7/16/2019 Ensayo de Biuret

http://slidepdf.com/reader/full/ensayo-de-biuret-563385d43661d 1/2

Ensayo de Biuret: 

Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4), junto con tartrato de sodio y

potasio (KNaC4H4O6·4H2O). El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia de proteínas,

y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta. El Hidróxido de Potasio no

participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para que tenga lugar.

Consiste en tratar una proteína o péptido con Cu++

en medio alcalino, produciéndose una

coloración violácea por formación de un complejo de coordinación entre el Cu++

y los pares

electrónicos libres de los nitrógenos de los grupos amino de la unión peptídica. Son necesarias por 

lo menos dos uniones peptídicas para que tenga lugar la reacción.

La reacción del biuret no es una reacción específica para proteínas. Eso hace que un resultadopositivo con este reactivo deba ser cuidadosamente evaluado para descartar los resultados falsospositivos

Un resultado negativo de la reacción del biuret sobre una muestra problema no necesariamenteindica la ausencia de proteínas, ya que puede ocurrir a) que no existan proteínas o péptidos en la

muestra (ni tampoco otras sustancias no proteicas biuret positivas), b) que existan una o más

sustancias interferentes en la muestra que impidan que se produzca la reacción (lo que daría lugar 

a un resultado falso negativo). Esto puede descartarse (o evitarse) si conozco de antemano la

composición aproximada de la muestra. Por ejemplo, si deseo determinar el contenido de péptidos

generados por una reacción de hidrólisis ácida, los H+

del medio interferirán con la reacción del

biuret, ya que ésta necesita de un medio alcalino para la formación del complejo con Cu++

. En este

caso la interferencia puede eliminarse alcalinizando el medio antes de realizar el ensayo (en caso

contrario obtendría un falso negativo como resultado) y c) Que existan péptidos, pero a una

concentración inferior al límite de sensibilidad del método. Todo método permite determinar la

presencia de un compuesto sólo si la concentración del mismo es superior a cierto valor. Existenmétodos mucho mas sensibles que el biuret (ver mas abajo).

Figura 1: Reacción de Biuret.

Ensayo de Xantroproteíco: 

7/16/2019 Ensayo de Biuret

http://slidepdf.com/reader/full/ensayo-de-biuret-563385d43661d 2/2

Esta reacción se usa para detectar la presencia de proteínas solubles en una solución. Se realiza

mediante el uso de HNO3 concentrado que, en presencia de proteínas o aminoácidos con restos

aromáticos torna la solución de un color amarillo oscuro.

Los anillos fenilo que contengan un grupo activante pueden ser nitrados produciendo un

compuesto Amarillo. La producción de un producto coloreado Amarillo al añadir ácido nítrico es

una prueba para la presencia de tirosina o triptófano en una proteína. La adición de base fuerte

hace que el color se torne más oscuro hacia anaranjado. Las manchas amarillas en la piel

causadas por ácido nítrico son el resultado de la reacción xantoproteíca.

La reaccion xantoproteica se puede considerar como una sustitucion electrofilica aromatica de los

residuos de tirosina de las proteinas por el acido nitrico dando un compuesto coloreado amarillo a

pH acido.