Extracto Etanólico de Mucílago de Opuntia Sp

Potenciar el crecimiento microbiano con extractos etanólicos.Melissa Arrambidez Hernández

EXTRACTO ETANÓLICO DE MUCÍLAGO DE Opuntia sp.ANTECEDENTES

Descripción de la planta

Opuntia sp. pertenece a la familia Cactaceae, constituida por unas 1400 especies de

plantas carnosas, con el tallo segmentado en palas que se superponen, la mayoría

presenta espinas (Campos, 2012).

Son plantas arbustivas, rastreras o erectas que pueden alcanzar 3.5 a 5 m de altura.

Tienen un sistema radical muy extenso, ramificado, rico en raíces finas absorbentes y

superficiales en zonas áridas de escasa pluviometría (Sáenz-Berger, 2006).

Los tallos suculentos y articulados o cladodios, que comúnmente se denominan pencas,

son ovoides o alongadas de 60-70 cm de longitud, dependiendo de la disponibilidad de

agua y nutrientes. Se pueden consumir como verdura cuando son tiernos, éstos miden

10-12 cm (Sáenz-Berger, 2006). En las pencas, de color verde opaco, se realiza la

fotosíntesis, pues éstas reemplazan a las hojas con esa función. Se encuentran

protegidas por una cutícula gruesa cubierta de cera que disminuye la pérdida de agua, por

su abundante parénquima. Los hidrocoloides (mucílagos) presentes en este tejido tienen

la capacidad de retener el agua (Zamora, 2011).

La presencia de Opuntia en Nuevo León

La distribución geográfica del género Opuntia en México refleja la abundancia e incidencia

natural en asociaciones, la principal especie en el estado de Nuevo León es O. lindheimeri

con una densidad de hasta 1 000 plantas/ha en General Terán, Salinas, y otros

municipios (Mondragon- González, 2003).

Nopal como fuente de alimento

Desde la llegada del hombre a las zonas desérticas y semi-desérticas de México,

aproximadamente 20 000 años, Opuntia spp. ha sido una fuente significativa de


alimentación, ya que los mexicanos antiguos lo consumían en su forma silvestre antes de

conocer el manejo hortícola. (Mondragon- González, 2003).

Junto con el maíz (Zea mays), el frijol (Phaseolus vulgaris) y el maguey (Agave

americana), fue alimento fundamental, responsable de los asentamientos chichimecas en

el centro y norte del país. También trasciende su utilización como bebida, medicina, tinte,

en prácticas mágico-religiosas y otros usos.

El uso del nopal ‘árbol sagrado’ como bebida, Fray Toribio Motolinía indica “…Estos

indios que digo, por ser la tierra tan estéril que ha tiempo carece de agua, beben zumo de

estas hojas de nocpal…” (Motolinía, 1995). Además, el fruto del nopal, la tuna, también

era utilizada como bebida en forma de nochoctli o pulque de tuna (Anaya, Bautista, 2008).

Otros usos o propiedades

El uso de Opuntia spp. como planta medicinal tiene sus orígenes en las culturas

prehispánicas, y el uso se extiende hasta la actualidad; por ejemplo, el uso de los

cladodios calentados para la reducir el ardor de los riñones. El jugo de los nopales para

combatir fiebres biliosas y malignas, y para sanar úlceras (Pimienta, 1992).

Opuntia spp. es utilizada para prevenir la erosión del suelo y la desertificación, debido a

que tiene una alta adaptabilidad en tierras pobres en nutrientes, cambios ambientales

como el incremento en los niveles del CO2 atmosférico. Además es importante para cubrir

regiones áridas y semiáridas, gracias a que puede soportar condiciones de lluvia escasa o

errática y altas temperaturas (Mondragon- González, 2003).

En áreas marginales para la agricultura tradicional, el nopal tunero se utiliza como

suplemento alimenticio para el ganado. Siendo utilizado como forraje de emergencia en

zonas áridas y semiáridas de México cuando escasean otros tipos de forraje (Pimienta,

1992).

El mucílago de nopal es un polímero compuesto por polisacáridos semejante a las

pectinas, además de sus características reológicas le confieren un potencial como materia

prima para la elaboración de películas plásticas comestibles, pues incrementa su vida útil

sin modificar el sabor ni color del alimento (Aquino et al., 2009).


Extracción de mucílago

Los cladodios excretan una sustancia viscosa llamada mucílago, el cual es uno de los

componentes más importantes debido a que forma parte de la fibra dietética. El mucílago

de Opuntia spp. es un polisacárido fibroso, altamente ramificado, cuyo peso molecular

oscila alrededor de los 13x106 g/mol. Contiene aproximadamente de 35-40% de

arabinosa, 20-25% de galactosa y xilosa cada una, y 7-8% de ramnosa y ácido

galacturónico cada uno (Rodríguez, et al.). La proporción de estos monómeros en la

molécula varía de acuerdo a factores como la variedad, edad, condiciones ambientales y

estructura empleada para la extracción (fruto, cáscara, cladodio) entre otros (Montañez-

Martínez,).

Tiene la propiedad de formar redes moleculares y retener grandes cantidades de agua,

así como de modificar propiedades como viscosidad, elasticidad, textura, retención de

agua, además de que es un buen gelificante, espesante y emulsificante (Rodríguez, et

al.).

El mucílago se presenta en diversas proporciones tanto en los cladodios como en la piel y

pulpa de la fruta. Estudios efectuados por Sáenz y Sepúlveda (2006) indican que el

rendimiento en todos los casos es bajo: 0.5 % en la cáscara y 1.2% en los cladodios

(Montañez-Martínez,).

OBJETIVO

Determinar el efecto potenciador de crecimiento microbiano del extracto de mucílago de Opuntia spp.

EXTRACCIÓN DEL MUCÍLAGO DE Opuntia sp.

Las espinas de los cladodios son eliminadas y lavados con cloro a una

concentración de 200 ppm, se realiza un enjuague con agua destilada. 300

gramos de cladodios son cortados en cubos de aproximadamente 1 cm3, y

licuados hasta obtener una pasta uniforme. A la cual se agrega agua destilada en


proporción 1:1 v/v. La mezcla se somete a calentamiento a 85° C durante 20

minutos y filtrada con tela de manta.

Dicho filtrado se distribuye en tubos Falcon de 50 ml y se centrifuga a 6 000 rpm

durante 18 minutos a 25° C. El precipitado se elimina y el sobrenadante (470 ml)

es diluido 65% v/v con alcohol etílico al 96% para la precipitación del mucílago. La

mezcla se almacena a 4° C por 24 horas. Después de dicho periodo, se recupera

mecánicamente (mediante una espátula) el sobrenadante y se coloca en un vaso

de precipitado para realizar lavados con etanol al 96%. Se realiza el filtrado del

líquido restante mediante bomba de vacío con embudo Büchner y filtro Waltman

#2, el mucílago obtenido se lava con exceso de alcohol etílico al 96% para

eliminar agua y clorofila. El material obtenido es congelado a -14°C durante 12

horas y posteriormente liofilizado a -44°C/ 200x103 por 2 días.

La muestra liofilizada es triturada mediante un mortero, y suspendida en etanol

para obtener una concentración final de 20mg/ml, y puesta en tubos Falcon

cubiertos con aluminio para un periodo de maceración de 5 días. Se centrifuga a

4°, 6000 rpm por 18 minutos y se recupera el sobrenadante, el cual es filtrado

mediante la bomba de vacío. Después el material fue filtrado por membrana de

0.4 micras para eliminar cualquier contaminación, obteniéndose 21 ml de muestra.

Ensayo de inhibición en placa

Se colocan 100 µl de la cepa ajustada en una placa con Agar Müeller Hinton, y se realiza

el extendido mediante un asa de Digralsky esterilizada con alcohol 96% y flameada. Para

realizar el pocillo se esteriliza un tubo de ensaye pequeño y se presiona contra el agar, en

seguida con ayuda de una espátula con punta de flecha estéril se obtiene el agar cortado

y se desecha. Posteriormente se agregan 100 µl del extracto con una concentración de 20

mg/ml. y se incuba 37°C/ 24 hrs.

“Ensayo”

Se realiza el ajuste de la cepa, la cual debe ser obtenida de un cultivo joven, en seguida

se realizan diluciones, transfiriendo 200 µl de la cepa ajustada en tubos de 1.8 NaCl

0.85%, sucesivamente hasta obtener 7 diluciones, de las cuales se plaquean las últimas


4 mediante la técnica del goteo, que consiste en colocar 10 µl en un lugar delimitado en la

placa con agar Müeller Hinton.

En un tubo de ensayo se colocan 1 ml del extracto en una concentración de 4 mg/ml, 980

µl de caldo Müeller Hinton 2X y 20µl de cepa ajustada. Los controles se realizan con 20 µl

de cepa y 1.980 µl de caldo Müeller Hinton y el control del solvente se realiza con 980µl

de caldo Müeller Hinton 2X, 20µl de cepa ajustada y 1 ml del solvente.

La hora del inicio del ensayo se denomina “T=0”, en la cual se plaquean por extensión

con asa Digralsky 100µl de cada uno de los tubos. Después de dos horas (“T=2”) se

realizan diluciones, tomando 200 µl del tubo con extracto y diluyéndolo en 1.8 ml de NaCl

0.85%, se plaquean mediante la técnica de goteo las diluciones -4, -5, -6; de igual modo

se procede con los controles. Realizando dicho procedimiento para T=4, T=6 y T=8,

aumentando una dilución por cada tiempo. Para T= 24 se realiza las mismas diluciones

que T=8.

RESULTADOS

Rendimiento de extracción de mucílago

Por cada 300 gramos de muestra de nopal que se sometieron al tratamiento de

extracción, se recuperaron 1.173 g. de mucílago, de los cuales se obtuvieron 629 mg de

muestra triturada después de la liofilización. Representando un rendimiento del 0.2096%

Ensayo de inhibición en placa

Fig. Efecto del extracto etanólico en concentración 20mg/ml sobre Listeria innocua. No hay inhibición en el crecimiento.

Fig. Efecto del extracto etanólico en concentración 20mg/ml, y el control sobre Listeria innocua. No hay inhibición en el crecimiento.


Ensayo

Tabla 1.T=0 Solvente Extracto Cepa

Núm. de colonias

Incontable Incontable Incontable

Tabla 2.T=2 Dilución Número de colonias

Solvente Extracto CepaT=2’ (repetición) -4 4 3 19

Fig. Efecto del extracto etanólico en concentración 20mg/ml sobre E. coli. No hay inhibición en el crecimiento.

Fig. Efecto del extracto etanólico en concentración 20mg/ml , y el control sobre E. coli. No hay inhibición en el crecimiento.


-5 1 0 5-6 3 0 0

T=2 -4 2 2 15-5 1 0 5-6 1 0 0


Solvente Extracto CepaT=4 -5 0 0 28

-6 0 0 2-7 0 0 0

T=4’ (repetición) -5 0 1 22-6 0 0 4-7 0 0 0



-7 0 0 1-8 0 0 0

T=6’ (repetición) -6 0 0 4-7 0 0 0-8 0 0 0


Solvente Extracto CepaT=8 (repetición) -7 0 0 2

-8 0 0 2-9 0 0 0

T=8 -7 0 0 3-8 0 0 0-9 0 0 0




-8 3 0 4-9 1 0 3

T=24 -7 0 0 5-8 4 2 4-9 2 0 3

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PIMIENTA, Barrios Eulogio (1992). Memorias II simposio y I Reunión Nacional. Agricultura

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ZAMORA, Rafael. (2011). Elaboración de un alimento funcional a base de

Saccharomyces boulardii e inulina. Instituto Politécnico Nacional. 72 págs.

EXTRACTO ETANÓLICO DE MEZQUITE (Prosopis sp.) : VAINA MADURA Y VERDEINTRODUCCIÓN:El mezquite es una leguminosa del género Prosopis sp; del que existen diversas especies como Prosopis glandulosa, P. velutina, P. Strombulifera, P. pubescens. P. juliflora. P. pallida, P. chilenis; originaria de México, aunque su distribución se ha extendido hasta algunas regiones áridas y semiáridas de Norte, Centro y Suramérica.

1) De acuerdo a la clasificación de la FAO en México se localiza desde Michoacán hasta Oaxaca, Nuevo León, Tamaulipas y norte de Veracruz, Chiapas y regiones centrales altas de la República Mexicana.

Entre los usos del mezquite (Prosopis sp.) destacan la obtención de madera, leña, carbón; la alimentación y engorda del ganado a partir del consumo de vainas o harina del mezquite. Debido a que las (2) las vainas maduras contienen un alto valor nutritivo, aproximadamente 15.8 g de proteína, 3,0 g de grasa y 50.8 g de carbohidratos por cada 100 gramos de muestra; sin embargo las semillas presentan mayor contenido proteico, ya que el embrión contiene aproximadamente el 60% y la semilla entera un 40%. Además, el fruto contiene 20.7 % de sacarosa y es rico en potasio, calcio y cloruro.

Los frutos de P. juliflora se componen de un gran número y alta concentración de aminoácidos como Isoleucina, leucina, lisina, metionina, cisteína, fenilalanina, tirosina, treonina, triptófano, valina e histidina.

(4) El mezquite es una buena fuente de producción de forraje: de 300 a 8,000 Kg/ha y produce anualmente de 3,000 a 10,000 Kg de fruto por hectárea (Conabio,2002)

Para alimentación humana se utiliza en la fabricación de harinas y mieles, en reemplazo de algunos alimentos convencionales, como harina de trigo, café y azúcar.

En México se emplean las hojas de Prosopis juliflora para obtener la vinalina, usado como antimicrobiano. Además la fermentación de harina de mezquite para la obtención de cerveza suave.


En Brasil y Perú, las hojas hervidas se emplean para curar los ojos, como purgante, dolores de estómago, calosfríos, disentería, dolor de cabeza, entre otros malestares.

Los trabajos revisados en la literatura demuestran el efecto antimicrobiano contra Staphylococcus aureus y Escherichia coli. que presentan los extractos en alcohol de hojas frescas y maduras del mezquite; el uso industrial de los exudados o gomas de la corteza del árbol de mezquite; el valor nutritivo de las vainas para el forraje del ganado.

6) Ensayos realizados con agar de mezquite a base de harina de Prosopis juliflora muestran el crecimiento significativo cepas como E. coli, Bacillus cereus, Bacillus subtilis,Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Salmonella sp, Proteus sp., Shigella sp.Klebsiella, Streptococcus pyogenes, Bordetella bronchiséptica.

OBJETIVO:EVALUAR LA ACTIVIDAD POTENCIADORA DE CRECIMIENTO DEL EXTRACTO DE MEZQUITE (Prosopis sp.) EN ETANOL: VAINA MADURA Y VERDE ANTE Escherichia coli Y Listeria innocua.

Muestra: las vainas colectadas de mezquite maduro y verde, fueron lavadas con cloro a 200 ppm y enjuagadas con agua destilada. Posteriormente se dividieron en vainas maduras y verdes, fueron cortadas en trozos de 1 cm aproximadamente y colocadas en frascos para liofilización, ocupando ¾ partes del volumen. Se rotularon correctamente y se congelaron a – 14°C ± -16°C.

Las muestras congeladas se colocaron en la liofilizadora LABCONCO a -44°C y 165 x 10 -3 M BAR.

PREPARACIÓN DEL EXTRACTO:

Las muestras liofilizadas fueron trituradas con ayuda de un mortero; se colocaron 800 mg de vaina de mezquite maduro en un tubo FALCON de 50 ml y se añadieron 40 ml de etanol al 70%.

Se colocaron en la centrífuga SORVALL LYNX 600 centrifuge a 600 rpm, 4000 g a 25°C durante 18 minutos. El sobrenadante fue filtrado por bomba de vacío, recuperando 35 ml de extracto, siendo macerado por 5 días a temperatura ambiente.

AJUSTE DE CEPA CON ESCALA 0.5 DE MCFARLAND


Se elaboró un cepario de Escherichia coli y Listeria innocua por estría en superficie en

tubos con Agar ICC en pico de flauta; se incubó a 37°C por 24 horas. Se realizaron

resiembras en placas con agar Müeller Hinton y se incubaron 37°C/ 24 hrs. Con un

hisopo estéril previamente sumergido en solución salina estéril, se tomaron colonias de la

cepa a trabajar, se sumergió en el tubo con 5ml de NaCl 0.85%, se homogenizó en el

vórtex, se midió la transmitancia en el espectrofotómetro a 600 nm y se ajustó a 75.5%,

con un estimado de 1.25 x108 UFC/ml.

ENSAYO DE INHIBICIÓN EN PLACA:

CONCENTRACIONES DEL EXTRACTO:

[10mg/ml]:Se tomaron 50 μl de extracto madre de mezquite vaina madura en etanol [20 mg/ml] y se diluyeron con 50 μl de agua estéril.

[5 mg/ml]: Se tomaron 25 μl de extracto madre de mezquite vaina madura en etanol [20 mg/ml] y se diluyeron con 75 μl de agua estéril.

[1 mg/ml]: Se tomaron 5 μl de extracto madre de mezquite vaina madura en etanol [20 mg/ml] y se diluyeron con 95 μl de agua estéril.

CONTROLES: etanol l 35 y 70%

ENSAYO CON Escherichia coli.

Se inoculó por extensión en placa 100 μl de cepa activada de Escherichia coli a 0.5 estándar de McFarland en 4 placas de agar Muller-Hinton.

Se realizaron pocillos con ayuda de un tubo de ensaye; en las dos placas CONTROL se realizaron 2 pozos, a las que se añadieron 100 μl de etanol al 35 y 70% respectivamente.

En las placas de prueba del extracto se probaron 3 concentraciones distintas [1, 5 y 10 mg/ml]

Los cultivos se incubaron a 36.4°C durante 24 horas.

ENSAYO CON Listeria innocua

Se inoculó por extensión en placa 100 μl de cepa activada de Listeria innocua a 0.5 estándar de McFarland en 4 placas de agar Muller-Hinton.


Se realizaron pocillos con ayuda de un tubo de ensaye; en las dos placas CONTROL se realizaron 2 pozos, a las que se añadieron 100 μl de etanol al 35 y 70% respectivamente.

En las placas de prueba del extracto se probaron 3 concentraciones distintas [1, 5 y 10 mg/ml].

Los cultivos se incubaron a 36.4°C durante 24 horas.

1) Efecto del extracto de mezquite vaina madura en etanol al 70% en Escherichia coli[103]:

Ensayo de Extracto [2 mg/ml]: Se agregaron 200 μl de extracto de mezquite y 800 μl de agua estéril a un tubo de 10x100 mm que contenía 0.980 μl de caldo Muller-Hinton a doble concentración.Se añadieron 20 μl de la dilución 105 de cepa activada Escherichia coli.

Control Solvente: se añadió 1ml de etanol a un tubo de 10x100 mm que contenía 0.980 μl de caldo Muller-Hinton a doble concentración y posteriormente se agregaron 20 μl de la dilución 105 de cepa activada de Escherichia coli.

Control CEPA: Se agregaron 20 μl de la dilución 105 de cepa activada Escherichia colia un tubo de 10x100 mm con 1.980 μl de caldo Muller-Hinton.

Al añadir la cepa,se homogenizaron los cultivos en el vortex y se inoculó por extensión en placa 100μl de cada tubo a una respectiva placa de agar Muller-hinton previamente etiquetada.

Tras añadir los 20 μl de cepa, los cultivos se homogenizaron en el vortex y se tomaron 100μl de cada tubo, inoculándose por extensión en placa en cajas Petri con agar Muller-Hinton previamente etiquetadas.

Los cultivos fueron incubados a 36.4°C por tiempos intermitentes, ya que para comparar el crecimiento de Escherichia coli en el extracto, solvente y caldo Mullen-Hinton, se realizaron distintos ensayos a las 0,2,4, 6 y 24 horas.

Tras añadir los 20 μl de cepa, los cultivos se homogenizaron en el vortex y se tomaron 100μl de cada tubo, inoculándose por extensión en placa en cajas petri con agar Muller-Hinton previamente etiquetadas como “tiempo cero”.

A las 2, 4, 6, y 24 horas se realizaron diluciones de 200 μl a los tres cultivos; de las últimas 3 diluciones en cada hora, se tomaron 10 μl y mediante la técnica por goteo, se inocularon 2 placas de agar Muller-Hinton; se incubaron a 36.4°C por 24 horas.

2) Efecto del extracto de mezquite vaina madura en etanol al 70% en Escherichia coli[105]:

El experimento se realizó en base a la metodología anterior, modificándose la concentración de la cepa a 105en cada cultivo y la preparación del control solvente.


Ensayo de Extracto [2 mg/ml]: Se agregaron 200 μl de extracto de mezquite y 800 μl de agua estéril a un tubo de 10x100 mm que contenía 0.980 μl de caldo Muller-Hinton a doble concentración.Se añadieron 20 μl de la dilución 107de cepa activada Escherichia coli, para obtener una concentración de 105.

Control Solvente: se añadieron 140 μl de etanol al 70% y 860 μl de agua destilada a un tubo de 10x100 mm que contenía 0.980 μl de caldo Muller-Hinton a doble concentración y posteriormente se agregaron 20 μl de la dilución 107 de cepa activada de Escherichia coli.

Control CEPA: Se agregaron 20 μl de la dilución 107de cepa activada Escherichia colia un tubo de 10x100 mm con 1.980 μl de caldo Muller-Hinton.

RESULTADOS:Cada ensayo mencionado se realizó por duplicado.

ENSAYO DE INHIBICIÓN EN PLACA:

ENSAYO CON Escherichia coli

Figura 1. Control: Efecto del etanol a diferentes concentraciones en el crecimiento de Escherichia coli.

Se observa que tanto el etanol al 35% y 70% no tienen efecto inhibitorio ante E. coli.

Figura 2. Efecto del extracto etanólico de mezquite vaina maduraen el crecimiento de Escherichia coli.

Ninguna de las tres concentraciones probadas (1,5 y 10 mg/ ml) ejerce efecto inhibitorio en el crecimiento de


ENSAYO CON Listeria innocua

Figura 3. Control: Efecto del etanol al 70% en el crecimiento de Listeria innocua.

Se observa que tanto el etanol al 35% y 70% no tienen efecto inhibitorio ante Listeria innocua.

Figura 4. Efecto del extracto etanólico de mezquite vaina maduraen el crecimiento de Escherichia coli.

Se observa que el extracto etanólico no afecta el crecimiento de Listeria innocua.


1) EFECTO DEL EXTRACTO DE MEZQUITE VAINA MADURA EN ETANOL AL 70% EN Escherichia coli [103]:

TIEMPO (Horas) SOLVENTE#colonias

EXTRACTO#colonias

CEPA#colonias

0 No se observa crecimiento

-1 -2 -3

Aproximadamente 97 colonias

-1 -2 -3

Aproximadamente 90 colonias

-1 -2 -32 Inc. Inc. 6 1 Ø Ø Inc. Inc. Inc.4 No se observa

crecimientoNo se observa

crecimientoInc. 26 Ø


-2 -3-4

No se observa crecimiento

-2 -3 -4 Inc. 36 4

24 Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc.

2) EFECTO DEL EXTRACTO DE MEZQUITE VAINA MADURA EN ETANOL AL 70% EN Escherichia coli [105]:

TIEMPO (Horas) SOLVENTE#colonias

EXTRACTO#colonias

CEPA#colonias

-2 -3 -4

-3 -4-5-3 -4-5 -3 -4-5


0 Numerosas colonias de E. coli.

Numerosas coloniasde E. coli

Numerosas colonias de E. coli

2 Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc. Inc.


No se observa crecimiento

41 7 1

6No se observa


crecimientoInc. 8 2

8No se observa


crecimiento3 1 Ø

24 3 Ø Ø Ø Ø Ø 3 1 Ø

LITERATURA CONSULTADA:

LITERATURA CONSULTADA:1) Gutiérrez Carvajal Liliana. Dorantes López Jesús. Potencialidades de especies con uso tradicional del estado de Veracruz como opción para establecer Plantaciones Forestales Comerciales Especies forestales de uso tradicional del Estado de Veracruz. 2002.

[http://www.verarboles.com/Mezquite/mezquite.html]

2) Ortíz de Montellano Bernardo. Medicina, Salud y nutrición Aztecas. ¿Detroit 1990?

3) FAO. Departamento de Agricultura. EL GÉNERO PROSOPIS “ALGARROBOS” EN AMÉRICA LATINA Y EL CARIBE. DISTRIBUCIÓN, BIOECOLOGÍA, USOS Y MANEJO. FAO

4) CONABIO (Comisión nacional para el conocimieno y uso de la biodiversidad). "Sistema Nacional de Información sobre Biosdiversidad" Prosopis juliflora (Sw.) DC. Artículo en internet. Http://www.conabio.gob.mx/arboles/pdfespecies/46legum44m.pdf. Consulta: 5 de febrero del 2002.

-3 -4 - 5-3 -4 - 5-3 -4 - 5

-4-5- 6-4-5- 6-4-5- 6

-5 -6- 7-5-6- 7-5-6 - 7

-5 -6- 7 -5 -6 - 7-5 -6 - 7

-6-7 - 8-6 -7 - 8-6 -7- 8


5) Yolanda L. López-Franco, Francisco M. Goycoolea, Miguel A. Valdez, Ana María Calderón de la Barca. Goma de mezquite: una alternativa de uso industrial. Inter-ciencia, vol. 31, núm. 3, marzo, 2006, pp. 183-189, Asociación Inter-ciencia. Venezuela.

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7) Azevedo R. 1988 “P. Juliflora as a Source of Food and Medicine for Rural Inhabitants in Rio Grande de Norte”. The Current State of Knowledge on Prosopis juliflora; FAO (pag 397–402)

EXTRACTO ETANÓLICO DE PAPAYA VERDEMetodología.

Obtención del extracto de cáscara del fruto de Carica papaya.Para obtener el extracto se obtuvo el fruto de____ y se lavó en una solución a 200 ppm de cloro en agua durante 3 minutos. Posteriormente el fruto fue pelado para conseguir la cáscara. El producto fue congelado a -80 °C durante un día y luego fue liofilizado durante 2 días a -45 °C y 180 (algo va aquí). Una vez seco, la cáscara se trituró hasta obtener un polvo que enseguida se maceró con alcohol al 70% obteniendo una concentración de 20mg/mL. Por último se filtró el macerado por bomba al vacío.

Prueba de pozo.En placas con agar Muller Hinton se hicieron tres pocillos sobre el agar en los cuales se le pusieron 100 µL de tres tratamientos a diferentes concentraciones de extracto: 10, 5 y 1 mg/mL. Las placas se dejaron incubando a 37 °C por 24 horas.

Método de goteo.Un tubo se ajustó a 74.3 ± 2 de transmitancia con una cepa de Escherichia coli y de Listeria inocua. Posteriormente se inocularon en placas con agar Muller Hinton 10 µL para conteo en placa y se dejaron incubar a 37 °C por 24 horas.

Preparación del tratamiento con el extracto.


El extracto se probó a una concentración de 2 mg/mL. Para obtenerlo se diluyeron 200 µL y se le adicionaron 800 µL de agua estéril. Se agregaron 20 µL de la cepa ajustada y 1 mL de caldo Muller Hinton a doble conentración.Control cepa.Al caldo Muller hinton (1980 µL)se le agregaron 20 µL de cepa.Control con Solvente.Se diluyó el alcohol al 70% agregando 140 µL de alcohol al 70% y 860 µL de agua esteril.Posteriormente a cada tratamiento se contó el crecimiento de la cepa en cada tratamiento por un conteo en placa por método de goteo. Las placas se incubaron a 37 °C durante 24 horas en las cuales se revisó el crecimiento a las cero, dos, cuatro, seis, ocho y veinticuatro horas.

Resultados

Conteo en placa primer ensayoPlaca 1 Placa 2

Extracto Controles Extracto ControlesHoras Papaya Cepa Solvent

ePapaya Cepa Solvent

e0 143 INC 0

Dilución-1, -2 y -3 Dilución-1, -2 y -32 0 0 0 17 1

30 0 0 0 2 0 0 13 0 1 0 0 0

Dilución-2, -3 y -4 Dilución-2, -3 y -44 0 0 0 36 7 0 0 0 0 0 0 0 25 6 0 0 0 0

Dilución-3, -4 y -5 Dilución-3, -4 y -56 0 0 0 INC 2

14 0 0 0 0 0 0 INC 1

70 0 0 0

8Dilución-4, -5 y -6 Dilución-4, -5 y -6

24 INC INC INC 0 0 0 0 0 0 INC

INC

INC 0 0 0 0 0 0

Conteo en placa segundo ensayoPlaca 1 Placa 2

Extracto Controles Extracto ControlesHoras Papaya Cepa Solvent

ePapaya Cepa Solvent

e0 INC INC INC







EXTRACTO ETANÓLICO DE CÁSCARA DE PIÑA MADURA

INTRODUCCIÓN

La piña o ananá es una fruta tropical nativa de América. Ésta además de ser muy sabrosa y refrescante es considerada una planta medicinal, que posee propiedades y brinda beneficios para mejorar la salud. La piña también conocida bajo el nombre científico Ananas comosus, es una fruta de la familia de las bromeliáceas de origen que procede de la zona tropical de Brasil, Argentina y Paraguay. Las partes medicinales del ananá son su fruto y tallo, a partir de los cuales se pueden obtener todos sus beneficios para la salud. Está constituido por una piel áspera de color amarillo anaranjado. Cuando este se encuentra maduro es más fibroso, muy jugoso con sabor particular entre dulce y ácido. Es además muy aromático. Algunas de sus propiedades que beneficia la piña aumentan la digestión a causa de una enzima llamada bromelina. Es digestivo, aumentando la metabolización de los diferentes nutrientes. Mejora la digestión proteica. Es diurético, gracias a la bromelina, la cual estimula los riñones para eliminar el exceso de agua y residuos. Ayuda a perder peso, se lo considera un alimento calorías negativas. Esto se debe a que el cuerpo gasta más calorías en metabolizarla que las calorías que aporta. Ayuda a bajar el colesterol malo y triglicéridos, por su alto contenido en fibra y antioxidantes. Previene enfermedades cardiovasculares. Es anticoagulante. Es antiinflamatorio. Se utiliza para tratar llagas, heridas. Es útil para bronquitis y mucoviscidosis. Como se podrá observar la piña además de ser una fruta sabrosa y refrescante es una fruta que trae consigo múltiples propiedades medicinales que brindan beneficios para la salud. Debido a que la bromelina de la piña ayuda a digerir los alimentos, las


propiedades de este componente son utilizadas por la industria de la alimentación, para que las carnes envasadas sean más blandas. Sin embargo, este hecho perjudica la composición de la enzima que se destruye con el calor y hace que no sea aprovechable por el organismo.

OBJETIVO

Utilizar extractos etanólicos a base de frutas como potenciadores para el crecimiento microbiano, sobre las bacterias Escherichia Coli y Listeria como modelos de prueba.

Metodología

Durante un periodo se analizó diferentes extractos etanólicos a base de frutas como la piña para potenciar el crecimiento microbiano. Se estudió un extracto etanólico a base de piña; Para el procesamiento de la muestra se cortaron rodajas de cascara de piña, se utilizó un lavado para eliminar cualquier microorganismo con cloro a 200 ppm, las cuales fueron cortadas en trozos de 1cm3 aproximadamente y colocadas en viales esterilizados. Fueron sometidos a una temperatura entre -14C° y -16C° por 6 horas, después del tiempo trascurrido se colocó en liofilización en proceso de -46°C/184x10 -3 por 4 días, hasta eliminar la mayor cantidad de humedad presente en la muestra de piña. Una vez deshidratada la muestra se utilizó un mortero, se pesó y fueron colocados en frascos de tapa rosca previamente esterilizados. Se utilizó para la preparación del extracto 40 mililitros de etanol con una concentración al 70% y con 8 gramos de la muestra de piña y colocados en tubos de centrifugadora falcón enrollados con papel aluminio, para evitar el contacto de luz del exterior con el extracto. Después de 24 horas, se centrifugo a 6000 rpm por 18 minutos en temperatura ambiente. El sobrenadante fue filtrado con bomba de vacío para eliminar la mayor cantidad de impurezas presentes. El extracto al final quedo a una concentración de 20 mg/ml, fue colocado en frascos viales de tapa rosca para el uso durante las pruebas necesarias. Para el ensayo microbiológico fue necesario trabajar con un cepario de E. Coli y Listeria, en donde se preparó agar ICC (infusión cerebro corazón)se colocó 5 mililitros en los tubos con rosca, una vez esterilizados se enfriaron a temperatura ambiente con una inclinación para crear tubos con pico de flauta y sembrar por estría de pescado e incubar el cepario a 37°C en 24 horas y refrigeración de 4°C, así para poder comenzar a trabajar los ensayos necesarios para las pruebas de esta investigación. Se comenzó a estriar por cuadrantes en una placa con agar Mueller Hinton para incubación en 37°C por 24 horas de la E. Coli y 48 Horas Listeria, se obtuvieron colonias aisladas, se tomó muestra para activar la cepa con la ayuda de un hisopo para homogenizar en


solución salina con una fisiológica de 0.85% NaCl en tubos de 5 mililitros, el cual se fue ajustando en el espectrofotómetro hasta obtener una transmitancia entre 74.3± %, ya ajustado se hacen diluciones por la técnica del goteo pasando 200 µ desde el tubo activado a las diluciones necesarias para el ajustado correcto 107, se disuelven las diferentes controles para ver los diferentes resultados se agregan .980µ de caldo Mueller Hilton 2x, 800µ de agua estéril, 200µ de extracto de piña y 20µ de cepa 107 se homogeniza y se siembra por extensión 100µ. Para el siguiente control de solvente en etanol se agregan .980µ de caldo MH 2x, 860µ de agua estéril, 140µ etanol al 70% y 20µ de cepa 107

homogenizar y sembrar por extensión con 100µ y para la cepa Sola se utiliza 1.980µ de Caldo MH y 20µ de cepa 107 para sembrar por extensión los 100µ. Siendo el tiempo 0. En el tiempo 2 con control del extracto se hacen disoluciones y se siembran las necesarias para el conteo de las células con 10µ se hizo exactamente igual para el solvente en etanol y la cepa sola. Realizando así tiempos de 4, 6, 8 y 24 horas se deja incubar en 37°C por 24 horas para el conteo de las colonias formadas, tomando en cuenta si el extracto potencia el crecimiento o lo inhibe. También se hicieron ensayos de pozos, se activó la cepa de E. Coli y Listeria con tubos de solución salina con una fisiología de 0.85% NaCl de 5 mililitros, el cual fue ajustados en el espectrofotómetro hasta obtener una trasmitancia entre 74.3±2% y se plaquea por extensión 100µ en tres placas de agar MH, en la primera se hace el control en un pozo se agrega etanol al 70% y el segundo pozo agua estéril 100µ. El segundo pozo son tres concentraciones del extracto que se hacen con agua estéril un pozo de 10 mg/ml, 5mg/ml y 1mg/ml, esa misma placa se hace un duplicado, se dejó a temperatura de 37°C por 24 horas en la incubadora para ver los resultados obtenidos en este proyecto de investigación.

Resultados

1° Prueba- E. Coli

Tiempo Placa 1 Placa 2Horas Dilución Solvent

eExtracto Cepa

SolaSolvente Extract

oCepa Sola

0 - INC 85 ________________________2 -1 INC INC INC - 3 INC

-2 INC INC INC INC INC INC


-3 INC INC INC INC INC INC

4 -2 - - INC - - INC

-3 - - INC - - INC

-4 - - 1 - - INC

6 -3 - - INC - - INC

-4 - - INC - - INC

-5 - 1 INC - 3 INC

24 -4 - - INC - - INC

-5 - - INC - - INC

-6 - - 17 - - 6

EFECTO DE EXTRACTOS ETANOLICOS A BASE DE PLÁTANO MADURO(Musa cavendishii) COMO POTENCIALIZADORES EN EL CRECIMIENTO MICROBIANO.

OBJETIVO:

“Evaluar el efecto del extracto etanolico a base de cascara de plátano maduro como potencializador en el crecimiento de Escherichia coli”

HISTORIA DEL FRUTO:

El banano moderno es un cultivo, probablemente originario de la región indomalaya. Desde Indonesia se propagaron hacia el sur y el oeste, alcanzando Hawái y la Polinesia por etapas. Los comerciantes europeos llevaron noticias del árbol a Europa alrededor del siglo III a. C., pero no lo introdujeron hasta el siglo X. De las plantaciones de África Occidental los colonizadores portugueses lo llevarían a Sudamérica en el siglo XVI.

Hoy las variedades comerciales se cultivan en todas las regiones tropicales del mundo. Es la más cultivada de las frutas tropicales y una de las cuatro más importantes en términos globales.


Anualmente se producen más de 28 millones de toneladas de fruta, de las cuales casi dos tercios provienen de Sudamérica. Los principales importadores son Europa, los Estados Unidos, Japón y Canadá.

Indiaes el principal productor mundial de banana, con alrededor de 11 millones de toneladas (11.000.000 tn) anuales, destinadas en su mayoría al mercado interno. Ecuador y Colombiason los principales exportadores de banana en América, a los que sigue Venezuela, que ha superado el millón de toneladas anuales. La producción de Panamá, Honduras y Costa Rica está principalmente destinada a los Estados Unidos.

El plátano es una cosecha fundamental en Colombia y Ecuador, donde los subproductos vegetales se usan en la alimentación animal, así como en México y en Venezuela.

El fruto tarda entre 80 y 180 días en desarrollarse por completo. En condiciones ideales fructifican todas las flores femeninas, adoptando una apariencia dactiliforme que lleva a que se denomine mano a las hileras en las que se disponen.

Puede haber entre 5 y 20 manos por espiga, aunque normalmente se trunca la misma parcialmente para evitar el desarrollo de frutos imperfectos y evitar que el capullo terminal insuma las energías de la planta. El punto de corte se fija normalmente en la "falsa mano", una en la que aparecen frutos enanos. En total puede producir unos 300 a 400 frutos por espiga, pesando más de 50 kg.

El fruto es una falsa baya epígina de 7 a 30 cm de largo y hasta 5 de diámetro, que forma un racimo compacto. Está cubierta por un pericarpo coriáceo verde en el ejemplar inmaduro y amarillo intenso, rojo o bandeado verde y blanco al madurar. Es de forma lineal o falcada, entre cilíndrica y marcadamente angulosa según la variedad. El extremo basal se estrecha abruptamente hacia un pedicelo de 1 a 2 cm. La pulpa es blanca a amarilla, rica en almidón y dulce; en los plátanos puede resultar algo astringente o gomosa por su contenido en látex, farinosa y seca. Muy rara vez las variedades diploides o tetraploides producen semillas, negras, globosas o irregulares, con la superficie rugosa, de hasta 16 × 3 mm de tamaño, incrustadas en la pulpa. Los triploides, como 'Cavendish', nunca producen semilla.

Los plátanos son propios de regiones tropicales y subtropicales, y rara vez dan buenos resultados fuera de la banda comprendida entre los 30°N y 30°S. Algunos cultivos están adaptados a altitudes de hasta 2.300 msnm, pero la mayoría no prospera a más de 600 m de altitud.


La temperatura óptima para la floración ronda los 27°C, y el crecimiento de los frutos se beneficia de una ligeramente superior. Por encima de los 37 °C las hojas padecen quemaduras y los frutos se deforman; por debajo de los 16 °C el ritmo de desarrollo se reduce sensiblemente, dando lugar a la aparición de una hoja por mes en lugar del período óptimo de una por semana. Por debajo de los 10 °C, la planta detiene su crecimiento por completo, y el desarrollo de los frutos se aborta. Aún breves accesos de frío pueden matar las inflorescencias, ocasionar la podredumbre de los frutos ya presentes o abortar su desarrollo, dando lugar a frutos pequeños, de color verde gris y sabor débil.

COMPOSICIÓN QUIMICA DEL FRUTO:

Verde Maduro

Agua 69,58 75,12Almidón 15,37 4,21Celulosa 7,54 0,92Sacarosa 9,36Glucosa 0,58 5,19Dextrosa 1,82 1,76Gomas 0,67 1,60Tanino 0,06 0,01Proteínas 2,10Cenizas 0,76 0,76

Por lo anterior, se puede comprender que el proceso de maduración transforma los almidones en glucosas y disminuye la celulosa y los taninos, haciendo más fácilmente digerible y asimilable la fruta.

EXTRACTO ETANOLICO DE PLÁTANO Lavar y desinfectar la fruta con cloro a 200 ppm Cortar y picar la cascara en cubitos de aproximadamente 1 cm3

Colocar en viales la fruta hasta llenar a ¾ de la capacidad del vial. Congelar a -14 °C por aproximadamente 6 horas. La muestra congelada se coloca en el liofilizador, durante 2 días hasta que

la muestra quede totalmente deshidratada. Con ayuda de un mortero, se pulveriza la muestra y es pesada. Se pesaron .8 gramos de la muestra y se colocan en 40 ml de etanol al

70% en un tubo Falcon el cual fue forrado con papel aluminio para evitar el contacto de luz con el extracto. Se deja en reposo por 24 horas.

Una vez que se cumplió con el tiempo determinado, se centrifugó a 6000 rpm durante 24 horas a 4°C.


Utilizando una bomba de vacío se filtró el sobrenadante que queda después de la centrifugación, para eliminar la mayor cantidad de partículas presentes.

Una vez obtenido el sobrenadante, se coloca en frascos esmerilados, la muestra final queda a una concentración de 20 mg/ml.

*PREPARACIÓN DE CEPARIO:

Para el ensayo microbiológico fue necesario trabajar con generar un cepario de e.coli el cual se realizó de la siguiente manera:

1. Preparar agar ICC (infusión cerebro corazón)2. Colocar en tubos con rosca3. Esterilizar en autoclave4. Enfriar a temperatura ambiente con una inclinación de aproximadamente

80° para crear tubos con pico de flauta.5. Dicho material fue entregado a la persona responsable de activar los

ceparios.6. Una vez que se tenían las cepas libres de contaminación, se guardaban en

el refri para su pronto uso.

Una vez que se tuvo el cepario listo, se comenzaron a trabajar los ensayos necesarios para las pruebas que se realizarían durante la investigación.

*ENSAYO DILUCIONES:

Una vez que se tenía el cepario listo se comenzaron los ensayos para las diluciones que se van a trabajar. Esto se trabajó de la siguiente manera:

*ACTIVACIÓN DE LA CEPA:

Tomar por picadura cepa del tubo pico de flauta.

Estriar por cuadrantes en una placa con agar Mueller hinton, previamente esterilizado y aceptado por prueba de esterilidad.

Incubar 24 horas

Una vez que se tienen colonias aisladas, con un hisopo estéril se tomó una muestra y se descargó en el tubo Mc Farland el cual se fue ajustando poco a poco en el espectrofotómetro hasta tener una transmitancia de 74.3 ±2 % .


Ya que se tenía listo el ajuste, se comenzaron a realizar diluciones en las cuales se tenían que tomar 200 µl del tubo ajustado y se pasaban a un tubo con 1.8 ml de solución salina y de este tubo se tomaban 20 µl y se pasaron a otro tubo con 1.8 ml de solución salina y así sucesivamente hasta obtener la dilución 7.

Una vez que se tenían las diluciones se optaba por plaquear en cajas Petri desechables estériles con agar mueller hinton estéril divididas en 9 cuadros, las diluciones más representativas del ensayo, de las cuales se tomaron 10 µl del tubo y se colocó por método del goteo en el cuadrante que le corresponde en la placa. se repitió el mismo procedimiento en una segunda placa.

Una vez que se tenían los extractos preparados se tenía que realizar una prueba para determinar si el extracto potenciaba o inhibía el crecimiento de la bacteria, para el cual se realizó el ensayo de pocitos, el cual consiste en lo siguiente:

1. Con un tubo Mc farland ajustado por transmitancia, se tomarón 100 µl de la cepa y se inocularon en una caja Petri con agar mueller hinton estéril y se extendieron con ayuda de una varilla de vidrio.

2. Una vez que se había extendido, con ayuda de un tubo de ensayo limpio, se hacían pocitos en los cuales se depositaria la muestra a analizar

3. Se hicieron 4 placas

*ENSAYO POCITOS:

Una vez que las placas se tenían listas, se comenzó a hacer el ensayo utilizando 3 concentraciones diferentes del extracto el cual fue diluido en agua estéril, las concentraciones fueron las siguientes:

10 mg/ml

5 mg/ml

1 mg/ml

Así también se prepararon 2 controles, con el solvente utilizado en 2 concentraciones

Etanol 70 %

Etanol 35%

Una vez que se tenían las placas con el extendido de e.coli y los pocitos listos se depositaban 100 µl, de las concentraciones y controles utilizados en cada pocito.


Se dejó incubar por 24 horas, para determinar el poder de inhibición o crecimiento del extracto.

Como los resultados no eran muy convincentes de lo que en realidad se pretende, se decidió cambiar la concentración y trabajar con el extracto al 100%, lo que quiere decir que no fue diluido para reducir la concentración. Se utilizó la misma metodología para la prueba de pocitos.

Una vez que se obtuvieron los resultados, se decidió trabajar el ensayo microbiológico para observar la capacidad para potenciar el crecimiento, que el extracto pudiera tener.

*ENSAYO MICROBIOLOGICO:

En este ensayo se utilizó el extracto etanolico hecho con cascara de plátano maduro con un día de reposo y se probó contra una cepa de e.coli.

Para este ensayo iniciamos con un extracto a una concentración de 20 mg/ml.

Se realizó un ajuste en un tubo de Mc farland con 5 ml de solución salina, hasta obtener una transmitancia de 74.3 ± 2%, observado en el espectrofotómetro.

Una vez que se tenía el tubo ajustado, se realizaron diluciones de la -1 hasta la -7 y de ahí se tomó la que cuente como 103, sabemos que el tubo ajustado está a un logaritmo de 108.

Este ensayó se basa en realizar diluciones cada 2 horas de 3 muestras preparadas con las siguientes concentraciones:

MUESTRA 1: 1.980 µl de caldo mueller hinton a concentración normal + 20 µl de la cepa ajustada en el tubo de Mc farland.

MUESTRA 2: .980 µl de caldo mueller hinton a doble concentración + 20 µl de la cepa ajustada + 1 ml del solvente (etano 70%)

MUESTRA 3: .980 µl de caldo mueller hinton a doble concentración + 20µl de la cepa ajustada + 1 ml del extracto el cual entró a una concentración de 4 mg/ml + .800 µl de agua.

Una vez listas las 3 muestras se tomaban 100 µl de cada tubo y eran depositados en placas con agar mueller hinton gelificado (una placa por muestra), y eran extendidos con ayuda de una varilla de vidrio previamente esterilizada en el mechero.

Los tubos fueron colocados en la incubadora hasta la siguiente prueba,

Las pruebas se realizarían cada 2, 4,6, 8 y 24 horas, cabe mencionar que en el primer ensayo solo se trabajaron diluciones hasta la hora 6 por cuestiones de tiempo dentro del laboratorio.


A las 2 horas se sacaron los tubos y se realizaron las diluciones de la 1 a la 3 en tubos de vidrio con 1.8 ml de solución salina en los cuales se colocaron 200 µl del tubo de muestra 1 y se colocaron en la dilución 1, se tomaron 200 µl de la dilución 1 y se colocaron en la dilución 2 y así sucesivamente hasta llegar a la dilución 3.

Cada que se pasaban 200 µl se homogeneizaba la muestra con la ayuda de un vortex.

Este paso se repitió para los tubos con la muestra 2 y 3.

Una vez que ya se tenían los tubos de dilución se colocó una gota con 10 µl de la dilución en una caja Petri con agar mueller hinton estéril y gelificado, previamente cuadriculada por la parte de atrás, esta gota se colocó en el cuadro que correspondía a la muestra, se colocó una gota por dilución en su cuadro correspondiente y se hizo lo mismo con las demás muestras, se hizo un duplicado de este con las mismas condiciones en otra caja Petri con el mismo agar.

Este procedimiento se realizó para las horas siguientes (4, 6,y 24).

Y la misma metodología se utilizó para el segundo ensayo, solamente que esta vez hubo un cambio en las concentraciones de las muestras.

MUESTRA 1: 1.980 µl de caldo Mueller hinton a concentración normal + 20 µl de la cepa ajustada en el tubo de Mc farland.

MUESTRA 2: .980 µl de caldo mueller hinton a doble concentración + 20 µl de la cepa ajustada + 140 µl de etanol + 860 µl de agua. Con la finalidad de que el alcohol quedara a la misma concentración que el alcohol que tiene el extracto en la muestra 3, para así poder hacer un análisis más detallado de las muestras.

MUESTRA 3: .980 µl de caldo mueller hinton a doble concentración + 20µl de la cepa ajustada + 1 ml del extracto + .800 µl de agua.

Los pasos fueron los mismos hasta cumplir las 24 horas.


RESULTADOS:

Ensayo diluciones 1

DILUCIÓN PLACA 1 PLACA 2 PLAQUEO (10µl)RESULTAD

O INTERPRETACIÓN-4 6 1

*100

600 100 600*10^4 100*10^4-5 12 7 1200 700 1200*10^5 700*10^5-6-7

PROMEDIO 3.5 X10^6

Tabla 1: resultados ensayo diluciones 1.

Ensayo diluciones 2DILUCIÓN PLACA 1 PLACA 2 PLAQUEO (10µl) RESULTADO INTERPRETACIÓN

-4 INC INC

*100-5 INC INC-6 53 31 5300 3100 5300*10^6 3100*10^6-7 7 16 700 1600 700*10^7 1600*10^7


PROMEDIO 5.3*10^9Tabla 2: resultados ensayo diluciones 2.

PRUEBA POCITOS #1EXTRACTO PME:

CONCENTRACIÓN RESULTADO10 mg no hay inhibición5 mg no hay inhibición1 mg no hay inhibición

CONTROLES (ETOH)70% si hay inhibición35% no hay inhibición Tabla 3: resultados obtenidos ensayo pocitos 1 Tabla 4: resultados prueba pocitos 2.

ENSAYO 1: EXTRACTO PMETIEMPO SOLVENTE EXTRACTO CEPA SOLA

Ono hay crecimiento

no hay crecimiento contaminación

Tabla 5: resultados hora 0.

ENSAYO 1: MUESTRA PME

PLACA 1 PLACA 2 PLACA 1 PLACA 2 PLACA 1 PLACA 2TIEMPO SOLVENTE SOLVENTE

TIEMPO EXTRACTO EXTRACTO TIEMPO CEPA SOLA CEPA SOLA

DILUCION DILUCION DILUCION DILUCION DILUCION DILUCION

2 horas -1 -2 -3 -1 -2 -3 2 horas -1 -2 -3 -1 -2 -3 2 horas -1 -2 -3 -1 -2 -3

0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 INCINC INC 0 0 INC


0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 INCINC INC 0 0 INC


0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 INCINC INC 0 0 INC

24 hrs. -4 -5 -6 -4 -5 -6 24 hrs. -4 -5 -6 -4 -5 -6 24 hrs. -4 -5 -6 -4 -5 -6

INC INC IN INC INC INC INC INC INC IN INC INC INC IN INC INC IN INC

PRUEBA POCITOS #2EXTRACTO PME:

CONCENTRACIÓN RESULTADO20 mg/ml ACUOSO no hay inhibición20 mg/ml ETANOLICO no hay inhibición

CONTROLESH2O no hay inhibiciónETANOL 70% no hay inhibición


C C C CTabla 6: resultados a 24 horas

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Extracto Etanólico de Mucílago de Opuntia Sp