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EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DIFERENTES EXTRACTOS
VEGETALES SOBRE EL CRECIMIENTO DE Colletotrichum
gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. AGENTE CAUSAL DE LA
ANTRACNOSIS EN MANGO (mangifera indica l).
JAIME ESNEIDER AGUIRRE RODRIGUEZ.
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial para optar el título de
MICROBIÓLOGO AGRICOLA Y VETERINARIO
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA
Bogotá, D.C.
Noviembre, 2008.
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EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DIFERENTES EXTRACTOS
VEGETALES SOBRE EL CRECIMIENTO DE Colletotrichum
gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. AGENTE CAUSAL DE LA
ANTRACNOSIS EN MANGO (mangifera indica l).
JAIME ESNEIDER AGUIRRE RODRIGUEZ.
Jairo Antonio Osorio
Ingeniero Agrónomo Ph.D.
DIRECTOR
Nancy Eunice Niño. Gerardo Moreno
Bíologa MSc. fitopatología Ingeniero agrónomo
JURADO JURADO
3
EVALUACIÓN DEL EFECTO DE DIFERENTES EXTRACTOS
VEGETALES SOBRE EL CRECIMIENTO DE Colletotrichum
gloeosporioides (Penz.) Penz. & Sacc. AGENTE CAUSAL DE LA
ANTRACNOSIS EN MANGO (mangifera indica l).
JAIME ESNEIDER AGUIRRE RODRIGUEZ.
APROBADO
_________________________ ________________________
JANETH ARIAS PALACIOS M.Sc- .Ed INGRID SCHULER, Ph.D.
Directora Carreras de Microbiología Decana Académica
4
NOTA DE ADVERTENCIA
“Los conceptos y opiniones emitidos en este trabajo son responsabilidad del autor
y no comprometen en nada a la Pontificia Universidad Javeriana”.
Artículo 23 de la Resolución N° 13 de Julio de 1946
5
DEDICADO
A mi familia por el apoyo, la confianza y entrega.
A mis padres por su amor, su apoyo, por confiar siempre en mí, y
por ser las personas que más admiro en la vida.
6
AGRADECIMIENTOS
A mi familia por creer en mí.
A Clemencia de la Rotta por su colaboración y especialmente por brindarme
su conocimiento y apoyo.
A Erika Martínez y Juan Clímaco por su colaboración y apoyo a lo largo del
proyecto.
Al laboratorio de fitopatología de la corporación colombiana de investigación
agropecuaria CORPOICA por permitirme realizar el proyecto.
A Alejandra Villegas, por su colaboración y apoyo a lo largo del proyecto.
A Ivonn Gelvez y Sandra Usaquen, por su amistad y ayuda.
A Ingrid Sierra por su gran apoyo emocional.
A Nancy Niño y Ligia Espinosa del laboratorio de fitopatología del CIAA por
su apoyo, colaboración y enseñanza.
A Sandra Ramírez por su amistad.
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TABLA DE CONTENIDO
1. INTRODUCCION 14
2. MARCO TEORICO 16
2.1. MANGO 17
2.1.1 Mango común o hilacha. 19
2.1.2 Variedades resistentes a la antracnosis. 20
2.1.3 Botánica. 21
2.1.4 Fase reproductiva. 22
2.1.5 Clima y suelo. 22
2.2. ANTRACNOSIS 23
2.2.1. Etiología. 24
2.2.2. Sintomatología causada. 25
2.2.3. Fuentes de inoculo. 27
2.2.4. Dispersión. 27
2.2.5. Condiciones favorables. 28
2.2.6. Germinación. 28
2.2.7. Infección quiescente. 29
2.3. ESTRACTOS VEGETALES 30
2.3.1. Extracto de swinglia. 32
2.3.2. Capsialil. 33
2.3.3. Desfan 100. 34
2.3.4. Ecoswing. 35
2.3.5. Xplode. 36
2.3.6. Extracto de cardón lefaria. 36
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA 38
4. JUSTIFICACIÓN 39
8
5. OBJETIVOS 40
5.1. OBJETIVO GENERAL 40
5.2. OBJETIVOS ESPECIFICOS 40
6. DISEÑO DE LA INVESTIGACION 41
6.1. SITIO DE ESTUDIO Y MUESTRA. 43
7. MATERIALES Y MÉTODOS 44
7.1. PRUEBA DE GERMINACIÓN DE CONIDIAS. 44
7.1.1. Cultivo monospórico después de la exposición a los extractos. 46
7.2. EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO MICELIAL. 46
7.3. EVALUACIÓN EN FRUTOS DE MANGO DESPRENDIDOS. 48
7.4. ANÁLISIS DE DATOS. 49
8. RESULTADOS Y DISCUSIÓN. 50
8.1. PRUEBA DE GERMINACIÓN DE CONIDIAS. 50
8.1.1. Cepa 1047 de C. gloeosporioides. 50
8.1.2. Cepa 935 de C. gloeosporioides. 54
8.1.3. Cepa 845 de C. acutatum. 58
8.2. EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO MICELIAL. 62
8.2.1. Cepa 1047 de C. gloeosporioides. 62
8.2.2. Cepa 935 de C. gloeosporioides. 64
8.2.3. Cepa 845 de C. acutatum. 68
8.3. EVALUACIÓN EN FRUTOS DE MANGO DESPRENDIDOS. 72
9. CONCLUSIONES. 81
10. RECOMENDACIONES. 82
11. BIBLIOGRAFIA. 83
12. ANEXOS. 89
9
LISTA DE FIGURAS
Figura 1: Antracnosis en frutos maduros. 26
Figura 2: Antracnosis por Colletotrichum gloeosporioides. 26
Figura 3: Montaje prueba frutos desprendidos, inoculación de frutos. 49
Figura 4: Tubo germinal conidia de C. gloeosporioides 50
Figura 5: Crecimiento micelial cepa 1047 tratamiento con Desfan. 63
Figura 6: Formación de apresorios tratamiento con Desfan cepa 1047. 64
Figura 7: Crecimiento micelial cepa 935 tratamiento con Desfan. 65
Figura 8: Conidias cepa 935 de C. gloeosporioides, tratamiento con Desfan. 66
Figura 9: Crecimiento micelial cepa 845, tratamiento con Desfan. 68
Figura 10: Aparición de los primeros síntomas de antracnosis a los tres días. 73
Figura 11: Síntomas avanzados de antracnosis a los diez días. 73
Figura 12: Síntomas y signos de antracnosis en mango. 74
Figura 13: Síntomas de antracnosis en mango, tratamiento con Desfan. 77
10
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Extractos y dosificación. 42
Tabla 2: Porcentaje de germinación conidias cepa 1047 C. gloeosporioides. 52
Tabla 3: Porcentaje de germinación conidias cepa 935 de C. gloeosporioides. 56
Tabla 4: Porcentaje de germinación de conidias cepa 845 de C. acutatum. 60
Tabla 5: resultados prueba inhibición del desarrollo de la antracnosis en frutos
desprendidos cepa 1047 de C. gloeosporioides. 74
Tabla 6: resultados prueba inhibición del desarrollo de la antracnosis en frutos
desprendidos cepa 935 de C. gloeosporioides. 75
Tabla 7: determinación del efecto de los extractos (Desfan y Ecoswing) en la
aparición de síntomas por infección quiescente en mango. 77
11
LISTA DE GRAFICAS
Grafica 1: Curva de germinación de conidias cepa 1047. 51
Grafica 2: Porcentaje de germinación conidias cepa 1047 C. gloeosporioides. 52
Grafica 3: Resultados monosporico cepa 1047 C. gloeosporioides. 53
Grafica 4: Curva de germinación de conidias cepa 935. 55
Grafica 5: Porcentaje de germinación de conidias
cepa 935 C. gloeosporioides. 57
Grafica 6: Resultados monosporico cepa 935 C. gloeosporioides. 58
Grafica 7: Curva de germinación de conidias cepa 845. 59
Grafica 8: Porcentaje de germinación de conidias cepa 845 de C. acutatum. 61
Grafica 9: Resultados monosporico cepa 845 C. acutatum. 61
Grafica 10: Porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial
cepa 1047 C. gloeosporioides. 62
Grafica 11: Porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial
cepa 935 de C. gloeosporioides, a los 8 dias. 65
Grafica 12: Comparación de medias, Porcentaje de inhibición del
crecimiento micelial. Cepa C-917, y Cepa 1047. 67
Grafica 13: Porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial
cepa 845 de C. acutatum, a los 8 dias. 68
Grafica 14: Porcentaje de inhibición del crecimiento, en las tres
cepas utilizadas. 69
Grafica 15: Efecto de los extractos vegetales y sus dosis en PIC en
las tres cepas. 71
Grafica 16: Porcentaje de inhibición del crecimiento micelial
en frutos desprendidos. 79
12
RESUMEN
El objetivo principal de este estudio fue evaluar el efecto de 6 extractos vegetales
sobre el desarrollo y crecimiento de C. gloeosporioides, agente causal de la
antracnosis en mango, Con el fin de encontrar un producto para el control de la
enfermedad, más eficaz, menos costoso y que no afecte el ecosistema.
Los extractos comerciales seleccionados para este estudio fueron: Capsialil,
Ecoswing, Desfan, Xplode y Extracto de Swinglia, adicionalmente se trabajó con
un extracto obtenido de cactus (secciones medias del tallo de cardón lefaria
(Cereus deficiens Otto & Dietr.) Proveniente del Desierto de la Tatacoa (Huila).
El efecto de cada extracto se obtuvo evaluando el porcentaje de inhibición de la
germinación, porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (PIC), y inhibición
del desarrollo de los síntomas de antracnosis en frutos de mango desprendidos. Se
trabajo con dos cepas de C. gloeosporioides, (1047 y 935) obtenidas de frutos de
mango hilacha con antracnosis, provenientes de los departamentos de Magdalena
y Tolima respectivamente y una cepa de C. acutatum, obtenida de frutos de
tomate de árbol, en el departamento de Cundinamarca.
El extracto que presento mayor porcentaje de inhibición del crecimiento micelial
en las tres cepas fue Desfan, mostrando diferencias significativas entre
tratamientos, la dosis que presento los mejores resultados fue la dosis
recomendada por el producto (DR) con la media mas alta en las dosis utilizadas.
13
SUMMARY
The main objective of this study was to assess the effect of six plant extracts on
the development and growth of C. gloeosporioides, causal agent of the
anthracnose in mango, in order to find a product to the control of the illness, more
effective, lees expensive and that doesn’t affect the ecosystem.
The commercial extracts chosen for this study were: Capsialil, Ecoswing, Desfan,
Xplode and Swinglia’s extract, additionally it was worked with an extract
obtained from the cactus (half sections of Cardon lefaria’s stem (Cereus deficiens
Otto & Dietr.) from Tatacoa’s desert (Huila). The effect of each extract was gotten
evaluating the percentage of inhibition of the germination, percentage of
inhibition of the mycelial growing (PIC), and inhibition of the development of the
signs of anthracnose in mango’s fallen fruits. In the study was worked with two
strains of C. gloeosporioide, (1047 and 935) obtained of the hilacha mango’s
fruits with anthracnose, in Magdalena and Tolima’s departments respectively and
one strains of C. acutatum, obtained of the tree tomato’s fruit in the
Cundinamarca’s department.
The extract that submits greater percentage of inhibition of growing mycelial in
three strains was Desfan, showing significant differences between treatments, the
dose that submits the best results was the suitable dose for the product (DR) with
the highest averages in the used doses.
14
1. INTRODUCCION:
La antracnosis es una enfermedad causada por el hongo Colletotrichum sp. Esta
enfermedad se encuentra afectando frutales de gran importancia económica en el
país, entre ellos el mango, considerado como la segunda especie frutícola de
mayor importancia socioeconómica. La gran demanda de esta especie en los
mercados nacionales e internacionales ha llevado a una gran expansión de las
áreas de siembra, Colombia cuenta con un área de 12.000 hectáreas, en
producción de este producto y una producción de 119.000 Toneladas/año, de los
cuales los departamentos de mayor producción son Tolima y Cundinamarca, con
mas del 60% por ciento, seguidos por Antioquia, Bolívar y Magdalena. Los
municipios de mayor producción son el Guamo, Espinal en el Tolima, Anapoima
y La Mesa en Cundinamarca. (Ministerio de agricultura, 2007).
Las pérdidas causadas por antracnosis se han cuantificado en un 40% para
cultivos de mango, en este mismo caso los daños causados por antracnosis en
poscosecha, son ocasionados principalmente como consecuencia de infecciones
latentes (Páez Redondo, 2003).
El control de la enfermedad se ha fundamentado en aplicaciones frecuentes de
fungicidas, especialmente en las etapas de floración y fructificación, con
resultados poco satisfactorios y contribuyendo a la contaminación de los
ecosistemas. Debido a esto de un tiempo para acá, se han venido planteando
diferentes alternativas para el adecuado manejo de la enfermedad en mango y
sobre todo en poscosecha, donde se ha encontrado el problema principal ya que
esta enfermedad demerita la calidad de la fruta haciéndole perder todo el valor
comercial. (Páez Redondo, 2003).
Con el objeto de reducir las pérdidas causadas por la enfermedad y su efecto
adverso, se ha encontrado que es necesario afrontar el problema integrando
diferentes medidas de manejo y control de la enfermedad, logrando contribuir
también a la ampliación del área de siembra en el país. Una de estas medidas de
control, es el de la implementación de extractos vegetales capaces de inhibir el
15
desarrollo del hongo. (Páez Redondo, 2003). En Colombia se han realizado
algunos estudios relacionados con la evaluación de la capacidad de algunos
extractos vegetales para inhibir el desarrollo de C. gloeosporioides, causante de
antracnosis en diferentes frutales entre ellos el mango. Gomez H. (2002) realizo
una evaluación del extracto de fique sobre el desarrollo in vitro de C.
gloeosporioides, con el fin de determinar la acción biocida de esta sustancia sobre
las estructuras micelial y conidial de este hongo fitopatogeno, en la cual demostró
que esta sustancia inhibe el desarrollo micelial de C. gloeosporioides, cuando la
concentración del extracto de fique en medio de cultivo PDA es superior al 5%, y
afecta la germinación conidial cuando la concentración del extracto es superior al
1%.
En 1996, Loaiza y Rivera, realizaron un estudio preliminar del efecto fungicida
de extractos de diez plantas sobre el hongo C. gloeosporioides, mediante pruebas
in vitro, en el cual concluyeron que el extracto de raíz de madero negro fue el mas
efectivo y mostro los mejores resultados. De esta manera se han venido realizando
muchos estudios sobre los efectos de diferentes extractos vegetales sobre el
desarrollo de C. gloeosporioides, en diferentes frutales de importancia económica
en el país, entre ellos el mango, de esta manera nos podemos dar cuenta como ha
aumentado el interés por la investigación en cuanto a nuevos métodos de manejo
eficientes y que no causan daños ni contaminación de los ecosistemas, lo que esta
logrando que se reduzca la utilización de productos químicos y aumente la
investigación de nuevas alternativas biológicas.
El presente estudio forma parte de un proyecto llamado “Estudio de
epidemiologia y control no convencional de la Antracnosis (Colletotrichum
gloeosporioides) en mango común (criollo, hilacha, Magdalena River)” el cual se
llevo a cabo en la Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria
CORPOICA. En este proyecto se evaluó la acción y el efecto de 6 extractos
vegetales sobre el desarrollo y crecimiento de C. gloeosporioides, agente causal
de la antracnosis en mango.
Con formato: Fuente: Cursiva
Con formato: Fuente: Cursiva
16
2. MARCO TEORICO:
Colombia a nivel mundial ocupa el lugar 24 como productor mundial de mango,
superado por países latinoamericanos como México y Brasil, con un crecimiento
dinámico de 5.2%, aunque con una participación aun muy marginal que alcanza
tan sólo 0.5%. La expansión en el área de cultivo ha alcanzado un crecimiento
durante la década 1994-2003 de 7%. (Agrocadenas, 2005).
El mango es la segunda especie frutícola de mayor importancia económica en la
región Caribe Colombiana después del banano, datos del Ministerio de
Agricultura reportan que durante el 2007, Colombia exportó más de 200 toneladas
de mango fresco y seco a diferentes países, por valor de 582 mil dólares, siendo
Estados Unidos el mayor receptor, seguido de Canadá y Alemania. Esta cifra
revela un incremento, teniendo en cuenta que en el 2006 fue de 126 toneladas.
(Ministerio de Agricultura, 2007).
Su gran demanda en los mercados nacional e internacional ha llevado a la
expansión de las áreas de siembra. No obstante, la presencia de la antracnosis se
ha constituido en el principal factor limitante de la productividad en la zona
bananera del Magdalena, y en cultivos de mango de todo el país, en donde se han
tenido pérdidas entre 40% de la cosecha también ha logrado grandes pérdidas en
poscosecha. (Paez, 1995).
El área dedicada al cultivo del mango, es mayor año tras año a nivel mundial y
nacional. Es así como en los países productores, el incremento en superficie
plantada en la última década, aumentó a una tasa promedio anual del 3.52%,
mientras que la producción lo hizo a un promedio de 5.95%, habiéndose
cosechado un total de 28.848.460 toneladas en el año 2000. En Colombia, se ha
mantenido la misma tendencia, lo que permite registrar a finales del año 2000, un
área plantada de 11.908 hectáreas y una producción de 981.686 toneladas,
aportadas por los huertos existentes principalmente en Antioquia, Cundinamarca y
Tolima. Estas cifras señalan la importancia del cultivo, razón por la cual se
dedican esfuerzos en conocer su comportamiento y proponer maneras de manejo
Con formato: Fuente:(Predeterminado) Times New Roman,12 pto
17
que le permitan al agricultor, obtener la mayor producción con una calidad que
sea reconocida por el consumidor. (Cartagena, 2000).
Desde el punto de vista fitopatológico, son muchas las enfermedades que afectan
al mango, siendo una de las más importantes la antracnosis, debido a las altas
pérdidas que se producen gracias a esta enfermedad, tanto en calidad como en
cantidad y por los altos costos que requieren su manejo. (Pérez, y López, 1989).
2.1 MANGO:
El mango es originario de la India, de donde se distribuyó por todo el suroeste de
Asia y el archipiélago malayo. A América llegó por dos vías: de Asia fue llevado
por los portugueses al sur de África y luego a las costas brasileñas, en el siglo
XVI. Los españoles lo introdujeron a México en los siglos XV y XVI, mediante el
comercio que se estableció con Filipinas. Esta es una de las frutas más
importantes en el trópico, se cultiva en todos los países que se encuentran en esta
área. Se conoce hace mas de 4000 años en la India, donde en la actualidad existen
mas de 800.000 hectáreas cultivadas con este frutal. (Salazar, 1992).
Colombia posee grandes extensiones de tierra ecológicamente aptas para su
cultivo, principalmente la costa Atlántica y regiones mas cálidas del interior del
país como los valles de los departamentos de de Tolima, Huila y los llanos
orientales. (Torres, 1976). En Colombia se cultiva sobre los 1200 m.s.n.m. pero
con reducida producción y baja calidad, lo óptimo es por debajo de los 600
m.s.n.m. con una estación definida de sequía de 3 meses. El mango soporta
humedades relativas bajas, la radiación solar alta favorece la fructificación, el
desarrollo y el color del fruto. (Agrocadenas, 2005).
Según datos del Ministerio de Agricultura, durante el 2003 el cultivo de mango
participó con el 6,2% de la producción total de frutas frescas en Colombia,
ocupando el tercer lugar con una producción de 168 mil toneladas. El
departamento de Cundinamarca participó con el 31.3% de la producción total
nacional de mango en el 2003 y le siguió de cerca Tolima aportando el 23.0% En
cifras, Tolima produjo durante el año 2002, 38.817 Tm. de mango y
18
Cundinamarca por su parte 52.816 Tm. Para el período 1992-2003 Cundinamarca
presentó la mayor dinámica de crecimiento en la producción con 5.58% mientras
que Tolima alcanzó 5.12%. Antioquia es otro departamento que se destaca con el
14.6% de la producción nacional de mango y ha tenido buenos niveles de
crecimiento durante 1993-2003 creciendo a una tasa del 7.9% promedio anual
hasta alcanzar 24.768 Tm. en el 2003. (Agrocadenas, 2005).
Cundinamarca es actualmente el departamento que más tierra destina a la
explotación de mango, con un 26.5% del área cultivada en el país, 3.687 Ha.,
mientras que Tolima participa con el 22.4% del área. En general el crecimiento
del área sembrada en mango ha sido de 7% por año entre 1992-2003, por lo que si
se compara con el de la producción (4,9%) se concluye que la productividad de la
tierra ha disminuido y esto se observa en la tasa de crecimiento de los
rendimientos durante la década, que fue de 1,6%. En 1992 se obtuvieron los
mayores rendimientos promedios del país con 14 Tm./Ha., mientras que en el
2003 apenas alcanzaron apenas 11,0 Tm./Ha. (Agrocadenas, 2005).
Aunque el promedio nacional de productividad del mango en Colombia alcanza
un rendimiento de 11.0 Tm./Ha., las diferencias regionales son notorias. Así por
ejemplo en Boyacá el cultivo de mango alcanza un rendimiento de 16.5 Tm./Ha.,
seguido por Bolívar con 15.8 Tm./Ha. Cundinamarca, actualmente el principal
productor, alcanzó en el 2003 un rendimiento de 14.3 Tm./Ha., mientras que
Tolima, el segundo productor, obtuvo un bajo nivel con 12.4 Tm./ Ha. Antioquia,
el tercer productor nacional de mango se colocó en un nivel intermedio con unos
rendimientos que alcanzaron 11.2 Tm./Ha.
Según datos de la Encuesta Anual Manufacturera del DANE, el uso del mango
como materia prima por parte de la industria colombiana ha presentado un
crecimiento importante, en especial a partir de 1996, año en que consumió 5.532
Tm. para pasar a 20.386 Tm. consumidas en 2000. El crecimiento de este
consumo en el período 1993- 2000 fue de 32.4% promedio anual lo que refleja un
gran dinamismo. Sin embargo, en el mismo período el incremento del valor de las
19
compras de mango por parte de la industria fue del 47.0%, tasa muy superior al
incremento del volumen demandado, lo cual preocupa en términos de la
sostenibilidad del crecimiento de la demanda industrial del producto nacional, y
constituye una limitante competitiva para el desarrollo de dicha fruta.
(Agrocadenas, 2005).
En cuanto a las exportaciones de mango de Colombia se observa según datos del
DANE, que el mango participa en el 2003 con el 3,8% del total del valor de
exportaciones de los seis frutales de exportación y derivados del mango,
presentando gran dinamismo con una tasa de crecimiento anual promedio de
23.5% en el período 1994-2003. (Agrocadenas, 2005).
Colombia exporta actualmente sólo el 0.5% de su producción total de mango,
proporción que aunque ha venido creciendo especialmente durante los últimos
años de la década de los noventas, pasando de 34 Tm. en 1994 a 12.712 Tm. en el
2001, pero con un fuerte descenso a partir de este año alcanzando 301 Tm. en el
2002 y 874 Tm. en el 2003. En el año 2002 se afectaron las variedades Kent y
Keitt de exportación, por lo que se redujeron las colocaciones de estas variedades.
La oferta exportable de mango es relativamente escasa y gran parte de la
producción nacional es absorbida por el mercado interno, en especial por las
cadenas de supermercados. (Agrocadenas, 2005).
2.1.1 Mango común o hilacha:
Santa barbará Antioquia cuenta con más de 1200 hectáreas, y con una producción
anual promedio de 15000 toneladas de mango hilacha, siendo la zona más
productora de esta variedad de mango en el país. Las plantaciones de la región son
bosques nativos de mango que han crecido en forma espontanea y dispersa, hasta
constituirse en grandes huertos desuniformes y de distribución caprichosa, con
una explotación de tipo tradicional sin ningún manejo agronómico en cuanto a
propagación, distancias entre arboles, podas, fertilizantes, sistemas de cosechas y
20
manejo poscosecha, entre otros, lo que desfavorece la explotación comercial de
este frutal. En Colombia departamentos como el Tolima y zonas del la costa
atlántica son también productoras de mango común o hilacha. (Londoño, M et al.
2007).
La investigación y tecnología generada para el cultivo de mango en Colombia, se
dirige en su mayoría, hacia variedades mejoradas, pero para el mango tradicional
o común se cuenta con poca información. Se presentan deficiencias tanto en la
etapa de producción, como en la etapa de poscosecha. En la primera, para la
consecución de una buena calidad de fruta; en la segunda, donde están incluidas
todas las actividades que se realizan entre la cosecha y el consumo y que debido a
carencias o fallas en los procesos de recolección, selección, clasificación,
empaque y embalaje, conlleva a perdidas poscosecha y a problemas de
comercialización, por la mala calidad del producto ofrecido y el consecuente
desestimulo en la producción. (Londoño, M et al. 2007).
2.1.2 Variedades resistentes a la antracnosis:
Un experimento realizado en 1991, en el C.I. Caribia de CORPOICA, permitió
conocer el comportamiento de siete cultivares frente a la antracnosis; en el se
destacaron los cultivares Keitt y Tommy Atkins debido a su baja suceptibilidad;
por el contrario los cultivares Rosa, Irwin y Azucar demostraron ser altamente
susceptibles (Páez, 1995).
En 1997, Páez R. realizó otro estudio para determinar variedades resistentes, en el
cual concluyo, que los cultivares Tommy Atkins, Keitt, James Saigon, Early Gold
y Vandyke son los de mejor comportamiento frente a la enfermedad puesto que
presentan una baja susceptibilidad a esta enfermedad fungosa, endémica en la
zona bananera del Magdalena, Colombia. Esta característica se fundamenta en su
limitada producción de frutos por panícula. Incluso en los periodos de lluvia,
mantienen su tolerancia a la antracnosis, lo que puede representar una ventaja
competitiva para el agricultor que use aquellas variedades. (Páez, 1997).
21
Se confirmo también que la incidencia y la severidad de la antracnosis se
correlacionan de forma directa con algunos factores climáticos, y en especial, con
la humedad relativa y la precipitación. En la medida que se incrementaron los
valores de esos factores climáticos, aumentaron la incidencia y el nivel de
severidad de la enfermedad en los cultivares de mango. (Páez, 1997).
2.1.3 Botánica:
El mango pertenece a la familia de las anacardiáceas en la que se clasifican 64
géneros, y 15 especies comestibles. La mas cultivada es Mangifera indica linn. Es
un árbol corpulento y de gran crecimiento; su forma depende del tipo de
propagación, siendo los arboles por semilla erectos y altos, mientras los
injertados son mas bajos, ramificados y abiertos. La planta siempre esta verde,
excepto en los periodos de crecimiento en los cuales las hojas de los nuevos brotes
presentan coloración rojiza y luego se tornan verde brillante. Generalmente, los
brotes se presentan en ramas que estaban en reposo; allí se empiezan a diferenciar
las yemas florales, las cuales se desarrollan para dar lugar a nuevos frutos. (Torres
1976).
Dependiendo del clima, los arboles de mango tienden a producir alternadamente
una cosecha abundante en un año y poca o ninguna cosecha en el año siguiente. Si
el árbol se esta desarrollando pobremente, debido a las temperaturas desfavorables
o a condiciones del suelo adversas, una cosecha abundante puede impedir la
fructificación posterior durante dos años o más. La inflorescencia es una panícula
axilar o terminal. Las flores en cada panícula, son en su mayoría machos,
presentándose hermafroditas en menor proporción. En cada panícula se
encuentran hasta 7000 flores o más según la variedad. A pesar del gran número de
flores solo unas pocas llegan a formar fruto.
El fruto es una drupa cuyo tamaño, forma y color, varía según las variedades. Los
frutos de mango se desarrollan rápidamente después de haber cuajado; tardan en
madurar de cuatro a cinco meses. Su tamaño varía de tres a quince centímetros de
22
largo y puede pesar de unos pocos gramos hasta una o dos libras, según la
variedad. El color de la fruta madura varia de verde a rojo; así mismo su sabor y
aroma, varían grandemente entre variedades o se adaptan a muy diferentes gustos.
La pulpa puede tener o no fibra. (Torres 1976).
2.1.4 Fase reproductiva:
La fase reproductiva depende de la diferenciación de yemas vegetativas de un año
de edad a yemas reproductivas, y de las condiciones ambientales. Requiriendo una
época seca para inducir floración; durante el principal periodo de floración, las
lluvias reducen la polinización y el cuajado de frutos; sin embargo, el tiempo
húmedo nublado con frecuencia prolonga la producción de flor lo suficientemente
como para producir oleadas de floración a intervalos durante varios meses, dando
como resultado unas tres o cuatro cosechas parciales sucesivas en una sola
temporada de fructificación. (Medina, et al, 1981).
El porcentaje de fructificación en algunas variedades no pasa de 0.028%; en la
mayoría de los casos una de cada 150 flores aparentemente fertilizada se
desarrolla hasta frutos; esto se explica por la morfología de las flores, ausencia de
agentes polinizadores, fertilidad inadecuada del suelo y factores de orden
patológico, fisiológico y climático (Singh, 1978).
2.1.5 Clima y suelo:
El mango es una planta de climas cálidos con periodos secos y húmedos
alternados y definidos. La sequía es importante antes y durante la floración, en el
cuajado de los frutos y durante los primeros meses de crecimiento. Conviene esa
sequía para la abundante floración del árbol y para proveer un medio ambiental
favorable por que evita que las flores y los frutos sean atacados por enfermedades
como antracnosis. El mango es poco resistente al frío; su crecimiento se ve
reducido cuando la temperatura se esta por debajo de los 18 grados centígrados y
es dañado seriamente con temperaturas cercanas a cero grados centígrados. Por
Con formato: Fuente: Cursiva
23
esto climas como los presentados en el Tolima, los llanos orientales y la zona
bananera son excelentes para el cultivo de mango. (Torres. 1976).
Las exigencias de suelos del mango son mínimas; se le encuentran en gran
variedad de suelos, inclusive donde el aguacate y los cítricos fracasarían. De todas
maneras es preferible el uso de suelos sueltos y bien drenados. (Torres. 1976).
2.2 ANTRACNOSIS:
La Antracnosis es la enfermedad fungosa principal y más común en las regiones
donde se cultiva el mango. Su efecto es limitante en la producción, debido a que
ocasiona gran pérdida de frutos en campo, al momento de la cosecha y en
poscosecha (almacenamiento y transporte). Estudios adelantados por CORPOICA
indican que esta enfermedad causa entre 40 y 50% de pérdidas en cosecha en
papaya y mango, respectivamente. (Páez, 2003).
La enfermedad aparece en tejidos de plantas en desarrollo y también cuando están
en estado maduro. Las infecciones de hojas, tallos e inflorescencias jóvenes,
resultan en lesiones oscuras y hundidas de forma subcircular o angular que se
unen y destruyen áreas grandes; cuando las hojas se encuentran severamente
afectadas presentan síntomas de enrollamiento (Jeffries et al, 1990). Las pérdidas
económicas son más significativas cuando Colletotrichum sp; ataca los frutos
ocasionando dos tipos de enfermedades, la primera durante su desarrollo en el
campo (precosecha) y se manifiesta como lesiones necróticas, húmedas y
hundidas donde se producen masas conidiales que infectan nuevos tejidos y
órganos de la planta, o que colonizan materia orgánica en proceso de
descomposición y la segunda afecta los frutos maduros durante el almacenamiento
(poscosecha), que proviene de una infección quiescente, lo que permite ubicar a
Colletotrichum entre los patógenos más importantes de poscosecha (Bailey et
al,1992).
En la floración del mango Mangifera indica L., las lesiones primero aparecen en
las panículas florales como pequeñas manchas de color café o negras, las cuales se
24
agrandan, se unen y pueden causar ennegrecimiento total de la inflorescencia y
marchitamiento antes de que el fruto inicie su formación. Posteriormente, las
infecciones producen lesiones hundidas en frutos jóvenes, los cuales por lo
general se caen. Cuando la infección ocurre en frutos grandes (4-5 cm),
usualmente la lesión no se desarrolla, pero el microorganismo permanece en
estado de quiescencia hasta que los frutos maduran y aparecen también lesiones
hundidas de color oscuro. En todos los casos el desarrollo de la lesión está
acompañado de la salida de masas rosadas de esporas sobre la superficie de los
tejidos como consecuencia de la maduración del acérvulo (Jeffries et al, .1990).
2.2.1 Etiología
El Género Colletotrichum, contiene un número diverso de hongos que incluyen
los patógenos de plantas y los saprofíticos (Adaskaveg, et al, 1997). Las especies
de este género son consideradas como las más exitosas dentro de los hongos
patógenos de plantas, porque causan daño de importancia en un amplio número
que crecen tanto en zonas templadas como en zonas tropicales. Este patógeno
puede afectar a la mayoría de las partes de las plantas incluyendo raíces, tallos,
hojas, flores y frutos, pero a menudo son altamente específicos sobre tejidos
individuales o algunas especies de plantas en particular (Bailey et al., 1992).
La Antracnosis en mango es causada por el hongo Colletotrichum gloeosporioides
(Penz.) Penz. & Sacc., que en su forma sexual corresponde a Glomerella
cingulata (Ston) Spauld & Scherenk. El hongo C. gloeosporioides pertenece a la
superdivisión Deuteromycotera, clase-forma Coelomycete, orden Melanconiales y
familia Melanconiaceae. Se caracteriza porque presenta las conidias hialinas,
unicelulares, ovoides u oblongas, ubicadas en una estructura llamada acérvulo.
Estos cuerpos son en forma de disco, cerosos, subepidermales y típicamente
oscuros. Además de los conidióforos y conidias, presentan setas en el borde del
acérvulo y entre los conidióforos. (Páez, 2003).
Arauz y Umaña (1986) encontraron que C. gloeosporioides esporula
abundantemente sobre el micelio, conteniendo las conidias en una matriz
25
gelatinosa color rosado salmón llamada acervulo; el mismo tipo de esporulación
fue encontrado por SIMMONDS (1965).
2.2.2 Sintomatología Causada
En mango, el patógeno afecta hojas, ramas, inflorescencias y frutos, ocasionando
sobre estos últimos severos daños que demeritan su calidad, lo que repercute en la
pérdida de valor comercial y disminución de los rendimientos por unidad de
superficie. En las hojas viejas se presentan manchas pardo oscuras o marrón con
halo amarillo; las hojas jóvenes muestran manchas pequeñas de coloración oscura
y de forma irregular que aparecen del ápice y los bordes hacia el centro de la
lámina foliar y que pueden unirse para formar áreas necróticas más extensas que
provocan su caída o impiden el desarrollo de la fotosíntesis, también es notoria la
presencia de puntos necróticos en las nervaduras y encurvamiento y necrosis de
los ápices. (Páez, 2003).
Los síntomas se manifiestan en las ramas nuevas bajo la forma de manchas
necróticas y a medida que la enfermedad avanza las ramas infectadas se defolian,
se van secando desde la punta hacia la base y adquieren un color oscuro. Sobre las
panículas aparecen manchas o lesiones alargadas de coloración oscura (marrón
oscuro), que ocasionan la caída de las flores y frutos recién cuajados. Los frutos
cuajados (estado de “alfiler”) al ser infectados toman una coloración oscura y se
momifican con la posterior caída; en frutos inmaduros la enfermedad se expresa
por medio de manchas de color pardo claro y de aspecto aceitoso, presentándose
el mayor número de ellas en la zona cercana al punto de unión con el pedúnculo;
generalmente estas manchas no se agrandan debido a que el patógeno se encuentra
en estado latente. (Páez, 2003).
En frutos maduros, los síntomas son fácilmente distinguibles apreciándose
manchas de color marrón oscuro, ligeramente hundidas en la superficie y
acompañadas de cierta emisión de goma; en ocasiones aparece sobre la epidermis
del fruto un chorreado oscuro debido a la acción de las esporas del hongo al ser
26
arrastradas por el agua. Por efectos de las toxinas del hongo, la pulpa se deteriora
(pudrición) presentando áreas negruzcas que en sus inicios son blandas, pero que
después se endurecen; finalmente los frutos se pudren totalmente y se desprenden
de la planta con facilidad. (Páez, 2003).
Figura 1: Síntomas de antracnosis en frutos maduros, (Aguirre. 2008).
El patógeno infecta frutos en cualquier estado de maduración; cuando el hongo
afecta frutos recién formados, estos se momifican y permanecen adheridos a la
planta. En tejidos más maduros, el desarrollo del patógeno se ve limitado,
permaneciendo quiescente. Si el ataque ocurre en estado intermedio de desarrollo,
se observa una maduración prematura con coloración amarillenta normal y el fruto
cae al suelo. Cuando los frutos alcanzan a desarrollarse, se ven cubiertos de
manchas necróticas y la pulpa presenta una textura mas dura. (Behari, 1968).
Figura 2: Antracnosis por Colletotrichum gloeosporioides. Se manifiesta en
forma de manchas negras sobre la superficie del fruto. (Aguirre. 2008).
27
2.2.3. Fuentes de inóculo
Las mayores fuentes de inoculo se encuentran en las hojas conteniendo conidias
producidas en acérvulos y las ascosporas producidas y liberadas desde el
peritecio. En acérvulos y peritecios jóvenes, las conidias y las ascosporas están
encerradas en un material húmedo mucilaginoso, conocida como espora matriz, la
cual es una mezcla compleja, que está compuesta en su mayor parte por
polisacáridos, glicoproteínas y varios componentes menores incluyendo enzimas
como la invertasa, poligalacturonasa, celulosa y la pectinliasa (Bailey et al.,
1992).
La espora matriz juega un papel muy importante porque: puede inhibir y prevenir
la germinación prematura de las esporas para asegurar así la distribución del
inóculo, protege a las esporas de las temperaturas extremas, de los rayos ultra
violeta y de los efectos tóxicos de los metabolitos de las plantas y conserva la
viabilidad de las esporas bajo condiciones de baja humedad (Bailey et al., 1992).
2.2.4. Dispersión
Las conidias producidas en acérvulos se dispersan por el salpique de la lluvia, lo
cual indica que hay separación del patógeno por impacto de las gotas y transporte
de esporas, siendo estos dos aspectos esenciales para los procesos físicos en el
ciclo de la enfermedad Por lo tanto, la lluvia y la intensidad de ella, juegan un
papel muy importante en la dispersión de las esporas, y posiblemente tenga el
mismo efecto en todas las especies de Colletotrichum (Bailey et al., 1992). El
factor principal de dispersión del patógeno es la lluvia, pero también pueden
hacerlo los insectos de los órdenes Diptera, Coleoptera y Homoptera ya que
transportan las esporas a partir de los frutos esporulados que se encuentren en el
árbol o el suelo (Rondon, 1996).
28
2.2.5. Condiciones favorables
La infección durante los períodos húmedos está relacionada con la temperatura y
duración del período húmedo. Estudios de laboratorio permitieron conocer que la
germinación de las esporas es mayor con temperatura de 15ºC y humedad relativa por
debajo de 95%; el apresorio o estructura de penetración del hongo se forma 18 horas
después bajo estas condiciones. La formación del apresorio en el tejido vegetal es más
eficiente con temperaturas de 25ºC, observándose lesiones a los 5 días. El patógeno
penetra directamente o a través de heridas causadas principalmente por insectos.
El hongo es favorecido por elevada humedad relativa (más de 82%), alta
precipitación y temperaturas oscilantes entre 22 y 32 grados centígrados. (Páez,
2003).
En el campo está establecido que la temperatura óptima para la germinación de las
esporas del hongo oscila entre 22 y 32ºC con óptima de 25ºC; las esporas
presentes en las ramillas o en el suelo, son viables después de dos años, en las
ramas superiores después de 19 meses y en las hojas caídas en el suelo después de
14 meses. Las condiciones de alta humedad (más de 82%), lluvias frecuentes y la
prevalencia del rocío y nubosidad durante los períodos críticos favorecen el
desarrollo de la enfermedad e intensidad de los ataques. En condiciones de la
Costa Atlántica, donde la temperatura es alta casi todo el año, la humedad relativa
y las precipitaciones son los factores más influyentes sobre el proceso infectivo
por C. gloeosporioides. (Páez, 2003).
2.2.6. Germinación
Después de la disposición en la superficie de las plantas, las conidias y las
ascosporas germinan experimentando una diferenciación compleja que requiere de
síntesis de proteínas para formar los apresorios, los cuales son esenciales para la
infección. Durante la germinación, una septa es producida por las conidias de la
mayoría de las especies de Colletotrichum, seguida de una mitosis. Los apresorios
son sésiles, pero en el final pueden formar diferentes tubos germinativos y algunas
29
veces son producidos en la punta del micelio ramificado. Los apresorios pueden
formarse rápidamente en ausencia del hospedero, por ejemplo, cuando la conidia
germina en una superficie dura como un vaso de precipitado o una membrana de
nitrocelulosa (Bailey et al., 1992).
Los apresorios son características morfológicas del género Colletotrichum,
pueden ser globosos o subglobosos, con o sin lóbulos. Dentro de las especies se
diferencian por su tamaño, por ejemplo, los apresorios de C. gloeosporioides
miden entre 6-20 μm x 4-12 μm y los apresorios de C. acutatum miden entre 8.5-
10 μm x 4.5-6 μm; pero tienen muchas características en común y entre ellas que
las paredes tienen dos ó tres capas compuestas de distintos carbohidratos y
melanina. La melanina requiere de síntesis de proteínas y es la encargada de darle
al apresorio su típica apariencia oscura; esta puede proteger al apresorio de la
irradiación, pero especialmente está involucrada en los procesos de penetración
(Bailey et al., 1992).
2.2.7. Infección quiescente
El hongo Colletotrichum es uno de los pocos microorganismos que tienen la
capacidad de sobrevivir en estado de latencia, de dormancia o quiescenia como
apresorio en la superficie hospedera, o como infección oportunista en los tejidos
del hospedero cuando las condiciones medio ambientales o fisiológicas impiden
su completo desarrollo, siendo esta una característica que le permite al hongo
escapar de los vacíos epidemiológicos que ocurren entre los diferentes estados de
susceptibilidad de los cultivos (Freeman et al., 1998).
Los síntomas de la enfermedad pueden manifestarse mucho tiempo después de
haberse iniciado la infección. Por otra parte, el estado de latencia, dormancia o
quiescencia, como la situación en la cual el patógeno permanece largos periodos
en estado inactivo en el hospedero y bajo circunstancias específicas se activa
(Prusky, 1996).
30
La ocurrencia y la permanencia de la latencia o quiescencia del patógeno en o
dentro del hospedero, indica que hay una dinámica de equilibrio entre el
hospedero, el patógeno y el ambiente; los cambios fenológicos y fisiológicos en el
hospedero, en el ambiente o en ambos, conllevan a la pérdida del equilibrio
establecido y permiten que el patógeno continúe su ataque (Jarvis, 1994).
2.3 EXTRACTOS VEGETALES:
En los últimos años, la sociedad mundial ha priorizado los aspectos ambientales,
conduciendo muchas investigaciones hacia el descubrimiento de nuevas materias
bioactivas que puedan ser empleadas en el manejo y control de enfermedades, con
menos efectos negativos al ambiente por tratarse de productos naturales (Bianchi,
Zambonelli, 1997).
Las plantas producen compuestos como ácido ascórbico, compuestos fenólicos
(fundamentalmente ácidos fenólicos y sus ésteres y algunos flavanoles, como la
catequina), con propiedades antimicrobianas que pueden ser empleadas para
controlar diferentes enfermedades como antracnosis, mildeo polvoso, royas, entre
otras. La obtención de los extractos vegetales y el estudio de sus compuestos
activos propician su empleo contra diferentes fitopatogenos y plagas incluyendo
thrips, Colaspis sp, Collaria sp, ácaros, nematodos, hongos, y bacterias. En
condiciones in vitro, los extractos inhiben el crecimiento del patógeno, así como
la esporulación y germinación de esporas, de modo que ayudan a controlar
algunas enfermedades de frutos y hortalizas. In vivo, el efecto fungicida de los
extractos vegetales varia en función a la metodología de preparación (solvente,
seco, fresco, tiempo de almacenamiento, etc.), especie botánica, órgano de la
planta (raíces, hojas, semillas, etc.), fecha de cosecha, etc. Sin embargo, la
combinación de extractos vegetales con algún otro compuesto natural puede
potenciar su actividad fungicida. (Hernández et al. 2007)
La producción de sustancias bioactivas o metabolitos secundarios por las plantas
ocurre a través de diferentes vías metabólicas, generando gran número de
Con formato: Fuente: Times NewRoman, Cursiva
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compuestos, muchos de los cuales sólo son detectados en un determinado grupo
de plantas y en concentraciones variables. La cantidad y composición de esta clase
de compuestos es muy variable y depende del tipo de tejido, edad de la planta, su
habitat y el tipo de suelo (De Matos, 2000). Muchos de estos compuestos son
producidos y almacenados en tejidos jóvenes, particularmente en hojas o tejidos
productivos como flores y semillas. (Costa et al. 2001). Numerosos estudios han
constatado que muchos de estos compuestos afectan importantes funciones en los
vegetales, ya que pueden actuar en la preservación de la integridad de las plantas,
contra el ataque de enemigos, como nematodos, bacterias, hongos, insectos y
herbívoros o en la atracción de polinizadores y dispersores de semillas (Bennett,
1994).
Diversos productos derivados de las plantas han mostrado un efecto
antimicrobiano. Entre estos compuestos se destacan los flavonoides, fenoles,
terpenos, aceites esenciales, alcaloides, lectinas y polipéptidos. (Cowan, 1999).
Sus mecanismos de acción son variables; por ejemplo la toxicidad de los fenoles
en microorganismos se atribuye a la inhibición enzimática por oxidación de
compuestos. El modo de acción de los terpenos y aceites esenciales no ha sido
dilucidado por completo, pero se postula que pueden causar rompimiento de la
membrana a través de los compuestos lipofilicos. De los alcaloides se han
postulado que se intercalan con el DNA, y de las lectinas y poli péptidos se
conoce que pueden formar canales iónicos en la membrana microbiana o causar la
inhibición competitiva por adhesión de proteínas microbianas a los polisacáridos
receptores del hospedero. (Cowan, 1999).
Rao et al. (1992) separaron y evaluaron el efecto fungistático de los aceites
esenciales de varias plantas, y encontraron la mayor efectividad contra
Colletotrichum gloeosporioides, Curvularia pallescens y Periconia atrovirens,
con aquellos extraídos de C. cyminum Mill y flores de S. aromaticum L. Ambas
plantas mostraron un efecto fungistático a 1000ppm y un efecto fungicida a 2000
y 3000ppm. Determinaron también que el efecto fungitóxico del aceite mineral
residía en sus fracciones aldehídica y fenólica.
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32
2.3.1 Extracto de swinglia:
La Swinglia glutinosa ha sido reportada con propiedades fungicidas al igual que el
aceite de Citrus Medica (Atehortua, 1994). Para enfermedades de frijol ha sido
usada con éxito en la región de Santander. (Moreno, A. 1995. Com. Pers.
CORPOICA provincia Guanentina). También estudios pasados han evaluado este
extracto para el control de antracnosis en frijol, con buenos resultados. En mango,
no se han logrado muchas investigaciones para el control de antracnosis con este
extracto. El CIAT (1989), realizo varios experimentos con extracto de hojas de
swinglia para el control de antracnosis, asperjando el extracto un día después de
su preparación e inoculando una hora después con una raza de C. lindemuthianum.
Este tratamiento logro reducir en un 74% la severidad respecto a un testigo donde
se inoculo el hongo sin aplicación del extracto.
El Limón Ornamental o Tabog, Swinglea glutinosa (Blanco) Merr. (Rutaceae) es
una especie originaria de Filipinas. Fue introducido a Panamá en la década del 30
al Jardín Botánico Summit, como parte de una colección de especies raras de
cítricos del Asia tropical. Su introducción se hizo con la finalidad de disponer de
materiales genéticos para el mejoramiento de cítricos y también para uso como
patrón resistente para injerto de cítricos de fruta. (Esquivel, 2007).
Esta planta es conocida en Asia desde hace siglos por sus propiedades acaricidas y
para el tratamiento de enfermedades de la piel. Recientemente, Weniger et al.
2001. descubrieron que los principios activos del S.glutinosa eran alcaloides
acridionicos. Posteriormente, en Colombia, donde esta planta introducida es una
ornamental bastante común, se empezó a utilizar el extracto de tallo y hojas de
esta planta como biofungicida para algunas enfermedades de plantas. El uso de
estos extractos como biofungicidas es discutible ya que los principales principios
activos son inhibidores de la fotosíntesis, y si bien podría controlar ciertos hongos,
también podría causar retraso de crecimiento o daños a la planta huésped.
(Esquivel, 2007).
33
El extracto de swinglia es un fungicida botánico obtenido a partir de extractos de
vegetales, rápidamente biodegradable e inocuo para el hombre y el medio
ambiente, desarrollado para prevenir y curar enfermedades en flores, frutales,
hortalizas, plantas ornamentales y fríjol. Esta compuesto en un 80% de extractos
de plantas de swinglia, entre los que están también Eugenol, Linalil, Citrolenol,
Geraniol, y terpinen. Posee un pH de 4.5, y actúa como fungicida y protectante. El
extracto ha sido utilizado para el control de antracnosis en algunas especies, y
para Mildeo polvoso y Marchitamiento en fríjol. (Abonos superior Ltda.
2005).
2.3.2 Capsialil:
Capsialil es un extracto concentrado de ajo (Allium sativum) y ají (Capsicum
spp.) que actúa como repelente botánico de insectos y ácaros, efectivo contra un
amplio grupo de especies plagas. Puede ser utilizado en aplicaciones dirigidas al
follaje y al suelo en cultivos de flores, frutales, ornamentales, hortalizas y pastos.
Irrita las plagas haciéndolas más móviles y por ende vulnerables a los factores
externos, y protege las plantas de insectos comedores de follaje. (Ecoflora. 2005).
El ajo, es procedente del centro y sur de Asia desde donde se propagó al área
mediterránea y de ahí al resto del mundo, se cultiva desde hace miles de años. A
finales del siglo XV los españoles introdujeron el ajo en el continente americano.
El ajo es una planta perenne de la familia de la cebolla, las hojas son planas y
delgadas, de hasta 30 cm de longitud. Las raíces alcanzan fácilmente
profundidades de 50 cm o más, el bulbo, de piel blanca, forma una cabeza
dividida en gajos comúnmente llamados dientes. Cada cabeza puede contener de 6
a 12 dientes, cada uno de los cuales se encuentra envuelto en una delgada película
de color blanco o rojizo. Cada uno de los dientes puede dar origen a una nueva
planta de ajo, ya que poseen en su base una yema terminal que es capaz de
germinar incluso sin necesidad de plantarse previamente. Este brote comienza a
aparecer luego de los tres meses de cosechado, dependiendo de la variedad y
condiciones de conservación (Special Nutrients, 1996).
Con formato: Fuente: Cursiva
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34
Las flores son blancas, y en algunas especies el tallo también produce pequeños
bulbos o hijuelos. Una característica particular del bulbo es el fuerte olor que
emana al ser cortado. El ajo (Allium sativum L.) posee productos azufrados como
alicina, alina, cicloide de alicina y disulfuro de dialil con propiedades repelentes,
esto le da características que hace que se pueda utilizar como repelente de afidos,
también previene el ataque de hongos y actúa como bactericida y fungicida
(Special Nutrients, 1996)
El ají, pertenece al género Capsicum, incluye más o menos 25 especies y tiene su
centro de origen en las regiones tropicales y subtropicales de América,
correspondiendo a las áreas de Bolivia y Perú, El fruto de la mayoría de las
especies de Capsicum contiene capsaicina, y otros compuestos similares (Special
Nutrients, 1996).
2.3.3. Desfan 100:
Desfan 100 es un compuesto orgánico complejo extraído de cítricos. Es un
desinfectante orgánico, ya que es extraído de las semillas de la naranja y toronja
conteniendo fracciones de glucosa, fructosa y ácido ascórbico. Es un desinfectante
orgánico que se comporta como un poderoso bactericida, fungicida y algicida.
(ROSS, S. et al. 1990).
Los extractos cítricos son fundamentalmente aceites esenciales obtenidos de las
semillas de diferentes variedades de cítricos, en este caso el aceite esencial de
semillas de toronja (Citrus máxima). Los extractos cítricos, son sustancias
multicomponentes que dentro del fruto tienen funciones biológicas específicas,
que al extraerse y contraerse se modifican para encontrar usos diversos en la
industria, siendo uno de los mas recientes, el de agente bactericida y fungicida.
Los mecanismos de acción de los extractos cítricos son: el rompimiento de la
pared celular en enlaces b 1-4, precipitación de proteínas, oxidación de
protoplasma e inactivación enzimática, proporcionándoles un amplio espectro de
Con formato: Fuente: Cursiva
35
acción. Estos mecanismos se activan por contacto entre el producto a tratar y el
extracto cítrico, lo que los hace seguros ya que generan un mínimo de resistencia
bacteriana. (Solusan, 2002).
Particularmente, las semillas de naranja (Citrus sinensis), contienen altas
concentraciones de fenoles, incluyendo numerosas flavanonas y flavonas
polimetoxiladas, glicósidos de flavonas y otros glicósidos fenólicos y se ha
demostrado que estos metabolitos secundarios están relacionados con la actividad
antioxidante de este género. (Manthey. 2004).
2.3.4 Ecoswing:
Ecoswing es un fungicida preventivo y curativo natural de amplio espectro
elaborado principalmente a partir de los ingredientes activos presentes en cítricos
no comestibles como la Swinglea glutinosa entre otros, de alta concentración y
pureza, muy efectivo para el control de mildeos, cenicillas, Oidiums, royas y otras
enfermedades de tipo fungoso. Su eficacia ha sido probada en cultivos de flores
como rosas, gérberas y hortensias, en frutales como uva, mora y durazno y en
hortalizas como tomate, entre otros cultivos. (Ecoflora, 2005). La diferencia que
hay entre Ecoswing y el Extracto de Swinglia, se centra en la composición del
cada extracto, dependiendo de la casa comercial, en este caso la composición de
Ecoswing según su casa comercial se basa en varios ingredientes activos presentes
en cítricos no comestibles entre ellos la Swinglea glutinosa, mientras que el
extracto de Swinglia tiene como ingrediente activo, la Swinglea glutinosa
únicamente.
Es idóneo para el manejo integrado de enfermedades, en rotaciones de programas
de agricultura más limpia, en la implementación de Buenas Prácticas Agrícolas y
en programas de agricultura ecológica. La eficacia de Ecoswing ha sido
comprobada en cultivos de flores, hortalizas y frutales por el Departamento
Técnico de Ecoflora, registrado ante el ICA para la realización de pruebas de
eficacia agrobiológica de extractos vegetales de uso agrícola. Ecoswing actúa
36
Aproximadamente 2 minutos después de que entra en contacto con las esporas del
patógeno comienza un proceso de desecación y pérdida del contenido celular
haciendo la espora no viable, evitando su germinación. (Ecoflora, 2005).
2.3.5. Xplode:
Xplode SL es el primer disruptor bioquímico de comportamiento, fabricado
industrialmente, a partir de concentrados grado alimenticio de capsaicina y
alicina; de alta actividad biológica y con efecto repelente, insecticida y acaricida.
La mezcla de Capsaicina y Alicina de Xplode SL, actúa produciendo una
disrupción del proceso de alimentación de los insectos, generando irritación de las
mucosas del aparato digestivo. Xplode tiene una concentración garantizada de
Capsaicina del (6%) y Alicina del (4%), el cual ha sido desarrollado con
concentrados grado alimenticio, Insumos que se usan para producción de
alimentos de consumo humano y por lo tanto las concentraciones de
contaminantes son mínimas. Xplode está clasificado dentro de la Categoría
Toxicológica IV. (Flor Integral S.A., 2005).
Grainge y Sleem (1988) recomendaron el ajo (Allium sativum L). Y otras plantas
para el control de la antracnosis. El ajo se usa también como insecticida y
repelente para insectos de diferente orden taxonómico, y es efectivo también
contra mildeo y roya del frijol (Stoll, 1989) (Mejia, 1993). Los bulbos, hojas,
flores y látex presentan actividad fungicida (Atehortua, 1994).
2.3.6. Extracto de cardón lefaria (Cereus deficiens Otto & Diert).
Una de las especies abundantes en las zonas xerofíticas es el cardón lefaria
(Cereus deficiens Otto & Dietr.), de la familia Cactaceae. Los miembros de esta
familia son conocidos por su rusticidad y algunos de ellos han sido estudiados en
37
el área de la alimentación humana (Vélez y Chávez, 1980) y por su capacidad de
actuar como acondicionadores del suelo (Henríquez et al., 2000).
Renzo Zapata et al., (2003) hicieron extracciones etanólicas desgrasadas (EED),
etanólicas sin desgrasar (EESD) y acuosas (EA) de secciones medias del tallo de
Cereus deficiens (Cactaceae), en las que se evaluó el efecto de los extractos sobre
el desarrollo in vitro de 10 hongos fitopatógenos entre ellos C. gloeosporioides.
La reacción de los extractos frente a C. gloeoporioides, se pudo evidenciar en el
desarrollo micelial del hongo. Los valores de DE50 fueron menores con los
extractos etanólicos que con el acuoso, estando estos entre 22 y 44% de
concentración; en el cual se concluyó que el control de un hongo con el extracto
acuoso de la planta indicaría la posibilidad de su uso inmediato por los
productores. Los resultados de esta investigación muestran que ese potencial
podría ser para el control de S. rolfsii y C. gloeosporioides, ya que presentaron los
mejores resultados.
38
3. FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
El área bajo siembra con mango (Mangifera indica L.) en Colombia ha
aumentado en los últimos años debido a la posibilidad de colocar los frutos en
mercados internacionales.
El promedio nacional de productividad del mango en Colombia alcanza un
rendimiento de 11.0 Tm./Ha. Según datos del Ministerio de Agricultura, durante
el 2003 el cultivo de mango participó con el 6,2% de la producción total de frutas
frescas en Colombia, ocupando el tercer lugar con una producción de 168 mil
toneladas. Entre 1992 y 2003 la producción de mango creció a una tasa de 3,6%
promedio anual. Colombia exporta actualmente sólo el 0.5% de su producción
total de mango, proporción que ha venido creciendo, especialmente durante los
últimos años de la década de los noventas, pasando de 34 Tm. en 1994 a 12.712
Tm. en el 2001. (Agrocadenas, 2005).
No obstante, aquellos mercados y potenciales compradores demandan frutos de
excelente calidad. De esta manera el control de enfermedades como la
antracnosis representa una acción prioritaria, con el fin de obtener un producto de
muy buena calidad.
La antracnosis, producida por el hongo Colletotrichum gloeosporioides, es
reconocida como una de las enfermedades mas importantes para el cultivo de
mango y otros frutales. Su presencia se caracteriza por la aparición de manchas
oscuras en hojas, flores y pedúnculos. Adicionalmente, los frutos se ven
afectados, en atapas iníciales, pudiendo sufrir daños también en la madurez. Esta
incidencia en los frutos maduros dificulta su comercialización.
En la Costa Atlántica, las pérdidas por Antracnosis (C. gloeosporioides) en
mango, alcanzan 40 a 50% en cosecha; éstas, se incrementan en la postcosecha,
por infecciones latentes manifestadas durante el almacenamiento y transporte. Las
pérdidas en Colombia se han cuantificado en cosecha en un 40% para cultivos de
mango, no obstante, los daños en postcosecha como consecuencia de infecciones
Con formato: Fuente: 12 pto, Cursiva
39
latentes, hacen de la enfermedad una verdadera amenaza para la comercialización
de la fruta, debido a que se pierde la calidad de la fruta, y por tanto su valor
comercial. (Páez Redondo, 2003).
4. JUSTIFICACIÓN
El manejo de la antracnosis del mango en Colombia, se ha fundamentado en
aplicaciones frecuentes de fungicidas, especialmente en las etapas de floración y
fructificación, con resultados poco satisfactorios y contribuyendo a la
contaminación del o los ecosistemas. (Páez, 2003). Además, a esto se le suman
los altos costos que tienen estos tratamientos con fungicidas, debido a la cantidad
de aplicaciones que se realizan para el control de la antracnosis. Según Páez 2003,
en Colombia se realizan entre 8 y 12 aspersiones con fungicidas por cosecha,
logrando aumentar los costos en cada cultivo. Esta ha sido durante años la
tecnología que se ha implementado para el control de antracnosis, por la mayoría
de productores, lo que ha hecho que el costo de tratamiento sea bastante alto.
Debido a esto se han comenzado a realizar investigaciones con el fin de generar
nuevas alternativas de manejo y medidas complementarias con miras a reducir los
costos generados por controles químicos, logrando también el aumento en las
investigaciones de nuevos métodos de control que no generen un daño al
ecosistema, entre estos el uso de productos de origen biológico y orgánico, con el
fin de entrar a mercados internacionales.
En este proyecto se evaluaron 6 productos a base de extractos vegetales con el fin
de encontrar el producto más eficaz, menos costoso y que no afecte el ecosistema,
y que pueda servir alternativa al control químico convencional empleado para el
control de la antracnosis en mango.
40
5. OBJETIVOS
5.1. OBJETIVO GENERAL
Evaluar el efecto inhibitorio de diferentes extractos vegetales sobre el desarrollo
de Colletotrichum gloeosporioides, agente causal de la antracnosis en mango, y
Colletotrichu acutatum agente causal de la antracnosis en tomate de árbol.
5.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS
- Analizar el comportamiento de dos cepas de Colletotrichum
gloeosporioides, y una cepa de Colletrotrichum acutatum, frente a seis
extractos vegetales.
- Determinar la concentración de cada extracto capaz de inhibir la
germinación de conidios y el desarrollo del crecimiento micelial de los
patógenos en medio de cultivo solido.
- Determinar el efecto de los extractos vegetales en el desarrollo de síntomas
en frutos desprendidos.
41
6. DISEÑO DE LA INVESTIGACIÓN
El presente trabajo se realizo bajo un diseño experimental completamente al azar,
con un arreglo factorial 6*4+1, en donde el factor A son los seis extractos
seleccionados, el factor B está compuesto por cuatro concentraciones y + 1 es un
control de la cepa creciendo en condiciones normales en medio PDA sin ningún
aditivo, que sirvió como punto de comparación con los demás tratamientos. Cada
unidad experimental era una caja de Petri o un vial con el patógeno, para un total
de 24 tratamientos con cuatro repeticiones cada uno. Es decir se establece un
aislamiento de Colletotrichum gloeosporioides, con la evaluación de seis
productos y un testigo absoluto, cuatro concentraciones para cada uno de los
productos y cuatro réplicas de cada uno. La eficacia de los productos se evaluó
mediante bioensayos de inhibición de germinación de esporas, supresión de
crecimiento micelial y acción de los extractos sobre órganos desprendidos.
Para todos los ensayos se seleccionaron 4 concentraciones: 1) la concentración
recomendada para el producto, 2) una concentración superior a la recomendada
comercialmente, 3) y 4) dos concentraciones por debajo de la recomendada
comercialmente (Tabla 1). Para el extracto de cactus se realizaron diluciones del
extracto obtenido del licuado de la planta con agua de las que se escogieron: 10-3
,
10-4
,10-5
, y 10-6
, para evaluar su efecto sobre los aislamientos de Colletotrichum.
42
Tabla 1. Extractos y dosificación escogidos para las pruebas de inhibición de
Colletotrichum gloesporioides y Colletrotrichum acutatum.
Extracto Concentración 1
(Dosis
comercial)
mL/L
Dosis 2
mL/L
Dosis 3
mL/L
Dosis 4
mL/L
Capsialil 0,7 0.95 0.45 0.2
Ecoswing 1.5 2 1 0,5
Desfan 0,2 0,25 0,15 0,10
Xplode 4 5 3 2
Extracto Swinglia 15 20 10 5
Extracto de cactus1 10
-3 10
-4 10
-5 10
-6
1 El extracto de cactus se evaluó mediante diluciones del extracto obtenido de la planta
licuada con agua (Zapata et al. 2003).
Se realizaron 3 fases para la evaluación de los extractos:
Fase 1: Evaluación del porcentaje de germinación de conidios frente a cada uno
de los extractos vegetales.
Fase 2: Evaluación del crecimiento micelial en medio de cultivo PDA frente a
cada uno de los extractos vegetales.
Fase 3: Prueba de inhibición del desarrollo de los síntomas de antracnosis en
frutos de mango desprendidos.
43
6.1 SITIO DE ESTUDIO Y MUESTRA:
El presente estudio se realizo en el laboratorio de Fitopatología de la Corporación
Colombiana de Investigación Agropecuaria, CORPOICA, C.I. Tibaitatá, ubicado
en el municipio de Mosquera (Cundinamarca), Km 14, latitud norte 40 4’ y
longitud 74012’, temperatura promedio 13
0C y humedad relativa de 82%.
Material biológico: En el laboratorio de fitopatología, se encuentra conservada la
colección Nacional de Colletrotrichum, conformada por 1155 aislamientos o
cepas obtenidas de distintos frutales en los que se incluye el mango, procedentes
de distintos sitios del país, de esta colección se trabajo con dos cepas de C.
gloeosporioide, la cepa 1047 obtenida de frutos de mango azúcar y 935 obtenidas
de frutos de mango hilacha con antracnosis, en los departamentos de Magdalena y
Tolima respectivamente, y una cepa de C. acutatum, (845) obtenida de frutos de
tomate de árbol, en el departamento de Cundinamarca, estos aislamientos se
escogieron al azar dentro de la colección, buscando que fueran de regiones
diferentes; estas cepas han sido clasificada, según estudios anteriores de
patogenicidad realizados en CORPOICA, como las cepas mas patogénicas en
mango.
Extractos vegetales: Los extractos escogidos se seleccionaron por estar
reportados en el mercado con propiedades fungicidas, Ecoswing, Capsialil,
Desafan 100, Extracto de Swinglia, Xplode, Extracto de cardón lefaria.
El extracto de cardón lefaria (Cereus deficiens Otto & Diert), se obtuvo utilizando
la metodología utilizada por Zapata et al., (2003), para la cual se colectaron
secciones medias del tallo (cladodio) de cardón lefaria, proveniente del Desierto
de la Tatacoa (Huila). Para el extracto acuoso se utilizaron 20g de material vegetal
seco y molido al cual se le practicó un prelavado con solución de hipoclorito de
sodio al 0,26% por 2min y luego 4 lavados con agua destilada estéril; se agregó
400ml de agua destilada y esterilizada y se licuó la preparación por 5min.
Posteriormente se filtró utilizando cuatro capas de gasa esterilizada y la
suspensión acuosa se almacenó en el refrigerador.
44
7. MATERIALES Y MÉTODOS:
7.1. PRUEBA DE INHIBICIÓN DE LA GERMINACIÓN DE CONIDIOS.
Para la prueba de inhibición de la germinación se utilizo un diseño experimental
al azar, con un arreglo factorial 6*4+1, en donde el factor A fueron los seis
extractos seleccionados, el factor B compuesto por cuatro concentraciones y + 1
es el testigo de cada una de las cepas utilizadas (C-935, C-1047 y 845) creciendo
en condiciones normales en solo agua destilada sin ningún aditivo, que servirá
como punto de comparación con los demás tratamientos para la discusión de
resultados. Cada unidad experimental fue un vial con la solución de conidios del
patógeno, para un total de 24 tratamientos con cuatro repeticiones cada uno.
Para esta prueba, primero se realizó una curva de germinación de cada una de las
cepas utilizadas (1047, 935, 845), en dos sustratos, agua destilada y agua
destilada con sucrosa al 2%. El objetivo de la curva de germinación fue observar
el comportamiento de la germinación de conidias frente a estos 2 sustratos con el
fin de determinar cual de los dos era el mas adecuado, y así utilizarlo en la prueba
frente a los extractos, también se determinó el tiempo adecuado para realizar la
lectura en la prueba con los extractos, lo cual fue muy importante para la prueba,
debido a que después de cierto tiempo dependiendo de la cepa, el porcentaje de
germinación comenzó a reducirse de manera significativa, lo que podría
perjudicar o influir en los resultados con los extractos si no se tomara en cuenta
este tiempo.
Para la curva de germinación se realizó un recuento en cámara de Neubauer con el
fin obtener una solución de conidias a una concentración de 1x105 conidias/ml
en Tween 80 al 0.01%. El Tween se utilizó como dispersante de las conidias.
Luego se incubó a 25°C en oscuridad y se realizaron lecturas de las conidias
germinadas cada 2 horas, durante 24 horas.
Después de tener establecida la curva de germinación de conidias para las 2 cepas
de C. gloeosporioides, y de C. acutatum, se procedió a realizar la prueba de
germinación con los extractos vegetales, para esto se realizaron repiques de los
aislamientos de cada cepa en medio Marthur’s (Anexo 2), con el fin de estimular
45
la esporulación del hongo y así obtener un máximo de conidios después de
incubar a 27ºC por 10 días en oscuridad.
Después en un erlenmeyer de 125mL que contenía 120mL de agua destilada
estéril (sustrato escogido por favorecer el mayor porcentaje de germinación de
conidios de los dos aislamientos) se hizo la solución de conidias realizando un
raspado con el asa redonda en cada una de las cajas, principalmente donde se
presentaban formación de acérvulos, y se procedió a realizar recuentos en cámara
de Neubauer, hasta obtener la solución en concentración 1x105
conidios mL, una
vez obtenida esta concentración se agregó 1 mL de la solución de conidias a un
vial y 1 mL de cada extracto preparado a diferentes concentraciones.
Para la evaluación se seleccionaron 4 concentraciones: 1) la concentración
recomendada para el producto, 2) una concentración superior a la recomendada
comercialmente, 3) y 4) dos concentraciones por debajo de la recomendada
comercialmente (Tabla 1). Para el extracto de cactus se realizaron diluciones del
extracto obtenido del licuado de la planta con agua de las que se escogieron: 10-3
,
10-4
,10-5
, y 10-6
, y se agregó 1 ml de de estas diluciones a los viales que contenían
1 ml de la solución de esporas, para evaluar su efecto sobre los aislamientos de
Colletotrichum.
Cada vial se incubó en oscuridad por 18 horas a 27oC, y se procedió a realizar las
lecturas del porcentaje de germinación de conidios a las 24 horas. La lectura se
realizó colocando 50ul de cada uno de los viales en una lámina de pozos, y se
procedió a contar el número de conidias germinadas, de 100 conidias contadas.
Cada resultado obtenido con los extractos evaluados se comparó con el porcentaje
de germinación de esporas del control del hongo en agua.
46
7.1.1. MONTAJE DE CULTIVOS MONOSPÓRICOS DE LAS CEPAS
DESPUÉS DE LA EXPOSICIÓN A LOS EXTRACTOS.
Una vez se realizaron las lecturas de la prueba de germinación, se tomó una de las
suspensiones de los viales con cada concentración de extracto y solución de
conidias, y se diluyó con agua destilada estéril para obtener una suspensión de 1
espora en 2µL, a partir de ésta se tomaron varías alícuotas de 2 µL y se colocaron
sobre una placa de agar agua (Anexo 3), a la cual previamente se le habían
marcado varios círculos guía al respaldo de la caja de Petri para identificar donde
se había puesto cada gota. Cada caja se incubó por 24 horas a 27oC en oscuridad,
con el fin de proporcionar las condiciones adecuadas para que las conidias
emitieran tubo germinal, después de esto se escogieron mediante observación
microscópica las conidias germinadas y se pasaron a cajas de Petri que contenían
medio PDA, con el fin de observar si las esporas que lograron germinar después
de estar en contacto con los extractos tenían la capacidad formar micelio en el
medio. Con esta prueba se pretendió corroborar los resultados obtenidos en el
ensayo anterior.
7.2. EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO MICELIAL DEL PATOGENO
EN MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO.
Para esta prueba se utilizó el mismo diseño experimental usado para la prueba de
germinación, el cual consistió en un diseño experimental al azar, con un arreglo
factorial 6*4+1, en donde el factor A fueron los seis extractos seleccionados, el
factor B compuesto por cuatro concentraciones y + 1 es el testigo de cada una de
las cepas utilizadas (C-935, C-1047 y 845) creciendo en condiciones normales en
medio PDA sin ningún aditivo, que sirvió como punto de comparación con los
demás tratamientos para la discusión de resultados. En este caso cada unidad
experimental fue un una caja de Petri con el patógeno, para un total de 24
tratamientos con cuatro repeticiones cada uno.
Para la evaluación del crecimiento micelial frente los diferentes extractos, primero
se debió tener en cuenta las dosis sugeridas por la casa comercial, para realizar los
47
cálculos correspondientes y llevarlos hasta el volumen requerido, en este caso
para cada uno de los productos se evaluaron 4 concentraciones, una por encima de
la sugerida por la etiqueta comercial y dos por debajo, cada concentración con 4
replicas, debido a esto se realizaron los cálculos para un volumen de 100ml de
PDA con el fin de agregar 25 ml a cada caja de petri y así completar las 4 réplicas.
Se preparó PDA liquido y se repartió en 24 fiolas, 100 ml en cada fiola,
previamente se calculó la cantidad necesaria de cada extracto para un volumen de
100ml. Cada concentración de extracto se agregó a cada fiola, teniendo en cuenta
que la temperatura del medio no sobrepasara los 450C (para que no se
desnaturalizaran los componentes del extracto). Se homogenizó hasta que el
componente se disolviera en el medio, para cada producto se prepararon 4 fiolas
cada una con una concentración distinta de extracto, después de disolver bien el
producto en el medio líquido, se procedió a servir sobre las cajas de Petri estériles,
cuando el medio solidificó por completo, se inoculó un disco de agar de 5 mm
con el hongo evaluar que en este caso fueron las 3 cepas (1047, 935, y 845); dos
de C. gloeosporioides, y una de C. acutatum. Para cada tratamiento se realizo un
control el cual no contenía extracto. Se incubaron a 27oC. Las lecturas del radio
de la colonia se realizaron cada 48 horas durante 7 días.
El resultado de la medición del crecimiento de la colonia fungosa se obtuvo
midiendo el radio de crecimiento del hongo, a partir de este resultado se obtuvo el
porcentaje de inhibición del crecimiento (PIC), con la siguiente fórmula:
PIC = crecimiento testigo - crecimiento tratamiento x 100
crecimiento testigo
(Rondón, et al, 2006).
48
7.3. PRUEBA DE INHIBICIÓN DEL DESARROLLO DE LOS SÍNTOMAS
DE ANTRACNOSIS EN FRUTOS DE MANGO DESPRENDIDOS.
Para prueba de inhibición en frutos se utilizo un diseño experimental al azar, con
un arreglo factorial 2*2+2, en donde el factor A fueron los dos extractos
seleccionados en los ensayos in vitro, el factor B compuesto por las dos
concentraciones que mejor resultados mostraron y + 2 son los dos aislamientos
(C-935 y C-1047) inoculados sobre los frutos que no se trataron, que sirvieron
como punto de referencia de la infección. Cada unidad experimental consistió en
una cámara húmeda con dos frutos para un total de 8 tratamientos con cuatro
repeticiones cada uno. La variable medida fue presencia o ausencia de lesiones de
antracnosis.
Con esta prueba de inhibición del desarrollo de la antracnosis en frutos
desprendidos, se pretendió evaluar la protección que puedan ofrecer los extractos
vegetales evaluados contra el desarrollo de los síntomas ocasionados por C.
gloeosporioides, aislado de frutos de mango enfermos.
Para esta prueba se utilizaron los extractos vegetales Desfan y Ecoswing
seleccionados en las pruebas de inhibición de la germinación e inhibición del
crecimiento micelial, debido a que éstos fueron los extractos vegetales que
presentaron mejores resultados en las pruebas in Vitro. También se utilizaron las
dos concentraciones de los productos que mostraron los mejores resultados
(Desfan: 0,25 ml/L y 0,2 mL/L; y Ecoswing: 2,0 ml/L y 1,5 ml/L), más dos
controles de infección con las cepas C-935 y C-1047, adicionalmente se montó un
control negativo que consistió en frutos con dos discos de agar papa dextrosa
estéril. Para esta prueba se utilizó mango de variedad hilacha, debido a su
susceptibilidad frente a las cepas utilizadas.
Los frutos recolectados se desinfectaron por un minuto con hipoclorito de sodio
(NaOCl) al 2.6%, lavados dos veces con agua destilada estéril, asperjados una vez
con alcohol antiséptico al 70% y lavados nuevamente con agua destilada estéril y
se dejaron secar al aire libre. Una vez secos, los frutos de cada tratamiento
49
seleccionado se sumergieron en una solución de cada uno de los extractos
vegetales por 5 minutos y se dejaron nuevamente al ambiente.
Los aislamientos evaluados fueron el C-935 y el C-1047, que fueron reactivados
en PDA por 10 días a 27ºC en oscuridad. Para el experimento, se tomaron 88
frutos y se inocularon con 2 discos de agar cubierto por la colonia del hongo, en
dos puntos sobre el fruto. Se realizaron evaluaciones diarias de los frutos para
detectar las lesiones de antracnosis. Los controles de infección consistieron en
frutos desinfectados e inoculados con las dos cepas del patógeno evaluadas.
Las condiciones óptimas para el desarrollo de la enfermedad se proporcionaron
colocando los frutos en cámaras húmedas (HR> 90%) a temperatura de 24 ºC ±2.
Para cada uno de los ensayos, se están realizando evaluaciones diarias de los
frutos para detectar la presencia de lesiones. Cabe resaltar que para esta prueba no
se realizaron heridas en los frutos para facilitar la penetración del hongo, ya que se
ha demostrado que este tiene la capacidad de penetrar por si mismo, ocasionando
daños al tejido del fruto.
Figura 3: Montaje prueba frutos desprendidos, inoculación de frutos.
(Foto: Aguirre. 2008)
7.4. ANÁLISIS DE DATOS.
Efecto de los extractos vegetales se determinó a través de un análisis de varianza
ANOVA, y posteriormente se realizó la comparación de medias (α0,05). Para
identificar si existía diferencias significativas entre los tratamientos, y para
determinar cual fue el mejor tratamiento.
50
8. RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
8.1. PRUEBA DE INHIBICIÓN DE LA GERMINACIÓN DE CONIDIOS
Los resultados de la prueba del porcentaje de inhibición de la germinación se
obtuvieron, realizando recuentos de conidias germinadas en 100 conidias contadas
(figura 4).
Figura 4: Tubo germinal conidia de C. gloeosporioides.
(Foto: Aguirre. 2008)
8.1.1. Cepa 1047 de C. gloeosporioides:
En la prueba de porcentaje de germinación de conidias de la cepa 1047 de C.
gloeosporioides, la lectura se realizó a las 16 horas, debido a que en la curva de
germinación (gráfica 1), el mayor número de conidias germinadas se dió en este
tiempo, a partir de este tiempo, el porcentaje de germinación comenzó a reducirse
de manera significativa. Para las pruebas de germinación de conidias, se utilizo
agua destilada como sustrato, debido a que este sustrato presentó mejores
resultados y permitió mayor germinacion de conidias que en agua destilada con
sucrosa.
51
Gráfica 1: Curva de germinación de conidias cepa 1047, en agua destilada y agua
destilada con sucrosa.
En la prueba de inhibición de la germinación de conidias de la cepa 1047 de C.
gloeosporioides, se encontró que el extracto de cardón lefaria (Cereus deficiens),
presentó la mayor efectividad, con porcentajes de germinación de 0% en todas las
dosis utilizadas. Desfan y el extracto de swinglia, presentaron los mismos
porcentajes de germinación en todas las dosis utilizadas; siendo también efectivos
en el control de la germinación de conidias; en la dosis más concentrada se
observó que el porcentaje de germinación fue de 0.25% para los dos extractos
(desfan, extracto de swinglia) y en el resto de las dosis utilizadas, el porcentaje de
germinación fue de 0%, como se muestra en la gráfica 2, donde se puede observar
que los extractos más efectivos fueron estos 3 (extracto de cardón lefaria, desfan,
y extracto de swinglia) Todos los extractos produjeron un efecto de inhibición
sobre la germinación de las conidias, si se compara con el resultado de los
controles, los cuales tuvieron porcentajes de germinación 2%. El extracto menos
efectivo en el control del porcentaje de germinación fue Capsialil, que en su dosis
mas concentrada presentó un porcentaje de germinación de 0%, en la dosis
indicada por el producto el porcentaje de germinación fue de 1.75%, indicando
que no hubo mucho efecto por parte del extracto, si comparamos los resultados
obtenidos en las dosis más diluidas y los resultados que presentaron los controles
52
nos damos cuenta que el extracto no tubo mayor efecto inhibitorio y solo presentó
inhibición de la germinación en su dosis mas concentrada.
Tabla 2: Resultados porcentaje de germinación de conidias cepa 1047 de C.
gloeosporioides:
Dosis + Dosis comercial Dosis -1 Dosis -2
Ex de swinglia 0.25% 0% 0% 0%
Capsialil 0% 1.75% 1.5% 2.25%
Desfan 0.25% 0% 0% 0%
Ecoswing 1% 0.5% 0.75% 1%
Xplode 0.25% 0.25% 0.5% 0.25%
10-3
10-4
10-5
10-6
Ex de cactus 0% 0% 0% 0%
Control 2% 2% 2% 2%
Grafica 2: porcentaje de germinación de conidias cepa 1047 de C. gloeosporioides.
53
El montaje del cultivo monospórico que se realizó después de las pruebas de
germinación, con el fin de corroborar o confirmar los resultados obtenidos en esta
prueba, y nos confirmó que los extractos que presentaron el mayor efecto fueron
los extractos de cardón lefaria (Cereus deficiens) y desfan, en los cuales no se
presentó crecimiento micelial en las cajas, en ninguna de las concentraciones,
indicándonos que después de someter las conidias al tratamiento con estos dos
extractos se causa un efecto de inhibición sobre la germinación de las conidias,
logrando que estas al ser expuestas en medio PDA no puedan emitir tubo germinal
ni formar micelio, inhibiendo totalmente su desarrollo en medio de cultivo
(gráfica 3).
Gráfica 3: resultados monosporico cepa 1047 C. gloeosporioides.
Estudios preliminares realizados en CORPOICA, en el proyecto llamado:
evaluación de alternativas de control para la antracnosis en cítricos, tomate de
árbol y guanabana, se evaluó el efecto de varios extractos vegetales comerciales,
para controlar antracnosis causada por Colletotrichum acutatum, indicando que de
54
los extractos utilizados, Desfan fue el más efectivo, Ecoswing y Capsialil variaron
en su comportamiento pero no de forma significativa.
Zapata et al, en el 2003 estudiaron la reducción del desarrollo de hongos
fitopatógenos con extracto de cardón lefaria (cereus deficiens otto & diert), donde
los resultados de esta investigación muestran que el potencial inhibitorio podría
ser en el caso del control de S. rolfsii y C. gloeosporioides, debido a que se
obtuvieron reducciones significativas en el crecimiento micelial. Aunque en el
estudio no se evaluó el efecto del extracto sobre la germinación de las conidias,
con estos resultados se puede confirmar la efectividad del extracto Desfan sobre el
control de C. gloeosporioides, el cual logra inhibir la germinación de esporas a un
0% y el crecimiento micelial del hongo en medio PDA.
8.1.2. Cepa 935 de C. gloeosporioides:
Para la prueba de porcentaje de germinación de conidias en la cepa 935 se utilizó
como sustrato agua destilada, debido a que presentó el mayor porcentaje de
germinación en la curva, mostrando mejores resultados que el agua con sucrosa,
esto nos indicó que para realizar la prueba de germinación de conidias en esta
cepa el sustrato adecuado era el agua sola. En este caso la lectura de los resultados
se realizó a las 20 horas, debido a que este fue el tiempo donde se presentó mayor
porcentaje de conidias germinadas según la curva (gráfica 4).
55
Gráfica 4: Curva de germinación de conidias cepa 935, en agua destilada y agua
destilada con sucrosa.
En la cepa 935 de C. gloeosporioides, los resultados fueron un poco diferentes en
comparación con la cepa 1047, aunque para este caso el extracto que presentó
mayor efecto para inhibir la germinación de las conidias fue Desfan, con un
porcentaje de germinación de 0% en todas las dosis, exceptuando la primer dosis
por debajo de la recomendada en la que se presentó un porcentaje de 0.25% (tabla
3). Este resultado fue similar al de la cepa 1047, indicando que Desfan presentó la
misma efectividad para inhibir la germinación de las conidias en las dos cepas de
C. gloeosporioides evaluadas. El extracto de swinglia también presentó efecto
inhibitorio, pero solo en su dosis mas concentrada (20ml/L), en la cual se obtuvo
un porcentaje de germinación de 0%, indicando que la dosis sugerida por el
producto (300c.c. en 20L de agua) no es efectiva para inhibición de la
germinación de conidias de C. gloeosporioides. Los extractos Capsialil, Xplode,
Ecoswing, y estracto de cardón lefaria, presentaron un efecto inhibitorio sobre la
germinación de las conidias del hongo, pero si se comparan con los resultados
obtenidos en los controles que en este caso fue de 2.62%, se puede observar que
no fueron muy efectivos (grafica 5).
El extracto de cardón lefaria (Cereus deficiens) que presentó el mayor efecto de
inhibición en la cepa 1047, en este caso al evaluar su efecto en la cepa 935 de C.
gloeosporioides, se puede observar que no fue tan efectivo, su mayor efecto se
56
presentó en la dosis más concentrada, logrando un porcentaje de germinación de
0.75%, en el resto de las dosis utilizadas los resultados fueron similares al control,
esto nos indica que no fue muy efectivo inhibiendo la germinación de las conidias
en la cepa 935. El extracto que presentó menor efectividad fue Xplode con un
porcentaje de germinación muy cercano al control, incluso en su dosis más diluida
su porcentaje de germinación fue de 2.75%, porcentaje mayor al que se presento
en el control.
Estos resultados demuestran que a pesar de estar evaluando el mismo hongo C.
gloeosporioides, pero cepas diferentes, obtenidas de frutos de mango de diferentes
sitios, no se presentan resultados afines, a excepción de Desfan, el cual presentó
resultados efectivos en las dos cepas evaluadas, aunque fue mas efectivo en la
inhibicion de la germinación de conidias en la cepa 935.
Tabla 3: Resultados Porcentaje de germinación de conidias cepa 935 de C.
gloeosporioides:
Dosis + Dosis comercial Dosis -1 Dosis -2
Ex de swinglia 0% 0.75% 0.75% 1%
Capsialil 1.5% 1.25% 1.5% 1.5%
Desfan 0% 0% 0.25% 0%
Ecoswing 1.75% 1% 1% 1%
Xplode 2% 2.25% 1.75% 2.75%
10-3
10-4
10-5
10-6
Ex de cactus 0.75% 2.5% 1.75% 1.75%
Control 2.62% 2.62% 2.62% 2.62%
57
Grafica 5: porcentaje de germinación de conidias cepa 935 de C. gloeosporioides.
Los resultados obtenidos en los cultivos monospóricos de la prueba de
germinación de la cepa 935 de C. gloeosporioides, indicaron que el extracto mas
efectivo fue Desfan, debido a que no se presentó crecimiento micelial en los
cultivos monospóricos en ninguna de las concentraciones utilizadas, demostrando
que al someter las conidias del hongo al tratamiento con Desfan, éstas no logran
germinar y mucho menos formar micelio en medio PDA.
En el extracto de Swinglia los resultados del cultivo monospórico, demostraron
que este presentó un efecto de disminución del desarrollo micelial, ya que en la
dosis indicada y en la dosis más concentrada, el hongo creció en el medio de
cultivo, pero en menor tamaño comparándolo con los controles, también se pudo
observar que en estas dos dosis su crecimiento micelial fue de 1 cm para la dosis
mas concentrada y 1,8 cm para la dosis indicada por el producto, presentando
también disminución en el micelio aéreo y en la esporulación en estas dos dosis,
mientras que en las dosis diluidas su crecimiento fue similar al de los controles
presentando un crecimiento de 2,3cm y 2,6cm de radio (gráfica 6). Para los demás
extractos evaluados los resultados no demostraron efectividad en la inhibición del
desarrollo del hongo puesto que todos crecieron en medio PDA.
58
Gráfica 6: radio de crecimiento micelial de los cultivos monosporico cepa 935 C.
gloeosporioides.
8.1.3. Cepa 845 de C. acutatum:
Los resultados obtenidos en la curva de germinación de la cepa 845 de C.
acutatum (gráfica 7), permitieron confirmar que el sustrato más efectivo en las 3
cepas fue el agua destilada sola, logrando obtener los porcentajes de germinación
mas altos. El máximo de conidias germinadas se presentó a la hora 16, debido a
esto se tomó esta hora para realizar las lecturas en la prueba con los extractos. El
efecto del agua más importante se centra en la germinación de las esporas de los
hongos y sobre la penetración del tubo germinativo en el hospedero (Agrios
1998). Esto explica por que el agua destilada presentó los mejores resultados de
germinación. En el caso del agua destilada con sucrosa, es posible que la sucrosa
se adhiera a las moléculas de agua, imposibilitando el acceso a estas por parte del
microorganismo, dificultando la hidratación necesaria para la germinación de las
conidias del hongo, según Harris, 1981, es posible que al haber un incremento en
la concentración de solutos se reduzca el potencial hídrico y se disminuya la
disponibilidad de agua libre para el crecimiento de los hongos. Esto se debe
principalmente a que las sustancias disueltas tienen una cierta afinidad por el
59
agua, que hace que el agua asociada a los solutos no esté disponible para los
organismos (Madigan et al, 2004).
Gráfica 7: Curva de germinación de conidias cepa 845, en agua destilada y agua destilada con sucrosa.
Los resultados del porcentaje de germinación de conidias en la cepa 845 de C.
acutatum, confirmaron que Desfan fue el extracto más efectivo inhibiendo la
germinación de conidias de C. acutatum. Este extracto ya había sido evaluado en
estudios anteriores realizados en CORPOICA donde presentó resultados similares
en el porcentaje de germinación de conidias de C. acutatum, de tomate de árbol,
lo cual nos confirma la eficacia de este extracto para inhibir la germinación de las
conidias en las 3 cepas evaluadas (1047, 935 y 845).
El extracto de Swinglia presento resultados similares a Desfan, excepto en su
dosis mas diluida en la cual su porcentaje de germinación fue de 1.5% (gráfica 8),
siendo menos efectivo; Ecoswing presento resultados similares a Desfan, en la
dosis mas concentrada y la dosis indicada por el producto. En este caso los tres
productos en las dosis más concentradas y la dosis indicada por el producto
tuvieron el mismo efecto de inhibición de la germinación de conidias en C.
acutatum, comportándose de la misma manera. El extracto que presentó menos
efecto para este patogeno fue el extracto de cardón lefaria, puesto que presentó
60
porcentajes de germinación superiores a los controles, lo que indico que este
extractó no tuvo ningún efecto sobre la germinación de conidias en la cepa 845 C.
acutatum.
Tabla 4: Resultados Porcentaje de germinación de conidias cepa 845 de C.
acutatum:
Dosis + Dosis comercial Dosis -1 Dosis -2
Ex de swinglia 0.25% 0.5% 0.5% 1.5%
Capsialil 1.25% 1% 1% 1.25%
Desfan 0.25% 0.5% 0.5% 0.25%
Ecoswing 0.25% 0.5% 1% 2%
Xplode 1% 1.75% 1.25% 1.75%
10-3
10-4
10-5
10-6
Ex de cactus 3.25% 3.5% 3% 3.75%
Control 2.58% 2.58% 2.58% 2.58%
61
Gráfica 8: porcentaje de germinación de conidias cepa 845 de C. acutatum.
En el cultivo monospórico realizado después de la prueba de germinación se pudo
observar que el extracto más efectivo fue Desfan, el cual no presentó crecimiento
micelial en ninguna de sus dosis utilizadas, indicando que al someter las conidias
al tratamiento con el extracto, este no permite su germinacion y que formen
micelio en medio de cultivo PDA, En los demás extractos se presentó crecimiento
micelial en todas las dosis utilizadas, indicando que presentaron poco o ningún
efecto sobre la germinación y desarrollo del hongo (gráfica 9).
Grafica 9: resultados monosporico cepa 845 C. acutatum.
62
8.2. EVALUACIÓN DEL CRECIMIENTO MICELIAL DEL PATOGENO
EN MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO.
8.2.1. Cepa 1047 de C. gloeosporioides
En esta evaluación se obtuvo el radio de crecimiento del hongo en cm, y el
porcentaje de inhibición del crecimiento (PIC). Los resultados del PIC indicaron
que el extracto más efectivo, en la inhibición del crecimiento de C.
gloeosporioides, fue Desfan, cuya efectividad se pudo evidenciar en su dosis más
alta, donde se observó que el extracto inhibió el crecimiento del hongo en un 79.8
%, en las otras dosis utilizadas el porcentaje de inhibición del crecimiento fue
más bajo presentando porcentajes de 75.1% para la dosis recomendada por el
producto, 63.1% y 53.7% para las dosis siguientes. Ecoswing y Capsialil en sus
dosis más concentradas lograron inhibir el crecimiento del hongo en un 19% y
18% respectivamente, (gráfica 10). El resto de los extractos presentaron inhibición
del crecimiento del hongo pero los resultados no fueron significativos.
Los resultados obtenidos para esta prueba indicaron que los extractos que
presentaron los porcentajes de inhibición del crecimiento (PIC) más altos fueron,
Desfan y Ecoswing en sus dosis más concentradas, siendo más efectivo Desfan el
cual presentó el porcentaje de inhibición del cremiento más alto de los extractos
evaluados.
Grafica 10: porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial de la cepa 1047 de C.
gloeosporioides.
63
Figura 5: Crecimiento micelial cepa 1047 tratamiento con Desfan. A) Dosis +1 más
concentrada (0.25 ml/L). B) Dosis comercial (0.2 ml/L). C) Dosis -1diluida (0.15 ml/l).
D) Dosis -2 más diluida (0.10 ml/L). E) Control cepa 1047 de C. gloeosporioides. (Foto: Aguirre. 2008).
En las observaciones macroscópicas realizadas a los tratamientos con Desfan no
se observaron anormalidades en el micelio del hongo, este fué igual al control, y
todos los tratamientos presentaron una coloración salmón en el centro de la
colonia, pero en menor cantidad que la que presentó el control, lo cual indicó que
no se afectó la producción de acérvulos, pero hubo una reducción de estos en los
tratamientos con Desfan, demostrando así un posible efecto fungistático por parte
del extracto hacia el hongo. En las observaciones microscópicas se observaron
apresorios característicos de este género (Figura 6), micelio normal, las conidias
se encontraban sin anormalidades morfológicas, pero se vió que la esporulación
fue escasa en los tratamientos con Desfan. Esto indicó que el único efecto se
presentó en cuanto a crecimiento radial y reducción de la esporulación, el cual
presentó una gran diferencia en la dosis más concentrada con respecto al control
(figura 5.A).
A B
C D
E
64
Figura 6: Formación de apresorios tratamiento con Desfan cepa 1047.
(Foto: Aguirre. 2008).
El efecto de Desfan sobre el crecimiento micelial del hongo, se debe en primer
lugar a sus componentes, Desfan es un desinfectante orgánico extraído de las
semillas de la naranja y toronja conteniendo fracciones de glucosa, fructosa, ácido
ascórbico. El ácido ascórbico funciona como coenzima de varias enzimas
hidrolíticas potenciando la acción de estas. Estas enzimas hidroliticas son
responsables de romper los polisacáridos, componente estructural de la pared
celular de la mayoría de los hongos. De esta forma consigue decodificar e
interferir en los mensajes químicos de las enzimas y de las proteínas
desdobladoras de los nutrientes esenciales para los microorganismos patógenos
(Pérez R. 2008).
8.2.2. Cepa 935 de C. gloeosporioides:
Los porcentajes de inhibición del crecimiento micelial (PIC) en la cepa 935 fueron
muy similares a los obtenidos en la cepa 1047; en este caso el extracto que
presentó el PIC más alto fue Desfan, demostrando su efectividad inhibiendo el
crecimiento en la cepa 935 y 1047, con porcentajes de inhibición de 80.1% para
la dosis mas concentrada Dosis + (0.25 ml/L), en la dosis comercial (0.2 ml/L) se
presentó un porcentaje de inhibición de 74.6% y en las dosis diluidas (0.15 ml/l y
0.10 ml/L), se obtuvieron porcentajes de 63.8% y 53.0% respectivamente,
65
indicando que su mayor efecto se presentó en la dosis mas concentrada (grafica
11).
Grafica 11: porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial cepa 935 de C.
gloeosporioides, a los 8 dias.
Figura 7: Crecimiento micelial cepa 935 tratamiento con Desfan. A) Dosis +1 más
concentrada (0.25 ml/L). B) Dosis comercial (0.2 ml/L). C) Dosis -1diluida (0.15 ml/l).
D) Dosis -2 más diluida (0.10 ml/L). E) Control cepa 935 de C. gloeosporioides. (Foto: Aguirre. 2008).
A B
C D E
66
Los resultados obtenidos con Desfan en la cepa 935 de C. gloeosporioides,
demostraron un efecto inhibitorio por parte del extracto, en el cual se observó
mayor inhibición en la dosis mas concentrada, las observaciones macroscópicas
demostraron que el extracto presentó efecto fungistático, inhibiendo su
crecimiento radial, igual que en la cepa 1047 (figura 7). El hongo desarrolló
estructuras reproductivas, las cuales se evidenciaron por las coloraciones color
salmón en el centro de las colonias, indicando la presencia y formación de
acervulos que contenían las conidias del hongo, en todos los tratamientos con
Desfan se presentaron las mismas coloraciones. En las observaciones al
microscopio se observaron las conidias normales sin ninguna alteración (figura 8),
lo que indicó que el extracto no tuvo efecto sobre estas, y que el extracto solo
inhibió el crecimiento radial del hongo. Es posible que el extracto esté implicado
en la nutrición del hongo, interfiriendo las proteínas que desdoblan los nutrientes,
logrando que el hongo no se nutra ni se desarrolle de manera adecuada.
Figura 8: Conidias cepa 935 de C. gloeosporioides, tratamiento con Desfan dosis 1+
(mas concentrada). (Foto: Aguirre. 2008).
Los datos obtenidos del crecimiento radial (cm) de las colonias fueron analizados
mediante un análisis de varianza ANOVA, el cual mostró que existen diferencias
significativas (α=0.05) entre los diferentes extractos vegetales. Entre las dosis
evaluadas de cada producto no se encontraron diferencias. Con la prueba de
67
Tukey de comparación de medias se determinó que los extractos que mejores
resultados presentaron sobre la cepa C-935 fueron los aislamientos: Desfan,
Ecoswing y Extracto de swinglia (gráfica 12a); sobre la cepa C-1047 fueron:
Desfan (Figura 11), Ecoswing y Xplode (gráfica 12b).
Grafica 12: Comparación de medias, Porcentaje de inhibición del crecimiento
micelial. A) Cepa C-935. B) Cepa 1047 C. gloeosporioides.
8.2.3. Cepa 845 de C. acutatum:
Los resultados obtenidos en la prueba de inhibición del crecimiento micelial en la
cepa 845 de C. acutatum (Gráfica 13), indicaron que el extracto que presento
mayor efecto de inhibición fue Desfan, con porcentajes de inhibición inferiores a
los que se obtuvieron en las cepas anteriores (1047 y 935), la diferencia que se
presentó es que para C. acutatum, el mayor efecto por parte del extracto no se
presentó en la dosis más concentrada (Dosis +1), como se vió en las cepas 1074 y
935 de C. gloeosporioides, sino en la primera dosis diluida (Dosis -1), donde se
observó un porcentaje de inhibición del crecimiento micelial (PIC), de 51.1%,
seguido por la dosis comercial en donde se obtuvo un porcentaje de inhibición de
44.7%; el porcentaje más bajo se vió en la dosis más concentrada con 26.7%
seguido por la dosis más diluida (Dosis-2) que presentó 38.3%. Demostrando así
diferencias en cuanto a la efectividad por parte de las diluciones en comparación
con las otras cepas evaluadas.
A B
68
Grafica 13: porcentaje de inhibicion del crecimiento micelial cepa 845 de C. acutatum, a
los 8 dias.
Figura 9: Crecimiento micelial cepa 845 de C. acutatum, tratamiento con
Desfan. A) Dosis +1 más concentrada (0.25 ml/L). B) Dosis comercial (0.2
ml/L). C) Dosis -1diluida (0.15 ml/l). D) Dosis -2 más diluida (0.10 ml/L). E)
Control cepa 845 de C. acutatum (Foto: Aguirre. 2008).
A B
C D E
69
Los resultados que se obtuvieron del porcentaje de inhibición del crecimiento
micelial en la cepa 845 de C. acutatum, demostraron una gran diferencia con los
resultados obtenidos en las cepas de C. gloeosporioides, principalmente su
porcentaje de inhibición fue mas bajo, además las dosis utilizadas también
mostraron diferencias con las cepas de C. gloeosporioides. No se observaron
anormalidades en los tratamientos con Desfan, al ser comparados con los
controles el crecimiento micelial fue muy similar exceptuando en el crecimiento la
disminución del crecimiento micelial en los tratamientos es notable, vale destacar
que en la primer dosis diluida (dosis-1), el hongo creció muy compacto con
micelio totalmente blanco, mientras que en los otros tratamientos y en el control
se presentaron ciertas coloraciones rosadas indicando la presencia de estructuras
reproductivas del hongo, al realizar las observaciones microscópicas se pudo
observar mucho micelio sin anormalidades pero se vio escasa la esporulación, ya
que no se encontraban tantas conidias como en los controles, esto indica que
posiblemente el extracto causó una disminución en la producción de conidias del
hongo, presentando un efecto fungistático, el cual también inhibió su crecimiento
micelial.
Grafica 14: porcentaje de inhibición del crecimiento (PIC), en las tres cepas utilizadas,
1047 y 935 de C. gloeosporioides. Y 845 de C. acutatum.
70
Con los resultados obtenidos se pudo observar que los extractos que presentaron
porcentajes de inhibición del crecimiento micelial más altos fueron Desfan y
Ecoswing en todas las cepas evaluadas (gráfica 14). El extracto que presentó el
mayor efecto fue Desfan, ya que en las cepas de C. gloeosporioides (1047 y 935),
su efecto fue mayor que en la cepa de C. acutatum (845), donde Desfan también
presentó el mayor efecto, diferenciándose de las cepas 1047 y 935 por que el
porcentaje de inhibición mas alto se vió en la primera dosis diluida Dosis -1 (0.15
ml/L), y no en la dosis más concentrada Dosis +1 (0.25ml/L), como se presentó
en las otras cepas evaluadas; mostrando que la dosis mas concentrada fue la
menos efectiva en esta cepa. En cuanto al extracto Ecoswing, su mayor efecto se
vió en la cepa 935 de C. gloeosporioides, presentando su mayor efecto en la dosis
más concentrada Dosis +1 (2ml/L), estos resultados indicaron claramente que el
los dos extractos Desfan y Ecoswing fueron mas efectivos en la cepa 935 de C.
gloeosporioides, aislada de frutos de mango hilacha obtenidos en el municipio de
espinal en departamento del Tolima.
Los resultados obtenidos con el extracto de cardón lefaria difieren un poco a los
hallazgos de Zapata et al, 2003, quienes estudiaron la reducción del desarrollo de
hongos fitopatógenos con extracto de cardón lefaria (cereus deficiens otto &
diert), donde los resultados de la investigación mostraron un potencial inhibitorio
para el control de S. rolfsii y C. gloeosporioides, debido a que se obtuvieron
reducciones significativas en el crecimiento micelial. En este caso los resultados
en las cepas utilizadas (1047 y 935 de C. gloeosporioides, y 845 de C.
acutatum), no se vió un efecto significativo de este extracto, lo cual podría ser
atribuido a muchos factores implicados en el efecto causado por el extracto, como
el tipo de cepa utilizada, las condiciones utilizadas en los ensayos y
principalmente la composición del extracto, ya que en la investigación realizada
por Zapata et al, en el 2003, se hicieron extracciones etanólicas desgrasadas
(EED), etanólicas sin desgrasar (EESD) y acuosas (EA) de secciones medias del
tallo de Cereus deficiens (Cactaceae), en donde el mayor efecto lo mostraron
EED y EESD. El efecto reductor del crecimiento micelial de los extractos fue
directamente proporcional a la concentración utilizada. Con los resultados que se
obtuvieron se confirmó que la extracción acuosa no es la más efectiva para la
71
inhibición del crecimiento micelial, aunque se vió efecto sobre el crecimiento del
hongo, los resultados no resultan muy significativos. En cuanto a las dosis
utilizadas es posible que estas también no sean las más efectivas, por tanto se
recomienda su uso en dosis más concentradas para nuevas investigaciones.
Grafica 15: efecto de los extractos vegetales y sus dosis en PIC en las tres cepas
1047 y 935 de C. gloeosporioides. Y 845 de C. acutatum. De acuerdo a la
comparación de medias (α0.05). Letras iguales indican que no hay diferencia
significativa entre tratamientos.
Según el análisis de varianza y la prueba de comparación de medias, el extracto
que presentó mayor porcentaje de inhibición del crecimiento micelial en las tres
cepas fue Desfan, mostrando diferencias significativas entre tratamientos, así
mismo, la dosis que presentó los mejores resultados fue la recomendada por el
producto (DR) con la media más alta de las dosis utilizadas, seguida por la dosis
B
A
A
B
A
A
A
B
B
A
A
B
B
A
A
B
A
A
A
A
A
A
A
A
72
más concentrada y por la primer dosis diluida (Dosis -1). La segunda dosis diluida
(Dosis -2) presentó la media mas baja de todas las dosis, mostrando diferencias
significativas con las demás dosis utilizadas, pero comportándose de la misma
manera en las tres cepas utilizadas, indicando que no existe diferencias
significativas en las dosis utilizadas para estas cepas (Gráfica 15). Un ejemplo de
esto lo podemos ver con Desfan, en la dosis recomendada, donde presentó los
mejores resultados en las tres cepas evaluadas. En los resultados obtenidos con
Ecoswing se obtuvo el porcentaje de inhibición del crecimiento micelial más alto
en la dosis más concentrada (Dosis +1), y en la dosis recomendada por el
producto (DR), mostrando diferencias significativas con las dosis diluidas (Dosis -
1, y Dosis-2).
8.3. PRUEBA DE INHIBICIÓN DEL DESARROLLO DE LOS SÍNTOMAS
DE ANTRACNOSIS EN FRUTOS DE MANGO DESPRENDIDOS.
El objetivo de esta prueba fue determinar si los extractos lograban inhibir el
desarrollo de los síntomas en frutos desprendidos de mango hilacha, para esta
prueba se seleccionaron los extractos Desfan y Ecoswing, debido a que estos
fueron los que presentaron los mejores resultados en las pruebas de inhibición del
crecimiento micelial y de inhibición de la germinación de conidias.
Se determinaron y monitorearon los síntomas de la enfermedad en los mangos
durante 10 días, debido a que en el día 10 la mayoría de los frutos presentaban
infección muy avanzada. A partir del tercer día tras la inoculación, se observaron
los primeros síntomas de la enfermedad, los cuales se evidenciaron por medio de
un halo color café alrededor del disco de Agar que se coloco en cada fruto (figura
10).
73
Figura 10: Fruto de mango con los primeros síntomas de antracnosis a los tres días. Halo
café alrededor del disco de Agar. Testigo cepa 1047. (Foto: Aguirre. 2008).
Figura 11: frutos de mango con síntomas avanzados de antracnosis a los diez días. Halo
café alrededor del disco de Agar. Testigo cepa 1047 (Foto: Aguirre. 2008).
Los resultados en esta prueba se determinaron realizando observaciones de
síntomas y signos causados por la enfermedad, para esto se midió el radio del halo
alrededor del disco de Agar con el patógeno, y se realizaron observaciones de
algunos signos característicos de la enfermedad como la presencia de acérvulos
formados por el hongo, esto con el fin de determinar cual de los extractos causaba
algún efecto en la manifestación de los síntomas y signos de la enfermedad.
Durante los 10 días de monitoreo de las cámaras húmedas se pudo observar que
en la cepa 1047 de C. gloeosporioides, los extractos no presentaron algún efecto
inhibitorio de los síntomas, al comparar los resultados con los controles (Tabla 5),
se pudo ver que la diferencia entre los tratamientos con los extractos y los
controles es mínima, indicando que ninguno de los extractos en condiciones
74
controladas presentó algún efecto de inhibición de los síntomas de la enfermedad
en frutos de mango. Se realizaron observaciones del desarrollo de la enfermedad
en los frutos donde se observó la formación de acérvulos de color salmón sobre el
disco de Agar que se puso en los frutos (figura 12), los acérvulos se presentaron
tanto en los tratamientos con los extractos como en los controles, esto explica que
ninguno de los extractos influyó en el desarrollo de la enfermedad.
Figura 12: fruto de mango con formación de acérvulos color salmón de
Colletrotrichum gloesporioides, sobre el disco de Agar. Tratamiento con Desfan
dosis +1 (0.25ml/L), Cepa 1047 (Foto: Aguirre. 2008).
Tabla 5: resultados prueba inhibición del desarrollo de la antracnosis en frutos
desprendidos cepa 1047 de C. gloeosporioides.
EXTRACTO DOSIS
RADIO DEL HALO DE INFECCIÓN
EN CM.
DIA 3 DIA 6 DIA 8 DIA 10
DESFAN
0.25 mL/L 0.1 0.5 0.75 1.2
0.2 ml/L 0.1 0.5 0.7 1.25
ECOSWING
2 mL/L 0.2 0.34 0.6 1
1.5mL/L 0.1 0.43 0.7 1.3
CONTROL 0.1 0.25 0.7 1.12
75
En la cepa 935 de C. gloeosporioides, los resultados que se presentaron en la
prueba en frutos desprendidos, indicaron que ninguno de los extractos presentó
inhibición del desarrollo de los signos y síntomas de la enfermedad en mango, ya
que el hongo en los tratamientos con los extractos (Desafan y Ecoswing) se
comportaron de manera similar a los controles (Tabla 6), demostrando que
ninguno de los extractos fue efectivo. También se presentó la formación de
acérvulos color salmón, sobre el disco de Agar, lo mismo que en los controles,
confirmando así que no hubo ningún efecto de los extractos, sobre la inhibición
del crecimiento micelial del hongo ni sobre el desarrollo y formación de sus
estructuras reproductivas este.
Tabla 6: resultados prueba inhibición del desarrollo de la antracnosis en frutos
desprendidos cepa 935 de C. gloeosporioides.
EXTRACTO DOSIS
RADIO DEL HALO DE
INFECCIÓN EN CM.
DÍA 3 DIA 6 DIA 8 DIA 10
DESFAN
0.25 mL/L 0.1 0.46 0.9 1.32
0.2 ml/L 0.15 0.61 0.82 1.41
ECOSWING
2 mL/L 0.1 0.46 0.86 1.17
1.5mL/L 0.15 0.47 0.86 1.3
CONTROL 0.1 0.55 0.7 1.3
Los resultados obtenidos en la prueba para la determinación del efecto de los
extractos (Desfan y Ecoswing) en la aparición de síntomas por infección
quiescente en mango, se determinaron por medio de presencia o ausencia de
76
síntomas, donde se pudo observar que los primeros síntomas de la enfermedad
empezaron a presentarse a partir del octavo día de observaciones, estos síntomas
se vieron en los tratamientos con los extractos excepto en el tratamiento con la
dosis comercial de Desfan, en los demás se presentaron manchas cafés,
características de antracnosis en mango en los controles los cuales también se
presentaron los síntomas a partir del octavo día. A medida que el fruto se
desarrolla los valores de pH disminuyen dificultando la penetración del patógeno
durante la maduración del fruto; por lo tanto los síntomas que se observan en los
estados fenológicos E3 y E4 son el resultado de infecciones quiescentes que se
forman cuando el fruto se encuentra en los estados fenológicos E1 y E2. (Parra,
L.2008).
El pH de frutos enfermos es superior a 6.0, y el valor mínimo para que se active la
secreción de pectinasas y por ende la degradación de la cutícula, es de mínimo 5.1
(Yakoby et al 1999) esta situación puede influir en la actividad del
microorganismo. Debido a esto se pudo presentar un retraso en la aparición de
síntomas de antracnosis en el tratamiento con Desfan en la dosis comercial
0.2ml/L (Tabla 7), teniendo en cuenta que el pH de 2 que posee Desfan no es el
adecuado para que el microorganismo se desarrolle, lo cual pudo retrasar la
aparición de síntomas de la enfermedad.
También se pudo observar que los valores de pH del exocarpio en áreas sanas de
frutos enfermos, se ve alterada por la presencia de C. gloeosporioides aumentando
el valor de pH con respecto al de un fruto completamente sano. (Parra, L.2008).
En el décimo día de seguimiento todos los tratamientos presentaban síntomas
similares a los controles (Tabla 7); esto indica que en esta prueba ninguno de los
extractos utilizados fue eficiente, ni logró controlar ni prevenir la aparición de los
síntomas de la enfermedad en los frutos desprendidos.
77
Figura 13: Síntomas y signos de antracnosis en mango, tratamiento con Desfan A) estado
inicial, día 6 B) estado avanzado, día 8 (Foto: Aguirre. 2008).
Tabla 7: determinación del efecto de los extractos (Desfan y Ecoswing) en la
aparición de síntomas por infección quiescente en mango.
EXTRACTO DOSIS
Ausencia/presencia
DÍA 3 6 8 10
DESFAN
+1 0 0 1 1
DC 0 0 0 1
ECOSWING
+1 0 0 1 1
DC 0 0 1 1
CONTROL 0 0 1 1
En los resultados obtenidos en las pruebas de inhibición de la germinación y
porcentaje de inhibición del crecimiento micelial, es posible que el efecto
inhibitorio presentado por Desfan, se deba principalmente a su composición,
como ya se había mencionado anteriormente, Desfan es un desinfectante orgánico
extraído de las semillas de la naranja y toronja, el cual contiene fracciones de
glucosa, fructosa, ácido ascórbico. Este último aparte de intervenir en la acción
A B
78
enzimática del hongo e intervenir en su nutrición, también es responsable del bajo
pH del extracto.
Desfan presenta un pH de 2, siendo este el extracto con el pH mas bajo de todos
los utilizados (Anexo 1). Cada organismo tiene un rango de pH dentro del cual es
posible su crecimiento y normalmente posee un pH óptimo bien definido, la
acidez o alcalinidad de un medio tiene una gran influencia sobre el crecimiento
microbiano. Algunos microorganismos crecen mejor a pH bajo o alto, aunque la
mayoría lo hacen a pH entre 6 y 8 cercano a la neutralidad. (Madigan et al, 2004).
Colletotrichum sp, se desarrolla mejor en el rango de pH 5-8 siendo su óptimo pH
5. (Guanipa, 1989).
El crecimiento micelial in vitro de Colletotrichum sp, presenta algunas similitudes
con el desarrollo necrótrofo, en lo que se refiere a la expresión enzimática (Shih et
al., 2000), la rápida colonización y utilización de la fuente de alimento y la
producción de amonio en respuesta a pH ácido in vitro, incrementando de esta
forma el pH hasta obtener el nivel óptimo para su actividad enzimática (Mendgen
y Hahn, 2000). Estos factores son muy importantes en el desarrollo de la
patogenicidad de hongos y bacterias. (Benito et al., 2000). Esto podría indicar que
el pH del medio en este caso, no estuvo implicado en la inhibición del crecimiento
micelial en cuanto a la prueba in vitro, debido a que si se presento inhibición por
parte del extracto, aunque pudo ser más por el efecto del acido ascórbico el cual
puede intervenir directamente en la acción enzimática del hongo, afectando su
nutrición, como ya se había mencionado.
Para la prueba in vivo sobre frutos desprendidos, donde no se presentaron
resultados importantes por parte del extracto, si es posible que el hongo este
produciendo amonio en respuesta a pH ácido, incrementando de esta forma el pH
hasta obtener el nivel óptimo para su actividad enzimática, logrando que este se
desarrolle e inicie una fase biótrofa. La fase biótrofa es de corta duración, asegura
el establecimiento del patógeno al hospedero, seguido de una fase necrótrofa
asociada a la aparición de los síntomas de la antracnosis, en donde hay un
incremento en la expresión enzimática para degradar la pared celular vegetal
aumentar la virulencia del patógeno. (Cerón, 2005).
79
Gráfica 16: porcentaje de inhibición del crecimiento micelial en frutos
desprendidos.
En la gráfica 16 se presenta el seguimiento realizado en la prueba de frutos
desprendidos donde se obtuvo el porcentaje de inhibición del crecimiento (PIC),
midiendo el radio del halo que se presentaba alrededor del disco de Agar. Los
80
datos negativos se deben a que el halo del tratamiento fue más grande que el halo
del testigo, lo cual quiere decir que el extracto no presento ningún efecto en
absoluto.
Como podemos observar en la gráfica 16, ninguno de los 2 extractos (Desfan y
Ecoswing) presentó inhibición en la cepa 1047 de C. gloesporioides, ya que todos
los resultados dieron por debajo de cero. En cuanto a la cepa 935 de C.
gloesporioides, en las primeras lecturas (3 y 6), se observó cierta inhibición por
parte de los dos extractos aunque un poco mayor con Ecoswing en la dosis más
concentrada, pero si observamos las siguientes lecturas, se presenta una
disminución en el PIC a medida que pasa el tiempo, en la lectura 8 y 10, los datos
están por debajo de cero, menos en Ecoswing con la dosis más concentrada, con
un porcentaje de inhibición menor a 5%, el cual no es muy significativo. Se podría
pensar que este resultado se debe a que la cepa 1047 es mas patogénica en frutos,
que la cepa 935, la cual presentó síntomas de manera más lenta, más no que hubo
algún efecto de inhibición.
81
9. CONCLUSIONES.
El extracto vegetal que presentó los mejores resultados en el control de C.
gloeosporioides, de mango en condiciones in vitro, fue el producto comercial
Desfan en la dosis recomendada (0.2ml/L) por la casa comercial.
De los seis extractos vegetales evaluados, el extracto de extracto de cardón lefaria
(cereus deficiens otto & diert), fue el que presentó mayor efectividad en la
inhibición de la germinación de conidias de la cepa 1047 de C. gloeosporioides.
La cepa 1047 de C. gloeosporioides, provenientes de fruto de mango del
departamento de Magdalena, fue la cepa que mostró mayor virulencia en las
evaluaciones sobre frutos desprendidos; lo que mostró que posiblemente existe
variabilidad genética entre las cepas evaluadas, cuyos orígenes geográficos son
distintos.
Las evaluaciones exploratorias de inhibición del desarrollo de C. gloeosporioides,
de mango realizadas en el laboratorio, brindaron la información necesaria para
seleccionar un extracto para estudios posteriores en campo.
El agua destilada mostro ser un sustrato adecuado para la germinación de conidias
de C. gloeosporioides, y C. acutatum.
82
10. RECOMENDACIONES.
Realizar evaluaciones de control de la antracnosis en mango con otros extractos
vegetales disponibles en el mercado.
Realizar evaluaciones del extracto Desfan , directamente sobre árboles de mango
en diferentes etapas fonológicas, para estudiar su eficacia en la disminución de la
antracnosis en los diferentes órganos vegetales.
Realizar evaluaciones in vitro teniendo en cuenta las condiciones en campo, y los
componentes de los productos evaluados, debido a que muchos extractos tienen
componente que se pueden alterar debido a las condiciones ambientales, esto
influye mucho en los resultados en campo.
83
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89
12. ANEXO 1.
PH EXTRACTOS.
EXTRACTOS. PH.
DESFAN. 2
XPLODE. 5
ECOSWING. 5
EX. CACTUS. 5
CAPSIALIL. 6
EX. SWINGLIA. 8
ANEXO 2.
Medio Marthur’s.
Dextrosa: 11.2g
MgSO4. 7 H2O: 2.5g
KH2PO4: 2.7g
Bactopeptona: 1g
Extracto de levadura: 0.8g
Agar: 12g
ANEXO 3.
Agar agua.
Gelatina sin sabor: 7g
Agar: 10g
90
ANEXO 4.
Análisis estadístico.
Evaluación del crecimiento micelial.
CEPA 1047
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 3 1+ CERO DR
Number of Observations Read 100
Number of Observations Used 49
The GLM Procedure
Dependent Variable: CRECIMIENTO CRECIMIENTO
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 12 52.58608844 4.38217404 125.04 <.0001
Error 36 1.26166667 0.03504630
Corrected Total 48 53.84775510
R-Square Coeff Var Root MSE CRECIMIENTO Mean
0.976570 6.103208 0.187207 3.067347
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 49.53700510 8.25616752 235.58 <.0001
DOSIS 1 0.31222321 0.31222321 8.91 0.0051
EXTRACTO*DOSIS 5 2.73686012 0.54737202 15.62 <.0001
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 47.25900298 9.45180060 269.69 <.0001
DOSIS 1 0.26602083 0.26602083 7.59 0.0091
EXTRACTO*DOSIS 5 2.73686012 0.54737202 15.62 <.0001
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
91
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 36
Error Mean Square 0.035046
Critical Value of Studentized Range 4.41355
Minimum Significant Difference 0.3238
Harmonic Mean of Cell Sizes 6.511628
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 3.7750 4 CONTROL
A
A 3.6875 8 E. CACTUS
A
A 3.6600 5 E. SWINGLIA
A
A 3.5125 8 CAPSIALIL
A
A 3.4750 8 XPLODE
B 3.1000 8 ECOSWING
C 0.8375 8 DESFAN
CEPA 1047
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 36
Error Mean Square 0.035046
Critical Value of Studentized Range 3.45676
Minimum Significant Difference 0.2175
Harmonic Mean of Cell Sizes 8.851312
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 3.77500 4 CERO
B 3.10000 23 DR
92
B
B 2.90455 22 1+
CEPA 1047
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Level of Level of ---------CRECIMIENTO---------
EXTRACTO DOSIS N Mean Std Dev
CAPSIALIL 1+ 4 2.97500000 0.12583057
CAPSIALIL DR 4 4.05000000 0.17320508
CONTROL CERO 4 3.77500000 0.33040379
DESFAN 1+ 4 0.75000000 0.05773503
DESFAN DR 4 0.92500000 0.05000000
E. CACTUS 1+ 4 3.92500000 0.15000000
E. CACTUS DR 4 3.45000000 0.33166248
E. SWINGLIA 1+ 2 3.65000000 0.21213203
E. SWINGLIA DR 3 3.66666667 0.05773503
ECOSWING 1+ 4 2.95000000 0.12909944
ECOSWING DR 4 3.25000000 0.12909944
XPLODE 1+ 4 3.55000000 0.05773503
XPLODE DR 4 3.40000000 0.27080128
CEPA 1047
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Least Squares Means
CRECIMIENTO LSMEAN
EXTRACTO LSMEAN Number
CAPSIALIL Non-est 1
CONTROL Non-est 2
DESFAN Non-est 3
E. CACTUS Non-est 4
E. SWINGLIA Non-est 5
ECOSWING Non-est 6
XPLODE Non-est 7
CEPA 935
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 3 1+ CERO DR
Number of Observations Read 100
93
Number of Observations Used 52
CEPA 935
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Dependent Variable: CRECIMIENTO CRECIMIENTO
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 12 28.61923077 2.38493590 93.01 <.0001
Error 39 1.00000000 0.02564103
Corrected Total 51 29.61923077
R-Square Coeff Var Root MSE CRECIMIENTO Mean
0.966238 7.639141 0.160128 2.096154
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 27.89423077 4.64903846 181.31 <.0001
DOSIS 1 0.16333333 0.16333333 6.37 0.0158
EXTRACTO*DOSIS 5 0.56166667 0.11233333 4.38 0.0029
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 25.74750000 5.14950000 200.83 <.0001
DOSIS 1 0.16333333 0.16333333 6.37 0.0158
EXTRACTO*DOSIS 5 0.56166667 0.11233333 4.38 0.0029
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 39
Error Mean Square 0.025641
Critical Value of Studentized Range 4.39425
Minimum Significant Difference 0.266
Harmonic Mean of Cell Sizes 7
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 2.80000 4 CONTROL
A
A 2.72500 8 CAPSIALIL
A
94
B A 2.58750 8 E. CACTUS
B
B C 2.43750 8 XPLODE
C
C 2.28750 8 E. SWINGLIA
D 1.56250 8 ECOSWING
E 0.62500 8 DESFAN
CEPA 935
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 39
Error Mean Square 0.025641
Critical Value of Studentized Range 3.44546
Minimum Significant Difference 0.1839
Harmonic Mean of Cell Sizes 9
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 2.80000 4 CERO
B 2.09583 24 DR
B
B 1.97917 24 1+
CEPA 935
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Level of Level of ---------CRECIMIENTO---------
EXTRACTO DOSIS N Mean Std Dev
CAPSIALIL 1+ 4 2.70000000 0.08164966
CAPSIALIL DR 4 2.75000000 0.10000000
CONTROL CERO 4 2.80000000 0.08164966
DESFAN 1+ 4 0.55000000 0.05773503
DESFAN DR 4 0.70000000 0.08164966
E. CACTUS 1+ 4 2.75000000 0.10000000
E. CACTUS DR 4 2.42500000 0.05000000
E. SWINGLIA 1+ 4 2.15000000 0.50000000
E. SWINGLIA DR 4 2.42500000 0.05000000
ECOSWING 1+ 4 1.40000000 0.08164966
95
ECOSWING DR 4 1.72500000 0.09574271
XPLODE 1+ 4 2.32500000 0.12583057
XPLODE DR 4 2.55000000 0.05773503
CEPA 935
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Least Squares Means
CRECIMIENTO LSMEAN
EXTRACTO LSMEAN Number
CAPSIALIL Non-est 1
CONTROL Non-est 2
DESFAN Non-est 3
E. CACTUS Non-est 4
E. SWINGLIA Non-est 5
ECOSWING Non-est 6
XPLODE Non-est 7
CEPA 845
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 3 1+ CERO DR
Number of Observations Read 100
Number of Observations Used 52
CEPA 845
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Dependent Variable: CRECIMIENTO CRECIMIENTO
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 12 2.63923077 0.21993590 20.06 <.0001
Error 39 0.42750000 0.01096154
Corrected Total 51 3.06673077
R-Square Coeff Var Root MSE CRECIMIENTO Mean
0.860601 6.236269 0.104697 1.678846
96
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 2.23548077 0.37258013 33.99 <.0001
DOSIS 1 0.06020833 0.06020833 5.49 0.0243
EXTRACTO*DOSIS 5 0.34354167 0.06870833 6.27 0.0002
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 1.91687500 0.38337500 34.97 <.0001
DOSIS 1 0.06020833 0.06020833 5.49 0.0243
EXTRACTO*DOSIS 5 0.34354167 0.06870833 6.27 0.0002
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 39
Error Mean Square 0.010962
Critical Value of Studentized Range 4.39425
Minimum Significant Difference 0.1739
Harmonic Mean of Cell Sizes 7
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 1.95000 4 CONTROL
A
B A 1.81250 8 XPLODE
B A
B A 1.81250 8 E. CACTUS
B A
B A 1.80000 8 E. SWINGLIA
B
B C 1.67500 8 CAPSIALIL
C
C 1.58750 8 ECOSWING
D 1.25000 8 DESFAN
CEPA 845
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for CRECIMIENTO
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 39
97
Error Mean Square 0.010962
Critical Value of Studentized Range 3.44546
Minimum Significant Difference 0.1202
Harmonic Mean of Cell Sizes 9
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 1.95000 4 CERO
B 1.69167 24 1+
B
B 1.62083 24 DR
CEPA 845
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Level of Level of ---------CRECIMIENTO---------
EXTRACTO DOSIS N Mean Std Dev
CAPSIALIL 1+ 4 1.62500000 0.05000000
CAPSIALIL DR 4 1.72500000 0.12583057
CONTROL CERO 4 1.95000000 0.12909944
DESFAN 1+ 4 1.42500000 0.05000000
DESFAN DR 4 1.07500000 0.12583057
E. CACTUS 1+ 4 1.82500000 0.09574271
E. CACTUS DR 4 1.80000000 0.14142136
E. SWINGLIA 1+ 4 1.72500000 0.05000000
E. SWINGLIA DR 4 1.87500000 0.09574271
ECOSWING 1+ 4 1.67500000 0.12583057
ECOSWING DR 4 1.50000000 0.11547005
XPLODE 1+ 4 1.87500000 0.12583057
XPLODE DR 4 1.75000000 0.05773503
CEPA 845
------------------------------------ DIA=8 -------------------------------------
The GLM Procedure
Least Squares Means
CRECIMIENTO LSMEAN
EXTRACTO LSMEAN Number
CAPSIALIL Non-est 1
CONTROL Non-est 2
DESFAN Non-est 3
E. CACTUS Non-est 4
E. SWINGLIA Non-est 5
ECOSWING Non-est 6
XPLODE Non-est 7
98
Prueba de germinación de conidias.
CEPA 1047
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 5 1+ 1- 2- CERO DR
Number of Observations Read 100
Number of Observations Used 100
CEPA 1047
The GLM Procedure
Dependent Variable: PORC_GERMINACION PORC_GERMINACION
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 24 57.16000000 2.38166667 6.44 <.0001
Error 75 27.75000000 0.37000000
Corrected Total 99 84.91000000
R-Square Coeff Var Root MSE PORC_GERMINACION Mean
0.673183 114.7691 0.608276 0.530000
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 44.66000000 7.44333333 20.12 <.0001
DOSIS 3 1.04166667 0.34722222 0.94 0.4265
EXTRACTO*DOSIS 15 11.45833333 0.76388889 2.06 0.0212
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 24.12500000 4.82500000 13.04 <.0001
DOSIS 3 1.04166667 0.34722222 0.94 0.4265
EXTRACTO*DOSIS 15 11.45833333 0.76388889 2.06 0.0212
CEPA 1047
The GLM Procedure
Dependent Variable: PORC_GERMINACIONT
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 24 821.539484 34.230812 6.56 <.0001
99
Error 75 391.375076 5.218334
Corrected Total 99 1212.914560
R-Square Coeff Var Root MSE PORC_GERMINACIONT Mean
0.677327 98.34827 2.284367 2.322733
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 627.7244893 104.6207482 20.05 <.0001
DOSIS 3 13.7468137 4.5822712 0.88 0.4564
EXTRACTO*DOSIS 15 180.0681810 12.0045454 2.30 0.0096
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 416.4928337 83.2985667 15.96 <.0001
DOSIS 3 13.7468137 4.5822712 0.88 0.4564
EXTRACTO*DOSIS 15 180.0681810 12.0045454 2.30 0.0096
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 0.37
Critical Value of Studentized Range 4.28480
Minimum Significant Difference 0.7788
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.2
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 2.7500 4 CONTROL
B 1.3750 16 CAPSIALIL
B
C B 0.8125 16 ECOSWING
C
C D 0.3125 16 XPLODE
C D
C D 0.0625 16 E. SWINGLIA
C D
C D 0.0625 16 DESFAN
D
D 0.0000 16 E. CACTUS
CEPA 1047
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
100
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 5.218334
Critical Value of Studentized Range 4.28480
Minimum Significant Difference 2.9247
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.2
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 9.4428 4 CONTROL
B 5.4010 16 CAPSIALIL
B
C B 4.2445 16 ECOSWING
C
C D 1.7935 16 XPLODE
D
D 0.3587 16 E. SWINGLIA
D
D 0.3587 16 DESFAN
D
D 0.0000 16 E. CACTUS
CEPA 1047
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 0.37
Critical Value of Studentized Range 3.95308
Minimum Significant Difference 0.6941
Harmonic Mean of Cell Sizes 12
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 2.7500 4 CERO
B 0.5833 24 2-
B
B 0.4583 24 1-
B
B 0.4167 24 DR
B
B 0.2917 24 1+
CEPA 1047
The GLM Procedure
101
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 5.218334
Critical Value of Studentized Range 3.95308
Minimum Significant Difference 2.6068
Harmonic Mean of Cell Sizes 12
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 9.4428 4 CERO
B 2.4535 24 2-
B
B 2.3286 24 1-
B
B 1.7877 24 DR
B
B 1.5344 24 1+
CEPA 845
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 5 1+ 1- 2- CERO DR
Number of Observations Read 100
Number of Observations Used 100
Dependent Variable: PORC_GERMINACION PORC_GERMINACION
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 24 116.5400000 4.8558333 7.39 <.0001
Error 75 49.2500000 0.6566667
Corrected Total 99 165.7900000
R-Square Coeff Var Root MSE PORC_GERMINACION Mean
0.702937 58.29854 0.810350 1.390000
102
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 102.2275000 17.0379167 25.95 <.0001
DOSIS 3 6.6145833 2.2048611 3.36 0.0232
EXTRACTO*DOSIS 15 7.6979167 0.5131944 0.78 0.6935
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 91.42708333 18.28541667 27.85 <.0001
DOSIS 3 6.61458333 2.20486111 3.36 0.0232
EXTRACTO*DOSIS 15 7.69791667 0.51319444 0.78 0.6935
Dependent Variable: PORC_GERMINACIONT
Sum of
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 24 946.554304 39.439763 4.72 <.0001
Error 75 626.119684 8.348262
Corrected Total 99 1572.673988
R-Square Coeff Var Root MSE PORC_GERMINACIONT Mean
0.601876 52.48690 2.889336 5.504871
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 765.3032673 127.5505445 15.28 <.0001
DOSIS 3 61.2822473 20.4274158 2.45 0.0703
EXTRACTO*DOSIS 15 119.9687898 7.9979193 0.96 0.5066
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 684.6742054 136.9348411 16.40 <.0001
DOSIS 3 61.2822473 20.4274158 2.45 0.0703
EXTRACTO*DOSIS 15 119.9687898 7.9979193 0.96 0.5066
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 0.656667
Critical Value of Studentized Range 4.28480
Minimum Significant Difference 1.0375
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.2
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 3.3750 16 E. CACTUS
103
A
A 3.0000 4 CONTROL
B 1.4375 16 XPLODE
B
C B 1.1250 16 CAPSIALIL
C B
C B 0.9375 16 ECOSWING
C B
C B 0.6875 16 E. SWINGLIA
C
C 0.3750 16 DESFAN
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 8.348262
Critical Value of Studentized Range 4.28480
Minimum Significant Difference 3.6993
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.2
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 10.485 16 E. CACTUS
A
B A 9.904 4 CONTROL
B
B C 6.298 16 XPLODE
C
D C 5.376 16 CAPSIALIL
D C
D C 4.334 16 ECOSWING
D C
D C 3.284 16 E. SWINGLIA
D
D 2.152 16 DESFAN
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 0.656667
Critical Value of Studentized Range 3.95308
Minimum Significant Difference 0.9247
Harmonic Mean of Cell Sizes 12
NOTE: Cell sizes are not equal.
104
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 3.0000 4 CERO
B 1.7500 24 2-
B
B 1.2917 24 DR
B
B 1.2083 24 1-
B
B 1.0417 24 1+
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 75
Error Mean Square 8.348262
Critical Value of Studentized Range 3.95308
Minimum Significant Difference 3.2972
Harmonic Mean of Cell Sizes 12
NOTE: Cell sizes are not equal.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 9.904 4 CERO
B 6.553 24 2-
B
B 5.258 24 DR
B
B 5.158 24 1-
B
B 4.318 24 1+
CEPA 935
The GLM Procedure
Class Level Information
Class Levels Values
EXTRACTO 7 CAPSIALIL CONTROL DESFAN E. CACTUS E. SWINGLIA ECOSWING
XPLODE
DOSIS 5 1+ 1- 2- CERO DR
Number of Observations Read 100
Number of Observations Used 99
The GLM Procedure
Dependent Variable: PORC_GERMINACION PORC_GERMINACION
Sum of
105
Source DF Squares Mean Square F Value Pr > F
Model 24 63.5151515 2.6464646 4.02 <.0001
Error 74 48.6666667 0.6576577
Corrected Total 98 112.1818182
R-Square Coeff Var Root MSE PORC_GERMINACION Mean
0.566180 65.27247 0.810961 1.242424
Source DF Type I SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 6 50.69848485 8.44974747 12.85 <.0001
DOSIS 3 1.47375479 0.49125160 0.75 0.5275
EXTRACTO*DOSIS 15 11.34291188 0.75619413 1.15 0.3299
Source DF Type III SS Mean Square F Value Pr > F
EXTRACTO 5 46.55086580 9.31017316 14.16 <.0001
DOSIS 3 1.32444444 0.44148148 0.67 0.5723
EXTRACTO*DOSIS 15 11.34291188 0.75619413 1.15 0.3299
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 74
Error Mean Square 0.657658
Critical Value of Studentized Range 4.28638
Minimum Significant Difference 1.0421
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.12583
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 2.2500 4 CONTROL
A
B A 2.1875 16 XPLODE
B A
B A 1.6875 16 E. CACTUS
B A
B A C 1.4667 15 CAPSIALIL
B C
B C 1.1875 16 ECOSWING
C
D C 0.6250 16 E. SWINGLIA
D
D 0.0625 16 DESFAN
CORPORACION COLOMBIANA DE INVESTIGACION AGROPECUARIA (CORPOICA) 1622
EXTRACTOS GERMINACION
ERIKA MARTINEZ
106
PROCESÓ: PROGRAMA DE BIOMETRIA
18 DE NOVIEMBRE DE 2008
CEPA 935
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 74
Error Mean Square 6.609846
Critical Value of Studentized Range 4.28638
Minimum Significant Difference 3.3039
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.12583
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N EXTRACTO
A 8.454 4 CONTROL
A
A 8.322 16 XPLODE
A
A 6.985 16 E. CACTUS
A
B A 6.336 15 CAPSIALIL
B A
B A 5.560 16 ECOSWING
B
B C 3.168 16 E. SWINGLIA
C
C 0.359 16 DESFAN
CORPORACION COLOMBIANA DE INVESTIGACION AGROPECUARIA (CORPOICA) 1623
EXTRACTOS GERMINACION
ERIKA MARTINEZ
PROCESÓ: PROGRAMA DE BIOMETRIA
18 DE NOVIEMBRE DE 2008
CEPA 935
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACION
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 74
Error Mean Square 0.657658
Critical Value of Studentized Range 3.95439
Minimum Significant Difference 0.9278
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.94805
NOTE: Cell sizes are not equal.
107
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 2.2500 4 CERO
A
B A 1.3333 24 2-
B
B 1.2917 24 DR
B
B 1.1667 24 1-
B
B 1.0000 23 1+
CORPORACION COLOMBIANA DE INVESTIGACION AGROPECUARIA (CORPOICA) 1624
EXTRACTOS GERMINACION
ERIKA MARTINEZ
PROCESÓ: PROGRAMA DE BIOMETRIA
18 DE NOVIEMBRE DE 2008
CEPA 935
The GLM Procedure
Tukey's Studentized Range (HSD) Test for PORC_GERMINACIONT
NOTE: This test controls the Type I experimentwise error rate, but it generally
has a higher Type II error rate than REGWQ.
Alpha 0.05
Error Degrees of Freedom 74
Error Mean Square 6.609846
Critical Value of Studentized Range 3.95439
Minimum Significant Difference 2.9412
Harmonic Mean of Cell Sizes 11.94805
NOTE: Cell sizes are not equal.
Means with the same letter are not significantly different.
Tukey Grouping Mean N DOSIS
A 8.454 4 CERO
B 5.411 24 2-
B
B 5.312 24 DR
B
B 5.278 24 1-
B
B 4.405 23 1+
![cartilla plagas y enfermedades granadilla-corpoica[1]](https://img.pdfslide.es/doc/110x75/5571fa25497959916991659e/cartilla-plagas-y-enfermedades-granadilla-corpoica1.jpg)
