Funcionamiento

FuncionamientoMicroscopio de inmunofluorescenciaLa luz de una fuente de longitud de onda mltiple, se mueve a travs de un filtro excitador que solo permite que pase la radiacin excitada de la longitud de onda deseada.

Esta radiacin es reflejada por el filtro dicromtico y enfocada por la lente del objetivo sobre la muestra, las molculas fluorescentes de la muestra se excitan y emiten luz (por fluorescencia) de una longitud de onda especfica y mayor.

Esta luz es enfocada por el objetivo y la mayor parte pasa a travs del filtro dicromtico y no se refleja. Un filtro de barrera final bloquea toda la luz residual con la frecuencia de la radiacin de excitacin.

Filtros: Retienen la radiacin ultra-violeta, peligrosa para el ojo humano, dejando pasar solamente la radiacin visible, que no es peligrosa. Existen un gran nmero de juegos de filtros de excitacin y de emisin para los diferentes fluorocromos.

1. Primer filtro de excitacin: Ubicada entre la fuente de luz y el preparado. Permite el paso de ondas de luz con longitud que caiga en el rango azul con el fin que el preparado sea alcanzado exclusivamente por la luz azul y produzca emisin de luz fluorescente. En el esquema est seleccionando luz de longitud de onda entre 450 y 490 nm (azul)Funcionamiento especfico de sus partes2. Segundo filtro de barrera: Es el filtro que selecciona la luz de longitud de onda fluorescente. En este caso deja pasar la luz de longitud de onda 520 a 560 nm. Ubicada antes del ocular para prevenir daos retinianos que podran ser causados por rayos ultravioleta que escapan el espejo dicrmico. Corta completamente la luz de excitacin no deseada, es decir selecciona la longitud de onda de emisin del fluorocromo.

3. Espejo dicroico: Refleja la luz de ciertas longitudes de onda y de dejar pasar otras. En este caso refleja luz de longitud de onda menos de 510 nm (por ello refleja la luz incidente azul) y deja pasar la luz de longitud de onda superior a 510 nm, dejando pasar la luz verde emitida por el fluorocromo . Permite la separacin de la luz de excitacin y la fluorescencia.

El microscopio utiliza el rango ultravioleta del espectro luminoso en lugar del rango visible, bien para aumentar la resolucin con una longitud de onda menor o para mejorar el detalle.Microscopio UltravioletaEl vidrio, al no transmitir las longitudes de onda ms cortas de la luz ultravioleta, es sustituido por cuarzo , fluorita o sistemas de espejos especializados.