DEPARTAlv1ENTODE FISIOWGIA y FARMACOLOG1A

FACULTAD DE MEDICINA VETEIUNARIA Y ZOOTECNIA

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M.t'llCp

Eficacia del preparado nutricional Viusid-Iíquido* en lasvariables productivas e inmunológicas en pollo de engorda

Introducción.En la actualidad, la producción intensiva de pollo de engorda hoy día requiere del conciertode cierto número de acciones conjuntas a seguir para lograr la máxima producción posibleen el menor tiempo. Algunas de estas medidas se refieren a buenos programas debioseguridad, dietas balanceadas,. programas óptimos de vacunación, utilización depromotores del crecimiento·· y productos que mejoren la respuesta inmune(inmunomoduladores ).

En este sentido, el Viusid® producto de desarrollo de Dermaceutical, SA de CV, ofrece lasposibilidades de mejorar los parámetros productivos y de optimizar el sistema inmune delpollo de engorda.

El Viusid líquido®, es un preparado nutricional, a base de antioxidantes, vitaminas,oligoelementos y, un principio activo producto de la extracción del regaliz (ácidoglicirricínico) con potenciales actividades antivirales al actuar in vitro e in vivo impidiendola replicación tanto de virus ADN como ARN (Herpes virus, influenza A y B, Hepatitis B,Coronavirus SARS etc.) (1,2,3,4) además impide la salida del virión de su cápside y, conesto su penetración a las células (5,6). Estos efectos se han asociado a la inhibición selectivadosis dependiente de la fosforilación de la Cinasa-P (7,8). El Viusid® también es capaz deestimular la producción de interferon gamma en los linfocitos By T, al activar los mismos,estimulando así el sistema inmunológico (12,13).

La activación molecular de los principios activos incrementa la actividad de las funcionesbiológicas de los mismos (efecto antiviral y antioxidante), sin modificación de la estructuramolecular de los principios activos, asegurando un aumento significativo de las defensas delorganismo.

Objetivo.El objetivo del estudio es el de confirmar la eficacia del Viusid® en pollo de engorda alevaluar su efecto en los parámetros productivos e inmunológicos en órganos y célulaslinfoides del pollo de engorda .

•Circuito de la IlWcstigacitJn Cientlfica, Ciudad Universitaria, Coyoecán: GP 04510, ,\fé:dra, DFT~!s.:5622 5908 Y5622 5980

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.MEXIC,O

Material y métodos.Animales y tratamientos

El estudio se llevó a cabo en una granja comercial llamada "Bandolón" propiedad de GrupoAbrego, ubicada en el estado de Querétaro, México para el que se utilizaron 60,000 avesRoss x Ross de un día de edad, divididos en dos grupos de 30,000 aves cada uno, grupos A yB; a su vez subdivididos en dos casetas de 15,000 pollos (4 casetas de 15,000 pollos). Deéstas, dos se trataron con Viusid líquido® a razón de 270 ml del productoll OOOLde aguadurante todo el ciclo de producción y dos casetas se dejaron como grupo testigo sintratamiento.

El manejo sanitario de la parvada fue el usual de una granja de tipo comercial con ambientecontrolado y sistema de alimentación automático, con bebedero de niple sin copa. La dietafue a base de preiniciador, iniciador (0-21 días), crecimiento (22-42 días), finalizador yterminador (43-49 días) de una marca comercial.

Grupo A. Grupo tratado.Todos los animales recibieron alimento yagua. ad limitum. Asimismo se les vacunó deacuerdo con los calendarios establecidos en la granja, además de recibir el Viusid líquido®a razón de 270 rnl/l000L de agua diariamente durante todo el ciclo.

Grupo B. Grupo testigo.Todos los animales recibieron agua y alimento ad limitum. Asimismo, se les vacunó deacuerdo con los calendarios establecidos en la granja.

Parámetros productivos en evaluaciónPorcentaje de viabilidad a 49 días, a todas las aves se les registró el peso y la conversiónalimenticia cada semana, así como la conversión alimenticia acumulada a 49 días, tambiénse registró el consumó de alimento cada dos semanas.

Respuesta Inmune Humoral.Para confirmar el efecto inmunoestimulante del Viusid líquido® a nivel sistémico, setomaron muestras de sangre el día 23 de edad post-vacunación (15 muestras/réplica); seobtuvieron los sueros, se congelaron a -20°C, para posteriormente determinar títulos deanticuerpos sérico s específicos para el virus de Newcastle a través de la prueba de inhibiciónde la hemoaglutinación.

Circuito de la JItYlStigadón Cientfjica. Ciudad Universitaria, Co)'lIl1.an, GP 04.510. M¿.;i,a, DF. Tels.: 5622 5908 Y 5621 5980

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.MtxlC;O

Respuesta Inmune Celular.

Hipersensibilidad Cutánea Basofílica. La evaluación se llevó a cabo el día 22 de edadmediante una prueba de hipersensibilidad tardía (Stadecker et al., 1977; Edelman et al.,1985; Corrier y DeLoach, 1990, como respuesta a la inoculación intradérmica de lamembrana interdigital de las falanges 3 y 4 de la extremidad inferior derecha, empleándose(5 pollos por réplica), con Phitohaemaglutinina (pHA-A3) a una concentración de 0.1mglo.l ml. En la membrana . interdigítal de la pata izquierda, se realizó el mismoprocedimiento utilizando solución salina estéril (0.1 ml) como testigo. A las 24 horas pos-inoculación se determinó el grosor de la membrana interdigital con un vernier digital.

HematologíaSe tomaron muestras de sangre con s-monovette EDTA (Sarsted **) de las venas radiales de10 pollos por tratamiento los días 23 y 49. Se realizó el conteo leucocitario diferencial enfrotis sanguíneos teñidos con Wright. Las cuentas totales se determinaron indirectamentepor el cálculo de los porcentajes de las células y de cuentas totales. (Campbell TW, 1988).

Se tomaron muestras de suero con s-monovette EDTA (Sarsted **) paradeterminaciones de: Aspartato amino transferasa (AST), Glucosa,Creatinfosfoquinasa (CK), Glutamato deshidrogenasa (GLDH), ProteínasPlasmáticas, albúmina y globulinas. (Campbell TW, 1988), esto con el objetivo deel Viusid® a nivel de enzimas y proteínas que se producen en el higado.

realizarCalcio,totales

evaluar

HistologíaSe sacrificaron 10 pollos de cada tratamiento a los 23 y 49 días de edad, se tomaronmuestras de bolsa de Fabricio, bazo y timo, se fijaron en formalina bufferada al 10%, paraposteriormente ser procesados, montados en portaobjetos y teñidos con Hematoxilina-Eosina, para su posterior observación y evaluación mediante microscopía de luz ..

Porcentaje de peso Relativo de Bazo, timo y Bolsa de Fabricio.Se tomaron 15 aves por tratamiento se diseccionaron y se pesaron individualmente bazo,timo y Bolsa de Fabricio. Posteriormente se calcularon los pesos individuales de estosórganos y se expresaron como porcentaje relativo con respecto al peso total del ave.

C¡"u;to ~e In Investigación Cientljica, Ciudad Universitaria, Coyoacárl, CP 045.W. México, DET~s-: 5.622 5908 Y 5622 5980

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.M.txlCp

RESULTADOS

Análisis EstadísticoLos resultados obtenidos de las variables en estudio se analizaron estadísticamente medianteanálisis de varianza conforme a un diseño completamente al azar, según el procedimientoGLM del paquete estadístico SAS (SAS 1990). Cabe mencionar que los títulos deanticuerpo s para el análisis estadístico se sometieron a una transformación utilizandologaritmo base 2. Para el caso específico de la histología las variables obtenidas seanalizaron mediante la prueba noparamétrica de Wilconox. .

A continuación se listan los valores de las variables productivas, obtenidos durante el ciclode engorda:

Parámetros productivos.

Cuadro 1. Parámetros Productivos tratados con VruSID vs Testigo

PROMEDIOS

VIUSID TestigoSem Peso Peso

1 0.1475 0.14402 0.3075 0.31503 0.6520 0.63104 1,180 1,1605 1,638 1,6556 2,234 2,2057 2,947 2,905

2%-2%3%2%-1%1%1%

VIUSID Testigo%MortAc %MortAc

0.67% 0.64%1.27% 1.18%1.63% 1.90%2.45% 3.36%4.15% 5.74%4.27% 6.98%5.95% 8.17%

4%8%

-14%-27%-28%-39%-27%

VIUSID TestigoConv.Ac Conv.Ac

1.0130 1.08851.2490 1.25651.4380 1.48151.508 1.6601.636 1.8061.783 1.9911.940 2.148

-7%-1%-3%-9%-9%

-10%-1'0%

Hubo una tendencia a mejorar con el uso de VruSID.En el peso la diferencia fue de 41.5 gr, la Mortandad mejoro 27% y la Conversiónalimenticia disminuyó 0.208 gr siendo 10% menor.

Circuito de la InvlStigadón Cientfjica, Ciudad Universitaria; Co}'oacdll, cP 04510, f',fb;ico, DFTm.: 5622 590B)' 5622 5980

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MUIC;O

Resultados

Evaluación de la inmunidad humoral a (21 y 49 días)Títulos de anticuerpo s contra el virus de la enfermedad de Newcastle.

21 días

B

49 días

.9.91A

6.36

6.0

4.0

2.0

0.0

Tratado Testigo

(P<O.01)

6.93A

5.53

Tratado Testigo

(P<O.05)

Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estaaisticomente.Interpretación.- El grupo tratado con VIUSID® mostró mayor concentración en lostítulos de anticuerpos (P<O.05) contra el virus de la enfermedad de Newcastle que elgrupo testigo, lo que implica que los pollos tratados con VIUSID® produjeron unlogaritmo mas de anticuerpos que el grupo testigo a los 21 días de edad. Estatendencia se mantuvo a los 49 días, donde se incrementaron en 3 logaritmos laconcentración de anticuerpos.

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.MtX1C:p

Evaluación de la inmunidad Celular (21 y 49 días)Prueba de hipersensibilidad tardía basofilica.

21 días 0.776A

.-------------10.59.0-+-_________ A

0.7

0.6

0.50.4

0.3

0.2

0.1

o

0.202

49 días

:~ ...._----'0!ll.16C

B

o ( GRU PO TESTIGO GRUPO TRATADO

(P<O.01) (P<O.01)Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadísticamente

Interpretación.- Para la respuesta celular evaluada a través de la prueba dehipersensibilidad tardía basofílica, en pollos en etapa de iniciación aumentó el grosorinterdigital (P<O.01) en los pollos por la adición de VIUSID®; lo que implica que lospollos tratados con VIUSID® mostraron un aumento 4.8 veces mayor en el grosor de lamembrana interdigital al compararse con el grupo testigo. . .

Hematología

Hematocrito.- Es la relación porcentual entre los glóbulos rojos y el plasma total.

0.3500B

3.63.4

3.2

3

2.82.6 t<------,.-----,------('

0.2990A

Grupo tratado Grupo testigo

(P<O.05)

Circuito de la Investigación Ciel1t1fica, Ciudad Univer.sitaria,· Coyolicáll. el> 04510. México, DFTels.: 5622 5908 Y 5622 5980

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.M.IXICp

Medias con distinta letra a.be en el mismo grafico son diferentes estadísticamenteInterpretación.- En este rubro el grupo testigo representa el grupo sin el tratamientoque nos mostraría el hematocrito normal (P<O.05); sin embargo el grupo tratado esmenor en el hematocrito, un índice bajo de Hematocrito puede deberse a:Anemia, fallos en la médula ósea (Radiaciones, toxinas, Fibrosis, tumores, etc.),hemorragias o deshidratación.

Eritrocitos.- Los glóbulos rojos son las células sanguíneas que contienen en su interior la. hemoglobina. Los glóbulos rojos son los principales portadores de oxígeno alas células y tejidos

del cuerpo.

3.48B

(P<O.05)

0.360.340.320.3

0.280.26

Medias con distinta letra a,be en el mismo grafieo son diferentes esfadistieamente

Grupotratado

Grupo testigo

Interpretación.- En este rubro el grupo testigo representa el grupo sin el tratamiento quenos mostraría el hematocrito normal; sin embargo el grupo tratado es menor (P<O.05)Los valores disminuidos en la cantidad de eritrocitos pudiera deberse a: anemias;enfermedades sistémicas, fibrosis de médula ósea o Hemorragias.

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]t\LX1CP

Leucocitos.- Los leucocitos o glóbulos blancos son células que están principalmente en lasangre y circulan por ella con la función de combatir las infecciones.

18

16

14

12

10

4

o*---------~----------~--------~Grupo tratado Grupo testigo

-----------------------

Interpretación.- La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnósticode enfermedades infecciosas, inflamatorias, cáncer y leucemias, y otros procesos. En esterubro vemos que el grupo tratado muestra una cantidad mayor de células blancas(Leucocitosis) al ser comparado con el grupo testigo, con lo que pudiera inferirse que eltratamiento pudo tener un efecto en el proceso de leucopoyesis.

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.M.tXl~p

Linfocitos.- Pertenecen al grupo de leucocitos. Estas células tienen núcleos de formaovoide que ocupan la mayoría del espacio intracelular. Son los responsables de coordinarla respuesta inmune.

5 4.61 A

4 3.37B

3 XI09/L2

l.

oGrupo tI-atado Grupo testigo

(P<O.05)Medias con distinta letra a,be en el mismo grafieo son diferentes estadístieamente

Interpretación.- La linfocitosis (aumento de linfocitos) observada en el grupo tratadopudiera ser una reacción a la aplicación del tratamiento en el grupo tratado (P<0.05); queposiblemente pudo activar el proceso de linfopoyesis.

Basófilos.- Se denomina basófilo a cualquier célula que se tiñe fácilmente con colorantesbásicos (Hematoxilina principalmente).No Existieron diferencias estadísticas significativas entre tratamientos

( Grupo testigo 0.48 XI09/L Grupo tratado 0.50 XI09/L)

Monocito.- Los monocitos son un tipo de glóbulos blancos agranulocitos. Es el leucocito demayor tamaño en sangre. Presenta un núcleo arriñonado (forma de riñón), que se tiñe decolor violeta-azulado con una proporción 2: 1 con respecto al resto de la célula, y tiene unadepresión profunda. El citoplasma es abundante y de color gris azulado pudiendo estaracompañado de vacuo las blanquecinas. Los monocitos se generan en la médula ósea ydespués viajan por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hígado, bazo,pulmones, ganglio s linfáticos, huesos, cavidades serosas, etc. Después de alrededor de 24horas de permanecer en el torrente sanguíneo, los monocitos lo abandonan hacia el tejidoconectivo, donde se diferencian rápidamente a macrófagos.No Existierondiferenciasestadísticassignificativasentre tratamientos

(Grupo testigo 0.45 XI09/L Grupo tratado 0.34 XI09/L)

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M,tXICp

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Trombocito.- Los trombocitos, son fragmentos citoplasmáticos pequeños, irregulares ycarentes de núcleo, los trombocitos juegan un papel fundamental en la hemostasia y sonuna fuente natural de factores de crecimiento.

(P<O.05)

1.81.6.1.4-

1.21

0.8

0.60.4-

0.2o

Medias con distinta letra a,bc en el mismo gra/ico son diferentes estadisticamente

Interpretación. En el grupo tratado con VIUSID® se encontró un estado de trombositosis(P<O.05) en comparación con el grupo testigo. (Mayor fuente natural de factores decrecimiento).

Heterofilos.- En aves representan la primera línea de defensa, su contraparte en losmamíferos están representados por los neutrófilos.

(P<O.05)

1.79 A

Medias con distinta letra a,bc en el mismo grafico son diferentes estadisticamente

1.10 B

Grupo tratado Grupo testigo

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VllI~DAD NAqONALA.v'llN"MA DE

~~~~etación. En el grupo testigo mayor cantidad de heterófilos en comparación delgrupo tratado con VIUSID® (P<O.05). Esto pudiera ser un indicativo que el grupo testigoestá desarrollando una pequeña infección; ya que, los heterófilos representan la primeralínea de defensa.

QUIMICA SANGUINEA (21 días)

No existieron diferencias estadísticas significativas entre los tratamientos(Tratado y testigo) al evaluar los siguientes parámetros:Aspartato amino transferasa (AST), Glucosa, Calcio, Creatínfosfoquinasa:( CK), Glutamatodeshidrogenasa (GLDH) Proteínas totales Plasmáticas, albumina y globulinas.

PROPORCION DE PESOS EN PORCENTAJE21 días de edad

Timo Bazo0.4 0.900 -1 -_. --------

0.800 ---

0.3 0.700 +-----------

0.600 +-----------0.2 +---- 0500 +-----------

0_400 +-----------0.1 +---

Testigo Tratado

0.300 +-----------0_200

0.100 t---0.000 +----

o +----

Testigo' Tratado

(P<O.05)

Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadisticamente

Interpretación. Los resultados de los estudios referentes a los pesos relativos de timo ybazo fueron incrementados en el grupo tratado ( VIUSID®) arrojando diferenciasestadísticas significativas (P<O.OS)loque puede sugerir· que este efecto positivo en lamejora de pesos relativos de estos órganos linfoides pudiera estar relacionado con unamejora en el estado de salud de las aves.

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V.Nl~DAD NAqONALA~DI

.M.EXIC:pHISTOLOGIA (21 Y 49 dias)

Histopatología evaluación de la Bolsa de Fabricio

21 días 49 días4.1A 4.8 ~-------

4.6 -' -----<r

4.4 ------;;c-=;--------4.0742 ..0..--- ----'----

4 '"---

3.8--3.6 ...---

--- -4.67-

Promedio de Lesiónlinfoide

5

4 +-----~~------3 +----~--------2 -t--

1

O

Tratado testigo IRATAD estigo

(P<O.05)

Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadísticamenteInterpretación.- La evaluación de la bolsa de Fabricio a los 21 y 49 días de edad nos indicaque en grupo testigo, se reporta un mayor promedio de lesión linfoide que puede serdesde una atrofia leve hasta severa, demostrando que ~I grupo tratado (VIUSID®)mostróun promedio de lesión menor estadísticamente significativo (P<O.OS).

Histopatología evaluación de la Timos (21 y 49 dias)

21 días 49 días

410 400398.76 294.38400 <A~ 300N 390el>-•.. 130.49o 200(J 380~ B'O:.a 370•• 100~ 360

350 O

Testigo Tratado Testigo Tratado(P<O.05)

Circuito de la Investigación Cíentlfica, Ciudad Universitaria, Coyr¡acáll, CP 04510. México, DE< T~.: 5622 5908 Y 5621 5980

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VXIVElt\DADNAqONALAv~DE

.M~tC;O

Medias con distinta letra a,b en el mismo gráfico son diferentes estadísticamente

Interpretación.- La evaluación de los timos está determinada por la medida de la cortezadel timo en micras a los 21 días de edad se muestran diferencias numéricas nosignificativas, pero a los 49 días el grupo tratado (VIUSID®)mostró un mayor grosor de lacorteza tímica estadísticamente significativa (P<O.OS)al compararlo con el grupo testigo ..

BIBLIOGRAFIA1. Campbell TW: Avian hematology and Cytology. Ames, Iowa State University Press,1988.2. Dein FJ: Laboratory Manual of Avian Hematology. American Association of AvianVeterinarians (ed). New York, 1984.3.Corrier, D. E., DeLoach., 1990. Evaluation of Cell - Mediated, cutaneous basophilichypersensitivity in young chickens by an interdigital skin test. Poultry Sci. 69,403-408.4. Edelman, A. S., Sánchez, L. P., Robinson, E. M., Hochwald, M.G., Thorbecke, J. G.Primary and secondary wattle swelling response to phytohemagglutinin as a measure ofimmunocompetence in chickens. 1985 Avian Dis. 30, 105-111.

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Adicionales

Se puede aplicar el producto solo hasta la sa semana, dado que de ahí en adelante se suponeque el sistema inmune ya fue estimulado lo suficiente como para llegar al final del ciclo sinproblemas infecciosos.

Se considera que se puede iniciar la comercialización con los datos obtenidos en la granjaMilagros y con los datos inmunológicos obtenidos del Grupo Abrego.

Finalmente, aunque los pesos fueron similares en todos los grupos, hay que resaltar que laconversión alimenticia acumulada y la mortalidad acumulada fue mejor en los grupostratados.

1. Viusid-liquido mejora los parámetros productivos como son peso semanal y acumulado42 g más (+1%), a 49 días.

2. Viusid-liquido Mejora la conversión alimenticia semanal y acumulada a 49 días en 20puntos (+ 10%) , mejora la viabilidad de manera importante en 2.22% más que el grupo sinViusid-líquido (+27%).

3. Viusid-líquido el índice de productividad de acuerdo a la fórmula: (viabilidad % X kgpeso) I (días de edad X conversión acum.) X 100.Grupo Control 255.Grupo Tratado 291Mejora en 41 puntos el índice de productividad con relación al grupo sin Viusid-líquido.

4. Viusid-líquido comprueba que un efecto consistente en mejorar la inmunidad humoralen niveles de anticuerpo s contra Enfermedad de Newcastle en más de 2 logaritmos HI-ENe.

5. Viusid-liquido también tuvo efectos benéficos en generar mayor número de célulaslinfoides así como mayor peso y por ende mayores nódulos linfoides en órganos linfoidesbazo, timo y bolsa de Fabricio, pudiera estar relacionado con una mejora en el estado desalud de las aves.

6. Viusid-liquido con todos los beneficios obtenidos en los parámetros productivos y laefectividad en preservar y mejorar la respuesta inmune en órganos y células linfoides, secomprueba la hipótesis sustentada y confirma su efecto inmunomodulador en aves deengorda a nivel comercial