Prctica 8.

Frotis sanguneo y tincin de Wright.

Objetivo: Aprender el procedimiento correcto para realizar una extensin sangunea y su coloracin.

Resultado: Tener un frotis sanguneo teido y que ser observado al

microscopio.

Esta tcnica es importante para confirmar o descartar diagnsticos realizados en equipos automticos especialmente en casos de leucemia y otras patologas.

Son varios los mtodos manuales propuestos, practicaremos el que se utiliza 2 portaobjetos.

Material

1) Porta objetos limpios, desengrasados biselados y de extremos romos.

2) Sangre entera en tubos de ensayo

3) Gradilla para tubos de ensayo

4) Rejilla de tincin

5) Colorante de Wright

6) Buffer de fosfatos

8) Agua destilada (de no ser posible, agua potable)

7) Guantes y material de bioseguridad.

Consideraciones

1- Todo el material tiene que estar escrupulosamente limpio. Los portaobjetos

nuevos o usados deben estar desengrasados.

2- Si la sangre se toma de puncin digital no se debe utilizar nunca la primera

gota, y si est en tubo capilar debe contener heparina.

3- Si la sangre se obtuvo por puncin venosa debe tener el anticoagulante

apropiado (EDTA) y realizar el frotis dentro de las 2 primeras horas (evitar

destruccin celular o alteraciones morfolgicas).

4-Las extensiones deben tener un tamao aproximado de las partes del

tamao del portaobjetos, en las que podemos diferenciar cabeza, un cuerpo y

una cola.

5- Dejar secar en un lugar apropiado de forma horizontal.

6. Mantener la identificacin de las muestras. Se recomienda una vez seco el

frotis en un extremo de la cabeza escribir la identificacin correspondiente con

lpiz.

7. Para la tincin tener previstos los tiempos ptimos en los que acta el

colorante y el buffer.

8. Es importante la tincin adecuada para que al momento de observar el frotis

al microscopio se puedan identificar los distintos tipos de leucocitos as como la

morfologa celular.

Procedimiento

Extensin

1. Poner un portaobjetos sobre una superficie horizontal.

2. Depositar la cantidad de sangre necesaria (una o dos gotas) y

aproximadamente a 1cm de uno de los extremos del portaobjetos.

3. Sujetamos con los dedos pulgar e ndice de la mano izquierda el

portaobjetos con la muestra (esto en caso de ser diestros, los zurdos lo harn

al contrario).

4. Para extender la sangre se utiliza otro portaobjeto biselado y de esquinas

romas que sujetndolo con la mano derecha se sita delante de la gota de

sangre de forma que los dos portaobjetos formen un ngulo entre 30 y 45 y

desplazarlo suavemente hacia atrs hasta donde alcance la gota de sangre. Es

importante mantener una velocidad moderada y uniforme en el deslizamiento

procurando que la muestra no llegue hasta el extremo de la placa y se formen

la cabeza, cuerpo y cola.

la cabeza es la parte en la cual hemos apoyado un portaobjetos antes de

hacer la extensin.

el cuerpo representa la mayor parte de la extensin.

la cola corresponde al final de la extensin .

5. Dejar secar en posicin horizontal y revisar que el frotis est en las

condiciones adecuadas, caso contrario repetir.

Tincin Wright

1- Se coloca el frotis secado sobre la rejilla de tinciones, la misma que debe

estar en un lugar seguro y nivelado.

2- Se coloca el colorante de Wright de forma uniforme sobre toda la

extensin, por 4 minutos o de acuerdo al colorante disponible, evitando que se

seque o que se acumule en un solo lugar del portaobjetos.

3-Luego se cubre con una cantidad abundante de buffer y se deja por 7

minutos. Mezclar a travs de movimientos suaves los 2 componentes.

4- Se lava con agua con un chorro continuo y suave, a la vez que por la

parte de atrs del portaobjetos se limpia para eliminar los residuos del

colorante.

5- Se deja secar al aire en posicin vertical con la cabeza del frotis hacia

abajo.