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Ges$on du temps !!!
Western Blot ! ≠ coIP !!!!!!!!!
Ques$on de cours:
Analyse du WB : SET2 est une histone méthyle transférase
qui triméthyle la lysine 36 de l’histone H3
Test d’interac$on protéine-‐protéine in vitro u$lisé afin de savoir avec quelle forme de l’ARNPII (Rbp1) interagit SET2.
SET2 interagit spécifiquement avec RNAPIIPSer2 (càd lorsque le CTD de Rbp1 est phosphorylé sur la sérine 2)
Donc SET2 interagit spécifiquement avec l’ARNPII en élonga$on
Ques$on de cours:
+ +
= 12 points faciles / 20 !!!!
Les cellules cul$vées en présence de glucose : pas d’induc$on du gène Gal1 = PAS DE TRANSCRIPTION de GAL1
RAPPEL DE LICENCE : induc$on transcrip$onnelle par les sucres (maltose, glucose, galactose…)
Les cellules cul$vées en présence de galactose: induc$on du gène Gal1 = TRANSCRIPTION de GAL1
SET2 est localisée plutôt au centre du transcrit GAL1 (amorces 2 et 3 ≠ CDS !!!). La marque épigéné$que (≠ protéine) possède le même profil que SET2.
Corréla$on avec la fonc$on de SET2 : HMTase H3K36me3 (ques$on 2)
Conclusion: SET 2 n’est fixé au locus GAL1 que lorsque ce dernier est transcrit. Il se fixe au centre de la région transcrite (≠CDS).
Or, SET2 se fixe à l’ARNPIIP (Ques$on 2)
Lors de la transcrip$on de GAL1 SET2 se fixe à l’ARNPII et triméthyle H3K36
Lors de la transcrip$on, SET2 « accompagne » l’ARNPII en élonga$on lorsque le CTD celle-‐ci est phosphorylée sur la serine 2 de Rpb1.
SET2 va ensuite triméthylée la lysine 36 de l’histone H3.
Hypothèse: cefe marque épigéné$que ac$vatrice permefrait le bon déroulement de la phase de l’élonga$on de la transcrip$on en rendant les histones plus « fluides » lors du passage de l’ARNPII.
Cours
Cours
ATTENTION
• En Master ne plus confondre transcrip7on et traduc7on !!!
• Ne pas confondre méthyla7on des histone (MPT) et méthyla7on de l’ADN !!!
• No7on d’ORF/CDS/locus/gène/ARNm …