XI CONGRESO NACIONAL DE BIOTECNOLOGA Y BIOINGENIERA
ESTABLECIMIENTO DE CULTIVOS DE CALLO DE Stevia rebaudiana
(BERTONI) HEMSL. APARTIR DE EXPLANTES FOLIARES
Claudia Oriza, Sergio Zarate, Leticia Buenda, Juan Orozco, J.
ngel LechugaDpto. de Biotecnologa, UAM-Iztapalapa San Rafael
Atlixco No.186, Col. Vicentina 09340 Mxico, D.F. Fax (5)
8044712, e-mail: [email protected]
Palabras clave: Stevia rebaudiana, in vitro, cultivos de
callo
Introduccin. Stevia rebaudiana (Bertoni) Hemsl. esmiembro de la
familia Asteraceae, hierba perenne originariadel noroeste de
Paraguay y del sureste de Brasil. Las hojasde Stevia contienen una
serie de glucsidos, los cuales tienenun poder edulcorante de 100 a
400 mayor que la D-glucosa(1). Los glucsidos son compuestos no
txicos, nomutagnicos y bajos en caloras, por tal motivo han
sidoutilizados como sustitutos de azcares y recomendados parael
consumo de pacientes diabticos (2). Debido a ellorecientemente se
ha adoptado su uso como alternativa delazcar comn o edulcorantes
artificiales, lo que hace alcultivo de Stevia econmicamente
importante.Desafortunadamente, la propagacin de Stevia por
semillases inadecuada debido a la variacin intraespecfica
dediversas caractersticas importantes de la planta, como
elcontenido de glicosidos (3). El cultivo de tejidos vegetales
esuna valiosa alternativa para la clonacin de individuosproductores
o sobre productores de los esteviolglucsidos.El presente trabajo
pretende establecer las condicionesexperimentales para inducir la
formacin de callo enexplantes foliares de S. rebaudiana.
Metodologa. Segmentos nodales de plantas adultas de S.rebaudiana
fueron desinfestados superficialmente ysembrados en medio MS
modificado (macronutrientes al50%) y suplementado con 10 g /L de
sacarosa y 0.01 mg/Lde ANA. De los brotes producidos por los
explantes nodalesse tomaron las hojas cuyo rea foliar fue
aproximadamentede 0.5 cm2 y fueron sembradas en medio MS
suplementadocon 30 g/L de sacarosa y diferentes concentraciones
ycombinaciones de BAP y ANA (0.0-3.0 mg/L). Los mediosfueron
enriquecidos con carbn activado (0.5 g/L), cidoascrbico (50 mg/L) y
cido ctrico (100 mg/L). Los cultivosfueron incubados bajo un
fotoperiodo de 16 h luz/8 hoscuridad y en oscuridad contina a 25C +
2C.
Resultados y discusin. Los brotes se formaron a los 20das de
cultivo, obtenindose hasta 8.2 + 0.56 brotes porexplante (Fig. 1a).
La respuesta morfogentica a la presenciade BAP y ANA fue la
formacin de callo en los explantesfoliares, inicindose la respuesta
en el haz de la hoja en laregin ms cercana al pecolo, para
posteriormente formarsea lo largo de todo el explante. El factor
incubacin jug unpapel importante en el tiempo y cantidad en que se
produjoel callo. Los cultivos incubados bajo un fotoperiodoformaron
el callo en menor tiempo y la produccin de callose duplic con
respecto a los explantes incubados enoscuridad continua. En
ausencia de compuestos
antioxidantes fue evidente la oxidacin del explante. Laadicin de
cido ctrico y cido ascrbico en el medio decultivo evit la oxidacin
del explante y del callo producido,pero retras la respuesta,
inicindose hasta el mes de lasiembra del explante. La adicin de
carbn activado evit laoxidacin y la respuesta se inici entre la
primer y segundasemana de cultivo, al igual que en los explantes
sinantioxidantes. La auxina (ANA) empleada en las
distintasconcentraciones de manera individual no tuvo ningn
efectomorfogentico en los explantes foliares de S. rebaudiana.
Alcombinar la auxina con la citocinina se indujo la formacinde
callo, el tratamiento con mayor produccin de callo fue2.0 mg/L de
BAP y 2.0 mg/L de ANA (Fig. 1b).
Figura 1. Cultivo in vitro de S. rebaudiana. a) Brotes en
explantenodal; (b)Callo obtenido en presencia de BAP y ANA.
Conclusiones. La formacin de callo se llev a cabo enexplantes
foliares de S. rebaudiana, inducida por el efectoconjunto de BAP Y
ANA. Es necesario continuar estasinvestigaciones para seleccionar
una lnea celular productorao, en el mejor de los casos,
sobreproductora deesteviolglucsidos para establecer cultivos en
suspensin. Latcnica de cultivo de tejidos vegetales es una
herramientabiotecnolgica que ofrece la posibilidad de
obtenermetabolitos secundarios econmicamente importantes, comolos
son los glucsidos de S. rebaudiana.
Bibliografa.1. Kinghorn A. & Soejarto D. (1986). Sweetening
agents of plantorigin. Crit. Rev. Plant Sci. 4: 79-120.2. Bondarev
N., Reshetnyak O. & Nosov A. (2001). Peculiarities
ofditerpenoid steviol glycoside production in in vitro cultures
ofStevia rebaudiana Bertoni. Plant Sci. 161: 155-163.3. Ferreira C.
& Handro W. (1988). Micropropagation of Steviarebaudiana
through leaf explants from adult plants. Planta medica54(2):
157-160.
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