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Herramientas de la Biología Molecular
Material gráficoSecc.Genética
Fac. de Ciencias
Técnicas de manipulación genéticaTécnicas de manipulación genética
Aislamiento AmplificaciónSecuenciaciónExpresión
DE GENES
Los primeros avances
• 1965 - Arber y col. Enzimas de restricción
• 1969 - Berg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!)
• 1973 - Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio)
• 1975 - Moratoria. Conferencia de Asilomar
BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMAS
•REPLICARSE•CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO•DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN
ENZIMAS DE RESTRICCION
1965 - Arber y col.1978 - Smith y Nathan . Premio Nobel
Enzima de tipo II.Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13)Reconocimiento y corte:
GAATTC CTTAAG
----G ---AATTC-------CTTAA G---
Los vectores
• Llevan un ADN foráneo
• son capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella
Plásmidos* ADN circular extracromosómico* Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria* No.copias/bacteria: 1 a 3000* Tamaño pequeño (3 kb)* Inmóviles
Como vectores
* Marcadores* sitio de policlonaje* segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa* Capacidad 15 kb
Obtención de ADN en cantidad
Tipos de ADN a clonar
• ADN complementario
• ADN sintético
• ADN genómico
GENOTECA: clonado de un juego completo del genoma de una especie
SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada
Biblioteca genómica
Otros vectores en procariotasOtros vectores en procariotas
* Bacteriófagos. Fago lambdaADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos quele permiten circularizarsepermiten insertos más grandes
* Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagosinsertos de 40-45 kb
Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa
2n = 46 (XX/XY)
Cromosomas de tipo metacéntricossubmetacéntricos y acrocéntricos.
CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS
Podemos conocer la secuencia
Electroforesis
Cómo se observa tras la electroforesis
Ensayo de Southern blot
PCR
• Reacción en cadena de la polimerasa
• Emplea cebadores específicos
• Utiliza una polimerasa resistente al calor (Taq)
• Amplifica exponencialmente una secuencia determinada
Los glóbulos rojos
ANEMIA FALCIFORME
El fenotipo a nivel molecularResultado de la electroforesis
AS
La molécula de hemoglobina
La base molecular de la anemia falciforme
CROMOSOMA 11
El gen ocupa un lugar (LOCUS)(LOCUS) en el cromosoma.
GGTCTCCTC
G G T C T C CC C A G A G G CAC
GTG