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UNIVERSIDAD MAYOR DE SAN ANDRES
FACULTAD DE CIENCIAS PURAS Y NATURALES
CARRERA DE CIENCIAS QUIMICAS
EXTRACCIÓN E IDENTIFICACIÓN DE MULTI-RESIDUOS DE
PLAGUICIDAS EN SUELOS POR CROMATOGRAFÍA LIQUIDA CON
DETECTOR DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS (LC-MS/MS)
Trabajo para optar al grado de Licenciatura en Ciencias Químicas.
Por: Jimena Limachi Mamani
Tutora: Dra. Patricia Andrea Mollinedo Portugal
Tribunal: Dr. J. Mauricio Peñarrieta
La Paz-Bolivia
2016
ii
AGRADECIMIENTOS
A mis padres, por su apoyo incondicional a lo largo de toda la carrera, por sus
consejos, y sobre todo, por creer en mí
A la Dra. Patricia Andrea Mollinedo Portugal por guiarme en el desarrollo de este
trabajo, gracias por su disponibilidad y paciencia.
Al Centro de Investigaciones Químicas (CIQ – Quillacollo) por permitirme realizar
este trabajo en sus instalaciones.
Al PhD. Marcelo Bascope Orozco, por sus recomendaciones, apoyo y colaboración.
Al Dr. J. Mauricio Peñarrieta por su consideración, solidaridad y recomendaciones.
Por último a la Carrera de Ciencias Químicas y sus docentes quienes me soportaron
durante todo este tiempo y a su vez me brindaron las herramientas necesarias para
poder sacar esto adelante.
iii
TABLAS DE CONTENIDO
AGRADECIMIENTOS………………………..………………………………………………ii
TABLAS DE CONTENIDO…………………………………………….…………………....iii
LISTA DE TABLAS………………………………………………………………………….vii
LISTA DE ILUSTRACIONES……………………………………………………………...viii
RESUMEN…………………………………………………………………………………….x
CAPITULO 1
1. INTRODUCCION…………………………………............………………………….1
CAPITULO 2
2. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION…………………………….………………4
2.1 Objetivo General….......................................................................................4
2.2 Objetivo Especifico……………………………………………………….....…..4
CAPITULO 3
3. ANTECEDENTES………………………………………………………………..….5
CAPITULO 4
4. MARCO TEORICO…………………………………………………………….….....9
4.1 El suelo un recurso no renovable………………………………….…………9
4.2 Plaguicidas……………………………………………………………..……….11
4.2.1 Definición…………………………………………………………..…….11
4.2.2 Clasificación…………………………………………………………..…11
4.2.2.1 Tipo de plaga a controlar……………………………………….12
iv
4.2.2.2 Toxicidad………………………………………………………13
4.2.2.3 Grupo Químico del principio activo…………………………14
4.3 Riesgos y beneficios del uso de plaguicidas………………………..........19
4.4 Contaminación por plaguicidas……………………………………...……..22
4.5 Determinación de residuos de plaguicidas…………………………….…....26
4.5.1 Tipo de muestra…………………………...…………………….......….26
4.5.2 Extracción de plaguicidas…………………...………………………...29
4.5.2.1 Extracción QuEChERS………..……………………………...29
4.5.2.2 Composición de Plaguicidas estándar…...……………...…..33
4.5.3 Cromatografía de Gases…………………..……………………..........35
4.5.3.1 Cromatografía de Gases acoplada a espectrómetro de
masas……………………...……………………………………….…….36
4.5.4 Espectrometría de masas………………...…………………….……...37
4.5.4.1 Impacto electrónico(electron Impact EI)…………...….……...39
4.5.4.2 Ionización por Electrospray (Electrospray Ionization
ESI)……………………………………………………………….41
4.5.5 Cromatografía Líquida (LC)……………………………………...…….43
4.5.5.1 Cromatografía Líquida en fase reversa……………………....44
4.5.5.2 Cromatografía Líquida de compuestos iónicos……………...45
CAPITULO 5
5. Centro de Investigaciones Químicas (C.I.Q. Srl)………………………………..48
5.1 Ubicación Geográfica…………………………………………..…………...…49
5.2 Productos y servicios………………………………………………...………...49
5.3 Equipamiento…………………………………………………………….……..49
CAPITULO 6
6. Justificación……………………………………………………………………….....53
v
CAPITULO 7
7. Metodología………………………………………………………………...............55
7.1 Materiales…………………………………………….....................................55
7.2 Reactivos…………………………………….................................................55
7.3 Equipos……………………………………...................................................55
7.4 Método de extracción………………………………………………………….56
7.4.1 Extracción QuEChERS………………….………………………...…..56
7.4.2 Elección del método ………………………………………..................58
CAPITULO 8
8. Parte experimental………………………………………………………………….60
8.1 Tratamieneto de muestra suelo……………………………………………….60
8.1.1 Muestras de Palca………………………………………………………60
8.1.2 Muestras de Tahuapalca……………………………………………….62
8.1.3 Muestras de Huaricana…………………………………………………64
8.2 Extracción de residuos de plaguicidas (método EN 15662 QuEChERS)
……………………………………………………………………………………66
8.2.1 Preparación y extracción de la muestra……………………….……..67
8.2.2 Limpieza del extracto…………………………………………………...68
8.2.3 Análisis de las Muestras………………………………………………..71
CAPITULO 9
9. Resultados y Discusión…………………………………………………………….72
9.1 Análisis de muestras LC-MS/MS………………………………………….….72
9.2 Resultados LC-MS/MS………………………………………………………...72
9.3 Discusión………………………………………………………………………..73
vi
CAPITULO 10
10. Conclusión…………………………………………………………………..………85
CAPITULO 11
11. Bibliografía………………………………………………………………………..…86
CAPITULO 12
12. Anexos
vii
LISTA DE TABLAS
Tabla I. 4.2.2.1 Clasificación de los plaguicidas en función de su campo de acción
(EPA)…………………………………………………………………………………………12
Tabla II. 4.2.2.2 Clasificación de los plaguicidas según su toxicidad expresada en
DL50 (mg/Kg), recomendada por la OMS………………………………………………...13
Tabla III. 4.2.2.2 Clasificación de los plaguicidas según su tiempo de vida media de
efectividad…………………………………………………………………………………...14
Tabla IV. 4.2.2.3 Clasificación de los plaguicidas, según la familia química…….…..19
Tabla V. 8.1.1 Características de las Muestras provenientes de Palca, en la etapa de
tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de muestra……………..61
Tabla VI. 8.1.2 Características de las Muestras provenientes de Tahuapalca, en la
etapa de tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de
muestra…………………………………………………………………………………….…63
Tabla VII. 8.1.3 Características de las Muestras provenientes de Huaricana, en la
etapa de tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de
muestra……………………………………………………………………………………....65
Tabla VIII. 9.2 Resultados identificación de multi-residuos de plaguicidas por LC-
MS/MS……………………………………………………………………………………..…72
Tabla IX. 9.3 Estructuras de plaguicidas identificados en muestras de suelos y sus
características…………………………………………………………………………...…..74
Tabla X. 9.4 Plaguicidas permitidos en Bolivia definidos por el SENASAG………….78
Tabla XI. 9.1 Corresponde a la lista de moléculas de barrido cromatográfico
habilitado al periodo de análisis, cuyo barrido muestra e indica las moléculas que
fueron monitoreadas por el equipo. (Sistema LC-MS/MS)
viii
LISTA DE ILUSTRACIONES
Figura 1. Distribución de plaguicidas en el medioambiente……………………….......23
Figura 2. Tipos de extracción QuEChERS………………………………………………31
Figura 3. Homogeneizar el producto (triturar), Preparación de sales Quechers.
(Realizado en CIQ.-Quillacollo)…………………………………………………….……..31
Figura 4. Esquema, Extracción de plaguicidas en muestras de quinua. (Realizado en
CIQ.-Quillacollo)……………………………………………………………………………..32
Figura 5. Reconstitución del extracto de plaguicidas en quinua. (Realizado en CIQ.-
Quillacollo)…………………………………………………………………………………...33
Figura 6. Tratamiento de estándares de plaguicidas antes de su inyección LC-MS ó
GC-MS (CIQ-Quillacollo)…………………………………………………………………..35
Figura 7. Cromatogramas obtenidos en GC y LC – MS del Mix 3 (estándar).
(Obtenidos en CIQ-Quillacollo)…………………………………….……………………...47
Figura 8. Lectura en LC-MS/MS, mostrando la identificación de atrazina en la
extracción a pH regulado entre 5 – 6 (espectro obtenido en CIQ-Quillacollo)……….59
Figura 9. Muestras de suelo proveniente de Palca, color negro plomizo, con gran
cantidad de materia orgánica (raíces finas y medianas y grandes) y piedras
medianas y grandes de constitución dura………………………………………………..60
Figura 10. Muestras de suelo provenientes de Tahuapalca, suelo café-negruzco, con
gran cantidad de materia orgánica (raíces finas y medianas) y piedras medianos de
constitución dura…………………………………………………………………………….62
ix
Figura 11. Muestras de suelo provenientes de Huaricana, suelo suave, color
plomizo-amarillento, con gran cantidad de materia orgánica (Raíces finas pequeñas,
medianas, hojas, carbón) y piedras medianos y pequeños…………………………...64
Figura 12. (8.2.1) Proceso de extracción de plaguicidas en suelos………………….68
Figura 13. (8.2.2) Proceso de Limpieza del extracto ………………………………….71
Figura 14. Equipo utilizado, LC-MS/MS (CIQ-Quillacollo)…………………………….71
x
RESUMEN
En este trabajo se llevó a cabo un estudio para determinar el nivel de contaminación
en cuanto a residuos de plaguicidas en muestras de suelos provenientes de las
Localidades de Palca, Tahuapalca y Huaricana, de la ciudad de La Paz.
Se analizaron las muestras, y se lograron identificar la presencia de 10 plaguicidas
entre carbamatos, organofosforados, derivados de triazinas, Avermectin, utilizados
como fungicidas, insecticidas y herbicidas, de acuerdo al principio activo que
presenten. Según los datos de plaguicidas permitidos en Bolivia por el SENASAG,
nueve de los identificados son permitidos y uno no es permitido, es el caso del
plaguicida carbetamide, con los permitidos podemos decir que los plaguicidas
utilizados en Bolivia, fueron para la cosecha y producción de maíz y soya. Aunque no
se tiene datos de la procedencia de las muestras analizadas.
Para el tratamiento de las muestras se utilizó el método de extracción en fase solida
dispersiva (QuEChERS), y como técnica analítica, Cromatografía liquida con detector
selectivo de Masas (LC-MS/MS).
Palabras Clave: Plaguicidas, suelo, QuEChERS, Cromatografía liquida,
espectrometría de masas.
1
1. INTRODUCCION
Con el incremento de la población mundial, el hombre se vio en la necesidad de
incrementar la producción y eficiencia de los cultivos, con este propósito la industria
agroquímica se convirtió en una de los principales insumos agrícolas para el
incremento en la producción, rendimiento y mejora sustancial en los cultivos de
alimentos.
La problemática de los agricultores a la hora de la cosecha es la aparición de plagas,
con la pérdida de cosechas que estas generan, por esto se ha buscado la manera de
eliminarlas, utilizando los plaguicidas.
Según la EPA,US (Environmental Protection Agency,USA), y el Codex Alimentarius
(Comisión creada en 1963 por la Food and Agricultural Organization, FAO, y la
Organización Mundial de la Salud, OMS o WHO, World Health Organization,
pertenecientes a la ONU), los plaguicidas son compuestos o mezclas de compuestos
destinadas a prevenir, destruir, atraer, repeler o combatir cualquier plaga, incluidas
las especies indeseadas de plantas o animales, durante la producción,
almacenamiento, transporte, distribución y elaboración de alimentos, productos
agrícolas o alimentos para animales, o que pueda administrarse a los animales para
combatir ectoparásitos.1
En la actualidad, son pocos los que ponen en duda los beneficios asociados al uso
de plaguicidas. De hecho, la necesidad de la utilización de estas para la continuidad
CAPITULO 1
2
en el suministro de alimentos, y la producción sostenible, es una realidad admitida
por gobiernos y organismos internacionales.
Cuando se aplica un plaguicida a una planta, este se deposita en forma de aerosol o
polvo y cae al suelo, o también puede permanecer en el aire y viajar kilómetros a la
deriva con el viento antes de caer al suelo. Es por esa razón que se han encontrado
plaguicidas en lugares donde nunca se usaron.
Como cualquier compuesto químico, los plaguicidas, dependiendo de su estructura y
factores ambientales, pueden permanecer con la misma composición que tenían al
momento de ser aplicados (Organoclorados) o degradarse en sustancias menos
tóxicas o en sustancias más tóxicas.1
Los plaguicidas que persisten después de su aplicación son denominados residuos y
pueden permanecer por días o meses en las hojas de las plantas y años en suelos y
sedimentos de los ríos. Los residuos de las hojas y del suelo pueden ser lavados y
arrastrados por la lluvia largas distancias alcanzando fuentes de agua, afectando la
biodiversidad, disminuyendo la capacidad de descomposición de la materia orgánica,
modificando la estructura y favoreciendo la erosión.2
El uso continuo de plaguicidas puede provocar el surgimiento de nuevas plagas ya
que la aplicación de un insecticida de amplio espectro no sólo mata plagas, sino
también mata insectos benéficos que controlan de manera natural a otros insectos
plaga. Por otro lado, se puede provocar la resistencia de plagas dando lugar a que
las mismas sobrevivan a dosis que antes las eliminaban.
Sin embargo, la aplicación de plaguicidas es uno de los factores que más influyen en
la biodiversidad ya que tienen el efecto de reducir el hábitat, y el número de especies
3
y desplazar el equilibrio en el ecosistema. Ya que estudios revelan que el uso
excesivo también influyen en la fertilidad de los suelos, contaminando también las
aguas al ser estas arrastradas por la lluvias.
Este hecho, unido al surgimiento en los últimos años de políticas de conservación del
medio ambiente, ha dado lugar al desarrollo de diversas metodologías analíticas para
la extracción y determinación de residuos de plaguicidas en diferentes matrices
ambientales, entre estas el suelo.
El método clásico para la determinación de estos residuos en suelos, corresponde a
la extracción sólido-líquido con diferentes tipos de solventes; limpieza y posterior
análisis por cromatografía de gases. También se han desarrollado metodologías que
requieren menores cantidades de solventes como es el caso de la extracción con
fluidos supercríticos, extracción en fase sólida (SPE, por sus siglas en inglés) y
extracción asistida con microondas. Los métodos cromatográficos brindan la mejor
alternativa para los análisis simultáneos de varios compuestos o sus familias, por
ejemplo, cromatografía de gases con detectores nitrógeno-fósforo (NPD), captura de
electrones (ECD) y espectrometría de masas. En los últimos años se han planteado
excelentes alternativas mediante el empleo de cromatografía líquida de alta eficiencia
acoplada a espectrometría de masas.
En el presente trabajo se muestran los resultados de la identificación de 10
plaguicidas, mediante el método de extracción en fase solida dispersiva
(QuEChERS). La determinación de estos plaguicidas se realizó por Cromatografía
liquida con detector selectivo de Masas (LC-MS/MS).
4
2. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACION
2.1 OBJETIVO GENERAL
-Identificar residuos de plaguicidas en suelos por cromatografía liquida con detector
de espectrometría de masas (LC-MS/MS-ESI)
2.2 OBJETIVO ESPECIFICO
- Extraer residuos de plaguicidas utilizando el método de extracción en fase solida
dispersiva (EN 15662 Method-QuEChERS), en muestras de suelos.
CAPITULO 2
5
3. ANTECEDENTES
Desde épocas remotas el hombre ha combatido a las plagas y, por lo tanto, ha
utilizado plaguicidas. La primera etapa de la historia de los plaguicidas abarcó desde
antes de Cristo hasta mediados del siglo XIX y se le suele llamar “Era de los
productos Naturales”. Homero escribió acerca de las propiedades “purificadoras” del
azufre, pues se sabía que esta sustancia atacaba a los mohos. Otros datos son que
el uso de las flores de piretro como insecticidas se remonta en los tiempos de Jerjes,
rey de Persia y que los chinos utilizaron los arsenitos para el control de roedores y
otras plagas desde el año 900 de nuestra era. Durante los dos últimos siglos de esta
etapa se utilizaron como plaguicidas sustancias más complejas como el jabón, pero
que seguían siendo naturales.
En este siglo también se desarrollaron compuestos de arsénico, nicotina y otros
insecticidas, pero estos compuestos son tan tóxicos para animales y personas como
lo son para los insectos. Su utilización es peligrosa, sin embargo, a veces un
insecticida peligroso es preferible a ciertas muertes por enfermedades o hambre.1
La guerra contra los insectos cambio radicalmente en 1939 con el descubrimiento del
DDT. El DDT es extremadamente toxico para los insectos, pero su toxicidad en los
mamíferos es muy baja. Para matar a una persona se necesitan aproximadamente
30grs de DDT, pero esta misma cantidad de insecticida protege 4000m2 de terreno
contra las plagas de mosquitos. En 1970, la Academia Nacional de las Ciencias de
CAPITULO 3
6
EEUU. Informo que:” en más de dos décadas el DDT ha evitado 500 millones de
muertes debido a la malaria” avances similares se hicieron contra los mosquitos
portadores de fiebre amarilla y la mosca tse-tse, portadora de la enfermedad del
sueño. Espolvoreándose el DDT sobre el cuerpo, la gente se protegía contra el tifus y
poniéndolo en las madrigueras de los roedores se controlaba la amenaza de plaga.
Como muchos inventos, el DDT tenía efectos colaterales no deseados; es un
insecticida de larga duración y sus residuos se acumulan y persisten en el medio
ambiente durante largo tiempo. El amplio uso del DDT como insecticida en la
agricultura dio lugar a que se acumulara en grandes cantidades en las tierras de
cultivo y en las aguas, causando la disminución de varias especies de animales. En
1972, la agencia de protección Medio ambiental de los EEUU, prohibió el uso del
DDT como insecticida agrícola en los EEUU, no obstante, todavía se usa como
último recurso en países donde las enfermedades mediadas por los insectos
amenazan la vida humana.1
Se han desarrollado otros insecticidas clorados; alguno de ellos también se acumula
en el medio ambiente, produciendo gradualmente efectos tóxicos en los animales,
otros se pueden utilizar con poco impacto medioambiental si se aplican
correctamente. Debido a sus efectos tóxicos persistentes, los insecticidas clorados
raramente se utilizan en la agricultura, generalmente se utilizan cuando se necesita
un insecticida potente para proteger la vida o la propiedad; por ejemplo, el lindano se
utiliza en los shampus para matar piojos y el clordano para proteger los edificios de
madera de las termitas.1
7
Los herbicidas sintéticos se introdujeron al mercado después de la segunda guerra
mundial. Por sus características químicas pertenecen a grupos muy diversos, por
ejemplo Carbamatos, dinitroanilinas, aminotriazinas, acetanilidas, compuestos
alifáticos halogenados y derivados del ácido fenoxiacetico. Uno de los herbicidas
más importantes ha sido el 2,4-D, que se comercializo por primera vez en Estados
Unidos en 1945. Su mezcla con el 2,4,5-T fue conocida como “agente naranja” y su
uso con fijos estratégicos en la guerra del Vietnam. Otros herbicidas importantes son
el Dalapon, un ácido alifático clorado, el diuron, que pertenece al grupo de los
tiocarbamatos; el glifosato que es un organofosforado, y el paraquat, que aparece al
grupo de los bipiridilos.1
El uso de plaguicidas en Bolivia se remonta a la década de los años 50. Luego de la
revolución del año 1952 en la cual la propiedad de la tierra pasó a manos del
campesino, junto con la implementación de la denominada “marcha hacia el oriente”,
se produjo como consecuencia una importante migración a la Amazonía boliviana y
el comienzo del uso de plaguicidas. Posteriormente entre los años 1966 a 1975 la
importación de plaguicidas creció de 188.000 kg a 1.342.800 Kg. En la década de los
noventa se registraron 160 productos de los cuales 40% eran insecticidas, 25%
fungicidas, 20 % herbicidas y 5% nematicidas y rodenticidas.2
La importación de plaguicidas fue incrementándose de manera importante desde el
año 1994 cuando el registro de ese año alcanzó las 2000 toneladas de las cuales el
65% eran herbicidas, 23% insecticidas, 7% fungicidas y un 5% destinado para otros
usos, con un crecimiento anual del 12%. Para marzo de 1997 ingresaron legalmente
a Bolivia 426 insumos agrícolas comerciales y en el año 1999 se importaron
8
alrededor de 10.000 toneladas de plaguicidas. El registro de agroquímicos para el 31
de diciembre de 2000 mostró 1084 agroquímicos de los cuales 857 eran plaguicidas.
En el año 2003 los registros de importación de insumos agropecuarios mostraron un
total de 17.128.402 de kilogramos de los cuales alrededor de un 50%
correspondieron a plaguicidas, sin tomar en cuenta la cantidad de ellos que ingresan
por la vía del contrabando, estimada en un 30% más. Para el año 2004 la suma
ascendió a 15.429.263 Kg de plaguicidas, 15.822.532 para el 2005 y para el 2006 un
total de 17.066.125 kg, con un costo de 152.690.797 dólares americanos. Cabe
mencionar también el incremento elevado del uso de fertilizantes estimado en
364.924 Kg para el año 1997 y de 35.420.130 para el año 2006.2
La peligrosidad de estos compuestos presenta varios aspectos: peligrosidad en su
fabricación y formulación, peligrosidad para el agricultor que entra en contacto con
ellos, peligrosidad ecológica asociada a desequilibrios en el medio ambiente y
peligrosidad para el consumidor. A pesar de todos los inconvenientes que plantean,
difícilmente se puede prescindir de su uso en el estado actual de desarrollo de
nuestra agricultura. El riesgo que plantea su aplicación puede verse reducido
considerablemente si se aplican correctamente a los cultivos para los que han sido
elaborados, siguiendo las correspondientes medidas de seguridad, aplicando las
dosis adecuadas y, además, respetando los correspondientes días de descanso.
Pero estas premisas muchas veces no se cumplen y, si no hay control alguno que lo
impida, el alimento llega al consumidor con unos niveles de pesticidas superiores a
los que debería contener.2
9
4. MARCO TEORICO
4.1 EL SUELO UN RECURSO NO RENOVABLE
El suelo es un recurso muy importante para la población, ya que gracias a este surge
la producción alimentaria.
La producción agropecuaria se sostiene en el aprovechamiento directo de recursos y
servicios de la biodiversidad como el suelo, el agua, la polinización de cultivos, la
captación de agua, la formación de suelos fértiles, la diversidad genética y el reciclaje
de materia orgánica. A lo largo de los años el establecimiento de grandes
extensiones de monocultivos y la profusa aplicación de plaguicidas y fertilizantes ha
generado problemas como la degradación de los suelos, la contaminación del agua,
la acumulación de sustancias tóxicas en alimentos, la intoxicación de agricultores con
plaguicidas, la pérdida de fauna y flora silvestre y desbalance ambiental.3
El suelo es un recurso finito, lo que implica que su pérdida y degradación no son
reversibles en el curso de una vida humana. En cuanto componente fundamental de
los recursos de tierras, del desarrollo agrícola y la sostenibilidad ecológica, es la
base para la producción de alimentos, combustibles y fibras y para muchos servicios
ecosistémicos esenciales. Sin embargo, pese a que es un recurso natural muy
valioso, a menudo no se le presta la debida atención. La superficie natural de suelos
productivos es limitada y se encuentra sometida a una creciente presión debido a la
intensificación y el uso competitivo que caracteriza el aprovechamiento de los suelos
con fines agrícolas, forestales, pastorales y de urbanización, y para satisfacer la
demanda de producción de alimentos, energía y extracción de materias primas de la
CAPITULO 4
10
creciente población. Los suelos deben ser reconocidos y valorados por sus
capacidades productivas y por su contribución a la seguridad alimentaria y al
mantenimiento de servicios ecosistémicos fundamentales.4
Los consumidores están cada vez más preocupados por la calidad de los alimentos
que consumen y los impactos sociales y ambientales de la producción agropecuaria.
Para afrontar estos problemas se impulsa a nivel mundial que los agricultores
apliquen BUENAS PRÁCTICAS AGROPECUARIAS (también llamadas Buenas
Prácticas Agrícolas). Estas Buenas Prácticas contribuyen a producir alimentos sanos
y generar beneficios tangibles para los productores sin degradar el ambiente.
Las Buenas Prácticas Agropecuarias abordan temas como:
1. Uso adecuado del suelo y agua.
2. Uso responsable y apropiado de fertilizantes, plaguicidas y productos veterinarios.
3. Manejo Integrado de Plagas.
4. Elaboración y uso de fertilizantes orgánicos.
5. Manejo de animales para producción pecuaria.
El suelo es por defecto el lugar donde van a parar gran parte de los desechos sólidos
y líquidos de cualquier actividad humana. La contaminación del suelo es la
presencia de compuestos químicos hechos por el hombre u otra alteración al
ambiente natural de suelo. Todo lo que no es útil en cualquier proceso industrial,
minero, urbano, agrícola, etc. se viene acumulando en el suelo sin control a lo largo
de los años. Los productos químicos que podemos detectar en el suelo pueden ser
desde hidrocarburos de petróleo, solventes, plaguicidas y otros metales pesados.
11
Los efectos en el suelo de todos estos contaminantes pueden ser variados, por el
tiempo o con las condiciones climáticas, acelerando o disminuyendo su solubilidad.
Pero cuando se supera la capacidad de amortiguación propia de la naturaleza, se
constituye una bomba de tiempo química que aunque no produzca efectos
inmediatos puede hacerlo en un futuro. 5
4.2 Plaguicidas
4.2.1 Definición
Un plaguicida se define bajo la Ley Federal Norteamericana sobre insecticidas,
fungicidas y rodenticidas (FIFRA) y la Organización de las Naciones Unidas Para la
Alimentacion y la Agricultura (FAO), como “cualquier sustancia o mezcla de
sustancias cuyo propósito es el de prevenir, destruir, repeler o mitigar cualquier
insecto, roedor, nematodos, hongos, hiervas, o cualquier otra forma de vida
declarada como peste, y cualquier sustancia o mezcla de sustancias dirigidas para
su uso como regulador de plantas, de foliadoras o disecantes”.
Los plaguicidas han sido utilizados durante siglos para controlar los muchos
organismos (insectos, hongos, microbios, plantas, roedores, etc.) que ya sea que
compitan directamente con los humanos por alimentos y fibras o representen una
amenaza para la salud humana o el medio ambiente.6
4.2.2 Clasificación
Los plaguicidas se clasifican en función de algunas de sus características principales,
como son la toxicidad aguda, la vida media, la estructura química y su uso.
12
Los plaguicidas son clasificados principalmente en función del tipo de plaga a
controlar, toxicidad y grupo químico del principio activo.
4.2.2.1 Tipo de plaga a controlar
Dependiendo del organismo al que atacan. Los plaguicidas utilizados en el ámbito de
la agricultura pueden ser categorizados como: 6
Tabla I. 4.2.2.1 Clasificación de los plaguicidas en función de su campo de
acción (EPA)6
Tipo de plaguicidas Objetivo de control o modo de acción
Insecticida Insectos
Garrapacidas Garrapatas
Acaricidas Garrapatas, ácaros y arañas
Nematicidas Nemátodos
Fungicidas Hongos
Antimicrobianos Bacterias, virus y otros microorganismos
Herbicidas Yerbas
Rodenticidas Roedores
Avicidas Pájaros
Picicidas Peces
Moluscocidas Moluscos (babosas y caracoles)
Predacidas Depredadores vertebrados
Sinérgicos Resaltan el efecto de otro pesticida
Atracante Atrae pestes
Repelentes Aleja pestes
Regulador de crecimiento Cambia los procesos de crecimiento N.
Defoliador Retira hojas de las plantas
Disecantes Seca organismos vivientes
Antitranspirantes Reduce la perdida de agua de la planta
Fumigantes Plagas en edificios, suelos, etc.
13
4.2.2.2 Toxicidad
Según esta característica, una de las más utilizadas es la recomendada por la
Organización Mundial de la Salud (OMS), que cataloga a los plaguicidas según su
capacidad de producir daño agudo a la salud por una o varias exposiciones durante
un determinado tiempo; esta clasificación se basa en la dosis letal aguda (DL50) por
vía dérmica u oral en ratas. Este valor representa la estimación estadística de la
cantidad en mg del tóxico por Kg del peso corporal requerida para matar 50% de un
grupo de animales de experimentación. Mientras menor sea el valor DL50, mayor es
la toxicidad del producto químico.7
Tabla II. 4.2.2.2 Clasificación de los plaguicidas según su toxicidad expresada en DL50 (mg/Kg), recomendada por la OMS7
Clase Toxicidad DL50 en ratas (mg/Kg de peso del animal) Ejemplos
Vía Oral Vía Tópica
Sólido Líquido Sólido Líquido
Clase IA
Extremadamente tóxicos
< 5 < 20 < 10 < 40 Paratión, dieldrín
Clase
IB Altamente tóxicos 5-50 20-200 10-100 40-400
Eldrín,
diclorvos Clase
II
Moderadamente
tóxicos
50-
500
200-
2000
100-
1000
400-
4000
DDT,
clordano Clase III Ligeramente tóxicos
>500 >2000 >1000 >4000 Malatión
Los términos sólido o líquido se refieren al estado físico del producto o la
formulación.
Al basarse en la observación de especies animales, es importante señalar que estos
indicadores no proporcionan información sobre los efectos crónicos, ni sobre la
14
citotoxicidad de algún compuesto. Por su vida media, los plaguicidas se clasifican en
permanentes, persistentes, moderadamente persistentes y no persistentes.7
Tabla III. 4.2.2.2 Clasificación de los plaguicidas según su tiempo de vida media
de efectividad.7
Persistencia Vida media Ejemplos
No persistente De días hasta 12
semanas Malatión, diazinón, carbarilo, diametrín
Moderadamente persistente
De 1 a 18 meses Paratión, lannate
Persistente De varios meses a 20 años
DDT, aldrín, dieldrín
Permanentes Indefinidamente Productos hechos a partir de mercurio, plomo, arsénico.
Persistencia de distintos grupos de plaguicidas en suelos. (Fuente10)
4.2.2.3 Grupo químico del principio activo
Desde el punto de vista de su estructura química existe una gran variedad,
pudiéndose clasificar como organoclorados, organofosforados, carbamatos,
tiocarbamatos, piretroides, triazinas, derivados de origen botánico, compuestos
15
orgánicos del estaño, elementos como arsénico, selenio, antimonio, compuestos
inorgánicos como fosfito de magnesio, cloruro de mercurio, etc. Los más importantes
son los siguientes:8
ORGANOCLORADOS
Los organoclorados son los plaguicidas más ampliamente utilizados. Su estructura
química corresponde a la de los hidrocarburos clorados, lo que les confiere una alta
estabilidad física y química, haciéndolos insolubles en agua, no volátiles y altamente
solubles en disolventes orgánicos. Estas características favorecen su persistencia en
el ambiente y su lenta biodegradabilidad. Su vida media es de 5 años, aunque varía
según el producto; por ejemplo, para el beta hexaclorociclohexano es de 3 años,
para el aldrín de 6 años y para el DDT es de 30 años. El compuesto como tal o sus
metabolitos son contaminantes ubicuos de varios tejidos en humanos y de los
mamíferos en general. A causa de su alta lipofilicidad tienden a acumularse
principalmente en el tejido celular subcutáneo, en el componente graso de la leche
materna y de la sangre. Productos representativos de este grupo son el DDT, el
aldrín, el dieldrín y el endrín, así como el endosulfán y el lindano, ambos todavía
usados en España.7
Se presentan en forma de concentrados emulsionables, polvos humectables o polvos
y gránulos, en concentraciones variables. A algunos se les agrega establizantes
como epiclorhidrina y úrea.8 Algunos compuestos organoclorados se acumulan en el
organismo, generalmente sin causar efecto nocivo aparente. La mayor parte de los
compuestos organoclorados persisten en el medio ambiente y afectan la vida
silvestre. Por estas razones, se están utilizando menos en algunos países.
16
PIRETRINAS Y PIRETROIDES
PIRETRINAS:
Las piretrinas son plaguicidas obtenidos por secado, molienda y pulverización de la
flor del crisantemo, cuyo polvo contiene del 1 al 3% del principio activo. Las
principales piretrinas son las cinerinas I y II, las jasmolinas I y II, y las piretrinas I y II,
consideradas estas últimas como las de efecto más potente. Tienen una relativa
selectividad, por lo que su toxicidad es baja en organismos no blancos. Las
moléculas de piretrinas son neuroactivas, de baja absorción dérmica. Son poco
solubles en agua y se hidrolizan rápidamente por álcalis, poseen persistencia baja,
debido a su inestabilidad en presencia de luz y calor.7, 8
PIRETROIDES:
Son compuestos de derivados sintéticos de las piretrínas con actividad insecticida,
solubles en agua y se hidrolizan en álcalis, alta persistencia debido a su estabilidad
en presencia de luz y son neurotóxicos. Los cuales tienen una amplia difusión en el
mercado mundial, están formulados en diversas presentaciones, entre las cuales
tenemos los concentrados emulsionables, polvos mojables, gránulos y concentrados
para aplicación de ultra bajo volumen (sprays).8
Químicamente, se dividen en dos tipos: a) sin grupo alfacyano, como el permetrín y
resmetrín, y b) con grupo alfacyano, como fenvalerato, diametrín y cypermetrín.
Todos son metabolizados por hidrólisis, oxidación y conjugación, con poca tendencia
a acumularse en los tejidos. Además son rápidamente degradados en el ambiente,
pues aunque se absorben masivamente por el suelo, se eliminan fácilmente con el
agua.7
17
BIPIRIDILICOS
Son herbicidas sólidos, insípidos e inodoros y muy solubles en agua. Dentro de este
grupo se encuentran el paraquat y diquat.
El paraquat se utiliza como herbicida de contacto para destruir las partes verdes de
las plantas en presencia de la luz solar en forma líquida. Las soluciones
concentradas de paraquat corroen algunos metales y se inactivan rápidamente en
contacto con los minerales arcillosos del suelo.
El diquat se usa como herbicida acuático. Para contrarrestar su uso inadecuado del
paraquat con fines suicidas, algunas compañias han adoptado por adicionarles
sustancias de olor nauseabundo, emético y colorante para diferenciarlo de productos
caseros. Por lo general, estas sustancias se comercializan en forma líquida.8
Estos compuestos son altamente tóxicos, especialmente por vía oral. También se
absorbe por la piel. Al ser ingerido produce, después de varios días, daño pulmonar
irreversible que puede llevar a la fibrosis y a la muerte.
ORGANOFOSFORADOS
Los derivados fosfóricos ocupan hoy en día un lugar preponderante entre los
plaguicidas más conocidos y utilizados, ya que constituyen un grupo muy efectivo
contra las plagas.
Son compuestos de alta toxicidad y la mayoría de éstos se encuentran incluidos en la
categoría de extremadamente peligrosos de la clasificación de la OMS.8
Este grupo de insecticidas son por lo general muy solubles en agua y fácilmente
hidrolizables, por lo que presentan una baja persistencia en el medio ambiente,
normalmente no superior a unas semanas, y poco acumulables en el organismo
humano. Debido a ello, se utilizan muy a menudo para atacar insectos adultos,
18
parásitos de plantas y animales, en parte, para tratamientos preliminares de semillas
y terrenos antes de la siembra. Los insecticidas tiofosfatos constituyen un grupo
importante en esta familia, la presencia de un átomo de azufre ligado al fósforo (en
lugar del oxígeno) confiere a estas moléculas una mayor estabilidad química, por lo
que se hidrolizan mucho menos y pueden ser utilizados en medio acuosos.9
Estos son menos persistentes en el ambiente y no se acumulan en el organismo,
pero su toxicidad aguda es mayor. Enfatizar que toxicidad no es lo mismo que
riesgo.7
CARBAMATOS
Son sustancias altamente tóxicas y se usan mayormente como insecticidas,
nematicidas y fungicidas tanto en uso agrícola como doméstico. Poseen poca
volatilidad, se degradan fácilmente en medios salinos y bajo la acción de la luz y el
calor. Está comprobado su efecto neurotóxico.8
Estos pueden ser de tres tipos principales: a) derivados de ésteres carbamatados,
comúnmente usados como insecticidas; b) derivados del ácido tiocarbámico,
utilizados como fungicidas,y c) carbamatos propiamente dichos, que se emplean
como herbicidas. Todos ellos son relativamente inestables, se les atribuye un tiempo
corto de persistencia ambiental y cuentan con cierta selectividad. Su degradación se
realiza por oxidación y sus metabolitos finales son hidrosolubles pudiendo excretarse
por la orina y las heces fecales. Entre los más comunes se encuentran el lannate, el
carbarilo y el carbyl.7
19
Tabla IV. 4.2.2.3 Clasificación de los plaguicidas, según la familia química.7
Familia Química Ejemplos
Organoclorados Endrín, Dieldrín, Aldrín, Lindano, HCH (BCH), Heptacloro,DDT, Metoxicloro, Clordano, Toxafeno
Organofosforados Dimetón, Paratión, Metilparatión, Fentión, Diazinón, Diclorvós, Fenitritión, Triclorfón, Dimetoato, Malatión.
Piretroides Resmetrina, Bioresmetrina, Aletrina, Deltrametrina, Cipermetrina, Permetrina, Fenvalerato.
Bipiridilicos Paraquat, Diquat.
Carbamatos Aldicarb, Carbofurán, Metomil, Propoxur, Carbarilo.
Derivados del ácido fenoxiacético
Dicloroprop, picloram, silvex
Derivados del cloronitrofenólicos
DNOC, Dinoterb, Dinocap.
Derivados de Triazinas
Atrazina, ametryn, Desmetryn, Simazine
Compuestos organicos del Estaño
Cyhexatin, Dowco, Plictrán.
Compuestos inorgánicos
Arsenico, pentóxido. Obpa, fosfito de magnesio, cloruro de mercurio, arsenato de plomo, bromuro de metilo, antimonio, mercurio, selenio, talio y fosforo blanco.
Compuestos de origen botánico
Rotenona, Nicotina, Aceite de canola.
4.3 Riesgos y beneficios del uso de plaguicidas
Beneficios
El motivo por el que la producción ha crecido más del 80% durante las últimas siete u
ocho décadas es el desarrollo y uso de métodos de cultivo científicos, que incluyen el
uso de plaguicidas, fertilizantes, nuevas variedades de semillas y equipo autorizado.
Los plaguicidas se han convertido en un adjunto esencial para la agricultura moderna
en Estados Unidos y en todo el mundo.6
20
Si bien el uso de Químicos no debe ser considerado el único método para el control
de plagas, los plaguicidas siguen siendo el medio más utilizado para controlar la
mayoría de las plagas agrícolas.
Los plaguicidas han desempeñado y siguen desempeñando un papel importante en
el control de vectores de insectos de un número de enfermedades debilitantes de
humanos y animales domésticos. Aun en Estados Unidos, se han estimado que las
enfermedades originadas por plagas, y ataques por plagas mismas, representan de
100 a 300 muertes anuales y tal vez 20 veces más este número de enfermedades y
heridas incapacitantes, además varios millones de episodios de enfermedades y
heridas tienen la seriedad suficiente, o son lo bastante dolorosas, para requerir
atención médica. Como resultado de programas del control de mosquitos, tal vez
millones de personas en todo el mundo ahora se han librado de la amenaza de la
malaria. De igual manera, decrementos serios han ocurrido en la fiebre amarilla, tifo,
plaga, enfermedad de Chagas, oncocercosis y enfermedad de sueño para nombrar
sólo algunas de las originadas por artrópodos que han causado incalculable
sufrimiento humano y han reprimido el desarrollo económico de grandes porciones
del mundo.6
Según las estadísticas actuales de la FAO dos tercios de la Humanidad están
subalimentados. Por consiguiente el aumento de la producción agrícola es una
necesidad, siendo preciso ampliar las áreas cultivadas y el rendimiento de las
explotaciones. La lucha contra las plagas es uno de los métodos más importantes
para aumentar la productividad de las explotaciones agrícolas, ya que las pérdidas
causadas por las plagas son muy elevadas. Se ha calculado que alrededor de un
21
tercio de la producción alimenticia del mundo se perdería si los agricultores no
utilizaran productos químicos para contrarrestar el efecto de las plagas de los
cultivos, de las enfermedades de las plantas y la competencia de las malas hierbas.
Además de este aumento de los rendimientos, la disminución de las grandes
fluctuaciones de las cosechas debidas a las plagas y el ahorro de mano de obra
debido al uso de los plaguicidas tienen gran importancia económica.10
Riesgos
La preocupación pública inicial relativa a los efectos adversos potenciales de los
plaguicidas, giró alrededor de impactos ecológicos adversos. El riesgo debe estar
definido como la probabilidad de que algún efecto adverso ocurrirá. En el caso de un
plaguicida, el riesgo es una función de la capacidad intrínseca del material de causar
un efecto adverso determinado (por ejemplo, neurotoxicidad, cáncer, efectos de
desarrollo o inmunotoxicidad) y el nivel de exposición. Ya que los plaguicidas se
desarrollan específicamente por su actividad biológica o toxicidad para alguna forma
de vida, y ya que, a nivel subcelular, los organismos tienen muchas similitudes entre
ellos, todos los plaguicidas se asocian con cierta medida de riesgo. No obstante, el
grado del riesgo variará considerablemente, dependiendo de la naturaleza de la
toxicidad inherente del plaguicida y la intensidad, frecuencia y duración de la
exposición, la que a su vez, se relaciona con las circunstancias bajo las cuales la
exposición ocurre. Los riesgos potenciales para un aplicador de plaguicidas o un
granjero expuesto a los plaguicidas en un plano ocupacional son tal vez mucho
mayores que los riesgos para alguien de la población general expuesta sólo a rastros
de plaguicidas en alimentos y/o agua.6
22
Los plaguicidas se han convertido en un foco de atención especial del público porque
Son químicos sintéticos que son liberados intencionalmente en el medio
ambiente.
Han sido diseñados para ser tóxicos para ciertas formas de vida y con
frecuencia tienen el potencial de causar efectos adversos en otras especies no
objetivo, incluyendo a los humanos.
Los humanos están expuestos de manera inevitable a los plaguicidas, ya sea
por su ocupación o de manera involuntaria, a través de residuos de
plaguicidas que se presentan en alimentos y agua.
La percepción de que el sistema reglamentario actual no atiende debidamente
a las poblaciones que se supone son sensibles, por ejemplo, infantes y niños,
o subpoblaciones que pueden experimentar una mayor carga de exposición
ambiental debido a su estado socioeconómico.
A pesar de las grandes cantidades de químicos plaguicidas que se uti lizan y el
indudable potencial de muchos de ellos de ocasionar efectos adversos para la salud
en los humanos, todavía no hay datos suficientes para determinar con precisión el
impacto real de los plaguicidas en la salud humana.6
4.4 Contaminación por Plaguicidas
A pesar de que los plaguicidas han sido diseñados para ofrecer una alta
especificidad de acción, su uso genera innumerables efectos secundarios como la
generación de organismos resistentes, persistencia en el medioambiente o la
contaminación de los recursos hídricos. Los plaguicidas organoclorados son un
ejemplo de persistencia ambiental, ya que algunos de ellos permanecen en los
suelos sin degradación significativa hasta 30 años después de ser aplicados. Esa
permanencia favorece su incorporación a las cadenas tróficas, la biomagnificación y
23
la acumulación en los tejidos grasos de humanos y animales. Asimismo, la aplicación
sistemática de plaguicidas altera los equilibrios existentes en las cadenas tróficas
normales al causar la desaparición o disminución de los enemigos naturales de
distintas plagas, de descomponedores de materia orgánica, de incorporadores de
nitrógeno y de otras especies vitales para mantener los ciclos biológicos, como por
ejemplo los insectos polinizadores. Estos factores mencionados anteriormente
forman un ciclo cerrado (ver figura 1) de distribución de plaguicidas, que se
retroalimenta y refuerza, provocando multitud de efectos malignos para el
medioambiente.11
Figura 1. Distribución de plaguicidas en el medioambiente (Fuente11
).
24
La contaminación ambiental se caracteriza por la presencia de residuos de
plaguicidas en la atmósfera, en el agua, en el suelo y en los productos agrícolas y
alimentos. Su presencia en la atmosfera es debido principalmente a la evaporación y
arrastre mecánico de los plaguicidas aplicados. En las aguas de mares, ríos y lagos
su presencia es debido a la filtración a través de los suelos, a los vertidos
accidentales y al transporte aéreo de partículas. La presencia de residuos en
productos agrícolas será de mayor importancia cuando el tiempo transcurrido entre la
aplicación y la recolección no haya sido suficiente para permitir la limpieza o
degradación del producto. En alimentos de origen animal, la contaminación es debido
a la del hábitat en que se desarrollaba la vida del animal, hallándose muy descritos
los mecanismos por los cuales se acumulan en ciertas especies.12
La degradación de los plaguicidas en el medioambiente es debida a procesos
químicos de fotólisis, hidrólisis, oxidación o reducción y por supuesto a la acción de
microorganismos, formándose gran variedad de productos de transformación. Pero
teniendo en cuenta que la biotransformación de estos compuestos es muy lenta, los
plaguicidas tienden a acumularse en el tejido graso de los organismos vivos,
introduciéndose en la cadena alimentaria y extendiendo su alcance de forma global.11
Sin embargo, las personas que se hallan potencialmente más expuestos a los
plaguicidas son trabajadores que realizan operaciones agrícolas y de control de
plagas, manufacturación de materias primas y preparación de formulaciones.
Los riesgos agudos para la salud. Debido al manejo y aplicación de pesticidas se
presentan en los trabajadores agrícolas cuando efectúan operaciones poco
frecuentes o con poco conocimiento sobre la toxicidad. Procedimientos de aplicación
25
y sistemas de protección. En los trabajadores industriales existe también el riesgo de
intoxicación por escapes. Los riesgos crónicos, debido a la exposición diaria y que
presentan un carácter si no acumulativo. Prolongado, afectan a los trabajadores que
por su profesión están en contacto cotidiano con los pesticidas.12
El uso inadecuado de plaguicidas, así como el desconocimiento de las Buenas
Practicas Agropecuarias (BPA), por parte de los agricultores, aumentan la
probabilidad de encontrar residuos de plaguicidas en los alimentos, lo cual obliga a
realizar monitoreos permanentes y controles rigurosos a los tratamientos
fitosanitarios. De igual forma se ha generado la necesidad de desarrollar y validar
metodologías analíticas idóneas y confiables con el fin de evaluar la presencia de
estos residuos en los alimentos y valorar así el riesgo asociado al medio ambiente y
a la salud de los consumidores.13
La Comunidad Europea (CE), la Organización de Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación (FAO), la Organización Mundial de la Salud (OMS) han
convertido al monitoreo y control de los plaguicidas en actividades prioritarias para
determinar la calidad y seguridad de los alimentos y han establecido LMR. Desde el
punto de vista analítico, supone un reto alcanzar los niveles de detección esperados
a consecuencia de los cada vez más restrictivos LMR establecidos, además de la
complejidad de las matrices de origen alimentario. Por lo que es imprescindible
desarrollar métodos de análisis a partir de técnicas analíticas avanzadas de gran
sensibilidad y especificidad.12
Por residuo de plaguicida se entiende cualquier sustancia especificada presente en
alimentos, productos agrícolas o alimentos para animales como consecuencia del
uso de un plaguicida. El término también incluye cualquier derivado suyo, como
26
productos de conversión, metabolitos, productos de reacción e impurezas
consideradas de importancia toxicológica (Codex Alimentarius a).
Límite máximo para residuos (LMR) de plaguicida es la concentración máxima de
residuos de un plaguicida en la superficie o la parte interna de productos alimenticios,
expresada en mg/kg, recomendada por la Comisión del Codex Alimentarius, para
que se permita legalmente el uso de estos productos alimenticios en el consumo
humano y para los piensos. Los LMR tienen por objeto lograr que los alimentos
derivados de productos básicos sean toxicológicamente aceptables (Codex
Alimentarius a)
4.5 Determinación de residuos de plaguicidas
Debido al uso intensivo de plaguicidas, a su toxicidad y a su capacidad de
acumulación en el cuerpo humano, es preciso tener un control en los niveles de
concentración de estos compuestos, tanto en matrices biológicas (alimentos, tejidos
animales, tejidos vegetales), como en medioambientales (agua, suelo, aire). Estos
plaguicidas, en concentración inapropiada (exceso), ocasionan un desequilibrio
ambiental. Por lo cual es necesario tener un control de su aplicabilidad.
4.5.1 Tipo de muestra
Suelos
La composición química del suelo es muy variable, está formado por compuestos
inorgánicos y orgánicos, aunque más de la mitad de su volumen está formado por
poros. En el interior de los poros puede haber tanto aire como agua.
27
La materia orgánica presente en el suelo, generalmente unida a arcillas, está
formada por ácidos húmicos y fúlvicos, y es la responsable de los fenómenos de
adsorción de compuestos no iónicos y no polares.11
Los fenómenos más importantes de acumulación de pesticidas se producen, como
es de esperar, en los dos primeros tipos de cultivos, pero si tenemos en cuenta que
existe una gran dispersión debida a procesos naturales de transporte, la
contaminación del suelo con plaguicidas debemos considerarla desde un punto de
vista mucho más general. Conocer la movilidad de un plaguicida, después de su
aplicación en el campo, es un factor muy importante para conocer su peligro
potencial de contaminación de acuíferos o aguas superficiales.
Los factores que condicionan de forma directa el destino de los plaguicidas son, en
orden de prioridad: 11
Tipo de suelo: influye sobre el equilibrio de absorción de los plaguicidas,
debido a que los complejos de arcilla y materia orgánica presentan
propiedades coloidales y de intercambio iónico. La adsorción de plaguicidas
puede ocurrir por atracción dipolar, por puentes de hidrógeno o directamente
por un enlace iónico.
Naturaleza del plaguicida: su estructura química influye en su solubilidad en
agua y en su afinidad por el suelo. La formulación del plaguicida también es
un factor importante a tener en cuenta para evaluar su persistencia en el
suelo, ya que los de tipo granular y emulsificables son más persistentes que
los polvos humectantes.
28
Contenido de humedad: en suelos de tipo arenoso es más probable que un
plaguicida se adsorba cuando los suelos estén secos, que cuando estén
húmedos.
pH: la adsorción es más alta en suelos ácidos, ya que el plaguicida puede
convertirse en un catión cargado positivamente y así incrementar su
adsorción. También se pueden producir fenómenos de degradación del
plaguicida en pH extremos.
Temperatura del suelo: la adsorción de plaguicidas es un proceso exotérmico,
por lo que al incrementar la temperatura, el calor interno puede romper los
enlaces y causar la desorción de moléculas de plaguicidas.
El destino de los plaguicidas en suelos está controlado por fenómenos tanto
fisicoquímicos como biológicos, que se pueden agrupar en:
Aquellos que afectan a su persistencia (degradaciones) y aquellos que afectan a su
movilidad (adsorción, volatilización, absorción por plantas, erosión del viento o
filtración).11
La degradación de los plaguicidas se produce tanto por procesos biológicos a través
de microorganismos, como por procesos químicos de fotólisis, hidrólisis, oxidación y
reducción.
Los métodos de análisis de contaminantes en suelos son muy variados, siendo el
proceso de extracción la etapa más importante a optimizar. Las distintas técnicas de
extracción se basan en diferentes propiedades físicas.
29
4.5.2 Extracción de plaguicidas
El proceso de extracción de plaguicidas en laboratorio cuenta con diversas técnicas
como la Extracción Liquido-Liquido, Extracción Asistida por Ultrasonido, Extracción
Soxhlet, Extracción Asistida por Microondas, Extracción con Fluidos Supercríticos,
Extracción en Solvente Acelerado y Extracción de Membrana.
4.5.2.1 Extracción QuEChERS
En el 2003, se introdujo una nueva metodología de análisis de residuos de
plaguicidas en material vegetal, denominada QhEChERS (en inglés: Quick, Easy,
Cheap, Effective, Rugged, y Safe). Esta metodología proporciona una alta calidad de
resultados de forma rápida, fácil y económica, presentando ventajas sobre
metodologías tradicionales. Este método se basa en dos etapas fundamentales:
extracción de plaguicidas con acetonitrilo en presencia de sulfato de magnesio y
acetato de sodio, y la segunda, correspondiente a la limpieza del extracto. Seguido a
esto, los extractos pueden ser analizados por cromatografía liquida y de gases
acoplada a espectrometría de masas para determinar un rango amplio de residuos
de plaguicidas. En la actualidad se realizan diferentes modificaciones al método de
tal forma que continuamente se obtengan adaptaciones a nuevas matrices o
compuestos de diferentes características. Generalmente, en todos los diferentes
análisis y metodologías es común encontrar variaciones en la medición por efecto de
la matriz (muestra) que se está evaluando. Por tal razón, se ha tratado de mejorar
estos métodos de determinación basados en la incertidumbre del modo de procesar
30
las muestras, alcanzando resultados confiables con el procesamiento. Como se
mencionó anteriormente, las metodologías para la detección y análisis de residuos
de plaguicidas en material vegetal (principalmente frutos) ha sido ampliamente
evaluada. Sin embargo, los métodos para este fin en el suelo aun requieren estudio.
Ahumada et al., (2013) plantearon una metodología para el análisis de plaguicidas en
suelo basados en la técnica de cromatografía liquida ultrarrápida acoplada a
espectrometría de masas.16
El proceso presentado en esta metodología tuvo énfasis en suelos de los
departamentos de Boyacá y Cundinamarca (Colombia) haciéndola relevante para
este estudio. Generalmente, las metodologías usadas para detección de residuos de
moléculas químicas en suelos se han basado en técnicas cromatográficas, aunque
estas han tenido aplicación en tipos de suelos diferentes a los presentes en el país y
los procesos y enfoques técnicos han variado desde cromatografía con detector de
captura de electrones.
En esta nueva metodología de extracción, se introdujo el uso de la SPE dispersiva,
adicionando la fase solida de aminas primaria/secundaria (Primary and Secondary
Amine, PSA) a la mezcla de extracción, en lugar de pasar el extracto a través de un
cartucho o columna empaquetada con esta fase sólida. La extracción con Acetonitrilo
presento ventajas frente al uso de acetona (usado ampliamente tras la incorporación
del método de Luke), siendo una de las más importantes su buena separación de la
fase acuosa con la adición de una sola sal (NaCl) sin necesidad de uso de
disolventes no polares, al contrario que en la acetona. El uso del método de
QuEChERS se ha extendido ampliamente tanto para su aplicación en GC-MS como
31
LC-MS, llegándose a realizar pequeñas variaciones del método para incluir
plaguicidas más problemáticos o muestras de alto contenido en grasa.
Figura 2. Tipos de extracción QuEChERS (Julian de la Mata
31 de Mayo de 2012)
Figura 3. Homogeneizar el producto (triturar), Preparación de sales Quechers. (ilustración propia, Realizado en CIQ.-Quillacollo)
Muestras • Triturar la muestra, en una licuadora
Preparacion
sales
QuEChERS
• Pesar en tubos limpios y secos 0,5g de NaCl anhidro P.a. Y 2g De MgSO4 Anhidro P,a, 99,5%
32
Figura 4. Esquema, Extracción de plaguicidas en muestras de quinua. (Ilustración propia,
Realizado en CIQ.-Quillacollo)
Homogenizar y Pesar en tubos secos y limpios
15g de muestra
Agregar 10ml de acetonitrilo al 0,1% de ac. acetico y 5ml de agua Up.
Agitar por Un minuto en un vortex
Agregar reactivo
QuEChERS,
Agitar por un minuto en un vortex, llevar a ultrasonido por 10min a 30°C.
Llevar a Centrifug
ar
Por 6min a 6000rpm
separar el
liquido
- colocar en viales de inyección.
- Otra parte concentrar y reconstituir.
33
Figura 5. Reconstitución del extracto de plaguicidas en quinua. (Ilustración propia,
Realizado en CIQ.-Quillacollo)
Composición de plaguicidas estandar:
Análisis realizado para verificar el funcionamiento del método de extracción.
Preparación de Mix plaguicidas: Preparar 10ml de solución de 5 plaguicidas
estándares a concentración final de 200ppm. disueltos en etanol 0,1% en
ácido acético glacial.
Pesar 0,002g c/plaguicida
Plaguicida Gramos
Ametrina: 98% (C9H17NS 227,1205
g/mol).
0,0020g
Tebuconazole: 97% (C16H22ClN3O
307,1451 g/mol)
0,0020g
Flufenoxuron: (STD), (C21H11ClF6N203
488,0362g/mol)
0,0020g
Clorpirifos: 98,5% (C9H11Cl3NO3PS
348,9263g/mol)
0,0020g
Isoxaflutole: P (C15H12F3NO4S
359,044 g/mol).
0,0020g
Concentrar 3-5ml de extracto a sequedad a aprox. 40°C
Agregar 250uL de acetonitrilo al 0,1% ac, acetico
Analizar por GC y LC - MS
34
Aforar con etanol 0,1% ac. Acético a un volumen final de 10ml.
Agregar 250uL a 3 muestras de Quinua Blanco, negras y rojas.
Dejar reposar por 2hrs, agitar en vórtex.
Extraer los plaguicidas por el mismo método presentado anteriormente.
Analizarlos en el GC-MS y LC-MS/MS. Detectando así por la recuperación de
los plaguicidas los tiempos de retención de los mismos. (Método patrón
interno)
Inyección de Estándares: Soluciones de mix de plaguicidas ya
preparadas por laboratorios garantizados.
Preparación de mix 3: Variedad concentrado en tolueno.
Accustardard / AE-00012
-Contenido de muestra 1ml. (El contenido en
poca cantidad, por lo cual se debe realizar el
manejo con mucho cuidado
- Dividir en 6 partes, para conservarlos, ya
que estos vienen en ampollas y tienen que
estar cerrados por su toxicidad.
35
Una vez dividido en 6 ampollas,
150uL c/u, sellar con un soplete a
250°C
Figura 6. Tratamiento de estándares de plaguicidas antes de su inyección LC-MS ó GC-
MS (Ilustración propia, Realizado en CIQ.-Quillacollo)
4.5.3 Cromatografía de gases.
La definición oficial de la International Unión of Pure and AppliedChemistry (IUPAC)
dice: la cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes
serán separados y distribuidos entre dos fases una de las cuales es estacionaria
(fase estacionaria) mientras que la otra (la fase móvil) moviéndose en una dirección
definida.13
La cromatografía de gases se ha convertido en la técnica analítica más usada en el
mundo para la separación y análisis compuestos volátiles. Esta técnica tiene la
capacidad de determinar la estructura química y cuantificar (cantidad del compuesto
presente) los componentes de una o varias muestras, determinan la cinética y
mecanismo de reacción, a su vez permite la solución de problemas en otros campos
como en la farmacéutica para el control de calidad de nuevos productos y el
monitoreo de metabolitos en sistemas biológicos, la petroquímica para determinar los
componentes en los productos del petróleo, en la industria alimenticia para la
36
determinación de antioxidantes y preservantes en alimentos; además es
ampliamente usada para la detección de plaguicidas y sus residuos en diversas
matrices.14
En la cromatografía gaseosa la fase móvil es un gas que fluye a través de una
columna que contiene a la fase fija. Esta fase fija puede ser un sólido poroso
(cromatografía gas-sólido o CGS), o bien una película líquida delgada que recubre un
sólido (en partículas) o las paredes de la columna (cromatografía gas-líquido o CGL).
El cilindro de gas contiene un gas transportador como hidrógeno, helio o nitrógeno,
que es continuamente arrastrado a través de la columna cromatográfica a una
temperatura y flujo determinados. Se inyecta una pequeña muestra para análisis,
usualmente con un micro jeringa, por el puerto de la muestra donde es evaporada
instantáneamente para pasar sus componentes al estado gaseoso. La corriente del
gas transportador que fluye constantemente transporta los constituyentes gaseosos a
través de la columna cromatográfica. Los gases viajan a diferentes velocidades, de
modo que emergen de la columna a diferentes momentos. Su presencia en el gas
transportador que sale es detectada por medios físicos o químicos, y la respuesta del
detector pasa al dispositivo de registro, quizá después de una integración
electrónica.14
4.5.3.1 Cromatografía de gases acoplada a espectrometría de
masas
El acoplamiento entre cromatografía de gases y espectrometría de masas,
introducido por primera vez por Golhke en 1959, combina la cromatografía de gases
que produce la separación de muestras complejas y la espectrometría de masas, que
37
proporciona información tanto cualitativa como cuantitativa de cada analito, esté
separado o no de otros componentes de la matriz de la muestra. De hecho la
cromatografía de gases acoplada a la espectrometría de masas es la técnica más
usada hoy en día para la determinación de compuestos volátiles en muestras
ambientales.
La conectividad entre éstas técnicas se consigue fácilmente gracias a que ambas
trabajan en fase gaseosa y requieren una cantidad muy pequeña de muestra para
realizar el análisis. La interfase debe transferir cuantitativamente todo el analito y
reducir el flujo de gas portador para obtener un vacío apropiado para que pueda
operar el espectrómetro de masas. El único obstáculo que presenta este
acoplamiento directo es la diferencia de presiones entre: atmosférica a la salida de la
columna y un alto vacío a la entrada del espectrómetro de masas, pero se solventa
con el empleo de columnas capilares que al requerir flujos de gas portador de solo 1-
2 mL/min, son tolerados perfectamente por el espectrómetro de masas. El gas
portador a emplear debe ser fácilmente eliminable de la fuente iónica y no debe
reaccionar con la muestra ni interferir en su espectro, siendo Helio el más
frecuentemente empleado.
4.5.4 Espectrometría de Masas:
Es una poderosa técnica micro analítica usada para identificar compuestos
desconocidos, para cuantificar compuestos conocidos, y para elucidar la estructura y
propiedades químicas de moléculas. La detección de compuestos puede ser llevada
a cabo con cantidades realmente pequeñas (algunos pmoles) de muestra y obtener
información característica como el peso y algunas veces la estructura del analito.
38
En todos los casos, alguna forma de energía es transferida a las moléculas a analizar
para afectar la ionización.
En la técnica clásica de impacto electrónico (electron ionization EI), algunas de las
moléculas ionizadas del analito “explotan” en una variedad de fragmentos ionizados,
el patrón de fragmentación resultante así como los iones residuales constituyen el
espectro de masas. En principio, el espectro de masas de cada compuesto es único
y puede ser usado como se “huella química” para caracterizar el analito.
El proceso de análisis por espectrometría de masas comienza en llevar el compuesto
a analizar a fase gaseosa, la muestra debe tener una presión de vapor de que 10-2
mmHg, debido a que las moléculas deben migrar por difusión desde el sistema de
entrada hacia la cámara de ionización. Las muestras pueden ser introducidas al
espectrómetro de masas usando una sonda directa o por entrada en lote (batch) para
sólidos puros o líquidos volátiles. Analitos purificados por diferentes técnicas de
separación (cromatografía de gases, cromatografía de líquidos, electroforesis capilar,
etc.) pueden entrar al espectrómetro de masas tan pronto como vayan saliendo.
Ya que las moléculas neutras difunden en forma aleatoria por la fuente de ionización,
solo una porción es ionizada.
El proceso de ionización más común en análisis en fase gaseosa es el de ionización
electrónica (EI), en el cual se transfiere energía a la molécula neutra en estado de
vapor, dándole suficiente energía para expulsar uno de sus electrones y de ese
modo tener una carga residual positiva. Este proceso produce un ion con carga
positiva y un electrón suelto. La molécula ionizada puede tener energía excesiva que
puede ser disipada a través de la fragmentación de ciertos enlaces químicos. El
rompimiento de varios enlaces químicos permite la producción de fragmentos de ion
39
cuya masa es igual a la suma de las masas atómicas de un grupo de átomos que
retienen la carga positiva durante el proceso de fragmentación.
Para compuestos no volátiles, iones de la molécula intacta son producidos al pasar la
solución por un campo eléctrico (electrospray ionization) o por bombardeo de
partículas (fast atom bombardment) o por interacción con especies fotoexcitadas
(matrix-assisted laser desorption).
Después de producir los iones, el siguiente paso es su análisis en el analizador de
iones de acuerdo a su relación masa/carga (m/z). Los iones tienen una carga
eléctrica que les permite ser controlados por campos eléctricos; son separados por
su valor m/z en el analizador de masas. Existen diferentes tipos de analizadores de
masas: magnéticos, de cuadrupolo, trampa de iones cuadrupolo, trampa de iones
magnética, o tiempo de vuelo (time-of-flight). Los iones son analizados de acuerdo a
su abundancia a lo largo de la escala m/z. Durante el proceso de adquisición de
datos provenientes del detector, los datos pueden ser organizados en forma tabular o
en formato de gráfica de barras para dar finalmente el espectro de masas de la
muestra analizada.15
4.5.4.1 Impacto Electrónico (Electron Impact EI)
El Impacto Electrónico (Electron Impact EI) o comúnmente llamado Ionización
Electrónica, es un método clásico de generación de iones en espectrometría de
masas utilizado aún en muchas aplicaciones. El analito es introducido dentro de la
fuente de ionización que esta al vacío (<10-6 mbar) y subsecuentemente ionizado
por colisiones con un flujo de electrones (a 70 eV).
M + e- M+. + 2 e-
40
Los electrones para este proceso son generados por emisión térmica de un filamento
caliente. El filamento esta típicamente hecho de tungsteno o de renio. Los electrones
son subsecuentemente acelerados al aplicar un potencial entre el filamento y la
muestra. El rayo de electrones cruza la fuente de iones, afectando las moléculas
neutras que provienen de la muestra. La corriente típica del filamento es de 1x10 -4
Amperios.
La muestra es introducida por medio de una sonda directa (direct probe) operada de
20 a 500°C o por medio de un cromatógrafo de gases. Las muestras deben ser de
polaridad baja o media y con cierta estabilidad térmica, además de que deben ser
evaporadas antes de su ionización. El proceso de EI causa mucha fragmentación de
las moléculas lo cual puede tener ventajas en la deducción de su estructura. El
mecanismo de formación de iones para la especie AB es el siguiente:15
1. AB + e-* A+ + B- + e-
2. AB + e-* A+ + B° + 2e-
3. AB + e-* [AB+°*] + 2e- seguido de [AB+°*] AB+°
4. AB + e-* [AB2+*]" + 3e- seguido de [AB2+*]" A+ + B+ - (muy baja abundancia)
5. AH + e-* AH* + e- seguido de AH* + AH [AH+H]+ + A-
Dónde:
* = Especies de alta energía.
° = Radicales.
" = Intermediarios de vida corta.
En 1 y 2 se indican las especias de mayor abundancia las cuales sufren de
fragmentación instantánea.
En 3 indica especias de abundancia media.
41
En 4 indica especies de abundancia muy baja.
En 5 son especies que pueden formarse a altas presiones
4.5.4.2 Ionización por Electrospray (Electrospray Ionization ESI)
La Ionización por Electrospray (ESI) es uno de los métodos de ionización más
recientemente desarrollados en espectrometría de masas. El diseño y operación de
fuentes de ionización por electrospray usadas comúnmente en los espectrómetros de
masas están basados en diseños descritos por Fenn y colaboradores en 1985. Este
método es llevado a cabo a presión atmosférica a diferencia de otros métodos, por lo
que se le conoce también como un método de ionización a temperatura ambiente
(atmospheric pressure ionization API). ESI es ampliamente utilizado en aplicaciones
de ciencias bioquímicas y biomédicas debido a su capacidad de analizar moléculas
altamente polares tales como péptidos, oligonucleótidos y oligosacáridos.
En el proceso general de electrospray, que ocurre en la punta del emisor (capilar o
aguja), una solución acuosa ácida o básica (dependiendo de la muestra) diluida del
analito (10-4-10-5 molar) es rociada desde la punta del emisor en el cual se aplica un
potencial de 3-4 kV, la solución debe proveer conductividad eléctrica que puede ser
obtenida por el uso de analitos iónicos o aditivos iónicos tales como buffers o por
algún grado de disociación electrolítica del solvente. El líquido comienza a salir de la
aguja, incrementa su carga y asume una forma cónica, llamada cono de Taylor, en
honor a G.I. Taylor quien describió este fenómeno. El líquido asume esta forma
cuando incrementa su carga ya que una forma cilíndrica puede retener más carga
que una esfera. En la punta del cono, el líquido cambia de forma a una línea fina, que
se vuelve inestable ya que es forzado a retener más y más carga, y finalmente llega
a un punto crítico donde no puede soportar más carga eléctrica y la solución
42
entonces se dispersa en forma de niebla de pequeñas gotas (de menos de 10 mm de
diámetro) altamente cargadas que vuelan buscando una superficie de carga opuesta.
Debido a que las gotas están altamente cargadas con la misma carga eléctrica se
repelen fuertemente, las gotas vuelan y se dispersan cubriendo un área cada vez
mayor y se van reduciendo de tamaño ya que las moléculas de solvente se evaporan
en su superficie, y la distancia entre las moléculas cargadas disminuye
dramáticamente. Si la gota no encuentra donde disipar su carga, las cargas
eléctricas llegan a un estado crítico y la gota explota violentamente. Este proceso fue
originalmente observado por el físico John Zelany en 1914.
Aún no existe una explicación 100% aceptada de lo que le sucede a las gotas, pero
algunas de las teorías son:
1. Modelo de Residuo Cargado (charged residue model) de Dole. Las gotas sufren
repentinamente de explosiones coulombicas produciendo gotas más pequeñas y
más pequeñas que finalmente contendrán solo una molécula cargada y quizá
algunas moléculas de solvente.
2. Modelo de Evaporación Iónica (ion evaporation model) de Iribarne y Thomson.
Ocurre la expulsión de moléculas cargadas para reducir la densidad de carga de la
superficie.
3. La gota original sobrevive después de haber expulsado algun micro gotas
cargadas.
De cualquier forma, el proceso termina con moléculas cargadas que pueden todavía
llevar moléculas de solvente. El proceso de evaporación y rompimiento de gotas se
repite hasta que el tamaño y carga de las gotas desorba moléculas protonadas
dentro de la fase gaseosa, donde pueden ser dirigidas en el espectrómetro de masas
CAPITULO 4
43
por medio de campos eléctricos apropiados. El proceso de evaporación puede ser
suplementado con un flujo de gas (típicamente nitrógeno) y calor.15
Una característica de ESI es que debido a las condiciones ácidas usadas para
producir las gotas cargadas positivamente se tienden a protonar todos los sitios
básicos en las moléculas de analito. Una segunda característica de ESI es la
eficiencia del proceso de ionización y, como resultado, la sensibilidad de los
experimentos basados en esta forma de ionización, la eficiencia en la protonación de
estos sitios básicos en ambientes ácidos parece contribuir a la sensibilidad. Una
tercera característica es su compatibilidad con los solventes de HPLC de fase
reversa (reverse-phase high-performance liquid chromatography), ya que las mezclas
agua/solvente tienen excelentes propiedades compatibles con ESI.15
La señal observada en el proceso ESI es proporcional a la concentración del analito
en la solución que está siendo rociada pero no a su velocidad de flujo. Esto es
debido a que un incremento en la velocidad de flujo simplemente provoca tener que
eliminar un mayor porcentaje de solvente, debido a que en muchas ocasiones se
tienen muestras biológicas en un volumen pequeño y en poca cantidad, es preferible
poder rociar un volumen extremadamente pequeño, por lo que a partir de ESI que
maneja flujos de 5-1000ml/min se han derivado el micro ESI que maneja una
velocidad de flujo de 0.5-5ml/min y el nano ESI 0.02-0.5ml/min.
En dirección contraria, se han diseñado ESI asistidos neumáticamente, llamados Ion
Spray (ISP) donde una corriente de gas inerte es aplicada en conjunto con un alto
voltaje para ayudar al proceso de rociado de volúmenes grandes.15
4.5.5 Cromatografía Líquida (LC)
44
La cromatografía liquida se define como una técnica separativa basada en la afinidad
que los componentes tienen entre dos fases inmiscibles: una fase móvil liquida que
fluye sobre otra estacionaria solida empaquetada en una columna. La fase móvil se
compone generalmente de una mezcla de disolventes con distinta fuerza eulotropica.
La separación es una consecuencia de la diferencia de coeficientes de distribución
entre los componentes de una muestra, que produce sucesivas etapas de adsorción
y desorción de los mismos a través de la fase estacionaria.
4.5.5.1 Cromatografía líquida en fase reversa
La clasificación de las diferentes cromatografías liquida se centra en las variaciones
de las composiciones químicas de los tipos de relleno de la fase estacionaria. Cada
tipo de material de relleno tiene unas características fisicoquímicas que producen
diferentes mecanismos de separación. Existe una gran diversidad de tipos de LC,
pero en nuestro caso nos centraremos en la LC en fase reversa. El uso de LC en
fase reversa se ajusta adecuadamente al análisis de analitos polares e incluso
iónicos, si se hace uso de la formación de pares iónicos.
El tipo de material apolar con que se rellenan las columnas de LC fase reversa suele
ser silica químicamente modificada (cadenas de C8, C18), aunque también se hace
uso de otros materiales como copolimeros de estireno-divinilbenceno (XAD, PRP) o
partículas de silice-carbon (X-Terra). Como fase móvil se utilizan disolventes con
cierta polaridad, generalmente combinaciones de agua con mezclas de otros
disolventes orgánicos como metanol o Acetonitrilo. El porcentaje y tipo de
modificador orgánico en la fase móvil es el factor más determinante en la retención
de los analitos polares pero no iónicos. Las interacciones entre el analito y el
45
solvente son las que determinan la especificidad de la LC en fase reversa, ya que las
interacciones del analito con la fase estacionaria son relativamente débiles,
interacciones de Van der Waals no específicas. La retención disminuye en función
de la polaridad del analito.
Debido a la alta volatilidad de los disolventes utilizados como fase móvil y la
idoneidad de esta cromatografía para analitos polares, la LC en fase reversa se
convierte en el tipo de cromatografía más ideal para el acoplamiento con la
espectrometría de masas. Cabe destacar que se ha convertido en una práctica
habitual, la adición de aditivos en la fase móvil como modificadores con dos
finalidades: la más convencional es mejorar la forma de pico en la cromatografía de
analitos ácidos o básicos; por otro lado, puede favorecer la ionización por
protonación [M+H]+ o desprotonación [M-H]- del compuesto de interés. A este
respecto, es muy importante hacer uso de tampones de sales volátiles, tales como
acetatos, ya que en caso contrario pueden precipitar en la interfase tras la
evaporación del disolvente afectando seriamente al sistema de LC-MS. Por otro lado,
también se ha estudiado el uso de aditivos de amonio y de metales monovalentes
para generar aductos de [M+NH4]+ o [M+Li]+, con el objetivo de minimizar la
formación de aductos de sodio.
4.5.5.2 Cromatografía líquida de compuestos iónicos
Uno de los problemas que se plantea en LC en el análisis de plaguicidas es la
obtención de una aproximación adecuada a plaguicidas de carácter iónico, ya que su
retención es muy poco significativa en rellenos de tipo fase reversa. En general, el
uso de columnas de intercambio iónico, con empaquetamientos de silica modificada
o copolimeros de estireno-divinilbenceno con grupos funcionales de carácter iónico
46
diversos (n-propilamina, dietilaminopropil, alquil-N+ (CH3)3, ácido carboxilico o ácido
bencensulfonico) ha sido una de las propuestas más comunes y sencillas para el
análisis de analitos iónicos en diferentes tipos de detectores. Sin embargo, en el caso
de la MS resulta problemático debido a la baja volatilidad que suelen presentar los
modificadores añadidos en la fase móvil, ya que son necesarios modificadores con
una alta fuerza iónica basada en compuestos de muy baja volatilidad.
Considerando que la fase reversa es un tipo de LC que presenta una alta
compatibilidad con MS, se han encontrado las siguientes alternativas para aumentar
la retención de los analitos iónicos o ionizables en la fase estacionaria.
La supresión de la ionización para analitos de carácter acido gracias a la adición de
ácidos volátiles (ácido fórmico o ácido acético) que disminuyen el pH de la fase móvil
inhibiendo la protolisis de los analitos. De la misma forma, para analitos básicos con
tendencia a protonarse, es interesante el uso de medios básicos (acetato o
carbonato amónico) que impida su protonación. En el caso de tratarse de analitos
iónicos de difícil supresión, se puede llevar a cabo una cromatografía de pares
iónicos. En este caso se adicionan compuestos que forman iones lipofilicos como
modificadores en la fase móvil, suelen usarse sales de amonio cuaternarias o ácidos
perfluoropropionicos o butiricos de cadenas alquilicas no excesivamente largas para
el análisis de ácidos o bases orgánicas, respectivamente. De esta forma se generan
pares iónicos de carga neutra que se retienen en la fase estacionaria reversa.16
47
GC-MS: Cromatografo de gases
acoplado a espectroscopia de masas
(Equipo Varian Saturn III, método de
ionización impacto electrónico EI)
- Presión 17psi
- He gas carrier 1ml/min
- Inyección 2uL.
LC-MS/MS: Cromatografo Liquido LC-
MS/MS (Equipo, waters micromass
HPLC Alliance 2695, espectrómetro de
masas Quattro micro modalidad de
monitoreo SIR(single ion monitoring) y
MRM8multireaction monitoring)
- Gradiente de plaguicidas (agua-
etanol)
- Flujo 0,5ml/min
- Columna C18 latón fase reversa
- Propulsor de aire, gas nitrógeno
- Gas Argón p=10 psi
Figura 7. Cromatogramas obtenidos en GC y LC – MS del Mix 3 (estándar). (Ilustración
propia, Realizado en CIQ.-Quillacollo)
48
5. Centro De Investigaciones Químicas (C.I.Q. Srl.)
En Bolivia, desde el año 2007 Quillacollo es la sede de la unidad científica muy
avanzada, la misma va llevando a cabo investigación en las distintas áreas de las
ciencias químicas con el objetivo de brindar una solución a los problemas locales:
- Crear nuevas fuentes de desarrollo económico.
- Crear nuevas tecnologías.
- Crear una nueva generación de profesionales con una nueva mentalidad para
formación de nuevas empresas, con un mejor aprovechamiento de los
recursos locales sean estos humanos y/o de la biodiversidad.
El centro también coopera con tesis de grado para postgrado y pregrado en
modernos que el CIQ pone a disposición de los investigadores.
El CIQ ha decidido como su principal objetivo el uso de la tecnología para el
desarrollo del país, basando sus investigaciones en el área de la ciencia aplicada,
cada uno de los proyectos que lleva a cabo tienen como objetivo la creación de
nuevas empresas en el país.
El CIQ, ha logrado un crecimiento que se refleja no solo por las instalaciones,
equipamiento, que constantemente se viene adquiriendo, para brindar un mejor
servicio; sino también por el personal que cuenta y que año a año, se ve
incrementado.
CAPITULO 5
49
5.1 Ubicación Geográfica:
Direccion: Calle Junin s/n Zona Sapenco. Quillacollo - Cochabamba – Bolivia
Tel: 4391763
e-mail: [email protected]
José Marcelo Bascopé Orozco,
Director del Centro de Investigaciones Químicas
5.2 Productos Y Servicios
- Medio ambiente
- Control de calidad de plaguicidas
- Control de Calidad de medicamentos.
- Aflatoxinas
- Microbiología
5.3 Equipamiento
50
El equipo instrumental con el que cuenta la institución permite realizar las técnicas
analíticas más modernas usadas actualmente en las distintas agencias
gubernamentales para el control de calidad e investigación científica.
En esa dirección, el CIQ cuenta con las divisiones de servicios clínicos; química
analítica y productos naturales; industria y transformación de materia; medio
ambiente; tecnología de alimentos; automatización y control de procesos;
fitopatología y zootecnia.
Los principales equipos que posee la institución están compuestos, por un lado, por
cuatro sistemas de HPLC (cromatografía líquida de alta resolución), cuyas
aplicaciones analíticas cubren investigación científica, análisis de principios activos,
control de calidad de drogas, hormonas, pruebas biológicas y productos naturales.
De igual forma, cuenta con dos Cromatógrafos de gases con detectores FID, usado
actualmente en control de hidrocarburos, aceites esenciales, análisis de compuestos
volátiles, investigación científica, residuos de drogas, pruebas antidoping, pruebas de
medicina forense, etc.
También destacan entre sus equipos el Espectrómetro de Absorción Atómica, usado
principalmente para el área de química inorgánica; el Cromatógrafo de gases
acoplado a espectrometría de masas, para la investigación, control de residuos de
pesticidas, control antidoping, monitoreo de drogas, perfiles hormonales, medicina
forense y otros.
51
Asimismo, cuenta con un ICP-OES espectrómetro de emisión óptica de inducción de
plasma acoplado, cuyas aplicaciones van en distintas áreas de la ciencia, control de
calidad de aguas, identificación de metales pesados, toxicología clínica y otras.
El CIQ también tiene un Espectrómetro de fluorescencia de Rayos X, que permite el
análisis de una muestra sin la necesidad de destruirla.
La unidad de espectrometria de masas del CIQ es la más completa del país la misma
cuenta con dos cromatografos de gases acoplados y un HPLC acoplados a
espectrometros de masas para identificacion de sustancias desconocidas.
Finalmente, la planta piloto o también llamada planta de química fina, consta con
equipamiento suficiente para la producción de metabolitos secundarios a partir de
productos naturales.
Imagenes 1. Predio del Centro de Investigaciones Quimicas- Quillacollo
52
53
6. JUSTIFICACIÓN
El uso de los plaguicidas en la agricultura, ocasiona su liberación al medio ambiente,
lo cual implica que se den procesos de descomposición y/o degradación en los
diferentes compartimientos ambientales. Por otro lado, muchos de estos plaguicidas
presentan tiempos de vida media alto, lo cual aumenta la posibilidad de encontrar
residuos de estos compuestos en el aire, el agua, los sedimentos, la vegetación y los
suelos. Este hecho, unido al surgimiento en los últimos años de políticas de
conservación del medio ambiente, ha dado lugar al desarrollo de diversas
metodologías analíticas para la extracción y determinación de residuos de
plaguicidas en diferentes matrices ambientales, entre estas el suelo.
El método clásico para la determinación de estos residuos en suelo, corresponde a la
extracción sólido-líquido con diferentes tipos de solventes; limpieza y posterior
análisis por cromatografía de gases. También se han desarrollado metodologías que
requieren menores cantidades de solventes como es el caso de la extracción con
fluidos supercríticos, extracción en fase sólida (SPE, por sus siglas en inglés) y
extracción asistida con microondas.
En esta oportunidad se aplica un método de extracción en fase solida dispersiva
QuEChERS (Quick, Easy, Cheap, Effective, Rugged, y Safe), este método está
ganando popularidad en todo el mundo como el método a elegir para el análisis de
multi-resíduos de plaguicidas en alimentos y productos agrarios. El método
CAPITULO 6
54
QuEChERS ofrece las ventajas de altas recuperaciones, resultados precisos,
rapidez de tratamiento, poco uso de solvente y material de vidrio y además requiere
poco espacio de laboratorio y pocos reactivos. Y el proceso es robusto y fiable, para
la determinación de compuestos a nivel traza así también poder ser detectable por
Cromatografía liquida con detector selectivo de Masas (LC-MS/MS).
55
7. METODOLOGIA
7.1 Materiales
Tubos de centrifugación de 50 ml
probetas de 10 y 5 ml
Vasos de precipitados de 100,250 ml
Tubos con rosca de 15 y 25 ml (150 unid)
Tamices de 5,10 y 18 mm
Mortero de porcelana mediano
Matraz aforado de 100,250 ml
Micropipetas 45,1000 uL
Pipetas Pasteur
7.2 Reactivos
Acetonitrilo grado HPLC
Sulfato de magnesio anhidro (P.a.)
Cloruro de sodio anhidro (P.a.)
Ácido acético glacial
Ácido fórmico 98%
roQ Extraction Kits- KSO-8909 (Buffered EN 15662 Method)
roQ dSPE Kits- KSO-8916
Agua Up (ultra pura)
Agua destilada
7.3 Equipos
Balanza analítica (0,0001g)
Ultra sonido
CAPITULO 7
56
Centrifugadora
Vórtex (capacidad 4 tubos)
Speed Vac Plus
Campana estractora de aluminio
Cromatografo Liquido LC-MS/MS (Equipo, waters micromass HPLC Alliance
2695, espectrómetro de masas Quattro micro modalidad de monitoreo
SIR(single ion monitoring) y MRM8multireaction monitoring)
7.4 Método De Extracción
Las técnicas actuales de extracción, obligan a la utilización de sistemas como
Soxhlet o extractores acelerados presurizados (ASE), que utilizan altos tiempos de
extracción y disolvente, o bien resultan caros en la adquisición y mantenimiento. En
este caso se ha investigado en adaptar sistemas de extracción mediante
QuEChERS, en suelos contaminados por residuos de plaguicidas, minimizando así
el coste de la determinación y los residuos generados en el laboratorio.
7.4.1 Extracción QuEChERS
El método QuEChERS es un proceso de dos etapas: extracción y clean-up. La etapa
de extracción usa MgSO4 para reducir el contenido de agua en la muestra y NaCl
para la mayoría de las aplicaciones o acetato de sodio anhidro para compuestos
sensibles a pH alcalinos, como Folpet o Captan. Los productos para la etapa de
extracción se suministran en tubos de polipropileno para centrífuga de 50mL para
facilitar la extracción.
57
La etapa de clean-up usa PSA (amina primaria/secundaria) para la eliminación de
ácidos orgánicos y pigmentos polares además de otros productos. Algunos productos
además de PSA, tienen C18 para la eliminación de la mayor parte de los lípidos y
esteroles, o carbón grafitizado para la eliminación de esteroles y pigmentos como la
clorofila. Existe una gran variedad de formatos y caridades de lecho adsorbente para
diferentes tamaños de tubo.
El método QuEChERS para la extracción de plaguicidas en alimentos, se basa en el
trabajo de investigación realizado por el Departamento de Agricultura de Estados
Unidos. Además de usar menos solventes y materiales frente a los métodos
tradicionales de Extracción en Fase Sólida, QuEChERS emplea un método nuevo y
mucho más rápido mediante Extracción en Fase Sólida Dispersiva (dSPE). Este
método ha sido aprobado por la AOAC (Método 2007.01) y en Europa bajo EN-
15662. Estos métodos tienen varias etapas comunes:
PASO 1: Preparación y Extracción de la Muestra.
Se homogeneiza el producto con la cantidad de agua necesaria. Se añade
Acetonitrilo como solvente de extracción. Se añaden sales, ácidos, tampones para
mejorar le eficacia de la extracción y proteger compuestos sensibles. Se pueden
añadir estándares de fortificación y/o patrones internos para comprobar la eficiencia
de la extracción.
PASO 2: Limpieza del extracto.
Una alícuota del extracto se limpia mediante Extracción en Fase Sólida Dispersiva
(dSPE), elemento clave en la técnica QuEChERS. Se preparan unos tubos de
Polipropileno de centrífuga con cantidades precisas de MgSO4 y sorbentes de
58
Extracción en Fase Sólida para eliminar el exceso de agua y contaminantes no
deseados de las muestras extraídas. Tras agitación y centrifugación, los extractos
limpios están listos para ser analizados por GC/MS o LC/MS.
PASO 3: Análisis de las Muestras:
Se puede ajustar el pH de las muestras para proteger plaguicidas sensibles y/o
cambiar el solvente para mejorar el análisis por GC/MS o LC/MS. Se pueden añadir
patrones internos.
7.4.2 Elección del método:
Siendo el factor principal el pH: Al realizar pruebas de recuperación, cultivando un
plaguicida conocido Atrazina.
- Preparar solución de atrazina 100ppm
- Colocar a dos muestras 250uL c/u de solución atrazina preparada.
- Extraer los plaguicidas de las muestras
1. Sin regular el pH: extracción a pH= 3
2. Regulando el pH: Con NaOH a pH= 5-6 (papel pH)
59
Figura 8. Lectura en LC-MS/MS, mostrando la identificación de atrazina en la
extracción a pH regulado entre 5 – 6 (ilustración propia, obtenido en CIQ-Quillacollo)
Con las pruebas realizadas de manera cualitativa se procedió a la extracción de
multi-residuos de plaguicidas utilizando un regulador de pH.
60
8. PARTE EXPERIMENTAL
8.1 TRATAMIENTO DE MUESTRA SUELO
La muestra de suelo proveniente de Palca, Tahuapalca, Huaricana los cuales tienen
historia de aplicación de plaguicidas.
Se secó a temperatura ambiente, se eliminaron ramas, hojas y piedras y se tamizó
por una malla Nº. 5 (5mm) ,10 (2mm) y 18 (0.5mm U.S. Standard Sieve Series).
8.1.1 Muestras de Palca:
Figura 9. Muestras de suelo proveniente de Palca, color negro plomizo, con gran cantidad
de materia orgánica (raíces finas y medianas y grandes) y piedras medianas y grandes de
constitución dura.
CAPITULO 8
61
Tabla V. 8.1.1 Características de las Muestras provenientes de Palca, en la
etapa de tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de
muestra.
Muestra Características
MSP2 Raíces finas, medianas y grandes,
piedras pequeñas, medianas y grandes,
suelo seco amarrillo.
MS2-P2 Rocoso, piedras grandes y pequeños,
suelo seco, color café claro.
MS3-P2 Rocoso, piedras grandes, medianos y
pequeños, con raíces finas, suelo seco,
color amarillo.
MS4-P2 Rocoso, piedras grandes 2cm, > 1cm,
etc. Suelo seco, color amarillo.
MS1-P3 Raíces finas y medianas, piedras de 1,
2, 5 mm de tamaño, con color café-
rojizo.
MS2-P3 Raíces finas y medianas, semillas,
piedras grandes, medianas y pequeñas,
con color amarrillo-rojizo.
MS3-P3 Raíces finas, medianas y grandes, muy
rocosa y dura, piedras de 1, 1.5 cmm y
de 2mm en cantidad, con color negro
plomizo.
MS4-P3 Raíces finas grandes, tallos pequeños,
hojas pequeñas, con piedras grandes y
pequeñas, suelo arenoso. Color
amarilla.
MS-P1 Presencia de piedras pequeñas de
<1cm y 3mm, suelo amarilla.
MS2-P1 Raíces finas, medianas y grandes,
62
piedras >1mm, 5mm, 1cm. Color café
amarillezco
MS3-P1 Raíces pequeñas y finas, hojas,
constitución dura de color café claro.
MS4-P1 Raíces pequeñas, finas, hojas
pequeñas, piedras grandes 2cm,
medianas 5-6mm, pequeñas, seco,
color café.
8.1.2 Muestras de Tahuapalca:
Figura 10. Muestras de suelo provenientes de Tahuapalca, suelo café-negruzco, con gran
cantidad de materia orgánica (raíces finas y medianas) y piedras medianos de constitución
dura.
63
Tabla VI. 8.1.2 Características de las Muestras provenientes de Tahuapalca, en
la etapa de tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de
muestra.
Muestra Características
MSTP3-1 Raíces fina y medianas en gran
cantidad, piedras grandes y pequeñas,
suelo húmedo y dura, de color café-
negruzco.
MSTP3-2 Raíces finas en gran cantidad y
gruesas, piedras > 0.5, 1.0, 1.5 cm, de
color negro plomizo.
MSTP3-3 Raíces pequeñas, semillas, hojas poca
cantidad, húmeda, de constitución dura,
color rojizo
MSTP3-4 Raíces finas, y gruesos en gran
cantidad, piedras > 0.5, 1.0cm,
concreciones (vitrificados), suelo seco y
constitución dura, color negro.
MSTP5-1 Raíces finas, gruesas, en mucha
cantidad, ramas medianas y grandes,
piedras grandes de > 0.5, 1.0, 2.0 cm,
de constitución semidura, color rojizo.
MSTP5-2 Raíces medianas, pequeñas, piedras >
0.5, 1.0, 1.5 cm, concreciones de
cemento y vitrificados, de constitución
semidura, color rojizo.
MSTP5-3 Raíces finas y gruesas, tallos,
concreciones, piedras de cemento,
piedras grandes > 0.5, 1.0, 2 cm, suelo
seco, semidura, color rojizo.
64
MSTP5-4 Raíces fina en poca cantidad, piedras
> 0.5, 1.0cm, concreciones, color rojizo,
suave.
MSTP6-1 Raíces finas, medianas en poca
cantidad, piedras medianas y pequeñas
en poca cantidad, suelo húmedo de
constitución dura, color rojizo.
MSTP6-2 Raíces finas y piedras pequeñas en
poca cantidad, de constitución dura,
color café-rojizo.
MSTP6-3 Raíces fina en poca cantidad, piedras >
2mm, seca color rojizo.
MSTP6-4 Raíces finas en poca cantidad, piedras
medianas, de constitución dura, color
rojizo.
8.1.3 Muestras de Huaricana:
Figura 11. Muestras de suelo provenientes de Huaricana, suelo suave, color plomizo-
amarillento, con gran cantidad de materia orgánica (Raíces finas pequeñas, medianas,
hojas, carbón) y piedras medianos y pequeños.
65
Tabla VII. 8.1.3 Características de las Muestras provenientes de Huaricana, en
la etapa de tratamiento (separación de materia orgánica, piedras, etc.) de
muestra.
Muestra Características
MSHP1-1 Raíces delgadas y finas en poca
cantidad, tallos pequeños, piedras
pequeñas y 1.0cm, 0.5 cm, suelo seco
suave, de color plomizo-amarillento.
MSHP1-2 Raíces finas, tallos pequeños, piedras
pequeñas y 1.0cm, 0.5 cm, de
constitución dura, de color plomizo-
amarillento.
MSHP1-3 Raíces finas, tallos delgados, piedras
pequeñas y medianas en poca
cantidad, suelo seco, suave, de color
plomizo-amarillento.
MSHP1-4 Raíces finas, tallos medianos, piedras
pequeñas > 0,2mm, 1.0cm en variedad,
suelo de constitución semidura, de
color plomizo-amarillento.
MSHP2-1 Raíces finas, pocas ramas, piedras en
poca cantidad, color plomizo-
amarillento.
MSHP2-2 Raíces finas en poca cantidad, ramas
delgados, piedras > 0.2, 0.5, 1.0cm,
suelo suave, color plomizo-amarillento.
MSHP2-3 Raíces finas, tallos pequeños en poca
cantidad, piedras medianas en poca
cantidad, pequeñas en mucha cantidad,
66
suelo de constitución dura, color
plomizo-amarillento.
MSHP2-4 Raíces finas, pequeñas y largos,
piedras > 0.5, 1.0 y 2.0cm, Suelo de
constitución dura y fina, color plomizo-
amarillento.
MSHP3-1 Raíces finas y medianas, tallos
pequeños, piedras > 1.5 y 0.5cm, 2mm,
suelo suave, color plomizo-amarillento.
MSHP3-2 Raíces finas, ramas finas pequeñas,
piedras > 5cm, 2mm, suelo suave, color
plomizo-amarillento.
MSHP3-3 Raíces finas, ramas pequeñas, carbón ,
piedras > 0.5, 0.2cm, y más pequeños,
suelo suave, color plomizo-amarillento.
MSHP3-4 Raíces finas pequeñas, medianas,
hojas, en gran cantidad. Con presencia
de carbón, tallos pequeños, piedras >
1.0, 0.5cm y 2mm, suelo suave, color
plomizo-amarillento.
8.2 EXTRACCION DE RESIDUOS DE PLAGUICIDAS (método EN 15662
QuEChERS)
El método EN 15662 tamponada, utiliza una combinación de cuatro sales para
proporcionar la separación y el almacenamiento en búfer de la muestra.
Este procedimiento Buffered estabiliza el pH de la muestra y ayuda a minimizar la
degradación de residuos de plaguicidas de pH sensible (por ejemplo, pimetrozina y
setoxidim).
67
8.2.1 Preparación y extracción de la muestra:
Se Homogenizó la muestra, realizando un cuarteo y agitación de la porción
seleccionada por 5 min.
Se pesó 15 gramos del homogenizado en un tubo de centrifuga limpio de
50ml.
Se Añadió 10 ml de Acetonitrilo y 5ml de agua Up.
Con ayuda de un vortex, se agitó enérgicamente por un minuto.
Se agregó la sal QuEChERS (KSO-8909 Buffered EN 15662 Método),
pH=4,34
Con ayuda de un vortex, se agitó enérgicamente por un minuto..
68
Se llevó a ultrasonido por 10min a 30 °C.
Se Centrifugó durante 5 minutos a 6000 rpm, asegurándose de que el
material sólido esté en el fondo del tubo. Seguidamente se separó el
extracto (líquido).
Figura 12. (8.2.1) Proceso de extracción de plaguicidas en suelos
8.2.2 Limpieza de la Muestra
69
Reconstitución del analito.
Se Concentró 3ml del extracto hasta sequedad, a temperatura media del
SpeedVac Plus. (aprox. 40°C)
Se reconstruyó el concentrado, añadiéndole 1ml de solución de Acetonitrilo al
1% ac. Fórmico.
70
Agitar hasta disolver la muestra reconstituido.
La muestra reconstituido se Trasvasó al tubo de Extracción en Fase Sólida
Dispersiva (dSPE), seguidamente se agitó vigorosamente por 1min.
Se Centrifugó por 1min (con centrifugadora de rotación ascendente)
El sobrenadante se Transfirió a un vial para inyector y analizar por LC.
71
Figura 13. (8.2.2) Proceso de Limpieza del extracto.
8.2.3 Análisis de las Muestras:
Se realizó el ajuste de pH agregando HCOOH en el proceso de reconstitución, para
la determinación de residuos de plaguicidas identificados por Cromatografía Liquida
LC-MS/MS (Equipo, waters micromass HPLC Alliance 2695, espectrómetro de
masas Quattro micro modalidad de monitoreo SIR (single ion monitoring) y
MRM8multireaction monitoring). Con detector de espectrómetro de masas- ESI
(ionización por electrospray)
- Inyectando 10µL de extracto reconstituido.
- Gradiente de plaguicidas (agua-etanol)
- Flujo 0,5ml/min
- Columna C18 latón fase reversa
- Propulsor de aire, gas nitrógeno
Gas Argón p=10 psi
Figura 14. Equipo utilizado, LC-MS/MS (CIQ-Quillacollo)
72
9. RESULTADOS Y DISCUSION
9.1 Análisis de muestras LC-MS/MS
Se procesaron 36 muestras de suelo provenientes de las comunidades de Palca,
Tahuapalca y Huaricana de la ciudad de La Paz, el método QuEChERS (EN 15662)
fue modificado para la extracción de residuos de plaguicidas todos los procesos se
realizaron por triplicado. La presencia o ausencia de 101 estándares de (Ver Anexos
Tablas XI 9.1) fue determinada por Cromatografía Líquida de Alta precisión con
detector de Espectrometría de Masas LC-MS/MS ESI. Los resultados muestran la
presencia de 10 plaguicidas, estos se identifican en la Tabla VIII.9.2
9.2 Resultados LC-MS/MS
Tabla VIII. 9.2 Resultados identificación de multi-residuos de plaguicidas por
LC-MS/MS
N° Codigo Parametro Resultado
Límite de detección(mg/kg)
Límite máximo de residuo(mg/kg)
1 MS-P1 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
1 MS4-P1 Ametrine Cuantificación 0,001 0,05
1 MS4-P2 Chlorpirifos Cuantificación 0,001 0,05
2 Cypermetrine Cuantificación 0,003 0,1
1 MS2-P3 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
2 Cyproconazole Cuantificación 0,003 0,1
1 MS3-P3 Imidacloprid Cuantificación 0,001 0,05
2 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
1 MS4-P3 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
2 Azoxistrobin Cuantificación 0,003 0,05
1 MSTP3-1 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
CAPITULO 9
73
1 MSTP6-4 Chlorpirifos Cuantificación 0,001 0,05
1 MSHP1-1 Carbetamide Rango de LD 0,001 0,1
1 MSHP2-1 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
1 MSHP2-2 Carbendazim Cuantificación 0,001 0,05
2 Dicamba Cuantificación 0,001 0,1
1 MSHP3-1 Carbetamide Cuantificación 0,001 0,1
2 Emamectin benzoato Cuantificación 0,003 0,01
9.3 Discusión
La extracción de los plaguicidas está basada en el método QuEChERS, establecido
a nivel mundial por su alto rendimiento, bajo costo y fácil ejecución, es más utilizado
en muestras orgánicas (frutas y vegetales). Para la presente investigación, no se
encuentran muchas referencias respecto al análisis en muestras de suelo con este
método, por lo tanto se realizaron pruebas para la determinación de las condiciones
apropiadas de extracción, principalmente el factor pH, siendo este importante para su
correcta aplicación, el método fue adecuado y estandarizado a las condiciones de
trabajo y el tipo de muestra para este análisis.
Uno de los parámetros más importantes para la extracción de residuos de
plaguicidas en suelos, es el pH, ya que este estabiliza el carácter ácido y la
composición inorgánica que presenta la muestra. Después de un análisis de este
parámetro y otros, se determinó utilizar el método (EN 15662 Method) el cual hace
uso de una solución tampón regulando a pH de extracción a 4,7. Los plaguicidas
extraídos fueron reconstituidos para tener un extracto más concentrado y regulando
en pH con ácido fórmico (Acetonitrilo al 1% HCOOH). Además el pH ácido garantiza
una ionización eficiente en la técnica ESI-MS (ionización por electrospray), y se
74
pueda identificar el analito a nivel traza es decir en concentraciones de partes por
millón (ppm).
Diez plaguicidas fueron detectados las carcateristicas estructurales y aplicaciones
están se encuentran detalladas en: (ver tabla IX).
Tabla IX. 9.3 Estructuras de plaguicidas identificados en muestras de suelos y
sus características.
CARBENDAZIM
C9H9N3O2
191.187 g/mol
8 mg/L (solubilidad en
agua)
Fungicida, poco persistente.
En el suelo presenta una
movilidad moderada y
prácticamente no se volatiliza.
En este medio es biodegradado
lentamente bajo condiciones
normales; sin embargo, su
degradación biológica puede
incrementarse en suelos
pretratados. En los cuerpos de
agua tampoco se volatiliza y
muestra una baja afinidad por
los sólidos suspendidos y
sedimentos.
CLORPIRIFOS
(O, O-dietil O-3 ,5,6-
trichloropyridin-2-il
fosforotioato)
C9H11Cl3NO3PS
2 mg/L (25 °C) (Sol. En
agua)
Un insecticida organofosforado. Tiene una baja solubilidad en agua, es bastante volátil y es que no son móviles. Hay un bajo riesgo de lixiviación a las aguas subterráneas basado en sus propiedades químicas. Puede ser moderadamente persistente en sistemas de suelo pero no suele ser persistente en los sistemas de agua. Es altamente tóxico para los mamíferos, se clasifica como una tóxica reproducción, un inhibidor de la acetilcolinesterasa y un neurotóxico. También es un irritante de la piel y los ojos. Es altamente tóxico para aves, peces, invertebrados acuáticos y
75
abejas de la miel y moderadamente tóxico para las plantas acuáticas, albae y lombrices de tierra
AMETRINE
227,12 g/mol
Herbicida de triazina, Es moderadamente soluble en agua, pero mucho más en disolventes orgánicos. Es no volátil. Es persistente moderada en suelos y puede persistir por mucho tiempo en el agua bajo ciertas condiciones. Es moderadamente toxico.
CYPERMETRINA
416.2 g/mol
Piretroide sintético, usado como insecticida. Tiene una baja solubilidad acuosa y no es volátil. Mientras que sus propiedades químicas sugieren que no debería filtrarse a las aguas subterráneas que se ha encontrado contaminando algunas masas de agua subterránea. Es moderadamente persistente es suelos. Es moderadamente tóxico para los mamíferos y su cierta preocupación en cuanto a su potencial de bioacumulación.
IMIDACLOPRID
255,7g/mol
Su solubilidad en agua es de 0.51 g/L a 200 °C.
Esta sustancia se descompone al calentarse y en combustión forma gases tóxicos.
Insecticida, Este plaguicida es persistente en el suelo, con una vida media de 48 a 190 días dependiendo de la presencia de cobertura vegetal y materia orgánica añejada. En suelos con una cobertura densa y alto contenido de materia orgánica, la degradación del Imidacloprid se acelera.
CYPROCONAZOLE
291g/mol
Un fungicida de amplio espectro para cereales y otros cultivos de campo utilizado para el control de Septoria, óxido, moho polvoriento y otras enfermedades, clasificación triazol. Poco persistente en el medio ambiente.
76
CARBETAMIDE
236,27 g/mol
Es pre-y post-emergencia herbicidas carbamato. Es altamente soluble en agua y no es volátil. Es moderadamente tóxico para los mamíferos y tiene un alto potencial de bioacumulación. Es un carcinógeno potencial. Carbetamida tiene una toxicidad moderada a aves, peces, invertebrados acuáticos y las lombrices de tierra. Se muestra una baja toxicidad para las abejas, plantas acuáticas y algas
AZOXYSTROBIN
C
22H
17N
3O
5
403,4 g/mol
Fungicida- pirimidina. En el aire está presente únicamente en la fase de partículas, las cuales son eliminadas de la atmósfera por acción de la gravedad o al precipitarse con la lluvia. En el suelo muestra una movilidad baja. En los cuerpos de agua se espera que se adsorba a los sólidos suspendidos y sedimentos. La hidrólisis y la volatilización desde las superficies del agua o suelo no son destinos ambientales importantes para el compuesto. Su vida media por hidrólisis ha sido estimada en 11 y 110 años a valores de pH de 7 y 8 respectivamente. El Azoxistrobin tiene un potencial bajo de bioconcentración en organismos acuáticos. Poco persistente.
DICAMBA
C8H6Cl2O3
221,04 g/mol
Herbicida- sal del ácido benzoico. Sólido incoloro. Su punto de fusión está entre los 114 y 116°C. Su densidad relativa es de 1.57 a 25°C. Su solubilidad en agua es de 6500 mg/L a 25°C. Su solubilidad (expresada por 100mL de disolvente). Ligeramente persistente en el medio ambiente, Cuando es liberado en la atmósfera se espera encontrarlo en la fase de vapor y de partículas. El vapor es degradado mediante reacciones con radicales hidroxilo, con una vida media estimada de 6 días. Las partículas son removidas por precipitación húmeda y seca. Es moderadamente persistente en suelos, en los
77
cuales presenta una vida media de 4 a 555 días, pero típicamente de 1 a 4 semanas. En condiciones apropiadas para su rápida degradación biológica la vida media es menor a 2 semanas.
EMAMECTIN
BENZOATO
C56H81NO15 (benzoato
de Emamectin B1a) +
C55H79NO15 (benzoato
de Eamectin B1b)
Peso molecular: 1008.24
(benzoato de Emamectin
B1a) y 994.21 (benzoato
de Eamectin B1b
Insecticida y Acaricida-Avermectina, Polvo blanco. Su punto de fusión se encuentra entre los 141 y 146 °C. Su solubilidad en agua es de 0.024 g/L a 25 °C. Su presión de vapor
es igual a 3 X 10-8
mm Hg a 21 °C. Es incompatible con agentes oxidantes fuertes. Su movilidad en el suelo es baja, debido a su tendencia a unirse a las partículas. Su vida media estimada en el ambiente varía de 8 a 15 meses, con un valor de 193 días en suelo. Este compuesto es susceptible a la degradación biológica lenta bajo condiciones anaerobias y a la fotólisis tanto en agua como en suelo. Es estable a la hidrólisis a pH entre 5 y 8, pero se hidroliza lentamente a pH de 9.
La institución que se encarga de Mantener la situación sanitaria de las plagas y
enfermedades exóticas del país y mejorar la situación sanitaria de aquellas plagas y
enfermedades de importancia económica presentes en Bolivia es el SENASAG
(Servicio Nacional de Sanidad Agropecuaria e inocuidad Alimentaria). Donde se
encontró el registro de productos de plaguicidas permitidos en el país.
Donde 9 plaguicidas de los identificados en la investigación, contienen el principio
activo de varios de estos productos aceptados en el país. No así el plaguicida
Carbetamide que fue identificado, y no es legalmente aceptado en el país por el
SENASAG.
78
9.4 Plaguicidas identificados que son permitidos en Bolivia definidos por el SENASAG:
Los plaguicidas son evaluados por los productos que se introducen al país, en los cuales el principio activo son los
plaguicidas.
Tabla X. 9.4 Plaguicidas permitidos en Bolivia definidos por el SENASAG
Nombre Ingrediente Activo Clase Tipo
Cat.
Tox Cultivos Plagas Dosis
AGRODAZIM CARBENDAZIN Plaguicidas Fungicida III Soya
Antracnosis (Colletotrichum truncatum)
500-600 ml/ha Mancha anillada
(Corynespora cassicola)
CALLICARB 500 SC
CARBENDAZIM Plaguicidas Fungicida IV
CARBENXONE
50 SC CARBENDAZIM Plaguicidas Fungicida IV
Trigo (Triticum
aestivum L.)
Roya ( Puccinia
triticina) 0.5 - 1 L/Ha
AMESHIDE AMETRINE Plaguicidas Herbicida III Caña de azúcar (Saccharum officinarum L.)
Chiori (Amaranthus quitensis), Chupurujume
(Parthenium hysterophorus), Sanana (Bidens
segetum), Pata de gallina (Digitaria ciliaris), Rogelia
2.5 - 3.5 kg/ha
79
(Rottboellia
cochinchinensis)
CLORFOS CLORPIRIFOS Plaguicidas Insecticida II Maíz (Zea mays
L.)
Gusano cogollero (Spodoptera frugiperda)
1 l/ha
CLORFOS 48
CE Chlorpyrifos Plaguicidas Insecticida II
Soya(Glycine
màx)
Chinche verde
pequeño(Piezodorus guildinii), Pegador de hojas(Omiodes
indicata)
1-1,2 lt/ha(O. indicata - 0,9-1,2 lt/ha(P. hojas)
COLAX CLORPIRIFOS Plaguicidas Insecticida II
Trigo (Triticum
aestivum L.); Soya (Glycine max)
Spodoptera frugiperda; Gusano cogollero
(Spodoptera frugiperda
0,7 a1,0 l/ha; 1.0 - 1.2 l/ha
ALTO 100 SL CYPROCONAZOLE Plaguicidas Fungicida II Soya (Glycine max L.); Trigo
Oidio (Microsphaera diffusa), Roya
(Phakopsora pachyrhizi); Roya de la hoja (Puccinia
recondita)
300 cc/ha ; 300 - 400 cc/ha
AVATAR AZOXISTROBIN + CYPROCONAZOLE
Plaguicidas Fungicida III Soya (Glycine max L.)
Roya de la soya (Phakopsora pachyrhizi)
0,25 - 0,30 l/ha. Mancha Anillada
(Corynespora cassicola)
AZOBIN 50 DF Azoxystrobin Plaguicidas Fungicida III Soya (Glycine max L.)
Roya de la Soya (Phakopsora
pachyrhizi)
150 - 200 g/ha
AZOXYSTEBON AZOXYSTROBIN Plaguicidas Fungicida IV Soya (Glycine
max)
Roya de la soya (Phakopsora pachyrhizi)
200 cc/ha
DICAMNOR SA
48 DICAMBA Plaguicidas Herbicida III
Barbecho
quimico
Verdolaga camba
(Talinum paniculatum) 125 cc/ha
Chupurujume
80
(Parthenium
hysterophorus)
HERBAMBA DICAMBA Plaguicidas Herbicida II Maíz (Zea mayz
L.)
Chiori (Amaranthus quitensis),
0.15-0.2
Camotillo (Ipomoea hederifolia),
Santa Lucia
(Commelina benghalensis),
Sanana (Bidens pilosa),
BANVEL DICAMBA Plaguicidas Herbicida III
Arroz (Oryza sativa L.); Trigo (Triticum
aestivum L.)
Malva (Sida sp.),
Curichera (Eclipta alba), Chiori (Amaranthus sp.),
Leche leche (Euphorbia sp.), Motojobobo (Physalis
angulata); Quinua (Chenopodium album), Camotillo
(Ipomoea nil), Leche leche (Euphorbia heterophylla), Chiori
(Amaranthus quitensis)
400 - 500 cc/ha; 500 cc/ha
AZOTE EMAMECTIN BENZOATE
Plaguicidas Insecticida III Maiz Gusano Cogollero (Spodoptera
frugiperda)
150-200 g/ha
EMABENZIX EMAMECTIN
BENZOATE Plaguicidas Insecticida III Maíz(Zea mays)
Gusano cogollero(Spodoptera frugiperda)
150-200 g/ha
BENZAR 5 EMAMECTIN
BENZOATE Plaguicidas Insecticida IV Soya
Pegador de hoja
(Omiodis indicata) 150 g/ha
ULTIMATUM EMAMECTIN BENZOATE
Plaguicidas
Acaricida
– Insecticida
III Soya (Glycine max)
Acaro rayado (Tetranychus urticae) 0,25 - 0,30 kg/ha Acaro verde
81
(Mononychellus spp.)
BARGO-IMIDACLOPRID
70 WP
IMIDACLOPRID Plaguicidas Insecticida III Soya Chinche verde pequeño (Piezodorus
guildinii)
80 - 120 g/ha
CIPRID 35 SC IMIDACLOPIRD Plaguicidas Insecticida II Soya Mosca Blanca (Bemesia tabaci)
150 - 250 cc/ha
DOMINE 60 FS IMIDACLOPRID Plaguicidas Insecticida II Maíz (Zea mayz L.)
Gusano cogollero (Spodoptera
frugiperda)
500 - 600 cc/100 kg de semilla
LANCER IMIDACLOPRID Plaguicidas Insecticida II Trigo (Triticum
aestivum L.)
Pulgón del trigo (Schizaphis graminum)
80 - 100 cc/ha
CICIP 25 EC CYPERMETHRIN Plaguicidas Insecticida II
CIPERBOL CYPERMETHRIN Plaguicidas Insecticida II Soya (Glycine max L.)
Gusano Anticarsia (Anticarsia
gemmatalis), Falso medidor (Pseudoplusia
includens), Gusano cogollero (Spodoptera
frugiperda)
100 a 200 cc/ ha
CIPERNOVA 25 CYPERMETHRYN Plaguicidas Insecticida II Maíz (Zea mayz
L.)
Gusano cogollero (Spodoptera frugiperda)
100 - 150 cc/ha
82
Estos plaguicidas son utilizados en el país, por su toxicidad, la seguridad en
laboratorio es un factor muy importante en la investigación, ya que se está realizando
la detección de compuestos tóxicos y altamente contaminantes, siendo hasta
cancerígenos, al no saber que contiene la muestra es un riesgo innecesario
exponerse. (Guantes, barbijo con filtro, lentes, trabajar bajo campana).
Cabe puntualizar que una vez identificados estos compuestos, el siguiente paso es
cuantificarlos, para así definir el grado de contaminación que aporta cada uno de
estos por su toxicidad al medio ambiente. La concentración de los plaguicidas
encontrados debe estar por debajo del límite permisible.
Para la determinación de residuos con fines de registro y el establecimiento de
Límites Máximos de Residuos (LMR), se utilizarán como referencia las Directrices de
la FAO sobre "Ensayos de Residuos con fines de registro y establecimiento de LMR"
o aquellos sugeridos por la Comisión de Codex Alimentarius. En ausencia de éstos
podrán tomarse los métodos proporcionados por el fabricante o formulador.
Para lo cual es importante para el agricultor seguir y/o emplear la Guías sobre
Buenas Prácticas para la Aplicación Terrestre de Plaguicidas, establecidos por la
FAO. Cuando se usa un plaguicida aprobado el propósito es distribuir la dosis
correcta hacia un objetivo definido, con un mínimo de desperdicio debido a la deriva
y usando el equipo de aspersión más apropiado. Los pesticidas solo dan resultados
aceptables en el campo si se distribuyen en forma segura y precisa. A diferencia de
otras operaciones de campo, los resultados de una pobre aspersión pueden no llegar
a ser aparentes por un tiempo, de tal manera que es esencial que aquellos
83
relacionados con la selección y con el uso del plaguicida sean totalmente
conscientes de sus responsabilidades y obligaciones y estén adiestrados en el uso y
aplicación de esos compuestos. Es fundamental que sigan las indicaciones de la
etiqueta del producto, el público debe tener la garantía de lo que tiene que ver con el
manejo y aspersión de plaguicidas por parte de los trabajadores tanto durante como
después de la aspersión así también contar con un equipo personal de protección
(EPP), y realizar el correcto uso y aplicación de los plaguicidas. La aplicación al
mismo tiempo de más de un producto (mezcla en el tanque) siempre y cuando los
tiempos de los respectivos tratamientos coincidan y las formulaciones sean química y
físicamente compatibles. Deberían usarse solamente las mezclas aprobadas. Los
riesgos con la mezcla incluye la reducción en la actividad biológica debido a un
antagonismo de productos, puede verse como quemazón del cultivo que, aunque
parezca transitoria, puede reducir la cosecha al final. La temperatura y calidad del
agua también influyen en la compatibilidad de las mezclas en el tanque.
El tiempo óptimo para rociar está determinado por el cultivo, la plaga, los estados del
crecimiento de las malezas y de las enfermedades. La etiqueta del producto indicará
el tiempo del tratamiento, pero es usualmente al principio de la infestación cuando se
pueden usar las dosis menores.
La temperatura, la humedad relativa, la dirección y la velocidad del viento más la
posibilidad de lluvia pueden, todas, afectar la eficiencia del depósito del rociado.
Debe tenerse cuidado cuando se usan vehículos agrícolas para transportar
plaguicidas, ya que los productos químicos deben estar seguros y aislados y las
84
salpicaduras deben cubrirse con un material absorbente no combustible que pueda
descartarse correctamente. Los recipientes de plaguicidas deben mantenerse
tapados cuando no se usen y deben asegurarse contra una interferencia no
autorizada, particularmente cuando los operarios de aspersión estén trabajando fuera
de las áreas de mezclado y no siempre puedan ver los recipientes de productos
químicos, deben guardarse en bodegas especiales, en ninguna circunstancia deben
almacenarse cerca de productos alimenticios.
85
10. CONCLUSION
El presente estudio permitió verificar la presencia de 10 plaguicidas, presentes en
las muestras de suelos que se nos proporcionó. Entre los plaguicidas identificados
corresponden a los grupos de Carbamatos, piretroides, solo un organofosforados,
organoclorados, avermectin, y derivados de triazinas los cuales fueron utilizados
como insecticidas, fungicidas, herbicidas según su principio activo. (Objetivo 1)
Según datos del SENASAG se puede concluir que estos plaguicidas fueron
aplicados a la producción y cosecha de soya y maíz.
Con los resultados obtenidos podemos resaltar que ninguna de las moléculas
presentes sobre pasan el límite permisible establecido aunque aún no se cuenten
con resultados de cuantificación (en proceso), se pudo llegar a pasar el límite de
detección de los plaguicidas establecidos.
Comprobando también la factibilidad del empleo del método QuEChERS a pH
controlado para la extracción de multi-residuos de plaguicidas. (Objetivo 2)
Culminando el trabajo, es recomendable realizar una curva de recuperación con
patrones estándares cultivados en muestras de suelos, en la extracción de residuos
de plaguicidas para optimizar el proceso de extracción.
CAPITULO 10
86
11. BIBLIOGRAFIA
1 L.G. WADE,JR. Química Orgánica, Quinta edición, Pearson Educación. S.A, Madrid
2004, pag. (216-217)
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Escuder, S.A.(https://www.extertronic.com/shop/es/blog/22_insecticidas-quimicos-y-
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6 RAO V. KOLLURU, Dr.P.H. ROBIN M. PITBLADO, Ph.D, 2000, Manual De
Evaluación y Administración De Riesgos, México, Pág. 7-1 - 7-8
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medición de la exposición, Arch Prev Riesgos Labor 2001;4(2):67-75
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Riesgos Ambientales de plaguicidas en la actividad agrícola; Lima, Oficina General
de Epidemiología, 2001, pág. (13-16).
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cuantificación de pesticidas organoclorados y organofosforados en suelos por
cromatografía de gases con detectores FID y ECD. UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA
DE PEREIRA Facultad De Tecnologías Escuela De Química Pereira, Risaralda 2012.
Pág.(21-26)
CAPITULO 11
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Adsorción y Evolución en el suelo, Instituto de recursos naturales y agrobiología, 1ª
edición en 1984
11 ESTEVE TURRILLAS, FRANCESC ALBERT. Preparación De Muestras Para El
Análisis De Plaguicidas Mediante Microondas Y Fluidos Presurizados. UNIVERSITAT
DE VALENCIA, Servei De Publicacions 2007.
12 GUARDINO XAVIER. Pesticidas: Definición, clasificación, uso y toxicidad.
13 MOLINA MENDOZA, IRMA ALEJANDRA. Metodología para la determinación de
plaguicidas bencimidazoles en vinos, Universidad Nacional de Facultad de Ciencias
Agrarias, 2012.
14 ASENSIO RAMOS, MARÍA DEL CRISTO. Nuevos Procedimientos De Extracción Y
Determinación De Plaguicidas En Muestras Medioambientales. Curso 2011/12
CIENCIAS Y TECNOLOGÍAS/29 I.S.B.N.: 978-84-15910-29-9, Universidad de la
Laguna.
15 PLASCENCIA VILLA, GERMÁN. Espectrometría De Masas. Instituto de
Biotecnología-Universidad Nacional Autónoma De México. Junio de 2003
Cuernavaca, Morelos.
16 GRIMALT BREA, SUSANA. Nuevas aportaciones de LC-MS con analizadores de
triple cuadrupolo y tiempo de vuelo en el análisis de residuos de plaguicidas y
metabolitos en alimentos de origen vegetal. Instituto Universitario de plaguicidas y
aguas 2009.
12. ANEXOS
Tabla XI. 9.1 Corresponde a la lista de moléculas de barrido cromatográfico
habilitado al periodo de análisis, cuyo barrido muestra e indica las moléculas que fueron monitoreadas por el equipo. (Sistema LC-MS/MS)
MUESTRA Thiametoxan Imidacloprid Hexazinone Carbendazin
LD=0,001mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
MS3-P3 Ausencia Presencia Ausencia Presencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
CAPITULO 12
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Presencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Imazapic Clothianidin Picloram Triciclazole
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,005mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Acephate Methomyl Dimethoato Cyanazine
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Cyromazine Kasugamycin Methamidophos Triclorfon
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Carbetamide Nicosulfuron Cymoxanil Imazethapyl
LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Presencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Presencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Carbaryl Sulfetrazone Diuron Fluoroxypir
LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
LD=0,003mg/K
g
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Thiram Ametrine Prometrine Carbofuran
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Presencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Metribuzin Mesotrione Lindane Acetamiprid
LD=0,005mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA
Dimethomorph
2
Azinphos
methyl Delta metrine
Bispiribac
Sodium
LD=0,001mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,005mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Metalaxyl Carboxim Atrazine Isoxaflutole
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA
Flurochloridon
e Hexaconazole Picoxistrobin Coumaphos
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Clorantraniliprole Fensulfothion Demeton Metominostrobin
LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Flumiozaxin Terbutrin Metholachlor 1 Acetochlor
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Lactofen Pyriproxifen Pyridaben
Lambda
cyalotrine
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Alachlor Clomazone
Cyproconazol
e
Pyrazosulfuron
methyl
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Presencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA
Methyl
Parathion Ethoprop Malathion
Dimethomorph
1
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Chlorimuron ethyl Buprofesin Propanil Metoxifenozide
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA
Diafenthurio
n
Emamectin
Benzoato
Mefenpyr-
diethyl
Kresosim-
methyl
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Presencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Tebuconazole Fipronil Ipoconazole Protioconazole
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Iprodione Cyalofop Butyl Diazinon Fenthion
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Parathion Diflubenzuron Indoxacarb Profenopos
LD=0,005mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Abamectina 1
Fenoxaprop-p-
ethyl Tryfluxistrobin Novaluron
LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA
Fluoroxypir
methyl Lufenuron Pendimetalin Fenpyroximate
LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Difeconazole Chlorpirifos Flufenoxuron Cypermethrin
LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,003mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Presencia Ausencia Presencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Presencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Presencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MUESTRA Azoxistrobin Dicamba Thiodicarb Futriafol Bifentrin
LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg LD=0,003mg/Kg LD=0,001mg/Kg
MS-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MS4-P1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MS2-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MS3-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MS4-P2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS1-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS2-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS3-P3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MS4-P3 Presencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
T MSTP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSTP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSTP5-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
P MSTP5-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP5-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
L MSTP5-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSTP6-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSTP6-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSTP6-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP1-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
H MSHP1-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
U MSHP1-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP1-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
R MSHP2-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
I MSHP2-2 Ausencia Presencia Ausencia Ausencia Ausencia
C MSHP2-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP2-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
N MSHP3-1 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
A MSHP3-2 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-3 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
MSHP3-4 Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
CROMATOGRAMAS Obtenidos Por El Equipo LC-MS/MS
![Trans Residuos ADR2015.ppt [Modo de compatibilidad] · 2. Clasificación Clasificación de residuos • Residuos de la prospección, extracción de minas y canteras y tratamientos](https://img.pdfslide.es/doc/110x75/5e3d696debabe4708919b962/trans-residuos-modo-de-compatibilidad-2-clasificacin-clasificacin-de-residuos.jpg)
