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ESTUDIO DE REOLOGÍA SANGUÍNEA EN ESTUDIO DE REOLOGÍA SANGUÍNEA EN SUJETOS NORMALES Y PACIENTES CON SUJETOS NORMALES Y PACIENTES CON
ERITROCITOSIS EXCESIVAERITROCITOSIS EXCESIVA
PROYECTOPROYECTO ALFA ALFA �� EUROPEAN COMMISSIONEUROPEAN COMMISSION
Autor: Autor: Bernardo Torrico Arzady, Bernardo Torrico Arzady, M.ScM.Sc..Asesores: Asesores: Ginés Viscor Carrasco, Ginés Viscor Carrasco, Ph.DPh.D..
HildeHilde SpielvogelSpielvogel, , M.DM.D..Universidad Mayor de San AndrésUniversidad Mayor de San Andrés
Universitat de Barcelona Universitat de Barcelona
OBJETIVO PRINCIPALOBJETIVO PRINCIPAL
Dilucidar, a través de estudios de Dilucidar, a través de estudios de hemorreologíahemorreología, el posible papel de la viscosidad , el posible papel de la viscosidad sanguínea en el síndrome de sanguínea en el síndrome de EritrocitosisEritrocitosisExcesiva.Excesiva.
JUSTIFICACIÓNJUSTIFICACIÓN
El posible papel de la viscosidad sanguínea en el El posible papel de la viscosidad sanguínea en el síndrome de síndrome de EritrocitosisEritrocitosis Excesiva no está bien Excesiva no está bien establecido; y muchos pacientes que asisten al IBBA establecido; y muchos pacientes que asisten al IBBA presentan un cuadro clínico de EE., algunos de ellos con presentan un cuadro clínico de EE., algunos de ellos con hematocritoshematocritos muy altos, por encima de 70%. Estos muy altos, por encima de 70%. Estos datos demuestran la necesidad de desarrollar estudios datos demuestran la necesidad de desarrollar estudios de de hemorreologíahemorreología en poblaciones expuestas que viven a en poblaciones expuestas que viven a grandes alturas como ocurre en la ciudad de La Paz y el grandes alturas como ocurre en la ciudad de La Paz y el Alto de Bolivia.Alto de Bolivia.
HIDRODINÁMICA Y VISCOSIDADHIDRODINÁMICA Y VISCOSIDADDE LA SANGRE DE LA SANGRE
La sangre es un fluido no newtoniano formado por plasma y varios componentes celulares: glóbulos rojos y blancos, plaquetas, etc.
Su fluidez depende mucho de los glóbulos rojos; de su propiedad para agregarse formando rodillos y su gran capacidad para deformarse.
Paso de glóbulos rojos, a través de Paso de glóbulos rojos, a través de microporosmicroporos en en una membrana de una membrana de policarbonatopolicarbonato
Definición de viscosidadDefinición de viscosidad
Es el cociente entre tensión tangencial (T) Es el cociente entre tensión tangencial (T) y gradiente de velocidad (y gradiente de velocidad (γγ))
F
F AX
dX
T = F/A
µ
γ = dµ/dx
η = T/γ
Viscosidad sanguínea Viscosidad sanguínea Viscosidad aparente sangre y plasmaViscosidad aparente sangre y plasma
Viscosímetro rotatorio conoViscosímetro rotatorio cono--placaplaca
Análisis de la Análisis de la viscosidad a un viscosidad a un gradiente de gradiente de velocidad velocidad definido para definido para toda la muestratoda la muestra
Viscosidad relativaViscosidad relativaηrel = ηsangre / ηplasmaηrel = ηsangre / ηplasma
uuPerfil de velocidadesPerfil de velocidades
ττ = F/A= F/Aγγ = = dudu/dx/dx
ηη = = τ τ / / γγ
Perfil del gradiente Perfil del gradiente de velocidadde velocidad
γγ
uuFF AAdxdx
dudu
Aportación reológica de la fracción celular
Aportación reológica de la fracción celular
VISCOSÍMETRO ROTATORIO CONO- PLACA
Análisis de la viscosidad a un gradiente de velocidad definido para toda la muestra.
MATERIAL Y MÉTODOSMATERIAL Y MÉTODOS
EQUIPO: Viscosímetro EQUIPO: Viscosímetro BrookfieldBrookfield LV II.LV II.
POBLACIÓN DE ESTUDIO: POBLACIÓN DE ESTUDIO: �� Población control: sujetos sanos que viven en la Población control: sujetos sanos que viven en la
altura (estudiantes de la UMSA).altura (estudiantes de la UMSA).�� Población de estudio: Pacientes con Población de estudio: Pacientes con eritrocitosiseritrocitosis
excesiva (pacientes que asisten al IBBA).excesiva (pacientes que asisten al IBBA).�� Se ha determinado un tamaño de muestra de 30 para Se ha determinado un tamaño de muestra de 30 para
cada grupo.cada grupo.
ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS MUESTRAS DE SANGREMUESTRAS DE SANGRE
CMS
EE
SANGRE
6-8 ml
CONTROL
(sujetos sanos)
HEMATOLOGÍA
WBC, RBC, HGB, HCT,
MCV, MCH, MCHC, PLT
Recuento de Reticulocitos.
CENTRIFUGACIÓN
3 ml. REOLOGÍAVISCOSIDAD0,5 mL
WBC, G. blancos x uL de sangreRBC, Hematíes x uL de sangreHGB, conc. Hb, g-dLHCT, microhematocrito, %MCV, volumen corpuscular medio,
FLMCH, Hemoglobina corpuscular
media, pgMCHC, Concentración de Hb
corpuscular media, g-dLPLT, Plaquetas x uL
ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS MUESTRAS DE SANGREMUESTRAS DE SANGRE
CENTRIFUGACIÓN
Plasma
VISCOSIDAD0,5 mL
Proteínas Tot.Fibrinógeno.
Paquete de hematíes
Suspensión deHematíes normalesen plasmaHcto = 45%
Suspensión deHematíes normalesen solución de Ringer-albúmina.Hcto = 45%
Suspensión deHematíes fijados con glutaraldehidoHcto = 45%
VISCOSIDADNP VISCOSIDAD
NA
VIVISCOSIDAD
DA
LA VISCOSIDAD DE LA SANGRELA VISCOSIDAD DE LA SANGRE
NP
DA
NA
agregación
deformaciónorientación
Viscosidad(mPa·s)
Gradiente de velocidad (s-1)Gradiente de velocidad (s-1)
1000
100
10
1
100010001001001010110,10,10,010,01
Recuento de Recuento de ReticulocitosReticulocitosAzul brillante de Azul brillante de cresilocresilo
Estructura del EritrocitoEstructura del Eritrocito
Diagrama del citoesqueleto y proteínas integrales del plasmalema eritrocítico.
Se determinará el diámetro de los GR de los sujetos normales y de los pacientes con eritrocitosis excesiva mediante micrometria.
Datos de referencia:Datos de referencia:
El 70 % de pacientes con El 70 % de pacientes con HctoHcto ≥≥ a 48 %, pero ninguno a 48 %, pero ninguno de ellos llegde ellos llegóó a 70%.a 70%.Se estandarizaron todas las tSe estandarizaron todas las téécnicas para la cnicas para la determinacideterminacióón de la viscosidad sangun de la viscosidad sanguíínea.nea.Se Se estestáánn realizando pruebas de hematologrealizando pruebas de hematologíía. a. Se deben estandarizar pruebas complementarias como Se deben estandarizar pruebas complementarias como la determinacila determinacióón de proten de proteíínas totales (nas totales (LowryLowry), ), cuantificacicuantificacióón de n de fibrinfibrinóógenogeno y globulinas (electroforesis y globulinas (electroforesis de protede proteíínas).nas).Se dispone del material para determinar el diSe dispone del material para determinar el diáámetro de metro de los eritrocitos.los eritrocitos.El estudio serEl estudio seráá concluido en el mes de septiembre del concluido en el mes de septiembre del presente apresente añño. o.
Perspectivas de colaboración entre Perspectivas de colaboración entre Europa y América Latina �Europa y América Latina �
Conclusión del proyecto: �Conclusión del proyecto: �Estudio de reología sanguínea en sujetos Estudio de reología sanguínea en sujetos normales y pacientes con eritrocitosis excesivanormales y pacientes con eritrocitosis excesiva� UMSA � UMSA �� UB.UB.Publicación de artículos del trabajo realizado.Publicación de artículos del trabajo realizado.Presentación y defensa del trabajo en la Maestría en �BioquímicaPresentación y defensa del trabajo en la Maestría en �BioquímicaClínica y Gerencia de Servicios en Laboratorio� UMSA.Clínica y Gerencia de Servicios en Laboratorio� UMSA.Determinar la evolución de los cambios de la viscosidad sanguíneDeterminar la evolución de los cambios de la viscosidad sanguínea a en el desarrollo de la patología.en el desarrollo de la patología.Ensayar la eficacia de distintas estrategias terapéuticas.Ensayar la eficacia de distintas estrategias terapéuticas.“Determinación de la viscosidad sanguínea en ratas crónicamente “Determinación de la viscosidad sanguínea en ratas crónicamente hipoxicas”hipoxicas” (IBBA, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y (IBBA, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas (UMSA) y Universidad de Barcelona.Bioquímicas (UMSA) y Universidad de Barcelona.��Estudio de reología sanguínea en sujetos que viven a diferentes Estudio de reología sanguínea en sujetos que viven a diferentes alturasalturas�. UMSA �. UMSA �� Univ. Cayetano Heredia, Lima Univ. Cayetano Heredia, Lima �� Perú, UB.Perú, UB.Tesis Doctoral en Educación Superior : �Tesis Doctoral en Educación Superior : �La innovación Docente La innovación Docente desarrollando procesos de aplicación de nuevas tecnologías y Edesarrollando procesos de aplicación de nuevas tecnologías y E--learning y didáctica universitaria en la carrera de Bioquímica dlearning y didáctica universitaria en la carrera de Bioquímica de la e la UMSAUMSA�, bajo la tutoría del Dr. Ginés Viscor (UB).�, bajo la tutoría del Dr. Ginés Viscor (UB).
MUCHAS GRACIAS �