LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL II

LABORATORIO DE ANLISIS INSTRUMENTAL IICAFENA EN BEBIDAS ENERGIZANTESFundamento terico: El mtodo consiste en la determinacin de cafena en muestras de bebidas energticas, para lo cual se realiza una regulacin del pH y posterior precipitacin de las protenas. Finalmente se inyecta la solucin resultante al cromatgrafo lquido de alta eficiencia. La cuantificacin es por curva de calibracin.

Materiales y equipos

Material usual de laboratorio.

Reactivos y soluciones:

Cafena p.a.

Reactivo de Carrez I: Pesar 36 g de hexaciano ferrato de potasio trihidratado y diluir a 1 L

Reactivo de Carrez II: Pesar 72 g de sulfato de cinc heptahidratado y diluir a 1 L

Metanol grado HPLC.

Hidrxido de amonio p.a.

Curva de calibracin: Preparar 100 mL de una solucin de cafena de concentracin 250 ppm.

Curva de trabajo: A partir de la solucin stock y por dilucin preparar la curva de calibracin, tomando como volumen final 100 mL, de las siguientes concentraciones: 4, 8, 20, 40, 60 y 100 ppm.

Procedimiento:

Preparacin de la muestra:

Se toma una alcuota de 30 mL de muestra y se deposita en un vaso de 250 mL

Se aaden 25 mL de hidrxido de amonio concentrado y se deja reposar por 15 minutos.

Se neutraliza la mezcla anterior con cido clorhdrico concentrado hasta bajar el pH a 6,4 +/- 0.2 unidades. Se traspasa la solucin anterior a un matraz de aforo de 250 mL.

Se aaden 10 mL de cada uno de los reactivos de Carrez I y II.

Se enrasa y deja decantar.

Se filtra a travs de papel filtro Watman 1 o equivalente y el filtrado se recoge en un vaso.

Con una jeringa de 3 mL se recoge unos 2 mL de filtrado, se saca la aguja.

Se coloca un filtro Millipore de 0,45 um a la salida del cuerpo de la jeringa y se le coloca la aguja de punta roma del equipo.

Se ambienta el inyector con la solucin y posteriormente se abre la vlvula de la muestra.

Condiciones cromatogrficas:

Flujo: 1,45 mL/min

Temperatura de columna 40C

Lambda del detector: 274 nm.

Fase mvil: 80% agua y 20% metanol.

Columna RP-18.

MZ 2008