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“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la
Seguridad Alimentaria”
EL MICROSCOPIO
ESCUELA DE MEDICINA VETERINARIA
TEMA: MISCROSCOPIO
DOCENTE:Dra. Josefina muñoz
ALUMNOS:Idrogo Salazar José Toledo Balcazar Gustavo
INTRODUCCION
El objetivo de este trabajo es explicar el fundamento de la teoría del con
los detalles necesarios para que pueda comprender los principios teóricos
en los cuales se basan las técnicas de microscopía reconocidas. Pensamos
que estos conocimientos no sólo aumentarán su interés por trabajar con
el microscopio, sino que también le servirán a la hora de solucionar los
problemas con los que se tenga que enfrentar en el futuro cuando tenga
que recordar los conocimientos adquiridos en los años de estudio. Se han
evitado, en la medida de lo posible, las fórmulas matemáticas en favor de
las explicaciones concretas o las representaciones gráficas, ya que éstas
suelen entenderse con más facilidad y retenerse mejor en la memoria, que
las explicaciones basadas en la matemática.
HISTORIA
El nombre microscopio deriva del griego: mikrós=pequeño, skopéo=observar. Este
término designa, en sentido amplio, a todo instrumento utilizado para amplificar la
imagen de objetos que, por su tamaño, no son observables a simple vista. En la
práctica, se refiere a un aparato formado por un sistema de, al menos, dos lentes: un
objetivo y un ocular, con el mismo fin. El descubrimiento del microscopio compuesto
tuvo un precedente atribuido a Galileo (1564-1642). El verdadero impulsor de la
Microscopía fue, sin duda, el holandés Anton Van Leeuwenhoek, (1632-1723).
Construyó microscopios simples, con lentes muy convexas que él mismo pulía y con
los cuales realizó observaciones muy diversas: estudió la composición de la sangre,
fue el primero en observar y dibujar los protozoos, descubrió las bacterias, etc. Sus
trabajos fueron publicados por la Real Sociedad de Londres (1683). Hoy día, hay
unanimidad en considerar a los holandeses Hans y Zacarias Janssen, padre e hijo,
como constructores del primer microscopio compuesto en 1590.
Desde entonces y hasta nuestros días, el microscopio compuesto no ha cesado de
perfeccionarse, incorporándole mejoras, revolver porta objetivos, visión binocular,
iluminación halógena de gran rendimiento, filtro polarizadores, equipo de contraste
de fase, microscopio de contraste interferencial, microscopio de luz ultravioleta, etc.
Pese a todo, el microscopio óptico presenta una serie de limitaciones que le impone la
naturaleza de la propia LUZ. Por encima de los 1500-2000 aumentos, las aberraciones
que origina la luz impiden hacer observaciones con nitidez.
Es por ello que los investigadores tuvieron la idea de utilizar haces de electrones en
lugar de rayos luminosos y potentes electroimanes, en lugar de lentes. Con ello nació
el microscopio electrónico.
EL MICROSCOPIO
DEFINICION
El microscopio (de micro-, pequeño, y scopio, , observar) es un instrumentoσκοπεω
que permite observar objetos que son demasiado pequeños para ser vistos a simple
vista. El tipo más común y el primero que se inventó es el microscopio óptico. Se trata
de un instrumento óptico que contiene dos o más lentes que permiten obtener una
imagen aumentada del objeto y que funciona por refracción. La ciencia que investiga
los objetos pequeños utilizando este instrumento se llama microscopía.
PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO
Sistema óptico
- OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.
- OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
- CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
- DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
- FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Sistema mecánico
- SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.
- PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.
- CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular,.
- REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar
los objetivos.
- TORNILLOS DE ENFOQUE: Micrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico
que consigue el enfoque correcto.
MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina
completamente.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo micrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del
ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose
dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparación con el micrométrico y, cuando se observe algo nítida la
muestra, girar el macrométrico hasta obtener un enfoque fino.
4. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser
suficiente con mover un poco el macrométrico para lograr el enfoque fino. Si al
cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar
con el objetivo anterior y repetir la operación. El objetivo de 40x enfoca a muy poca
distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y mancharlo
con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el
objetivo de inmersión.
MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no
sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy
suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
3. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico,
micrométrico, platina, revólver y condensador).
4. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a
la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de
objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a
través del ocular.
5. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún
líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño
humedecido en xilol.
TIPOS DE MICROSCOPIOS
Existen una diversidad de microscopios que a medida que a pasado el tiempo han ido
evolucionando, mencionamos alguno de ellos:
Microscopio óptico Microscopio simple Microscopio compuesto Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio petrográfico Microscopio en campo oscuro Microscopio de contraste de fase Microscopio de luz polarizada Microscopio confocal Microscopio electrónico Microscopio electrónico de transmisión Microscopio electrónico de barrido Microscopio de iones en campo Microscopio de sonda de barrido Microscopio de efecto túnel Microscopio de fuerza atómica Microscopio virtual
Hablaremos de alguna de ellas:
Microscopio óptico
Un microscopio óptico es un microscopio basado
en lentes ópticos. También se le conoce
como microscopio de luz, (que utiliza luz o
"fotones") o microscopio de campo claro. El
desarrollo de este aparato suele asociarse con los
trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los
microscopios de Leeuwenhoek constaban de una
única lente pequeña y convexa, montada sobre una
plancha, con un mecanismo para sujetar el material
que se iba a examinar (la muestra o espécimen). Este uso de una única lente
convexa se conoce como microscopio simple, en el que se incluye la lupa, entre
otros aparatos ópticos.
Microscopio compuesto
Un microscopio compuesto tiene más de una lente objetiva. Los microscopios
compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o
cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o
ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El
microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:
El sistema mecánico está constituido por
una palanca que sirve para sostener, elevar
y detener los instrumentos a observar.
El sistema de iluminación comprende un conjunto
de instrumentos, dispuestos de tal manera que
producen las ranuras de luz.
El sistema óptico comprende las partes del microscopio que permiten un aumento de los
objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".
Microscopio de fluorescencia
El microscopio de fluorescencia es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los
objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es
el resultado de la radiación electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la
excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar sólo la
emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima
del objetivo. Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias
marcadas con fluorocromos.
El fenómeno de la fluorescencia se produce cuando
un electrón de un átomo absorbe toda la energía de
una determinadalongitud de onda de la luz, saltando a
otros orbitales. Es una situación inestable durante la
cual se emite la mayor parte de la energía que se ha
absorbido (con mayor longitud de onda) y vuelve a
desplazarse a su orbital.
Aprovechando este fenómeno, se han creado los flurocromos. Para utilizarlos
necesitamos una bombilla que emita luz ultravioleta y luz visible. Para excitar
el flurocromo necesitamos un filtro de excitación que seleccione la longitud de onda
que excita nuestro flurocromo. Los más comunes son el DAPI que tiñe el núcleo de las
células y el GFP.
Microscopio petrográfico
El microscopio petrográfico, microscopio polarizador o de luz polarizada es
un microscopio óptico al que se le han añadido dos polarizadores (uno entre el
condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador). El material que
se usa para los polarizadores son prismas de Nicol oprismas de Glan-
Thompson (ambos de calcita), que dejan pasar únicamente la luz que vibra en un
único plano (luz polarizada). Esta luz produce en el campo del microscopio claridad u
oscuridad, según que los dos nícoles estén paralelos o cruzados.
Algunos compuestos inorgánicos responden al efecto de
la luz, éstos tienen un alto grado de orientación molecular
(sustancias anisótropas), que hace que la luz que los
atraviesa pueda hacerlo en determinados planos vibratorios
atómicos.
El prisma de Nicol permite el paso de luz en un solo plano,
así la calcita gira la posición de polarización, facilitando
la identificación de sustancias que extinguen la luz. Al
fenómeno de extinción de luz causado por estos planos atómicos y orientaciones
moleculares se llama birrefringencia.
Este tipo de microscopio se usa para poder identificar sustancias cristalinas
(minerales) o fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto,
colágeno, cristales de uratos, queratina, sílience, pol, etc.
