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5/28/2018 Guia de Seleccion de Columnas Agilent Sorbax
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Analice eficientemente suscompuestos ms desafiantes
Entregue rpidamente
resultados de alta calidad.
Gua de seleccinde columnas AgileZORBAX para HPL
5/28/2018 Guia de Seleccion de Columnas Agilent Sorbax
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Aqu est un nico punto de
informacin para la seleccinde columnas LC.
Cmo aumentar la productividad mientras los recursos permanecen
constantes?
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muestras complejas y altas cargas de trabajo?
Qu columnas aseguran la solidez del mtodo para la transferencia a
nuestra fbrica?
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que combina una amplia oferta de columnas LC con un consejo experto que puede ayudarle
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consejos para el desarrollo de mtodos... y sugerencias de especialistas del mercado.
Y encontrar pruebas de que, a cualquier nivel de pH, las columnas ZORBAX desarrollan
superior reproducibilidad y alta resolucin.
Maximice su productividad!Nuestra gua fcil de utilizar recorta el proceso de seleccin de columnas a tres pasos:
1. Estrecha la bsqueda utilice los grficos de las pginas 6-9 para elegir la columna adecuada para sus necesidades.
2. Siga la para encontrar sugerencias sobre cualquier tema, desde columnas personalizadas a soporte tcnico.
La mayora de las sugerencias tambin pueden encontrarse en www.agilent.com/chem/lccolumntips.
3. Prepare su pedido, utilizando las referencias y guas de compra localizadas junto a las descripciones de cada columna.
Tambin puede realizar pedidos en lnea en www.agilent.com/chem/store .
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Tabla de Contenidos
Diagrama de flujo de seleccin de columnas HPLC ............................................................................................................6
Diagrama de flujo para la seleccin de columnas HPLC de fase reversa ZORBAX............................................................8
Gua rpida de fases ligadas para fase inversa ZORBAX ....................................................................................................7
Directrices bsicas para la eleccin de una columnas HPLC de fase reversa..................................................................10
Gua rpida de categoras USP para columnas HPLC .......................................................................................................12
Desarrollo de mtodos HPLC en fase reversa ...................................................................................................................13
Gua de seleccin de cartuchos.........................................................................................................................................18
ZORBAX Eclipse Plus..........................................................................................................................................................20ZORBAX Eclipse XDB .........................................................................................................................................................26
ZORBAX StableBond de 80 ............................................................................................................................................33
ZORBAX Rx ........................................................................................................................................................................39
ZORBAX Extend-C18 de 80 ...........................................................................................................................................41
ZORBAX Bonus-RP.............................................................................................................................................................45
Kits para el desarrollo de mtodos ZORBAX .....................................................................................................................49
Kits de validacin de mtodos ZORBAX ............................................................................................................................50
Columnas de fase reversa ZORBAX Original .....................................................................................................................51
Columnas de fase reversa ZORBAX Original .....................................................................................................................52
ZORBAX de resolucin rpida y alto rendimiento 1,8 m.................................................................................................57
Columnas ZORBAX de resolucin rpida de 3,5 m.........................................................................................................64
Columnas ZORBAX de ahorro de disolvente .....................................................................................................................68
ZORBAX MicroBore (d.i. de 1,0 mm) ................................................................................................................................71
Capilares y nano ZORBAX .................................................................................................................................................73
ZORBAX PrepHT.................................................................................................................................................................80
Columnas Agilent Prep LC .................................................................................................................................................84
Columnas quirales Ultron...................................................................................................................................................87
ZORBAX StableBond de 300 ..........................................................................................................................................94
ZORBAX Extend-C18 de 300 .........................................................................................................................................99
ZORBAX Poroshell............................................................................................................................................................102
Columnas para anlisis de aminocidos ZORBAX Eclipse (AAA)....................................................................................105
Columnas de filtracin en gel ZORBAX GF-250 y GF-450..............................................................................................107
Productos del catlogo ......................................................................................2
Pautas para la seleccin de columnas HPLC ZORBAX................................5
Columnas ZORBAX para HPLC analtica ......................................................19
Columnas HPLC para aplicaciones especiales............................................55
Columnas de intercambio inico ZORBAX: SAX y SCX ...................................................................................................111
Columnas ZORBAX para cromatografa bioanaltica..................................89
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Las nuevas columnas cumplen con
nuestro compromiso de brindar una mayorproductividad y optimizar el rendimientopara cidos, bases y neutros.
Tanto si lleva a cabo cromatografa convencional como ultrarpida, separacin de biomolculas
o anlisis complejos de compuestos bsicos, confe en las columnas de Agilent, que ofrecen
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Ahora Agilent ha lanzado dos interesantes nuevas lneas de columnas que le ayudarn a
afrontar sus dificultades relativas a tiempos de entrega cortos, cargas de trabajo rgidas y
menos personal:
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Eclipse Plus se mantienen en la primera lnea de la industria y estn diseadas para ayudarle
a conseguir excelentes formas de pico y resolucin.
Las nuevas columnas LC ZORBAX de 1,8 m de resolucin rpida y altorendimiento (RRHT) y 600 bares le permiten incrementar la velocidad de las separaciones
sin que se vea afectada la calidad de sus resultados y sus resoluciones.
Recuerde, cuando elige una columna LC ZORBAX Eclipse, lo que obtiene es mucho ms que
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En Internet, por telfono o en persona, Agilent le ayuda a solucionar los problemas que
puedan disminuir su productividad y a corregir sus resultados.
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que los LC convencionales con el sistema deresolucin rpida de Agilent serie 1200.
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de Agilent, la serie 1200 de Agilent le ayudar a producir sus resultados con ms eficiencia
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Utilice toda la capacidad de aumento de laproductividad del sistema de resolucin rpida
de la serie 1200.
Las columnas ZORBAX de resolucin rpida y alto
rendimiento proporcionan una eficiencia extremada-
mente elevada tanto en longitudes de columna cortas
como largas. No obstante, para sacar el mximo
partido a dicha eficiencia, debe dar un uso ptimo
al sistema HPCL de la serie 1200 con la lmpara de
larga duracin y las celdas de flujo de bajo volumen
equipadas con etiquetas RFID de Agilent para obtener
una trazabilidad de datos sin ambigedades.
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Familia de columnas de alto rendimiento
ZORBAX Eclipse LC de AgilentEliminan las complicaciones de prueba y error,adems de aumentar la velocidad de separacin,la reproductibilidad y la escalabilidad de mtodos.
Las columnas Eclipse LC incluyen doble desactivacin y un proceso de ligado nico. Con ello
se garantiza la consistencia entre lotes, se aumenta la duracin de las columnas y se posibilita
el mantenimiento de mtodos a largo plazo. Adems, las columnas Eclipse LC se basan entecnologa de partculas duraderas para lograr una ptima fiabilidad cromatogrfica a largo
plazo y una mayor duracin de la columna.
Las columnas Eclipse LC son la nica familia de columnas escalables
(de 1,8 m a 7 m) que permiten...
Minimizar la presencia de colas y maximizar la simetra de pico para bases, cidos y neutros.
Desarrollar y transferir mtodos sin necesidad de revalidacin.
Ofrecer resultados reproducibles en un amplio rango de pH y en diferentes condicionesde separacin.
Realizar las transformaciones de condiciones analticas a preparativas (o de mtodos
convencionales a mtodos ultrarrpidos) con tamaos de partculas de 1,8 m a 7 m. Procesar muestras hasta 20 veces ms deprisa y mejorar la resolucin hasta en
un 60% con columnas ZORBAX de resolucin rpida y alto rendimiento de 600 bares.
Desde el anlisis bsico a los complejos desarrollos de mtodos. Las columnas ZORBAX
Eclipse LC pueden mejorar la productividad, adems de generar resultados reproducibles
en una amplia gama de aplicaciones y condiciones.
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Estrategias de desarrollo de mtodos y seleccin de columnas HPLC
Para facilitar la seleccin de la columna que mejor se adapta a una determinada aplicacin,
hemos incluido el siguiente material de referencia. De ese modo, podr maximizar su ms
valioso recurso: el tiempo.
Diagrama de flujo de seleccin de columnas HPLCEncontrar instrucciones detalladas sobre la eleccin de una columna inicial para el desarrollo
de mtodos, segn factores cuantificables como el analito y la fase mvil. Le indicaremos la
pgina donde se encuentra la columna que se ajusta a sus necesidades.
Directrices bsicas para la eleccin de una columnas HPLC de fase reversa
Le mostraremos cmo seleccionar la mejor columna para molculas pequeas y anlisis de
protenas y pptidos, de acuerdo con factores como la configuracin de columna y la fase ligada.
Gua rpida de categoras USP para columnas HPLC
En esta seccin se describen de manera concisa y clara las categoras de la Farmacopea
de Estados Unidos (USP) para la familia de columnas ZORBAX de Agilent, incluidas nuestrasnuevas columnas HT de resolucin rpida y Eclipse Plus con tamaos de partculas pequeas.
De ese modo podr seleccionar con mayor facilidad las columnas que se ajustan a los estn-
dares y las monografas de USP.
Desarrollo de mtodos HPLC en fase reversa
La resolucin cromatogrfica entre dos o ms picos depende de la eficiencia, la selectividad
y la retencin de la columna, tres factores afectados por el pH. En la presente seccin se
describe una estrategia de desarrollo de mtodos basada en el cambio del nivel de pH de la
fase mvil.
Pautas para la seleccin de columnas
HPLC ZORBAX
5Para pedidos en lnea www.agilent.com/chem/store
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Seleccin de columnas
El siguiente diagrama constituye una gua para la seleccin de la columna a utilizar en su anlisis. Siga las indicaciones referentes alanalito y a la fase mvil. A la derecha encontrar la pgina donde podr consultar las caractersticas de la columna seleccionada.
Consulte el Catlogo Fundamental de Cromatografa 2007-2008 si desea obtener una lista completa de columnas y consumibles de LC.
Adaptacin autorizada de Practical HPLC Methodology and Applications, Brian A. Bidlingmeyer, John Wiley & Sons, Inc., New York, p. 109
Muestra
Peso molecular2.000
Soluble en disolventeorgnico
Soluble en agua
Soluble en disolventeorgnico
Soluble en agua
Soluble en hexano
MeOH yMeOH : H2O
o ACN yACN : Soluble H
2
O
Soluble en THF
No inica
Inica
Modo de fase normalcon slice sin tratar
Modo de fase normalcon slice tratada
Modo de fase reversa
con slice tratada
Permeacin en gel (molcula pequea)
Modo de fase reversacon slice tratada
Modo de fase reversa con fase ligadautilizando ionizacin controlada
Modo de fase reversa con fase ligada
utilizando un par-inico
Modo de fase reversa con slice sin tratar
Modo de intercambio inico
Cromatografa en gel permeable
Cromatografa de filtracin en gel
Modo de intercambio inicocon material de poro ancho
Modo de fase reversacon material de poro ancho
vea en laspginas 52-53
vea en laspginas 52-53
vea en la
pgina 19
vea en lapgina 19
vea en lapgina 19
vea en la
pgina 19
vea en lapgina 51
vea en lapgina 107
vea en lapgina 111
vea en lapgina 94
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
Gua rpida de fases ligadas para fase inversa ZORBAX
Nuevas columnasZORBAX RP-HPLC Usos y aplicaciones recomendadas Pgina No.
Eclipse Plus Excelente primera opcin para el desarrollo de mtodos Larga duracin desde pH 2-9 para separaciones fiables de compuestos bsicos, acdicos y
neutros Mejor forma de pico con compuestos bsicos Alta eficacia y resolucin con columnas de 1,8, 3,5 y 5 m Pruebas QA/QC para mayor reproducibilidad a largo plazo
2021
Eclipse XDB Cuatro opciones de selectividad para el desarrollo flexible de mtodos Alto rendimiento en un amplio rango de pH: pH de 2 a 9 Buena forma de pico para especies cidas, bsicas y neutras Larga duracin, con ligado extradenso y doble desactivacin Separaciones rpidas, ultrarrpidas y de alta resolucin con columnas de 1,8 y 3,5 m Seleccionable desde columnas capilares a preparativas
26
StableBond (SB) Compuestos bsicos, cidos y neutros Estabilidad excepcional a pH bajo Utilizable a altas temperaturas (hasta 90 C para C18, 80 C para C8, C3, Fenilo, CN y Aq)
y bajo pH como herramienta de selectividad adicional Amplia seleccin de fases estacionarias para distinta selectividad (C18, C8, C3, CN, Fenilo, Ac) Utiliza fases mviles para LC/MS con cido frmico, cido actico o TFA Utiliza fases mviles con TFA para la separacin de protenas y pptidos Separaciones rpidas usando columnas de 1,8 y 3,5 m
33
ZORBAX Rx Separacin general de compuestos bsicos, cidos y neutros a bajo pH con selectividaddiferente a la de las columnas SB
Rx-C8 es la misma que SB-C8
39
Bonus-RP Separacin de compuestos bsicos en fases mviles con mayor proporcin acuosa Separacin general de compuestos bsicos, cidos y neutros en los rangos de pH medio o
bajo; especialmente estable a pH bajo Separacin de pptidos con distinta selectividad Separaciones rpidas utilizando columnas de 3,5 m
45
Extend-C18 Separacin de compuestos bsicos por encima de su pKa en forma de base libre;separacin de compuestos bsicos, cidos y neutros a pH alto: hasta 11,5
Utiliza hidrxido amnico como fase mvil aditiva para LC/MS de pequeas molculas opptidos
Separacin en los rangos de pH alto, medio y bajo con cambios de selectividad Separaciones rpidas utilizando columnas de 3,5 m
41
Columnas ZORBAX originales Usos y aplicaciones recomendadas Pgina No.
ZORBAX Separacin general de compuestos bsicos, cidos y neutros a bajo pH con selectividaddiferente a la de las columnas SB; mayor nmero de silanoles activos que SB
Separacin en "modo mixto" a valores de pH ms neutros
51
ZORBAX ODS Classic(sin desactivar)
Separacin general de compuestos bsicos, cidos y neutros a medio rango a pH bajo conselectividad diferente a la de las columnas SB o XDB
51
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Diagrama de flujo para la seleccin de columnas HPLC de
fase reversa ZORBAXPara molculas grandes y pequeasLa mayora de los cromatografistas utilizan HPLC de fase reversa como una de las principales tcnicas de anlisis. HPLC de fase reversa sirvepara analizar compuestos tanto inicos como no inicos. Por lo tanto, este diagrama de flujo para la seleccin de columnas ZORBAX sefocalizar en columnas de fase reversa. Para seleccionar ms fcilmente una columna de fase reversa para el desarrollo de mtodos demolculas grandes y pequeas, siga el esquema descrito en estas pginas.
Este diagrama de flujo aporta informacin sobre la eleccin de una columna inicial para el desarrollo de mtodos de muestras de molculaspequeas, protenas y pptidos, al tiempo que recoge decisiones sobre la fase ligada y la configuracin de la columna.
La eleccin del tamao del poro de relleno se basa, en primer lugar, en el tamao de las molculas que vayan a analizarse. Las molculaspequeas tpicas pueden difundir fcilmente la entrada y salida de rellenos de poros de 80 a 120 , pero los pptidos y las protenas no pueden.
Por esta razn, se recomienda que utilice rellenos de 300 de tamao de poros (300SB) para condiciones isocrticas de separaciones degradientes de pptidos y protenas.
Se recomienda una C18 como fase ligada inicial de columna para la mayora de las muestras, ya que maximiza la retencin desde compuestosmoderadamente polares hasta compuestos apolares. Deberan considerarse fases de cadenas ms cortas si no puede optimizarse la resolucin con
una fase C18 o si est analizando protenas ms grandes.
El dimetro de la columna define cunto material (masa) se puede inyectar en una columna; cuanto menor sea el dimetro, menor ser lacantidad de material que se puede inyectar manteniendo una buena forma de pico. Las columnas de menor dimetro proporcionan mayor
sensibilidad y, por lo tanto, se utilizan habitualmente para LC/MS y aplicaciones con muestra limitada.
Tipo decolumna
Dimetrointerior(mm)
Carga demuestra(aprox.) Flujo normal
Mayorsensibilidad Aplicaciones
Analtica 4.6 0,1-1,5 mg 0,5-3 ml/min Separaciones estndar
Ahorro de disolvente 3.0 150-500 ug 0,3-1,5 ml/min + Economiza diso lvente, usa instrumentos HPLC estndarNarrowBore (de dimetro estrecho)
2.1 50-120 ug 0,1-0,5 ml/min ++ Alta sensibilidad, muestra limitada, LC/MS, economizar disolvente
Microbore 1.0 10-50 ug 10-100 l/min ++++ Alta sensibilidad, muestra limitada, LC/MS
Capilar 0.5, 0.3 1-10 ug 1-15 l/min +++++ Muy alta sensibilidad, LC/MS, pptidos y protenas
Nanocolumna 0.1, 0.075 100-200 ng 200-500 nl/min ++++++ Muy alta sensibi lidad, LC/MS, pptidos y protenas
Semiprep. 9.4 1-10 mg 5-10 ml/min mg separaciones preparativas
Preparativa 21.2 20-250 mg 20-60 ml/min Cientos de miligramos hasta 1 gramo
Molculas pequeasPM < 2.000 Molculas grandesPM > 2.000
Tamao de poro de relleno 300
Eclipse Plus C18 Fase Ligada inicial de columna StableBond 300SB-C18
4,6 mm Dimetro de columna 4,6 mm
De 80 a 120
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
Opciones de partida para columnas
Molculas pequeasPM < 2.000
Molculas grandesPM > 2.000
5 m Tamao de partcula porosa estndar 5 m
Para anlisis convencionales de molculas pequeas y grandes, el tamao estndar de partcula es de 5 m. No obstante, hay disponiblestamaos de partcula ms pequeos, los cuales proporcionan mayor eficacia y resolucin. Tambin los hay disponibles en columnas de longitudes
cortas.
Tamaos de partculas de anlisis rpidos
Resolucin rpida de 3,5 mHT de resolucin rpida de 1,8 m
Las partculas de resolucin rpida de 3,5 m proporcionan un 60%ms de eficiencia que las partculas de 5 m, mientras que laspartculas HT de resolucin rpida de 1,8 m proporcionan un200% ms de eficiencia. Las columnas ms cortas se pueden
utilizar para reducir de manera significativa el tiempo de anlisis demolculas pequeas.
Resolucin rpida de 3,5 mPoroshell 5 m
Para pptidos, las partculas de resolucin rpida de 3,5 m sepueden utilizar con columnas ms cortas para anlisis de gradiente
ms rpidos y de alta resolucin. Pero para las protenas, lascolumnas Poroshell, con un ncleo slido y una envoltura porosa,
proporcionan los anlisis ms rpidos.
150 mm Longitud de columna 150 mm
La longitud de columna convencional es de 150 mm o 250 mm paraalta resolucin con partculas de 5 m. Este es un buen punto de
inicio de un anlisis normal porque proporcionar una altaresolucin en un anlisis de 20-30 minutos. Para anlisis rpidos, sedeben emplear columnas ms cortas (75 mm y 50 mm) con
partculas menores (3,5 m).
Para digestiones de protenas y pptidos, 150 mm es tambin unabuena longitud de partida para la columna. El tiempo de gradiente
normal en una columna de esta longitud ser de 30-60 minutospara anlisis de alta resolucin. Para anlisis rpidos, se debenemplear columnas ms cortas (50 mm) con
partculas menores 3,5 m).
Molculas pequeas
Anlisis estndarEclipse Plus C18
4.6 x 150mm, 5m959993-902
Anlisis rpidosResolucin rpida
Eclipse Plus C184.6 x 150mm, 5m
959993-902
HT de resolucinrpida, 600 baresEclipse Plus C18
4.6 x 50mm, 1.8m
959941-902
Molculas grandes
Anlisis estndarZORBAX 300SB-C18
4.6 x 150mm, 5m883995-902
Anlisis rpidosResolucin rpida
ZORBAX 300SB-C184.6 x 50mm, 3.5m
865973-902
ZORBAX Poroshell300SB-C18
2.1 x 75mm, 5m
660750-902
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Gua de columnas y fases mviles:
fase reversaLas columnas de HPLC constan de dos partes, el relleno qumico de la columna y su soporteo hardware. Tenga en cuenta primero el peso molecular de su analito para seleccionar eltamao de poro y despus una fase ligada. Consulte las secciones de las columnas analticasy bioanalticas para obtener las mejores fases ligadas para molculas pequeas y grandes.Para seleccionar el hardware de la columna y el tamao de partcula, consulte la seccin detamaos de columna y separaciones rpidas, incluidas las columnas de resolucin rpida y HTde resolucin rpida, as como las columnas de ahorro de disolvente y capilares y las nuevascolumnas PrepHT.
Seleccin del tamao de poroSeleccione un relleno de columna de poro pequeo (60-100 ) si el peso molecular del solutoes inferior a aproximadamente 5.000. En caso contrario, utilice un relleno de columna con
300 de tamao de poro.
Seleccin del tamao de partculaEl tamao de partcula estndar para columnas HPLC es 5 m, aunque est aumentando eluso de las de 3,5 m. Si es necesario realizar anlisis de alta velocidad o mayor resolucin,pueden utilizarse partculas de 1,8 m y 3,5 m. Las columnas ms cortas con estas partculasconsiguen separaciones de alta resolucin ms rpidas, con tamao de partcula de 1,8 men columnas HT de resolucin rpida, ofreciendo la ms alta eficacia. El tamao de partculade 3,5 m opera con una presin de rutina y puede utilizarse en todos los LC. Las columnasRRHT cortas (de 50 mm e inferiores) de 1,8 m pueden utilizarse en LC estndares optimizados,mientras que las ms largas exigen un LC de presin superior (un que soporte presionessuperiores a 400 bares).
Configuracin de la columna
Los tamaos de columna ms habitualmente recomendados para el desarrollo de mtodosanalticos son 4,6 x 150 mm y 4,6 x 75 mm. Si necesita ms resolucin, utilice una columnade mayor longitud, 4,6 x 250 mm, o una columna de la misma longitud con partculas demenor tamao. Durante el desarrollo del mtodo, seleccione el dimetro interno de columna(por ejemplo, 2,1 o 3,0 mm) que mejor responda a objetivos de aplicacin adicionales (porejemplo, sensibilidad o consumo de disolvente) o a la compatibilidad requerida con ciertostipos de instrumento (capilares, nano o preparativos).
Tipo de slice y fase ligada
Tipo de sliceLas columnas de fase reversa ZORBAX utilizan dos tipos de microesferas de slice porosa,
ZORBAX SIL original y ZORBAX Rx-SIL. Esta ltima utiliza una slice muy purificada y menoscida que la primera. La slice menos cida implica menos potencial para interaccin entregrupos de analitos y silanol en la superficie de slice, especialmente si los solutos sonbsicos y contribuye a una forma de pico mejorada. Para desarrollar un mtodo nuevo,recomendamos utilizar productos de fase reversa basados en ZORBAX Rx-SIL (Eclipse,StableBond etc.). Sin embargo, se han desarrollado muchos y excelentes mtodos encolumnas de fase reversa basadas en ZORBAX SIL, por lo que seguimos fabricando estosproductos de elevada calidad y fiabilidad.
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
pH y fase mvil
La seleccin de fase mvil para un sistema de fase reversa comienza con la eleccindel modificador orgnico. Las diferencias de selectividad y la retencin de la muestravaran significativamente entre las fases mviles que contienen acetonitrilo, metanol ytetrahidrofurano (THF). La solubilidad de la muestra suele variar en estos disolventes,dictaminando la utilizacin de disolventes especficos. La deteccin UV a determinadaslongitudes de onda no es posible con algunos modificadores (por ejemplo, metanol a 200 nm).
Tanto el pH como la fuerza inica de la porcin acuosa de la fase mvil son parmetrosimportantes para desarrollar mtodos robustos insensibles a pequeas variaciones de lascondiciones. Con compuestos inicos, la retencin de especies tpicas presenta cambiossignificativos segn el pH. Es muy importante controlar el pH en tales sistemas de fase reversa
para estabilizar la retencin y la separacin de las bandas. Un rango de pH entre 2 y 4 sueleofrecer las condiciones de retencin ms estables frente a pequeos cambios de pH y es elrecomendado como punto de partida del desarrollo de mtodos para la mayora de lasmuestras, incluidos los compuestos bsicos y los cidos dbiles tpicos.
Fase estacionaria Dimensiones de columna
Tipo desuperficie
Tamao deporo
Tamao departcula
Longitud Dimetrointerno
Columna para HPLC
Propiedades qumicasEstabilidad qumica/Sensibilidad
Factor de retencin
Propiedades fsicasEficienciaVelocidad
Fase ligadaUna buena opcin de fase ligada de partida es C18 o C8. Si los solutos de la muestra no seseparan adecuadamente en stas, utilice las columnas de CN y fenilo. stas podran ofrecerlediferencias significativas en selectividad frente a las fases alqulicas lineales a la hora deefectuar la separacin.
En general, los solutos grandes, como las protenas, se separan mejor en columnas de fasereversa de cadena corta (C3, CN) y los pptidos y las molculas pequeas en columnasde cadenas ms largas (C8, C18). En muchos casos, no obstante, estas premisas bsicasconvencionales no se cumplen. Por ejemplo, los pptidos tambin se pueden separareficazmente en columnas de cadena corta, mientras que los pptidos hidrofbicos puedenpresentar mejor recuperacin en fases de cadena ms larga. Por ello, es mejor seleccionarinicialmente una fase intermedia del espectro hidrofbico (por ejemplo, C8) y despuscambiar a una fase ms hidrofbica o hidroflica dependiendo de los resultados inicialesy de las propiedades de solubilidad de la muestra.
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Nomenclatura USP
La Farmacopea de Estados Unidos (USP) es una fuente estndar de numerosos mtodos farmacuticos. Especifica las columnas por materialde relleno ms que por fabricante. La USP ha actualizado sus definiciones de L1. A continuacin, incluimos las definiciones ms recientes ycolumnas aplicables que se pueden encontrar en esta gua de seleccin de columnas. Las columnas de resolucin rpida y alto rendimiento(RRHT) se encuentran ahora en las categoras L1, L7 y L11.
USPNomenclatura Materiales de relleno USP Columnas
Tamaode partcula(m)
Tamaodeporo ()
L1 Octadecil silano ligado qumicamente a partculasde slice porosa o a micropartculas cermicas,de 1,5 a 10 m de dimetro
ZORBAX Eclipse Plus C18ZORBAX Eclipse Plus XDB-C18ZORBAX StableBond SB-C18ZORBAX Extend-C18ZORBAX Rx-C18ZORBAX ODSZORBAX ODS Classic
1.8, 3.5, 5, 7
3, 55
95808080807070
L3 Partculas de slice porosa, de 5 a 10 m dedimetro
ZORBAX SilZORBAX Rx-SIL
55
7080
L7 Octil silano ligado qumicamente a partculas deslice totalmente porosa, de 1,5 a 10 m dedimetro
ZORBAX Eclipse Plus C8ZORBAX Eclipse XDB-C8ZORBAX SB-C8ZORBAX Rx-C8ZORBAX C8
1.8, 3.5, 5, 7
3.5, 53, 5
9580808070
L8 Una capa esencialmente monomolecular deaminopropil-silano ligada qumicamente a unsoporte de gel de slice totalmente porosa, 10m de dimetro
ZORBAX NH2 5 70
L10 Grupos nitrilo ligados qumicamente a partculasde slice porosa, de 3 a 10 m de dimetro
ZORBAX Eclipse XDB-CNZORBAX SB-CNZORBAX CN
3.5, 53.5, 53, 5
808070
L11 Grupos fenilo ligados qumicamente a partculasde slice porosa, de 1,5 a 10 m de dimetro ZORBAX Eclipse XDB-PhenylZORBAX SB-PhenylZORBAX Phenyl
3.5, 51.8, 3.55
808070
L13 Trimetilsilano ligado qumicamente a partculasde slice porosa, de 3 a 10 m de dimetro
ZORBAX TMS 5 70
L14 Gel de slice de 10 m de dimetro con unrevestimiento ligado qumicamente, fuertementebsico de amonio cuaternario de intercambioaninico
ZORBAX SAX 5 70
L20 Grupos dihidroxipropano ligados qumicamente apartculas de slice porosa, de 3 a 10 m dedimetro
ZORBAX GF-250 4 150
L33 Relleno que tiene la capacidad de separarprotenas por su tamao molecular en un rangode 4.000 a 400.000 daltons Es esfrico, basadoen slice y tratado para proporcionar granestabilidad a distintos pH
ZORBAX GF-250 4 150
L35 Relleno de slice esfrica estabilizada concirconio con una fase ligada monocapamolecular hidroflica (tipo diol)
ZORBAX GF-250 46
150
L56 Propil silano ligado qumicamente a partculas deslice totalmente porosa, de 3 a 10 m dedimetro
ZORBAX SB-C3 3.5, 5 80
L57 Una protena de reconocimiento quiral,ovomucoide, ligada qumicamente a partculasde slice, unos 5 m de dimetro, con un tamaode poro de 120 ngstroms.
Ultron ES-OVM 5 120
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
Desarrollo de mtodos en el rango de pH 1-12
Figura 1: Tres regiones de pH paraseparaciones HPLC de compuestos bsicosEsta figura muestra el comportamiento deretencin de un analito bsico en relacincon el pKa y el pH. El pKa del analito es 6,5
Bajo pH < 3 Regin A pH medio 7 Regin B pH alto > 9 Regin C
Comience el desarrollo del mtodo a un pHbajo, en el que los silanoles de la columnaRP-HPLC estn protonados. As se minimizanlas colas de pico al eliminar las interaccionessilanol/base.
A pH bajo, los compuestos bsicos estn
cargados positivamente y puede reducirse suretencin. Los compuestos cidos pueden estar
protonados y presentar mayor retencin. Los tiempos de retencin son normalmente
estables frente a pequeos cambios en elpH, generando un mtodo robusto.
Los aditivos de fase mvil voltiles, como elcido frmico o el trifluoroactico (TFA), seutilizan a menudo a bajo pH con LC/MS.
Desarrolle mtodos a pH como mnimo 1unidad por encima o por debajo del pKapara minimizar los cambios en la retencincon pequeos cambios del pH.
Algunos grupos SiOH de la superficie deslice se convierten en SiO por encima de
pH 4 a 5; pueden producirse interaccionesque den lugar a colas. Minimice las interacciones seleccionando
una columna bien diseada y desactivadacon aditivos como TEA (trielamina), (menosaconsejable) o utilizando fases "ligadaspolares".
La ruptura de la slice se evita mediante unaqumica de enlace innovadora, una fuertedesactivacin y el uso de Rx-SIL.
En esta regin, los compuestos bsicospueden encontrarse en su forma de baselibre.
Es probable que se d una mayor retencin yresolucin de los compuestos bsicos.
La retencin cambia poco en esta regin, por
lo que pueden desarrollarse mtodosrobustos. La ruptura de la slice se evita mediante una
innovadora qumica de columna bidentada,una desactivacin fuerte, el uso de Rx-SIL yuna fase mvil ptima.
El hidrxido amnico es un excelentemodificador de fase mvil voltil a pH alto.
La resolucin cromatogrfica entre dos o ms picos depende de tres factores: eficiencia de la columna,selectividad y retencin. Con los analitos ionizables, bases y cidos, todos estos factores cambiandrsticamente con el pH. Por ejemplo, la retencin puede mejorar cambiando el pH de separacin,de forma que se separen los analitos en su forma no ionizada. Los cambios en el pH de la fase mviltambin mejoran la eficiencia de la columna ya que puede modificarse la ionizacin del analito y la delos silanoles residuales. As se minimizan las interacciones secundarias entre los analitos y la superficiede slice que provocan una degradacin de la forma del pico. Para lograr una resolucin ptima esnecesario tambin modificar el pH de la fase mvil. La siguiente estrategia de desarrollo de un mtodoexplica cmo se realiza esto con una mayor vida til de la columna.
Las tres regiones generales para separaciones cromatogrficas son las de pH bajo, medio y alto, talcomo se definen en la Figura 1. Esta figura destaca las ventajas de realizar separaciones de analitosionizables en cada regin de pH. El desarrollo del mtodo se desarrolla investigando las separacionescromatogrficas primero a pH bajo y, seguidamente, a pH ms elevado hasta lograr unos resultados
ptimos. Existe la columna perfecta para cada regin de pH.
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Desarrollo inicial de mtodos a pH bajo (pH 2-3)Con tantas opciones de columna disponibles, cmo saber por dnde empezar el desarrollode mtodos? El punto de partida recomendado para el desarrollo de mtodos es el uso deuna fase mvil tamponada a pH bajo, en torno a pH 2-3. El uso de una fase mvil de pHbajo proporciona con mas frecuencia las mejores formas de pico para compuestos bsicosen columnas basadas en slice. A pH bajo, los silanoles de la slice estn completamenteprotonados, por lo que los compuestos bsicos con carga positiva no interaccionan de formanotoria. El resultado es una buena forma de pico. Muchos compuestos cidos no estncargados, lo que maximiza su retencin a pH bajo. Estas observaciones suponen ventajasclave para el desarrollo de mtodos a pH bajo.
Para el trabajo analtico estndar, comience el desarrollo de mtodos con acetonitrilocomo modificador orgnico de la fase mvil y tampn fosfato 20-50 mM (pH 2-3) comocomponente acuoso para aplicaciones no LC/MS. Esas condiciones proporcionan el buencontrol del pH necesario para obtener los anlisis ms reproducibles de compuestosionizables. Para aplicaciones LC/MS el cido frmico o TFA son aditivos de fase mvil
buenos para pH bajo.
Comience con ZORBAX Eclipse Plus para obtener la mejor forma de picoSeleccione inicialmente columnas ZORBAX Eclipse Plus C18 o C8 para el desarrollo demtodos a pH bajo. Las columnas Eclipse Plus son la ltima incorporacin a la familia Eclipse,y utilizan tecnologas mejoradas de slice y de unin para conseguir una mejor forma de picosde compuestos bsicos. Las columnas Eclipse Plus se pueden utilizar a pH 2-9, lo que aportaflexibilidad al desarrollo de mtodos. Son muy estables hasta pH 2, lo que las convierte encandidato ideal para el desarrollo inicial de mtodos.
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
Optimice los disolventes y las fases ligadas a bajo pHLos pasos iniciales del desarrollo de mtodos pueden conducir a una separacin satisfactoriade forma muy rpida. Pero, si se necesita una mayor optimizacin, puede sustituirse elacetonitrilo por metanol o tetrahidrofurano y volver a optimizar la separacin. Tal vez as seconsiga ya una solucin satisfactoria; no obstante, si an se desea una mayor optimizacinde la selectividad, es posible cambiar la fase ligada de la columna.
A bajo pH, hay muchas opciones de fase ligada disponibles para optimizacin. Se incluyenlas fases de Eclipse Plus, as como la familia Eclipse XDB con C18, C8, Phenyl y CN. Lasopciones alternativas incluyen seis fases ligadas StableBond diferentes: SB-C18, SB-C8,SB-Phenyl, SB-CN, SB-C3 y SB-Aq.
A bajo pH, puede ser necesario mejorar la retencin de compuestos cidos. Para esassituaciones, rebaje an ms el pH, hasta pH 1-2, y utilice columnas StableBond. Esascolumnas proporcionan la mayor estabilidad a pH muy bajo y muchas opciones deselectividad para obtener separaciones con la mxima resolucin.
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Desarrollo de mtodos a pH medio (4-9)ZORBAX Eclipse Plus
Algunas muestras pueden no resolverse a pH bajo o presentar mejor solubilidad y estabilidad
a pH medio. Mientras se utiliza la columna Eclipse Plus C18, puede usarse el rango de pHmedio para el desarrollo de mtodos. La columna Eclipse Plus es estable hasta pH 9, por loque es igualmente fiable a pH medio. Las columnas de doble desactivacin presentan dosventajas clave: forma de pico ptima a bajo y medio pH, junto con suficiente densidad deligado para proteger la columna frente a la degradacin de slice a pH 6-9.
A pH medio, los compuestos bsicos (por ejemplo, aminas) pueden tener una carga positiva ylos silanoles de la superficie de la slice pueden tener carga negativa. Por lo tanto, la proteccinde tantos silanoles como sea posible conduce a una mejor forma de pico a pH medio. Esoconvierte a la columna Eclipse Plus C18 en la mejor opcin de partida para uso a pH medio.La primera opcin para modificador de la fase mvil a pH 7 suele ser el tampn fosfato,debido a su rango de tamponado de pH 6,1-8,1. Una segunda opcin para pH medio es eltampn acetato, que tampona en el rango de pH 3,8-5,8 y cuya volatilidad lo convierte enun buen candidato cuando se requiere compatibilidad con LC/MS.
Selectividades alternativas: ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl, CN yBonus-RPEl proceso de desarrollo de mtodos a pH medio reproduce el proceso a pH bajo, con laoptimizacin del modificador orgnico y la seleccin de una fase ligada alternativa si no sealcanza la resolucin necesaria tras ese paso. Las fases ligadas alternativas a pH medioson las Eclipse XDB-Phenyl, Eclipse XDB-CN y Bonus-RP. Proporcionan selectividades muydiferentes para muchas muestras, siguindose de nuevo el proceso de desarrollo de mtodos.La columna Bonus-RP cuenta con un grupo de amidas polar incluido que ofrece unaselectividad diferente para muchas muestras, proporciona una ptima forma de pico paracompuestos bsicos y permite utilizar la columna con fases mviles de hasta un 100% deproporcin acuosa.
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Gua para la seleccin de columnas ZORBAX HPLC
Gua para el desarrollo de mtodos de pH bajo a pH alto
Compuestos poco retenidos
Bajo pH 3
INICIO
MUESTRA
ZORBAX Eclipse Plus C18 o C8 Tampn 20-50 mM pH 2,5 (2-3) T=30 C (de ambiente hasta 60 C) Ajuste el % de ACN para 0,5 < k < 20
Compuestos poco retenidos
cidosPASO 1a
ZORBAX SB-C18 o SB-C8 Tampn 20-50 mM pH (1-3) T = 30C (de ambiente hasta 90C) Ajuste el % de ACN para 0,5 < k < 20
Bsicos
o
Problemas de espaciado de bandas
PASO 1b
COMPUESTOS BSICOS (ParInico)
Use modificador orgnicoMeOH, cido hexanosulfnico10 mM, tampn 25-50 mM pH 3
Ajuste el % de MeOH para 0,5
< k < 20Problemas de espaciado de bandas
PASO 1c
Aumente o disminuyael % de modificador
orgnico en un 5%(v/v)
Proble-mas deespaci-ado debandas
PASO 1dAumente o disminuya el % de
modificador orgnico en un5% (v/v)
PASO 1e Cambie el modificador orgnico
(ACN o THF) Ajuste para 0,5 < k < 20
Problemas de espaciado de bandas
Aumente o disminuya el % de modificadororgnico en un 5% (v/v)
Problemas de espaciado de bandas Problemas deespaciado de bandas
Problemas deespaciado de bandas
PASO 2a
Modifique la temperaturade columna a un mximo de
60 C para Eclipse XDB yun mximo de
80-90 C para Stablebond
Proble-mas deespaci-ado debandas
Problemas de espaciado de bandas
Cambie el modificador orgnico (MeOH o THF) Ajuste el % de orgnico para 0,5 < k < 20 Vuelva al PASO 2
Problemas de espaciado de bandas
Cambie la funcionalidad de fase ligada aEclipse XDB-C18, C8, PhenylSB-CN, AQ, Phenyl, Bonus-RP
Vuelva al PASO 1
Problemas de espaciado de bandas
o
pH medio, 7
ZORBAX Eclipse Plus C18 o C8 Tampn 20-50 mM pH 7 (6-9) T = 30C (de ambiente hasta 40 C) Ajuste el % de MeOH para 0,5 < k < 20 Compuestos cidos poco retenidos
PASO 5aCOMPUESTOS CIDOS
(Par Inico) Use modificador orgnico MeOH,
fosfato de tetrabutilamonio 10mM, tampn 25-50 mM pH 7
Ajuste el % de MeOH para0,5 < k < 20
Problemas de espaciado de bandasPASO 5b
Modifique la temperaturadentro del rango recomendado
para la fase ligada
Proble-mas deespaci-ado debandas
PASO 5c
Aumente o disminuyael % de modificadororgnico en un 5%
(v/v)
Problemas de espaciado de bandasPASO 5d
Cambie el modificador orgnico(ACN o THF)
Ajuste para 0,5 < k < 20
Problemas de espaciado de bandas
Problemas de espaciado de bandas
PASO 6
Aumente o disminuya el % de modificador
orgnico en un 5 % (v/v)
Problemas de espaciado de bandas
Problemas de espaciado de bandas
PASO 7
Cambie el modificador orgnico (ACN o THF) Ajuste para 0,5 < k < 20 Vuelva al PASO 6
Problemas de espaciado de bandas
PASO 8
Cambie la funcionalidad de fase ligada aZORBAX Eclipse XDB-Phenyl o Bonus-RP
Vuelva al PASO 5
Proble-mas deespaci-ado debandas
Alto pH 9
PASO 9
ZORBAX Extend-C18 pH 10,5 (9-11,5); TEA o amonaco 5-20 mM, o
tampn orgnico 10-50 mM, o tampn borato T = 25 C (de ambiente hasta 40 C) Ajuste el % de MeOH para 0,5 < k < 20
Problemas de espaciado de bandas
PASO 10
Cambie el modificador orgnico (ACN o THF) Ajuste para 0,5 < k < 20
PASO 10a
Modifique la temperaturadentro del rango
recomendado para la faseligada
Pruebe un modo de HPLC diferente.Pngase en contacto con
Agilent Technologies.
Separacin inicialPASO 1
PASO 2
PASO 3
PASO 4
PASO 5
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Gua de seleccin de cartuchos
Icono Tipo de cartucho Caractersticas Beneficios
Cartucho Agilent para HPLC Puede invertir las pinzas en la conexinterminal para aadir pre-columnas
EconmicoProlonga la vida til de la columnaPermite cambios rpidos de columnaPuede utilizar cartuchos de 2, 3, 4 y4,6 mm
Los cartuchos tienen un filtro y un tamiznicos en cada extremo
Ayuda a prevenir posibles obstrucciones
Precolumna ZORBAX:Sistema independiente
Cartucho de alta eficacia, independiente, debajo volumen muerto
Se venden hasta de 400 bares
Cartucho polimrico diseado para selladohermtico frente a superficies metlicas
No se necesitan juntasMs resistente frente a los disolventesque el PEEK
Conexiones reutilizables Apto para conexiones LC de 1/16"
Columnas de cartucho de resolucinrpida y HT de resolucin rpidaZORBAX:rellenos de 3,5 m y 1,8 m,sistema independiente
Para una alta productividad en LC/MS,LC/MS/MS y separaciones combinatoriales
Con relleno Eclipse XDB para uso a pH 2-9Con relleno StableBond para uso a bajo pH
Para todos los tipos de analitosBajo sangrado
Se venden por separado o en paquetes detres
Kit de hardware HPLC para precolumnassemipreparativas ZORBAX:Sistema independiente
Dispositivo de bajo volumen muerto Sella hasta 2.000 ps i(135 bares,13,5 Mpa)
Tubo (polifenilen-sulfona) diseado parasellado hermtico frente a superficiesmetlicas
No se necesitan juntas
Conexiones reutilizables Apto para conexiones LC de 1/16"
Sistema de precolumna y columna paraHPLC preparativas de cartucho ZORBAXy Agilent Prep:Opciones independientes y dehardware integral
Disposi tivo de bajo volumen muerto Prolonga la vida til de la columna
Conexiones reutilizables Permite cambios rpidos de columna
Opciones de hardware para precolumnasintegradas y externas
Utilizable con columnas de21,2 y 30 mm d.i.
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Sistemas de columna de cartuchoAgilent ofrece una variedad de materiales de relleno de HPLC muy utilizados enconfiguraciones de cartucho econmicas y de fcil uso.
Busque estos iconos en las pginas siguientes que le ayudarn a seleccionar lasprecolumnas y columnas ms apropiadas.
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Columnas ZORBAX para HPLC analtica
Consiga una resolucin y forma de picoexcelentes y elimine "falsos inicios."
Buenas noticias para los analistas que no tienen tiempo de "hacer un trabajo de columnas"para una aplicacin determinada: las columnas ZORBAX le permiten elegir la columna
adecuada de acuerdo con su muestra y fase mvil y eliminar cualquier tipo de conjetura.
Adems, la slice ZORBAX de Agilent est fabricada por Agilent, y no se adquiere a ningnproveedor externo. Esto significa que controlamos cada paso del proceso de fabricacin yaseguramos la consistencia entre lotes, as como un rendimiento ptimo y unos resultadosfiables a largo plazo.
En esta seccin, encontrar una variada seleccin de columnas ZORBAX diseadas paraobtener una ptima resolucin en un amplio rango de pH, lo que incluye:
Columnas HPLC ZORBAX Eclipse Plus: diseadas para proporcionar una ptimaforma de pico para compuestos bsicos de manera fiable.
Columnas HPLC ZORBAX Eclipse XDB: una opcin de confianza para mtodos
analticos y reguladores.
Columnas HPLC ZORBAX StableBond: el lder del sector en aplicaciones a pH bajo.
Columnas HPLC ZORBAX Rx: proporcionan una excelente estabilidad hasta pH 9.
Columnas HPLC ZORBAX Extend-C18: presentan una unin bidentada que permitedesarrollar separaciones de alta resolucin a niveles altos de pH.
Columnas HPLC ZORBAX Bonus-RP: una columna alqulica-amdica que proporcionauna forma de pico excelente para bases, adems de una alternativa de selectividad.
Los kits de desarrollo de mtodos ZORBAX contienen tres columnas por el preciode dos. Cada uno tiene una fase ligada diferente para lograr una selectividad ptima.
Kits de validacin del mtodo ZORBAX: seleccione tantas o tan pocas columnascomo desee para simplificar y abaratar el mtodo de validacin.
Las columnas HPLC ZORBAX Original estn fabricadas con slice de tipo A y seutilizan en muchos mtodos de separacin bien establecidos.
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Nunca antes una columna LC ha
producido de manera fiable estospicos simtricos para compuestosbsicos.
Presentamos las columnas ZORBAX Eclipse Plus LC:el desafo est en su rendimiento.
Las nuevas columnas Eclipse Plus ofrecen lo ltimo en rendimiento y productividadpara las columnas basadas en slice.
Al igual que el resto de columnas Eclipse, las Eclipse Plus obtienen un rendimientosuperior a travs del ligado extradenso, en combinacin con un proceso de dobledesactivacin preciso. Pero las columnas Eclipse Plus incluyen adems slicemejorada de alto rendimiento, nuevos reactivos de desactivacin y un procesoexclusivo de ligado optimizado por la slice mejorada.
Las columnas Eclipse Plus estn disponibles en partculas de tamaos 1,8, 3,5 y 5 mpara todos los anlisis analticos, de alta resolucin y LC rpidos. Desde la nanocolumna,hasta la analtica, pasando por la preparativa, las columnas Eclipse le permiten realizarescalados de mtodos de manera eficaz desde 1,8 m hasta 7 m, as como transferirmtodos a cualquier lugar del mundo sin tener que preocuparse de la reproductibilidad.Con ello, los mtodos que cree hoy no debern ser revalidados maana.
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Obtenga magnficas formas de pico para cidos, bases y neutros, y consiga de ese modouna mayor resolucin y exactitud.
Reduzca significativamente las colas para resolver con confianza analitos difciles. Realice anlisis de LC ultrarrpidos, rpidos o convencionales en un rango de temperaturas,
presiones y condiciones de pH.
Dedique ms tiempo a procesar muestras, realizar anlisis y cumplir con fechas, y menosa volver a evaluar nuevas qumicas de columna o a revalidar protocolos.
Desarrolle mtodos de HPLC de confianza en condiciones de plazo de entrega exigentes. Elija columnas Eclipse Plus de resolucin rpida y alto rendimiento con un tamao de
partcula de 1,8 m para separaciones ultrarrpidas y ptima flexibilidad de mtodos.
Especificaciones de columnas
Fase ligadaTamaode poro
Zona deSuperficie
Lmitesdetempe-ratura
Rango depH
Desacti-vacin
Cargadecarbono
ZORBAX Eclipse Plus C18 95 160 m2/g 60C 2.0-9.0 Doble 8%
ZORBAX Eclipse Plus C8 95 160 m2/g 60C 2.0-8.0 Doble 8%
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1. Oxybenzone2. Internal Std.3. Octylmethoxycinnamate
N: 6600Pw: 0.037 min.TF: 0.99 N: 6300
Pw: 0.061 min.TF: 0.98
N: 5000Pw: 0.019 min.TF: 1.09
N: 8800Pw: 0.014 min.TF: 1.20
N: 11600Pw: 0.047 min.TF: 1.06
N: 11800Pw: 0.093 min.TF: 1.02
min0 1 2 3 4
min0 1 2 3 4
247 bar
88 bar
22 min.
min0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
1
2Eclipse Plus C18
Ace 5 C18
SunFire C18
XBridge C18
Discovery HS C18
Luna C18 (2)
Gemini C18
XTerra MS C18
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Eclipse Plus C18 frente a C8 y RRHT frente a RR
Una menor retencin puede significar un ahorro de tiempo. En este caso la C8 es unabuena opcin. La columna RRHT proporciona la eficiencia y resolucin que se buscan,pero la fase ligada C8 puede ser la mejor eleccin.
Eclipse Plus: Mejor forma de pico de la industria sin colas
Columna A: Eclipse Plus C18959941-9024.6 x 50mm, 1.8m
Columna B: Eclipse Plus C8959943-9064.6 x 50mm, 3.5m
Fase mvil: Agua: Acetonitr ilo (30:70)Velocidad de flujo: 2 ml/minTemperatura: 30CDetector: UV 230 nmMuestra: Extracto de blsamo labial
en ACN (fundido a 100CACN, enfriado y filtrado a0,45 m)
1. Oxibenzona
2. Patrones internos3. Octilmetoxicinamato
1. Piridina2. Fenol
Fase mvil: A: 60% AguaB: 40% Acetonitrilo
Velocidad de flujo: 1,0 ml/minTemperatura: AmbienteDetector: UV254 nmPublicacin: 5989-4934ENMuestra: Piridina, fenol
Columna: Eclipse Plus C18959996-9024.6 x 100mm, 5m
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0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 m
4
pH 2.73
2
1
pH 7.0
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 m
1
2
3
4
2 min.
Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
23Para pedidos en lnea www.agilent.com/chem/store
La capacidad de retencin de Eclipse Plus C8 es menor que la de Eclipse Plus C18
Columna A: Eclipse Plus C8959996-9064.6 x 100mm, 5m
Columna B: Eclipse Plus C18959996-9024.6 x 100mm, 5m
Fase mvil: 80% metanol 8 mM (total)K2HPO4 pH 7Velocidad deflujo:
1,0 ml/min
Detector: UV 215 nmMuestra: Amitripti lina 0,05 g/l
(inyeccin 0,5 l)
Una columna C8 normalmente se selecciona porque retiene menos que una columnaC18, con lo que se reduce el tiempo de anlisis.La columna Eclipse Plus C8 muestra el mismo comportamiento con una forma de picoexcelente en compuestos bsicos difciles.
Anlisis rpido de un comprimido analgsico, diferencias de selectividad a pH 2 y pH 7
Columna: Eclipse Plus C8959946-9064.6 x 50mm, 5m
Gradiente: 10-60% B/3 minpH 2,7: A: cido frmico al 0,1%B: 0,1% fa en ACNpH 7,0: A: 20 mM Na fosfato B:ACN
Muestra: Comprimido Excedrin genrico1. Acetaminofn2. Cafena3. cido acetilsaliclico4. Desconocido
Tanto Eclipse Plus C18 como C8 se pueden utilizar con un amplio rango de pHpara optimizar el tiempo de selectividad o anlisis.
00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
Tf=1.04
Tf=1.00
00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min
3.789
5.777
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min0 0.5
A
1 1.5 2 2.5
O
OCH3Tf = 1.00
OCH3
O N+ Cl-
min0 0.5 1 1.5 2 2.5
B
Tf = 1.06
min0 2 4 6 8 10 12
min0 2 4
N = 14000
Tf = 1.25N = 41000
Tf = 1.13
N = 60000
Tf = 1.00
N = 23000
Tf = 1.01
6
6
6
5
5
4
4
3
3
2
A
B
2
1
1
8 10 12
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Mejore la forma del pico y consiga mayor eficiencia con ZORBAX Eclipse Plus
Columna A: XBridge C18,4,6 x 150 mm, 5 m
Columna B: Eclipse Plus C18959993-9024.6 x 150mm, 5m
Fase mvil: A: cido frmico al 0,1%B: cido frmico al 0,1% en ACN
Velocidadde flujo: 1,0 ml/minGradiente: 0,0 min 10% B
15 min 30% BTemperatura: 40CDetector: UV254 nmPublicacin: 5989-4934ENMuestra: Sulfonamidas
Anlisis rpidos y ultrarrpidos de compuestos bsicos en Eclipse Plus
Fase mvil: A: 50% 8 mM K2HPO4, pH 7B: 50% ACN
Velocidadde flujo:
1,0 ml/min
Temperatura: AmbienteDetector: UV254 nmPublicacin: 5989-4934ENMuestra: Berberina, 0,4 mg/ml, 2 ul
Columna A: Eclipse Plus C18959941-9024.6 x 50mm, 1.8m
Columna B: Eclipse Plus C18959993-9024.6 x 150mm, 5m959993-902
1. Sulfani lamida2. Sulfadiazina3. Sulfatiazol4. Sulfameracina5. Sulfametazina6. Sulfametoxazol
1. Berberina
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
25Para pedidos en lnea www.agilent.com/chem/store
ZORBAX Eclipse Plus
Hardware DescripcinTamao(mm)
Tamaode
partcula(m)
EclipsePlus C18USP L1
EclipsePlus C8USP L7
Analtica 4,6 x 250 5 959990-902 959990-906
Analtica 4,6 x 150 5 959993-902 959993-906
Analtica 4,6 x 100 5 959996-902 959996-906
Analtica 4,6 x 50 5 959946-902 959946-906
Resolucin rpida 4,6 x 150 3,5 959963-902 959963-906
Resolucin rpida 4,6 x 100 3,5 959961-902 959961-906
Resolucin rpida 4,6 x 75 3,5 959933-902 959933-906
Resolucin rpida 4,6 x 50 3,5 959943-902 959943-906
Resolucin rpida 4,6 x 30 3,5 959936-902 959936-906
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 150 1,8 959994-902
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 100 1,8 959964-902 959964-906HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 50 1,8 959941-902 959941-906
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 30 1,8 959931-902 959931-906
Solvent Saver 3,0 x 150 5 959993-302 959993-306
Solvent Saver Plus 3,0 x 150 3,5 959963-302 959963-306
Solvent Saver Plus 3,0 x 100 3,5 959961-302 959961-306
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 100 1,8 959964-302 959964-306
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 50 1,8 959941-302 959941-306
Columna de dimetro estrecho 2,1 x 150 5 959701-902 959701-906
Columna de dimetro estrecho RR 2,1 x 50 5 959746-902 959746-906
Columna de dimetro estrecho RR 2,1 x 150 3,5 959763-902 959763-906
Columna de dimetro estrecho RR 2,1 x 100 3,5 959793-902 959793-906
Columna de dimetro estrecho RR 2,1 x 50 3,5 959743-902 959743-906
Columna de dimetro estrecho RR 2,1 x 30 3,5 959733-902 959733-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares 2,1 x 100 1,8 959764-902 959764-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares 2,1 x 50 1,8 959741-902 959741-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares 2,1 x 30 1,8 959731-902 959731-906
Precolumnas, 4/paq. 4,6 x 12,5 5 820950-936 820950-937
Precolumnas, 4/paq. 2,1 x 12,5 5 821125-936 821125-937
Kit de soporte de la precolumna 820888-901 820888-901
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CH 3
CH 3
CH3
CH 3CH 3
CH 3
O
SiO
O
O
O
Si
Si
Si
CH 3CH 3
CH 3
CH3CH3
CH 3
Si
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Ligado extra denso y fase ligada de doble desactivacinEclipse XDB
ZORBAX Eclipse XDB
Cuatro opciones de selectividad para la optimizacin del desarrollo de mtodos Buena forma de pico para compuestos bsicos, cidos y neutros Alto rendimiento en un amplio rango de pH: pH de 2 a 9 Tamaos de partcula de 1,8 m a 7 m Larga duracin, con ligado extradenso y doble desactivacin
Las columnas Agilent ZORBAX Eclipse XDB, C18, C8, Phenyl y CN, proporcionan cuatroopciones de fase ligada para la optimizacin del desarrollo de mtodos. Estas columnasproporcionan una buena forma de pico en un amplio rango de pH (de 2 a 9), para una
flexibilidad adicional de desarrollo de mtodos, con una misma familia de columnas. Lascolumnas Eclipse XDB se utilizan para el desarrollo de mtodo a pH bajo (de 2 a 3),pudindose utilizar la misma columna para el desarrollo de mtodos en la regin de pHmedio (de 6 a 8). En la regin de pH medio, los silanoles residuales son ms activos y es ms
probable que se produzcan colas por efecto de las interacciones. Para evitarlo, las columnasEclipse XDB incorporan un ligado extradenso (eXtra Densely Bonded) y doble desactivacinmediante un proceso propio para abarcar el mayor nmero posible de silanoles activos.El resultado: mejor forma de pico de compuestos bsicos a pH de 2 a 9. Estn disponiblestamaos de partculas de 1,8, 3,5, 5 y 7 m para las columnas Eclipse XDB para separacionesde alta velocidad, alta resolucin analticas y de escala preparativas.
Especificaciones de columnas
Fase ligada
Tamao
de poro
Zona de
Superficie
Lmites de
temperatura
Rango de
pH
Desacti-
vacin
Cargade
carbonoZORBAX Eclipse XDB-C18 80 180 m2/g 60C 2.0-9.0 Doble 10%
ZORBAX Eclipse XDB-C8 80 180 m2/g 60C 2.0-9.0 Doble 7.6%
ZORBAX Eclipse XDB-Phenyl
80 180 m2/g 60C 2.0-9.0 Doble 7.2%
ZORBAX Eclipse XDB-CN 80 180 m2/g 60C 2.0-8.0 Doble 4.3%
El desarrollo de mtodos es ms fcily ms predecible si se tienen variasfases ligadas en la misma slice.Adems de las conocidas columnasC18, Agilent tambin ofreceselectividades que simplifican eldesarrollo de mtodos.
Sugerencias y herramientas
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ZORBAX SB-C8P/N 883975-906ZORBAX Eclipse XDB-C8P/N 993967-906
Competitive C
Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Buena forma de pico en un amplio rango de pH con ZORBAX Eclipse XDB
Velocidadde flujo: 1,5 ml/minTemperatura: 40C
Columna: Eclipse XDB-C8993967-9064.6 x 150mm, 5m
Fase mvil: Fase mvil:A:pH 3,0 75% tampnfosfato 25 mMpH 3,0: 25% ACN
B:pH 7,0 90% fosfato 20mMpH 7,0
10% ACN
A B
Muestra: A:1. Maleate2. Doxilamina3. Clorfeniramina4. Triprolidina5. Difenidramina
Muestra: B:1. Procainamida2. N-acetilprocainamida3. N-propionilprocainamida
Las columnas ZORBAX Eclipse XDB proporcionan una buena forma de pico en un amplio rango de pH y son una excelente opcin para el desarrollo de mtodos apH de 2 a 9.
Prueba de estabilidad de la columna a pH 3 y 60C
Columna: ZORBAX SB-C8
883975-9064.6 x 150mm, 5mColumna: Eclipse XDB-C8
993967-9064.6 x 150mm, 5m
Fase mvil : Condiciones de purga:70% NaAc-HCl 50 mM, pH 3,030% ACNCondiciones de la prueba de retencin:65% metanol35% agua
Velocidadde flujo:
1,0 ml/min
Temperatura: 60CMuestra: Antidepres ivos tr ic clicos
Las columnas Eclipse XDB son estables en un amplio rango de pH. A bajo pH, la columna con desactivacin Eclipse es extremadamente estable y muestra una estabilidadequivalente a la de una columna sin desactivacin, SB-C8, a pH 3. Las columnas se purgaron con una fase mvil de pH 3 a 60C. A continuacin se pusieron a prueba conun compuesto fuertemente bsico para determinar si la desactivacin o la fase ligada haban sido hidrolizadas y eliminadas de la superficie de la slice. La columna EclipseXDB result ser muy estable, como muestra su consistencia en la retencin de amitriptilina tras los ms de 12.000 volmenes de columna empleados en la prueba. Otracolumna desactivada muestra una menor estabilidad en las mismas condiciones.
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Time (min) Time (min)
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La doble desactivacin, el ligado denso y las duraderas partculas Rx-Sil (de tipo sol) se combinan para proporcionar una larga duracin de columna a pH 7 en comparacincon las columnas sil-gel de desactivacin simple utilizadas. Las condiciones utilizadas para esta prueba: alta temperatura (60 C) y alta concentracin salina (250 mM),aceleran la disolucin de la slice, lo que provoca un fallo prematuro de la columna de tipo sil-gel.
Prueba de estabilidad de la columna a pH 7,0
Columna: Eclipse XDB-C8993967-9064.6 x 150mm, 5m
Fase mvil: 60% ACN40% tampn fosfato 250 mM, pH 7,0
Velocidad de flujo: 1,5 ml/minTemperatura: 60CMuestra: Antidepresivos tricclicos
Las columnas Eclipse XDB y StableBond se basan en la misma slice pero tienen un ligado y una desactivacin diferentes. Eso haceque puedan tener una selectividad muy diferente para la misma muestra en las mismas condiciones, como ilustra este ejemplo.
1. Uracilo2. Nortripti lina3. Doxepina4. Amitr ipti lina5. Trimipramina
Cambios de selectividad para compuestos bsicos con Eclipse XDB y StableBond
1. Barbital2. Sulfametoxazol3. Cafena
Fase mvil: 70% NaH2PO4 25 mM, pH 3,030% metanol
Velocidad de flujo: 1,0 ml/minTemperatura: 35C
Columna A: Eclipse XDB-C8966967-9064.6 x 75mm, 3.5m
Columna B: ZORBAX Rx/SB-C8866953-9064.6 x 75mm, 3.5m
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Esta separacin de protectores solares en las tres fases ligadas Eclipse XDB, C18, C8 y Phenyl, muestra la posibilidad de utilizar diferentes fases ligadas para optimizar unaseparacin. Si bien las tres fases ligadas proporcionan una separacin adecuada, Eclipse XDB-Phenyl proporciona un orden de elucin de los picos diferente y un tiempoglobal de anlisis mucho ms corto. Las tres fases ligadas ofrecen asimismo una excelente forma de pico sin necesidad de aditivos en la fase mvil.
Optimizar separaciones con opciones de selectividad Eclipse XDB Analisis de protectores solares
Columna A: Eclipse XDB-Phenyl963967-9124.6 x 150mm, 3.5m
Columna B: Eclipse XDB-C8963967-9064.6 x 150mm, 3.5m
Columna C: Eclipse XDB-C18963967-9024.6 x 150mm, 3.5m
Fase mvil : 15% H20: 85% MeOHVelocidadde flujo: 1,0 ml/minTemperatura: 35CMuestra: Filtros solares
1. Oxibenzona2. Padimato-O3. Salicilato de etilhexilo
Separacin de cefalosporinas en Eclipse XDB-C8
Columna: Eclipse XDB-C8993967-9064.6 x 150mm, 5m
Fase mvil: 85% 25 mMNa2HPO4 pH 7: 15% ACN
Velocidad deflujo:
1,0 ml/min
Temperatura: 35CMuestra: Cefalosporinas
Las cefalosporinas son un tipo de antibitico; muchos compuestos de esta familia se separan bien en la columna Eclipse XDB-C8.
1. Ceftazidina2. Cefaclor3. Cefoxatima4. Cefoxitn5. Cefalotn
Selectividad para pesticidas de urea
1. Fenurn2. Monurn3. Monol inurn4. Diurn5. Linurn6. Pencicurn
Columna A: Eclipse XDB-C18993967-9024.6 x 150mm, 5m
Columna B: Eclipse XDB-CN993967-9054.6 x 150mm, 5m
Columna C: Eclipse XDB-C18993967-9024.6 x 150mm, 5m
Fase mvi l: A. 60:40 MeOH:aguaB. 60:40 MeOH:aguaC. 77:23 MeOH:agua
Velocidadde flujo:
1,0 ml/min
Temperatura: 25CMuestra: Pesticidas de ureaLa columna Eclipse XDB-CN reduce el tiempo deretencin y proporciona una buena selectividad parapesticidas de urea en comparacin con una columnaEclipse XDB-C18.
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ZORBAX Eclipse XDB
Hard-ware Descripcin
Tamao(mm)
Tamaode
partcula(m)
XDB-C18USP L1
XDB-C8USP L7
XDB-PhenylUSP L11
XDB-CNUSP L10
Columnas estndar (no requieren hardware especial, 400 bares)Semipreparativa 9,4 x 250 5 990967-202 990967-206
Analtica 4,6 x 250 5 990967-902 990967-906 990967-912 990967-905
Analtica 4,6 x 150 5 993967-902 993967-906 993967-912 993967-905
Analtica 4,6 x 50 5 946975-902 946975-906
Resolucin rpida 4,6 x 150 3,5 963967-902 963967-906 963967-912 963967-905
Resolucin rpida 4,6 x 100 3,5 961967-902 961967-906 961967-905
Resolucin rpida 4,6 x 75 3,5 966967-902 966967-906 966967-912 966967-905
Resolucin rpida 4,6 x 50 3,5 935967-902 935967-906 935967-912
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 100 1,8 928975-902 928975-906
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 50 1,8 927975-902 927975-906HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 30 1,8 924975-902 924975-906
HT de resolucin rpida, 600 bares 4,6 x 20 1,8 926975-902 926975-906
Solvent Saver 3,0 x 250 5 990967-302 990967-306 990967-312 990967-305
Solvent Saver 3,0 x 150 5 993967-302 993967-306 993967-312 993967-305
Solvent Saver Plus 3,0 x 150 3,5 963954-302 963954-306 963954-312 963954-305
Solvent Saver Plus 3,0 x 100 3,5 961967-302 961967-306 961967-312
Solvent Saver Plus 3,0 x 75 3,5 966954-302
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 100 1,8 928975-302 928975-306
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 50 1,8 927975-302 927975-306
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 30 1,8 924975-302 924975-306
Solvent Saver HT, 600 bares 3,0 x 20 1,8 926975-302 926975-306
Columna de dimetro estrecho 2,1 x 150 5 993700-902 993700-906 993700-912 993700-905
Columna de dimetro estrecho 2,1 x 50 5 960967-902 960967-906 960967-912 960967-905
Columna de dimetro estrecho RR* 2,1 x 150 3,5 930990-902 930990-906
Columna de dimetro estrecho RR* 2,1 x 100 3,5 961753-902 961753-906 961753-905
Columna de dimetro estrecho RR* 2,1 x 75 3,5 966735-902
Columna de dimetro estrecho RR* 2,1 x 50 3,5 971700-902 971700-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares** 2,1 x 100 1,8 928700-902 928700-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares** 2,1 x 50 1,8 927700-902 927700-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares** 2,1 x 30 1,8 924700-902 924700-906
Columna de dimetro estrecho RRHT, 600 bares** 2,1 x 20 1,8 926700-902 926700-906
MicroBore RR* 1,0 x 150 3,5 963600-902 963600-906
MicroBore RR* 1,0 x 50 3,5 965600-902 965600-906
MicroBore RR* 1,0 x 30 3,5 961600-902 961600-906
Precolumnas MicroBore, 3/paq. 1,0 x 17 5 5185-5921 5185-5921
Precolumnas, 4/paq. 4,6 x 12,5 5 820950-925 820950-926 820950-927 820950-935
Precolumnas, 4/paq. 2,1 x 12,5 5 821125-926 821125-926 821125-926 821125-935
Kit de soporte de la precolumna 820888-901 820888-901 820888-901 820888-901*RR: Resolucin rpida de 3,5 m
**RRHT: HT de resolucin rpida de 1,8 m
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Columnas de cartucho PrepHT (requieren kit de conexiones 820400-901)Cartucho PrepHT 21,2 x 250 7 977250-102 977250-106
Cartucho PrepHT 21,2 x 150 7 977150-102 977150-106
Cartucho PrepHT 21,2 x 150 5 970150-902 970150-906
Cartucho PrepHT 21,2 x 100 5 970100-902 970100-906
Cartucho PrepHT 21,2 x 50 5 970050-902 970050-906
Pre-columna PrepHT 17 x 7,5 5 820212-925 820212-926
Hardware de precolumna 820444-901 820444-901
Conexiones terminales PrepHT, 2/paq. 820400-901 820400-901
ZORBAX Eclipse XDB (continuacin)
Hardware DescripcinTamao(mm)
Tamaode
partcula(m)
XDB-C18USP L1
XDB-C8USP L7
XDB-PhenylUSP L11
XDB-CNUSP L10
Columnas de cartucho de Agilent (requieren kit de soporte 5021-1845)Analtica 4,6 x 250 5 7995118-585 7995108-585
Analtica 4,6 x 150 5 7995118-595 7995108-595
Resolucin rpida 4,6 x 75 3,5 7995118-344 7995108-344
Solvent Saver Plus 3,0 x 75 3,5 7995230-344
Precolumnas, 10/paq. 4,0 x 4 5 7995118-504 7995118-504Soporte de cartucho 5021-1845 5021-1845
Columnas estndar (no requieren hardware especial, 400 bares)Resolucin rpida HT 4,6 x 50 1,8 922975-902 922975-906
HT de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 50 1,8 922975-932
Columna de dimetro estrecho RRHT 2,1 x 50 1,8 922700-902
Columna de dimetro estrecho RRHT, 3/paq. 2,1 x 50 1,8 922700-932
Hardware DescripcinTamao(mm)
Tamaode
partcula(m)
XDB-C18USP L1
XDB-C8USP L7
5/28/2018 Guia de Seleccion de Columnas Agilent Sorbax
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ZORBAX Eclipse XDB (continuacin)
Hardware DescripcinTamao(mm)
Tamao
departcula(m)
XDB-C18USP L1
XDB-C8USP L7
Cartuchos HT de resolucin rpida (requieren kit de soporte 820555-901)Cartucho de resolucin rpida 4,6 x 30 3,5 933975-902 933975-906
Cartucho de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 30 3,5 933975-932 933975-936
Cartucho de resolucin rpida 4,6 x 15 3,5 931975-902 931975-906
Cartucho de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 15 3,5 931975-932 931975-936
Cartucho de resolucin rpida 2,1 x 30 3,5 973700-902 973700-906
Cartucho de resolucin rpida, 3/paq. 2,1 x 30 3,5 973700-932 973700-936
Cartucho de resolucin rpida 2,1 x 15 3,5 975700-902 975700-906
Cartucho de resolucin rpida, 3/paq. 2,1 x 15 3,5 975700-932 975700-936
Cartucho HT de resolucin rpida 4,6 x 50 1,8 925975-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 50 1,8 925975-932
Cartucho HT de resolucin rpida 4,6 x 30 1,8 923975-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 30 1,8 923975-932
Cartucho HT de resolucin rpida 4,6 x 15 1,8 921975-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 4,6 x 15 1,8 921975-932
Cartucho HT de resolucin rpida 2,1 x 50 1,8 925700-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 2,1 x 50 1,8 925700-932
Cartucho HT de resolucin rpida 2,1 x 30 1,8 923700-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 2,1 x 30 1,8 923700-932
Cartucho HT de resolucin rpida 2,1 x 15 1,8 921700-902
Cartucho HT de resolucin rpida, 3/paq. 2,1 x 15 1,8 921700-932
Kit de hardware para cartuchos RR y RRHT 820555-901 820555-901
Columnas capilares forradas de vidrioCapilar 0,5 x 250 5 5064-8286
Capilar 0,5 x 150 5 5064-8287
Capilar RR 0,5 x 150 3,5 5064-8288
Capilar RR 0,5 x 35 3,5 5064-8298
Capilar 0,3 x 250 5 5064-8269
Capilar 0,3 x 150 5 5064-8291
Capilar RR 0,3 x 150 3,5 5064-8271
Capilar 0,5 x 35 5 5064-8296
Capilar 0,3 x 35 5 5064-8297
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Fase ligada StableBond protegida estricamente
ZORBAX StableBond de 80
Mxima duracin y mejor reproducibilidad en separaciones a bajo pH: hasta pH 1 La qumica de columna estable patentada permite el uso a temperaturas elevadas
y pH bajo sin degradacin
Seis fases ligadas diferentes proporcionan una amplia selectividad: SB-C18, SB-C8,SB-CN, SB Fenilo, SB-C3, SB-Aq
Slice de alta pureza (tipo B) para una forma de pico ptima
Las columnas Agilent ZORBAX StableBond utilizan exclusivos silanos monofuncionalespatentados con voluminosas cadenas laterales de tipo diisobutilo (SB-C18) o diisopropiloSB-C8, SB-C3, SB Fenilo, SB-CN y SB-Aq) que protegen estricamente los enlaces siloxano
clave del ataque hidroltico a bajo pH. Los materiales de relleno StableBond no estndesactivados para as ofrecer una estabilidad excepcional y maximizar la vida til y lareproducibilidad bajo condiciones de fase mvil cida. La slice de alta pureza y baja acidezproporciona una forma de pico excelente con compuestos cidos, bsicos y neutros, deforma que las columnas StableBond son una opcin excelente para el desarrollo de mtodosde bajo pH. Las columnas ZORBAX StableBond son compatibles con todas las fases mvileshabituales, incluyendo fases mviles muy acuosas.
Especificaciones de columnas
Fase ligadaTamaode poro
Zona deSuperficie
Lmitesdetempe-ratura*
Rango depH*
Desacti-vacin
Carga decarbono
ZORBAX SB-C18 80 180 m2/g 90C 1.0-8.0 No 10%ZORBAX SB-C8 80 180 m2/g 80C 1.0-8.0 No 5.5%
ZORBAX SB-C3 80 180 m2/g 80C 1.0-8.0 No 4%
ZORBAX SB-Phenyl 80 180 m2/g 80C 1.0-8.0 No 5.5%
ZORBAX SB-CN 80 180 m2/g 80C 1.0-8.0 No 4%
ZORBAX SB-Aq 80 180 m2/g 80C 1.0-8.0 No propia*Las columnas StableBond han sido diseadas para un uso ptimo a bajo pH. A pH 6-8, se mejora la estabilidad de
las columnas basadas en slice trabajando a temperaturas
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Time (min)Time (min)
%k
Remaining
Column Volumes
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StableBond SB-C18 muestra una excelente estabilidad a bajo pH y a alta temperatura (pH 0,8, 90C)
La cadena ZORBAX SB-CN ms corta tambin es estable a pH bajo (pH 2,0, 50C)
Columna: ZORBAX SB-C18883975-9024.6 x 150mm, 5m
Columna: ZORBAX Rx-C18883967-9024.6 x 150mm, 5m
Fase mvil: 50% metanol/50% aguacon TFA al 1,0%Soluto de prueba: Tolueno
Temperatura: 90C
Como indicador de la ruptura de la columna, se mide el tiempo de retencin del tolueno tras purgar lacolumna con fase mvil. Slo la columna StableBond SB-C18 permanece inalterada tras tres meses deuso en condiciones de pH (0,8) muy bajo y a alta temperatura (90 C). La fase ZORBAX Rx-C18 proporcionaasimismo una matriz estable que se puede utilizar como alternativa de selectividad de StableBond SB-C18.
StableBond SB-C18(Diisobutil-C18)ZORBAX Rx-C18(Dimetilo-C18)
C18 del competidor AC18 del competidor BC18 del competidor CC18 del competidor DC18 del competidor E
ZORBAX StableBond SB-CN y las otras fases ligadas StableBond de cadenacorta son asimismo excepcionalmente estables a bajo pH. Por el contrario,las fases dimetil CN convencionales y similares carecen de esa estabilidad.
La columna SB-CN optimiza la retencin y la resolucin
La columna SB-CN se utiliza aqu para reducir el tiempo de anlisis en un 50 %. La retencin del analito mshidrfobo se reduce a la mitad. Al mismo tiempo, la retencin de los picos ms polares de elucin tempranaaumenta slo ligeramente.
Columna A: ZORBAX SB-C18866953-9024.6 x 75mm, 3.5m
Columna B: ZORBAX SB-CN866953-9054.6 x 75mm, 3.5m
Fase mvil: 30% ACN70% NaH2PO4 25 mM , pH 2,5Velocidadde flujo: 1,0 ml/minTemperatura: 35C
1. Estriol2. Daidzen3. Quercetina4. Genistena5. Dietilestilbestrol
Column Volumes of Mobile Phase Purge
RelativeRetention
Columna: ZORBAX SB-CN883975-9054.6 x 150mm, 5m
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min0
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450mAU
1 2 3 4 5
12
3
4
5
1 2 3
4
5
1
1
2 3
4
5
25
4
3
Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Ms opciones de fase ligada de resolucin rpida y alto rendimiento para la optimizacin del desarrollo de mtodos rpidos
Fase mvi l: Acetonitri lo (40%):Tampn 60% pH=2,4 25 mM NaH2PO4
Velocidadde flujo: 1,85 ml/min
Detector: DAD, 254 nmLC: Agilent 1200 RR LC
Muestra: Segn se enumera, inyeccin 1 l
Columna A: SB-C18827975-9024.6 x 50mm, 1.8m
Columna B: SB-C8827975-9064.6 x 50mm, 1.8m
Columna C: ZORBAX SB-Phenyl827975-9124.6 x 50mm, 1.8m
Columna D: ZORBAX SB-CN
827975-9054.6 x 50mm, 1.8m
Cinco fases ligadas diferentes proporcionan opciones de selectividad
SB-C3 es tan slo una de las cinco opciones diferentes de selectividad deStableBond. En este ejemplo, se logra una resolucin ptima con SB-C3.Todas estn basadas en la misma Rx-SIL de alta pureza. Las diferencias deselectividad dependen por tanto nicamente de las fases ligadas, lo queaporta mayor fiabilidad al desarrollo de mtodos.
Fase mvi l: 0-100% B en 18,8 min
A: NaH2PO4 50 mM,pH 2,5 en 95% H2O / 5% ACNB: NaH2PO4 50 mM,pH 2,5 en 47% H2O / 53% ACN
Velocidadde flujo: 1,0 ml/minTemperatura: 26CDetector: 254 nmMuestra: 1. Procana
2. Lidocana3. d-Cinchonina4. Butacana5. Tetracana
Columna A: ZORBAX SB-C18
883975-9024.6 x 150mm, 5m
Columna B: ZORBAX SB-C8883975-9064.6 x 150mm, 5m
Columna C: ZORBAX SB-C3883975-9094.6 x 150mm, 5m
Columna D: ZORBAX SB-Phenyl
883975-9124.6 x 150mm, 5m
Columna E: ZORBAX SB-CN883975-9054.6 x 150mm, 5m
1. Tolmetina2. Naproxeno3. Dif lunisal4. Ibuprofeno5. Diclofenac
Las 5 opciones diferentes de fase ligada de la familia StableBond mejoran la optimizacin del mtodo. Nota: SB-Aq no se muestra.
Cambie el orden de elucin de los picos 3, 4 y 5
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ZORBAX StableBond de 80
Hard-ware Descripcin
Tamao(mm)
Tamaode
partcula(m)
SB-C18USP L1
SB-C8USP L7
SB-CNUSP L10
SB-C3USP L56
SB FeniloUSP L11 SB-Aq
Columnas estndar (no requieren hardware especial, 400 bares)Semipreparativa 9,4 x 250 5 880975-202 880967-201 880975-205 880975-209 880975-212
Semipreparativa 9,4 x 150 5 883975-202
Semipreparativa 9,4 x 100 5 884975-202
Semipreparativa 9,4 x 50 5 846975-202
Analtica 4,6 x 250 5 880975-902 880975-906 880975-905 880975-909 880975-912 880975-914
Analtica 4,6 x 150 5 883975-902 883975-906 883975-905 883975-909 883975-912 883975-914
Analtica 4,6 x 50 5 846975-902 846975-906 846975-914
Resolucin rpida 4,6 x 250 3,5 884950-567
Resolucin rpida 4,6 x 150 3,5 863953-902 863953-906 863953-905 863953-912 863953-914
Resolucin rpida 4,6 x 100 3,5 861953-902 861953-906 861953-905 861953-912 861953-914Resolucin rpida 4,6 x 75 3,5 866953-902 866953-906 866953-905 866953-912 866953-914
Resolucin rpida 4,6 x 50 3,5 835975-902 835975-906 835975-905 835975-912 835975-914
HT de resolucin rpida,600 bares
4,6 x 150 1,8 829975-902 829975-906 829975-905 829975-912
HT de resolucin rpida,600 bares
4,6 x 100 1,8 828975-902 828975-906 828975-905 828975-912 828975-914
HT de resolucin rpida,600 bares
4,6 x 50 1,8 827975-902 827975-906 827975-905 827975-912 827975-914
HT de resolucin rpida,600 bares
4,6 x 30 1,8 824975-902 824975-906 824975-905 824975-912 824975-914
HT de resolucin rpida,600 bares
4,6 x 20 1,8 826975-902 826975-906
Solvent Saver 3,0 x 250 5 880975-302 880975-306 880975-305 880975-309 880975-312 880975-314
Solvent Saver 3,0 x 150 5 883975-302 883975-306 883975-305 883975-309 883975-312 883975-314Solvent Saver Plus 3,0 x 150 3,5 863954-302 863954-306 863954-305 863954-312 863954-314
Solvent Saver Plus 3,0 x 100 3,5 861954-302 861954-306 861954-305 861954-309 861954-312 861954-314
Solvent Saver HT,600 bares
3,0 x 150 1,8 829975-302 829975-306 829975-305 829975-312
Solvent Saver HT,600 bares
3,0 x 100 1,8 828975-302 828975-306 828975-305 828975-312 828975-314
Solvent Saver HT,600 bares
3,0 x 50 1,8 827975-302 827975-306 827975-305 827975-312 827975-314
Solvent Saver HT,600 bares
3,0 x 30 1,8 824975-302 824975-306 824975-305
Solvent Saver HT,600 bares
3,0 x 20 1,8 826975-302 826975-306
Col. de dim. estrecho 2,1 x 150 5 883700-922 883700-906 883700-905 883700-909 883700-912
Col. de dim. estrecho 2,1 x 50 5 860975-902 860975-906 860975-905 860975-909 860975-912 860975-914Col. de dim. estrecho RR* 2,1 x 150 3,5 830990-902 830990-906 830990-914
Col. de dim. estrecho RR* 2,1 x 100 3,5 861753-902 861753-906 861753-905 861753-912 861753-914
Col. de dim. estrecho RR* 2,1 x 75 3,5 866735-902
Col. de dim. estrecho RR* 2,1 x 50 3,5 871700-902 871700-906 871700-914*RR: Resolucin rpida de 3,5 m
**RRHT: HT de resolucin rpida de 1,8 m
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Columnas ZORBAX para un HPLC Analtico
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Hard-ware Descripcin Tamao(mm)
Tamao
de part.(m) SB-C18USP L1 SB-C8USP L7 SB-CNUSP L10 SB-C3USP L56 SB FeniloUSP L11 SB-Aq
Cartucho PrepHT 21,2 x 50 5 870050-902 870050-906 870050-914
Precolumna PrepHT,2/paq.
17 x 7,5 5 820212-920 820212-915 820212-915 820212-915 820212-933
Hardware deprecolumna
820444-901 820444-901 820444-901 820444-901 820444-901 820444-901
Conex. terminalesPrepHT, 2/paq.
820400-901 820400-901 820400-901 820400-901 820400-901 820400-901
Columnas de cartucho de Agilent (requieren kit de soporte 5021-1845)Analtica 4,6 x 250 5 7995218-585 7995208-585
Analtica 4,6 x 150 5 7995218-595 7995208-595
Resolucin rpida 4,6 x 75 3,5 7995218-344 7995208-344
Precolumnas, 10/paq. 4,0 x 4 5 7995118-504 7995118-504
Soporte de cartucho 5021-1845 5021-1845
MicroBore RR* 1,0 x 150 3,5 863600-902 863600-906 863600-905
MicroBore RR* 1,0 x 50 3,5 865600-902 865600-906
MicroBore RR* 1,0 x 30 3,5 861600-902 861600-906PrecolumnasMicroBore, 3/paq.
1,0 x 17 5 5185-5920 5185-5920
Precolumna, 2/paq. 9,4 x 15 7 820675-115 820675-115 820675-124 820675-115
Precolumna, 4/paq. 4,6 x 12,5 5 820950-920 820950-915 820950-916 820950-922 820950-917 820950-933
Precolumna, 4/paq. 2,1 x 12,5 5 821125-915 821125-915 821125-924 821125-924 821125-915 821125-933
Kit d.sop.precolumna 9,4 x 15 840140-901 840140-901 840140-901 840140-901 840140-901
Kit d.sop.precolumna 820888-901 820888-901 820888-901 820888-901 820888-901 820888-901
Columnas de cartucho PrepHT