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Identificación de virus que se transmiten a travésde semillas de caraota (Phaseolus vulgaris L.) y

fríjol (Vigna unguiculata (L.) Walpers) enáreas productoras de Venezuela

Identification of seed borne viruses in growing areas ofbeans (Phaseolus vulgaris L.) and cowpea (Vigna

unguiculata (L.) Walpers) in Venezuela

Z. Peña y G. Trujillo

Barquisimeto, Edo. Lara. INIA – Lara. Apdo. 592.

Resumen

Para conocer la incidencia de virus que se transmiten a través de la semi-lla en áreas productoras de caraota y fríjol, se evaluaron 53 materiales usadoscomo semilla. Se seleccionaron aislamientos virales provenientes de las semi-llas sembradas en umbráculo protegido contra insectos; identificándose los ais-lamientos virales de caraota como: "Colombiana 1", "Colombiana 2" y"Tucutunemo" y el de fríjol como "Ojo negro". Para este estudio se multiplicó elmaterial, se realizaron las pruebas de estabilidad en savia, se estudió la trans-misión a través de insectos, se estudió el rango de hospedantes, microscopíaelectrónica y se realizaron pruebas serológicas con los antisueros disponibles.En tres aislamientos virales de caraota se identificó, el virus del mosaico sure-ño de la caraota (BSMV) en muestra del Valle de Tucutunemo, estado Aragua,en un material procedente de Colombia colectado en Sanare, estado Lara, sedetectó infección viral simple con el BSMV y doble el BSMV y el virus del mo-saico común de la caraota (BCMV) . En fríjol se identificó el virus del mosaicosevero del frijol (CpSMV) a partir de semilla de los estados Portuguesa y Fal-cón. Con este estudio se ratifica la necesidad del control fitosanitario para laexclusión de materiales nacionales o importados no aptos para la siembra y secorrobora la importancia de la certificación de semillas.Palabras clave: virus, transmisión por semilla, incidencia, identificación, le-guminosas

Recibido el 11-3-2004 Aceptado el 15-2-2006Autor para correspondencia email: zpeña@inia.gov.ve

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Abstract

With the purpose of knowing the incidence of seed borne viruses inproduction areas of beans and cowpea, 53 materials used as seed were evaluated.Viral isolations coming from seeds sowed in shelter protected against insects;being identified the beans isolations like: "Colombian 1", "Colombian 2" and"Tucutunemo"; and those of cowpea like "Black Eye", were selected. Materialwas multiplied, stability test in sap were carried out, vector transmission wasstudied, the hosts range was determined, serological tests with the availableantibody were carried out. In three viral isolations of beans, the bean southernmosaic virus (BSMV) was identified in a sample of Tucutunemo Valley, Araguastate. In the material coming from Colombia collected in Sanare, Lara state, itwas detected simple viral infection BSMV and double infection BSMV and beancommon mosaic virus (BCMV). In cowpea, it was identified the cowpea severemosaic virus (CpSMV) from seed of Portuguese and Falcon states. Throughthis essay was corroborated the necessity of establishing a phytopathologicalcontrol, for the exclusion of national or imported seed materials not suitable forsows, and also the importance of seed certification.Key words: virus, seed borne viruses, incidence, identification, leguminous

Introducción

En el rubro fabáceas el aspectosanidad de la semilla ha sido señala-do como una limitante del rendimien-to, condición que le impide colocarseentre los renglones de rubros compe-titivos a nivel nacional (17). Cerca deuno de cada siete virus de plantas queexisten son transmitidos a través dela semilla (22). Los virus llevados enla semilla constituyen una de las fuen-tes de inoculo primario que permitenla presencia de virosis desde muy tem-prano en los cultivos de caraota y frí-jol, considerándose al: virus del mo-saico común de la caraota (Beancommon mosaic virus, BCMV) y elvirus del mosaico del fríjol ojo negro(Blackeye cowpea mosaic virus,BeCpMV) pertenecientes al grupoPotyvirus, virus del mosaico sureñode la caraota (Bean southern mosaic

Introduction

In Fabaceas crop, the seedhealthy aspect have been pointed outlike a yielding limiting, a conditionthat do not permit its locationbetween competitive crops at nationallevel (17). One of seven plant virus istransmitted through seed (22). Virusconduced by seed represent a primaryinoculums source that permits virusespresence in beans and cowpea cropsearly. Considering to Bean commonmosaic virus (BCMV) and Blackeyecowpea mosaic virus (BeCpMV)belonging to Polyvirus group, Beansouthern mosaic virus (BSMV)Sabemovirus group, Cowpea severemosaic virus (CSMV) Comovirusgroup, Cucumber mosaic virus (CMV)Cucumovirus (3), Alfalfa mosaic virus(AMV) (23) among others, as ones ofgreat importance for this

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virus, BSMV) grupo Sobemovirus, vi-rus del mosaico severo del fríjol(Cowpea severe mosaic virus, CpSMV)grupo Comovirus, virus del mosaicodel pepino (Cucumber mosaic virus,CMV) grupo Cucumovirus (3), virusdel mosaico de la alfalfa (Alfalfamosaic virus, AMV) (23) entre otros;como los de mayor importancia poresta forma de transmisión. Las pér-didas por ejemplo, causadas por elBCMV pueden variar entre 53 al 96%(10). De los 70 o más virus que afec-tan al cultivo de la caraota, siete setransmiten por la semilla (8); y exis-ten por lo menos unos 15 virus quepueden ser transmitidos en cultivossucesivos de fríjol a través de lotes desemilla infectada; particularmentesemillas cuya calidad fitosanitaria hasido descuidada (14).

La importancia del estudio deeste tipo de transmisión radica en quelas semillas constituyen un eficientemedio para la transferencia demicroorganismos fitopatógenos. Ade-más, más del 50% de las enfermeda-des importantes en caraota se puedentransmitir por semilla (10, 12). Losagricultores tienen que cambiar cadacierto tiempo sus cultivares debido ala "degeneración" de la semilla, lo queesta ligado a la transmisión de los vi-rus BCMV y el virus del mosaico co-mún necrótico de la caraota (BCMNV)por la semilla (7). Por la relevanciaque tiene esta forma de transmisiónen los procesos epidemiológicos seplantea el siguiente trabajo de inves-tigación para conocer la incidencia delos virus que se transmiten a travésde semilla de caraota y fríjol prove-nientes de diferentes áreas producto-ras del país.

transmission way. For instance, lostcaused by BCMV can vary from 53 –96% (10). From 70 or more virus thataffect bean crop, seven aretransmitted by seed (8) and there are15 viruses that can be transmitted incowpea successive cropsapproximately, through infected seedportion especially those withoutphytosanitary quality (14).

It is important to study thistransmission kind because seeds arean efficient medium for transferringof phyto pathogens microorganisms.Besides, more of 50% of importantdiseases in bean can be transmittedby seed (10, 12). Farmers has tochange their cultivars sometimes dueto seed degeneration which is relatedto the virus BCMV transmission andmosaic common necrotic of bean vi-rus (BCMNV) by seed (7). Due torelevance of this transmission wayhave in epidemiological process; thispaper is carried out with the purposeof knowing the virus incidencetransmitted through bean and cowpeaseed from different productive areasof the country.

Materials and methods

The evaluation of 53 materialsused as seed for knowing the virusincidence from principal producers ofbean and cowpea was carried out inVegetable virology Laboratory ofAgronomy Faculty, Universidad Cen-tral de Venezuela. Four viral isolateswere selected from every materials ofseeds sowed at greenhouse protectedagainst insects to be totally identifiedand for presenting symptomsidentified in studied population. Viral

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Materiales y métodos

En el laboratorio de VirologíaVegetal, en la Facultad de Agronomíade la Universidad Central de Vene-zuela, se llevo a cabo la evaluación de53 materiales usados como semillapara conocer la incidencia de virusque se transmiten a través de semillade las principales áreas productorasde caraota y fríjol. Fueron selecciona-dos 4 aislamientos virales de todos losmateriales provenientes de semillassembradas en umbráculo protegidocontra insectos, para ser identificadosplenamente, y por presentar los sín-tomas identificados en la poblaciónestudiada. Los aislamientos virales seidentificaron como: "Colombiana 1","Colombiana 2", "Tucutunemo" y "Ojonegro", proveniente los tres primerosde caraota y el último de semillas defríjol respectivamente. Para el estu-dio: a) se multiplicó el material; b) serealizaron las pruebas de estabilidaden savia; c) se realizaron los estudiosde transmisión a través de insectoscon áfidos y coleópteros; d) se compro-bó el rango de hospedantes y; e) seobservó a través de microscopia elec-trónica y se realizaron pruebasserológicas con los antisueros dispo-nibles en el laboratorio de VirologíaVegetal de la Facultad de Agronomía,de la Universidad Central de Vene-zuela.

Reproducción de los sínto-mas virales. Se empleó la metodolo-gía de French y Hebert (11) con el finde lograr la multiplicación de los sín-tomas virales, inoculando con jugocrudo de planta enferma un lote de48 plantas sanas de 7 días de edad dela misma variedad, que crecieron en

isolations were identified as:"Colombian I", "Colombian 2","Tucutunemo" from bean, and "Blackeye" from cowpea. Material wasmultiplied; stability test at sap wasmade, transmission studies throughinsects with aphids and coleopteras;host range was confirmed;observations through electronmicroscopy were carried out andserologic tests with available antiserum in the Vegetable VirologyLaboratory of Agronomy Faculty,Universidad Central de Venezuela.

Viral symptoms reproduction.French and Hebert (11)

methodology was used, with thepurpose of achieving themultiplication of viral symptoms byinoculating with crude juice of adisease plant a lot of 48 health plantsof 7 days age of same variety growingin pots at a reason of 3 plants/pot andtwo daily irrigation were applied forits maintenance, each 8 daysaspersions with liquid foliar fertilizerwere made (foliar NITROFOSKA)and a insecticide, acaricide andfungicide mix.

To obtain crude juice, diseasetissue was taken from young leaves,it was weight and finely cut,macerated in a cold and sterilizedmortar, in presence of potassiumphosphate buffer at pH 7.5 and 0.1 Min proportion of 1:4 (p/v). Plants withonly primary leaves were powderedwith carborundum abrasive 600, andwith index fingertip impregnated withinoculums, soft rubs were made in allarea of primary leave, after with awash bottle with distilled water,inoculated leaves were sprayed withthe purpose of eliminating excess or

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potes, a razón de tres plantas por potey para su mantenimiento se realiza-ron dos riegos diarios cuando fue ne-cesario, cada 8 días se hicieron asper-siones con abono foliar líquido(Nitrofoska foliar) y con una mezclade insecticida, acaricida y fungicida.Para obtener el jugo crudo se tomótejido enfermo preferiblemente de lashojas jóvenes, se pesó y, se cortó fina-mente; luego se maceró en un morte-ro frío esterilizado, en presencia debuffer fosfato de potasio, a pH 7,5 y0,1 M en proporción de 1:4 (p/v). Lasplantas con solo hojas primarias, fue-ron espolvoreadas con el abrasivocarborundo 600, y con la punta deldedo índice impregnado con el inocu-lo se realizaron frotamientos suavesen toda el área de la hoja primaria;luego, con una piseta con agua desti-lada se rociaron las hojas inoculadas,a fin de eliminar los excesos o restosdel inoculo. Se dejaron 5 plantas con-trol inoculadas de la misma forma conagua destilada.

Las inoculaciones se realizarona partir de las cuatro de la tarde, auna temperatura de 22ºC, en estascondiciones las plantas inoculadas semantenían por 24 horas; luego pasa-ban al umbráculo (26,4°C de tempe-ratura y 77,6% de humedad relativa)hasta observar la aparición de sínto-mas virales que fueron evaluados alos 5, 10 y 15 días.

Aislamiento del virus. Con lafinalidad de obtener material para serempleado como aislamiento viral, seprocedió a inocular un lote de 10 plan-tas sanas de cada variedad de caraota(‘Tenerife’, ‘Montalbán’, ‘Tacarigua’,‘Magdaleno’) y de fríjol (‘Apure’,‘Orituco’, ‘Tuy’). que fuese fácil de cul-

rest from inoculums. Five controlplants were inoculated in the sameway with distilled water.

Inoculations were made from 4pm at a temperature of 22ºC.Inoculated plants were kept during 24hours in this conditions, after theywere taken to the greenhouse (26.4ºCtemperature and 77.6% relativemoisture) to viral symptoms appears,that were evaluated at 5, 10 and 15days.

Virus isolation.With the purpose of getting ma-

terial to be employed as viral isolation,a lot of 10 healthy plants of each beanvariety ("Tenerife", "Montalban","Tacarigua", "Magdalena") and ofcowpea ("Apure", "Orituco", "Tuy"), ofan easy cultivation and well definedviral symptoms production, formeasuring ineffectiveness.

Biological propertiesdetermination of each viral isolation.

Stability test in sap. To deter-mine the physical properties of crudejuice of disease plants the followingtests were carried out: Dilution FinalPoint (DFP), Thermic InactivationPoint (TIP) and In Vitro Longevity(IVL), by using methodology describedby French and Hebert (11). Each testwere used healthy bean plants,Tacarigua variety for isolations"Colombian 1", Colombian 2" and"Tucutunemo", whereas cowpea Tuyvariety for isolation "Black eye".Crude juice of foliar tissue frominoculated plants with each isolationswas used in this tests, making amacerate in a cold and sterile mortarand in presence of potassiumphosphate buffer, at pH 7.5 and 0.1M in proportion of 1:4 (p/v). It was

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tivar, que en corto tiempo produjerasíntomas virales bien definidos paramedir la infectividad.

Determinación de las propieda-des biológicas para cada uno de losaislamientos virales

Pruebas de estabilidad ensavia. Para determinar las propieda-des físicas del jugo crudo de plantasenfermas se realizaron las pruebas:Punto Final de Dilución (PFD), Pun-to de Inactivación Térmica (PIT) yLongevidad In Vitro (LIV), utilizan-do la metodología descrita por Frenchy Hebert (11). En cada una de laspruebas se utilizaron plantas sanasde caraota de la variedad Tacariguapara los aislamientos "Colombiana 1","Colombiana 2" y "Tucutunemo",mientras que se utilizó fríjol de la va-riedad Tuy para el aislamiento "OjoNegro". En la realización de estas trespruebas se utilizó jugo crudo de teji-do foliar de plantas inoculadas concada uno de los aislamientos; mace-rando en un mortero frío, estéril y enpresencia de buffer fosfato de potasio,a pH 7,5 y 0,1 M en proporción de 1:4(p/v). Se filtró a través de gasa esté-ril. Estas pruebas se repitieron paraconfirmar los resultados obtenidos yse describen a continuación:

Punto Final de Dilución(PFD). En nueve tubos de 7,5 cm delargo, con 0,1 cm de espesor y 1 cm dediámetro, previamente esterilizados sele agregó nueve mililitros de agua des-tilada por tubo; luego al primer tubose le adicionó un mililitro de jugo cru-do y se rotuló como el tubo con dilu-ción 10-1, se agitó y se tomó con unapipeta estéril un mililitro de la dilu-ción rotulada como 10-1 y se añadió altubo de dilución 10-2, desechando esa

filtered through sterile gauze, thesetests were repeated for confirmingresults obtained and they aredescribed as follows:

Dilution Point Final (DPF). Innine tube of 7.5 cm long, with 0.1 cmwidth and 1 cm diameter, previouslysterilized nine mL of distilled water pertube were added, after to first tube itwas added 1 mL of crude juice and wasnamed as dilution tube ·No. 10-1, it wasagitated and taken with a sterile pipette1 mL of named dilution like 10-1, and itwas added to dilution tube No. 10-2,throwing away that pipette andcontinuing like that for the rest ofdilution tubes: 10-3, 10-4, 10-5 to 10-9.Three plants per pot and per dilutionwere inoculated, and in the same way,three plants were inoculated with crudejuice without diluting and three withdistilled water as control. For plantsinoculation it began with dilution 10-9

to finishing with pure crude juice, withthe previous carborundum apply 600,taking into account the washing ofinoculums and carborundum excess, ashands between each inoculation.

Thermic Inactivation Point(TIP). The following temperature se-ries was evaluated: 45ºC, 50ºC, 55ºC,60ºC, 65ºC, 70ºC, 75ºC, 80ºC, 85ºC, 90ºCand 95ºC. To the tubes used, 1 mL ofcrude juice was added. Every tube usedwas added 1 mL of crude juice. Eachtube was introduced in Water Bathduring 10 min. After, juice was cold ina rapid way by using a water spout and3 plants per pot were inoculated withcrude juice to environmentaltemperature and 3 with sterile distilledwater, as a control.

In Vitro Longevity (IVL).Crude juice was obtained from foliar

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pipeta, siguiendo igual procedimientopara el resto de los tubos con las dilu-ciones: 10-3, 10-4, 10-5 hasta la 10-9; Lue-go se procedió a inocular tres plantaspor pote, por dilución, y de igual for-ma se inocularon tres plantas con jugocrudo sin diluir y tres con agua desti-lada estéril como control. Para la ino-culación de las plantas se comenzó conla dilución 10-9 hasta llegar al jugo cru-do puro, previa aplicación deCarborundo 600 y con la precauciónde lavar el exceso de inóculo ycarborundo, al igual que, las manosentre cada inoculación.

Punto de Inactivación Tér-mica (PIT). Se evaluó la siguienteserie de temperaturas: 45°C, 50°C,55°C, 60°C, 65°C, 70°C, 75°C, 80°C,85°C, 90°C y 95°C. A los tubos utili-zados se les agregó un mililitro de jugocrudo. Cada tubo se introdujo en unbaño de María, por espacio de 10 mi-nutos, luego se procedió a enfriar eljugo rápidamente en agua de chorroy se inocularon tres plantas por pote,por temperatura de igual forma seinocularon tres plantas con jugo cru-do a temperatura ambiental y tres conagua destilada estéril, como control.

Longevidad In Vitro (LIV).Se obtuvo jugo crudo de tejido foliarde plantas inoculadas con cada unode los aislamientos; macerando lashojas en un mortero frío, estéril y enpresencia de buffer fosfato de potasio,a pH 7,5 y 0,1 M en proporción de 1:4(p/v). Se filtró a través de gasa esté-ril, luego se inoculó con jugo crudo tresplantas por pote, por cada intervalode tiempo (0, 24, 32, 48 y 72 horas)que el jugo crudo fue dejado a tempe-ratura ambiente y protegido. Previa-mente al jugo crudo se le agregó 0,1

tissue of inoculated plants with eachisolates, by macerating leaves in acold mortar, sterile and in presenceof potassium phosphate buffer, to pH7.5 and 0.1 M in proportion of 1:4 (p/v). It was filtered through sterilegauze, after three plants per pot wereinoculated with crude juice, per eachtime interval (0, 24, 32, 48 and 72hours) that crude juice was left at aenvironmental temperature andprotected. Previously to crude juice itwas added 0,1 mL of merthiolate, foravoiding contaminant agents.

Insect transmission.Transmission by aphids:

Applying methodology described byFrench and Hebert (11) aphids fromhealthy breeding of specie Myzuspersicae (Suizer), Aphididae family,Aphidinae sub-family (identified atAgriculture Zoology Institute, UCV),maintained on cowpea healthy plants,Orituco variety in a cage protectedfrom insects; aphids were taken witha humid fine paintbrush and placedin a Petri dish containing humid filterpaper and during 60 min aphids werewithout feed, then a period for virusacquisition was permitted, byintroducing in Petri dish diseasesleaves tissues pieces taken from ma-terial infected with virus, previouslyidentified. Aphids were in contactwith disease tissue during 10 min,being collected and transferred tohealthy plants, putting 6 aphids perplant. 120 min later, aphids were gotoff the plants by the application of ainsecticide and plants were translatedto greenhouse for the subsequentsymptoms observation.

Coleopteras transmission:Coleopteras from specie Andrector

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mL de merthiolate, a fin de evitar lapresencia de agentes contaminantes.

Transmisión mediante in-sectos

Transmisión por áfidos. Apli-cando la metodología descrita porFrench y Hebert (11) se utilizó áfidosprovenientes de crías sanas de la es-pecie Myzus persicae (Sulzer), fami-lia Aphididae, subfamilia Aphidinae(identificados en el Instituto de Zoo-logía Agrícola de la UCV) que fueronmantenidas sobre plantas sanas defríjol de la variedad Orituco en unajaula protegida de insectos; los áfidosfueron tomados con un pincel finohumedecido y colocados en una placade petri que contenía papel de filtrohumedecido, y por espacio de 60 min.se sometieron los áfidos al ayuno; lue-go se les permitió un periodo para laadquisición del virus, para ello fueronintroducidos en una placa de petri tro-zos de tejido de hojas enfermas toma-dos del material infectado con el vi-rus, previamente identificado. Losáfidos se colocaron en contacto con eltejido enfermo por espacio de diezmin.; luego, con la ayuda de un pin-cel, se colectaron y se transfirieron alas plantas sanas, colocando seisáfidos por planta. Transcurridos 120min., se retiraron los áfidos de lasplantas con la aplicación de un insec-ticida y las plantas se trasladaron alumbráculo para posterior observaciónde los síntomas.

Transmisión porcoleópteros. Se colectaron en siem-bras de caraota en el campo experi-mental del INIA (Instituto Nacionalde Investigaciones Agrícolas deMaracay, Edo. Aragua), coleópterosde la especie Andrector arcuatus

arcuatus (Oliver) Crisomelidaefamily, Galerucinae sub family(identified at Agricultural ZoologyInstitute, UCV) were colleted in beancrop sowing at experimental field ofINIA (Instituto Nacional de Investi-gaciones Agricolas de Maracay, Edo.Aragua). Coleopteras were located atgreen packing close with organzatissue sustained with elastic bands;it were feed with healthy leaves ofbean during 2 days, with the purposeof cleaning coleopteras of any viruscould be at field in where they hadbeen collected. After this time,coleopteras was located at threehealthy plants of 9 days age, as a con-trol for test, they were fed during 24hours; after, 4 lots of 6 coleopteras pergreen packing containing diseaseleaves taken from plants previouslyinoculated with each of viral isolationsand they were feed during 24 hoursfor virus acquisition. After this time,coleopteras were transferred tohealthy plants of bean or cowpeadepending on viral isolation thatwould like to transmit, 2coleopteras healthy plant-1, 3replications per viral isolation,feeding during 24 hours. Oncecoleopteras were transfer to plants fortheir feeding, they were covered withan isolating plastic camera, design forthis inoculation type. By finishingfeeding period or virus inoculation,insects were eliminated and plantswere taken to the greenhouse forevaluating symptoms at day 5, 15 and30. In those plants that showed viralsymptoms. Virus presence wasconfirmed through virus recuperationtest by mechanic inoculation, by usingfor this tests bean healthy plants

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(Oliver) familia Crisomelidae,subfamilia Galerucinae (identificadosen el Instituto de Zoología Agrícola dela UCV); los coleópteros se colocaronen envases de vidrio tapados con telade organza sujeta con cintas elásticas;se alimentaron con hojas sanas decaraota por espacio de dos días, conla finalidad de limpiar los coleópterosde algún virus que pudiese estar enel campo donde fueron colectados.Una vez transcurrido este tiempo seprocedió a colocar los coleópteros so-bre tres plantas sanas de nueve díasde edad, como control de la prueba,se alimentaron durante 24 horas; lue-go se formaron cuatro lotes de seiscoleópteros por frascos de vidrio quecontenían hojas enfermas tomadas deplantas previamente inoculadas concada uno de los aislamientos virales,y se sometieron a un periodo de ali-mentación de 24 horas para la adqui-sición del virus; transcurrido ese tiem-po los coleópteros se transfirieron aplantas sanas de caraota o fríjol de-pendiendo del aislamiento viral quese deseaba transmitir, doscoleópteros planta-1 sana, tres repeti-ciones por aislamiento viral, se deja-ron alimentar por 24 h. Una vez trans-feridos los coleópteros a las plantaspara su alimentación se cubrieron conuna cámara plástica aislante diseña-da para este tipo de inoculación. Alfinalizar el periodo de alimentación ode inoculación del virus, los insectosfueron eliminados, y las plantas se lle-varon al umbráculo para evaluar sín-tomas a los 5, 15 y 30 días. En aque-llas plantas que manifestaron sínto-mas virales, la presencia de virus secomprobó mediante la prueba de re-cuperación del virus mediante inocu-

Tacarigua variety, for bean isolations"Colombian 1", "Colombian 2" and"Tucutunemo" whereas cowpea Tuyvariety for cowpea "Blackeye"isolation

Differentials Host Evaluation.Species of differentials host proposedby Hampton et al. (13) and Rowell andGibbs (2) were evaluated looking fora good host. Plants of Amarantaceas(Gomphrena Globosa L.),Quenopodiaceas (Chenopodiumamaranthicolor Coste & Reyn, Ch.Quinoa Wild and Ch. album L.),Cucurbitaceas (Cucumis sativus L.and C, Pepo L.) ans Solanaceas(Nicotiana tabacum L., N. glutinosaL., Datura stramonium L. and D.metel L.).

Serologic Tests. There arespecials agars for serology. In thiscase it was used a noble agar at areason of 0.85 g dissolved in 100 mLof sterile distilled water; for avoidingthe contaminant agents, it was added3 mL of sodium azide preparedseparately by adding 0.25 g per each100 mL of sterile distilled water mixedwith 97 mL of liquid agar in aErlenmeyer flask whose content wasdivided in two equal parts and eachone was added 0.5% of sodium dodecylsulphate (SDS) and it were taken tothe autoclave. SDS is an anionicdetergent use with the purpose ofobtaining the virus fractioning, incase of flexible viruses (5). Liquid agarwas flowed in Petri dish, cells of 5 mmdiameter were opened; at the centera cell for anti serum was opened andaround it, 6 equidistant cells tosamples to be identified, by forming acircle around central cell of 2,5 cmapproximately. SBMV and CpSMV

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lación mecánica, utilizándose paraestas pruebas plantas sanas decaraota de la variedad Tacarigua paralos aislamientos de caraota "Colom-biana 1", "Colombiana 2" y"Tucutunemo", mientras que se utili-zó fríjol de la variedad Tuy para elaislamiento de fríjol "Ojo Negro".

Evaluación de loshospedantes diferenciales. En labúsqueda de un buen hospedante parahacer despistajes rápidos se evaluó lasespecies de hospedantes diferencialespropuestos por Hampton y colabora-dores (13) y Boswell y Gibbs (2). Fue-ron evaluadas plantas indicadoras delas familias: Amarantáceas(Gomphrena globosa L.),Quenopodiáceas (Chenopodiumamaranthicolor Coste & Reyn, Ch.quinoa Willd. y Ch. album L.), Cu-curbitáceas (Cucumis sativus L. y C.Pepo L.) y Solanáceas (Nicotianatabacum L., N. glutinosa L., Daturastramonium L. y D. metel L.).

Pruebas serológicas. Para larealización de esta prueba existenagares especiales para serología, ennuestro caso fue utilizado agar noblea razón de 0,85 g que fue disuelto en100 mL de agua destilada estéril; paraevitar la acción de contaminantes seañadió 3 mL de azida de sodio, que sepreparó a parte, agregando 0,25 g porcada 100 mL de agua destilada esté-ril; que se mezclaron con 97 mL deagar líquido en una fiola, el conteni-do de esta fiola se dividió en dos par-tes iguales, y a una de esas partes sele agregó 0,5% de sulfato dodecil desodio (sodium dodecyl sulfate, SDS),y se llevó al autoclave. El SDS es undetergente aniónico usado con la fi-nalidad de lograr el fraccionamiento

anti serum of Vegetable VirologyLaboratory of Agronomy Faculty,Universidad Central de Venezuelawere used for this test. Observationswere made at 24 and 48 hours.

Electron Microscopy: Byapplying methodology of negativecoloring, a drop of viral suspensionwas examined, diluted on a coppergrill previously covered with a thinfilm of nitro cellulose (collodium) andevaporated carbon; a minute laterwith a sterile filter paper the excessof liquid on the grill was cleaned anddried with uranil acetate. Twominutes later the uranil excess wasretired with filter paper; grills wasobserved through transmissionmicroscopy 30000x (Hitachi H-300) ofINIA, for determining viral particlesshape and size (6).

Results and discussion

Different viral sympto-mathology developed in studiedsamples were joined in 4representatives viral isolations of thegeneral symptomathology observed.They involved producers’ areas ofbean and cowpea. Selection of 4isolations yield to the time and spacerequired for studying each of samplesin a precise way.

Isolations from bean."Colombian 1"Virus isolation: Bean

(Tacarigua variety) virusmultiplication was efficient bypermitting maintenance andavailability in live material duringresearch; behavior of this varietyconfirms previously studies (18, 21).

Biological properties of

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del virus, en el caso de que se trate devirus flexuosos (5). Se procedió a va-ciar el agar líquido en las cajas depetri, al solidificar se procedió a abrirceldas de cinco milímetros de diáme-tro; en el centro se abrió una celdapara el antisuero y a su alrededor seisceldas equidistantes a las muestras aidentificar, formando un círculo alre-dedor de la celda central de unos 2,5cm. Para esta prueba se utilizó elantisuero del SBMV y el antisueroCpSMV del laboratorio de VirologiaVegetal de la Universidad Central deVenezuela, Facultad de Agronomía.Se realizaron observaciones a las 24y 48 horas.

Microscopía electrónica.Aplicando la metodología de tinciónnegativa se colocó una gota de la sus-pensión viral a examinar diluida so-bre una rejilla de cobre, que previa-mente se cubrió con una película muydelgada de nitrocelulosa (colodión)junto con carbón evaporado; se espe-ró por espacio de un minuto y luego,con un papel de filtro estéril, se lim-pió el exceso de líquido que estabasobre la rejilla y se procedió a teñircon acetato de uranilo, después de dosminutos se retiró el exceso de acetatode uranilo con papel de filtro, las reji-llas se observaron a través del micros-copio de transmisión 30000x (HitachiH-300) del INIA; para determinar laforma y tamaño de las partículasvirales en estudio (6).

Resultados y discusión

Las diversas sintomatologíasvirales desarrolladas en las muestrasestudiadas se agruparon en cuatroaislamientos virales representativos

isolation determination.Stability test in sap: By

determining the physical propertiesof crude juice from plants inoculatedwith "Colombian 1". TIP resulted in85ºC in 10 min. which is an acceptablerange for SBMV. In previous studies,values of 85ºC to 95ºC (3; 4) arementioned. In relation to PFD thiswas between 10-5 and 10-6, which is inconcordance with SBMV (8), althoughLamptey and Hamilton says that fi-nal dilution is in 10-7 (16). LIV was of168 hours at environmentaltemperature. There is a lot of reportsfor SBMV indicating that it keepsinfectious even three months or moreat environmental temperature (24).

Transmission throughinsects: it was transmittedmechanically through coleopteras A.arcuatus knows in Venezuela asSBMV vector (21).

Differentials host evaluation:Symptoms observed agree with thosedescribed for SBMV (3, 15, 24) (table 1).Species did not react to be inoculated were:Chenopodium amaranthicolor, Ch.Quinoa, Ch, album, Cucumis sativus, C.pepo, Nicotiana tabacum, N. glutinosa,datura stramonium, D. metel, as inprevious studies (2, 4, 8). It can be said thatGomphrena globosa did not react (8),although have been reported like the specie,no leguminous, susceptible to virus (24).

Electron microscopy andserologic tests: Viral particles ofisometric shape were observed. Dueto its viral particle shape and immunediffusion test in agar and identityreaction in front to anti serum SBMV,it is confirmed the presence of SBMV(2, 15, 24). (table 2).

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de la sintomatología general observa-da, y que a su vez, involucraron lasáreas productoras de caraota y fríjolde interés. La selección de solo cuatroaislamientos obedece al tiempo y es-pacio necesario requerido para estu-diar en forma precisa cada una lasmuestras.

Aislamientos provenientes decaraota

"Colombiana 1".Aislamiento del virus. La

multiplicación del virus en caraota dela variedad Tacarigua, fue eficientepermitiendo el mantenimiento y dis-ponibilidad en material vivo durantela investigación; el comportamiento deesta variedad confirma lo señalado enestudios anteriores (18, 21).

Determinación de las pro-piedades biológicas del aisla-miento.

Pruebas de estabilidad en savia.Al determinar las propiedades físicasdel jugo crudo de plantas inoculadascon el aislamiento "Colombiana 1", ElPIT resultó en 85°C en 10 min. estevalor se encuentra en un rango acep-table para el SBMV, en descripcionesanteriores se señalan valores de 85°Cy de hasta 95°C (3; 4). En relación alPFD este estuvo entre 10-5 y 10-6, co-incide con lo señalado para el SBMV(8), aunque Lamptey y Hamilton in-dican que la dilución final es en 10-7

(16); La LIV fue de 168 horas a tem-peratura ambiente, existen numero-sos reportes para el SBMV, señalan-do que éste se mantiene infectivo has-ta por más de tres meses a tempera-tura ambiente (24).

Transmisión a través de in-sectos. El aislamiento "Colombiana1" fue transmitido mecánicamente y

"Colombian 2"Virus isolation. By inoculating

Tacarigua variety it were observedchlorite lesions of 0.2 mm diameterapproximately in primary leaves andsystemic mosaic in trifoliate leaves,and leaves gave a fatty aspect withampoules. This variety is excellent forvirus reproduction.

Biological properties ofisolation determination.

Stability test in sap: TIP at60ºC in 10 min is at range of 50ºC to65ºC, corresponding to BCMV (1, 3);PFD agree with those reached byBCMV in different studies (10-3, 10-4,In relation to LIV, it was of 24 hours,according to range for BCMV (1, 2).

Transmission through insects:Virus could be transmitted by aphidM. persicae with a low transmissionpercentage which confirm that thisaphid transmit virus in a no persistentway (18, 19) and the transmissionpercentage can be variable, accordingto employed variety (20).

Differentials host evaluation:During the evaluation, species thatshows symptoms were: C.amaranthicolor y C. quinoa, bydeveloping chlorotic local lesions andby showing necrosis and a yellow halo;there were no observed systemicsymptoms. Symptomathologydeveloped have been described forthese species previously (1, 2, 3).

Electron microscopy andserological tests: Viral particles of722 mm long, with flexuous orphylamentous shapes. Agar immunediffusion test between availableantigen and anti serum resultednegatives (table 2).

These results are in agreement

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a través del coleóptero A. arcuatus se-ñalado en Venezuela como vector delSBMV (21).

Evaluación de loshospedantes diferenciales. Lossíntomas observados durante la eva-luación de la gama de hospedantes di-ferenciales coinciden con los descritospara el SBMV (3, 15, 24) (cuadro 1).

Las especies que no reacciona-ron al ser inoculadas fueron:Chenopodium amaranthicolor, Ch.quinoa, Ch. album, Cucumis sativus,C. pepo, Nicotiana tabacum, N. gluti-nosa, Datura stramonium, D. metel,coincidiendo con lo señalado en carac-terizaciones previas (2, 4, 8). Es deresaltar que Gomphrena globosa, noreaccionó (8); aunque ha sido repor-tada como la especie, no leguminosa,susceptible al virus (24).

Microscopía electrónica ypruebas serológicas. Se observópartículas virales de formaisométrica, por la forma de las partí-culas virales y en la prueba deinmunodifusión en agar la reacción deidentidad frente al antisuero SBMVreafirman que se trata del SBMV (2,15, 24). (cuadro 2).

"Colombiana 2"Aislamiento del virus. Al ino-

cular la variedad Tacarigua se obser-varon lesiones cloróticas de aproxima-damente 0,2 mm de diámetro en lashojas primarias y mosaico sistémicoen las hojas trifoliadas, enrollamientoy las hojas adquirieron un aspectograsiento con presencia de ampollas.Esta variedad resulta excelente parala propagación del virus.

Determinación de las pro-piedades biológicas del aisla-miento.

with those reported for BCMV thatincludes the following viruses: Azukibean mosaic virus, Blackeye cowpeamosaic virus, Cowpea (aphid-borne)mosaic virus, Cowpea vein-bandingmosaic virus, Peanut blotch virus,Peanut stripe virus and someisolations in soybean, including someraces of this virus (3).

"Tucutunemo"Virus isolation. By inoculating

healthy plants of P. vulgaris,Tacarigua variety, a mosaic wasobserved in where tonalities wellmarked (clear and obscure green) aremixed. After mosaic appeared, leavesshows a trend to suffering anarrowing with enlargement and withampoules presence in foliar sheet;stems are too thick that a twisted isproduced which cause sizediminishing of plant size. This varietypermits virus propagation efficiently.

Determination biologicalproperties isolation.

Stability test in sap: It can beprobed that this virus was inactivatedat temperatures over 90ºC. Themaximum dilution in which viruskeeps infective was between 10-4 and10-6, in concordance with testaccomplished. Besides, crude extractvirus of sap at environmentaltemperature of 22ºC was infectiveduring a period of 144 hours accordingto reported for the SBMV (4, 8, 16).

Transmission troughinsects: Virus can be transmitted ina mechanic way through coleoptoreonidentified from Andrector arcuatus(Oliver) specie, making thetransmission with a 33.33% ofefficiency (table 2). Transmission byaphids was negative.

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Cuadro 1. Reacción de hospedantes diferenciales ante los cuatroaislamientos virales.

Table 1. Differentials host reactions to four viral isolations

Reacción al aislamiento

Hospedante: Caraota Fríjol

Tucutunemo Colombiana 1 Colombiana 2 Ojo negro

C. Amaranthicolor Ns Ns Lln LlnC. Quinoa Ns Ns Lln LlnC. Album Ns Ns Ns NsCucumis sativus Ns Ns Ns NsC. pepo Ns Ns Ns NsNicotiana tabacum Ns Ns Ns LlnN. glutinosa Ns Ns Ns LlnDatura stramonium Ns Ns Ns LlcD. metel Ns Ns Ns NsGomphrena globosa Ns Ns Ns LlnArachis hipogaea Ns Ns Ns NsPisum sativum Llc Llc, Ss Ns LlcPhaseolus lunatus Lln Lln Lln LlnVicia faba Ns Ns Lln NsCicer arietium Ns Ns Ns NsCanavalia ensiformis Ns Lln Ns LlnCajanus cajan Ns Ns Lln SsVigna radiata Ns Lln, Ss Lln SsLens culinaris Ns Ns Llc NsDolichus lablab Ns Ns Ns Llc

Ns: No hubo síntomas;Ss: síntomas sistémicos: mosaicos, ampollas;Llc: Lesiones locales cloróticas;Lln: Lesiones locales cloróticas que se vuelven necróticas, no presentan otros síntomas.

Pruebas de estabilidad ensavia. El PIT a los 60°C en 10 min.,se encuentra en el rango de 50°C a65°C, señalado para el grupo BCMV(1, 3); El PFD coincidió con el alcan-zado para el BCMV en diferentes es-tudios (10-3-10-4); En cuanto a la LIVfue de 24 horas, valor que se encuen-

Differentials host evaluation:By inoculating differentials host,species that showed symptoms were:Pisum sativum and Pisum lunatus.Pisum sativum inoculated withisolation turned chlorotics, speciallyleaves nevation, then infection issystemic agree with symptoma-

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Cua

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Ojo

Neg

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85ºC

60ºC

90ºC

65ºC

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)10

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0-610

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0–610

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rica

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tra dentro del rango señalado para elBCMV (1, 2).

Transmisión a través de in-sectos. Se logró transmitir el virus através del áfido M. persicae con unbajo porcentaje de transmisión; estocorrobora que este áfido transmite elvirus en forma no persistente (18, 19)y que el porcentaje de transmisiónpuede ser variable, de acuerdo a lavariedad empleada (20).

Evaluación de loshospedantes diferenciales. Duran-te la evaluación de la gama de hospe-deros diferenciales las especies quemostraron síntomas fueron: C.amaranthicolor y en C. quinoa. desa-rrollando lesiones locales cloróticas, queluego se necrosaron y rodearon de unhalo amarillento; no se observaron sín-tomas sistémicos. La sintomatologíadesarrollada ha sido descrita para es-tas especies con anterioridad (1, 2, 3).

Microscopía electrónica ypruebas serológicas. Se observaronpartículas virales de 722 nm de lar-go, de forma flexuosas o filamentosas,algunas con apariencia trucadas yagregadas. Las pruebas deinmunodifusión en agar entre elantígeno y los antisueros disponiblesresultaron negativas (cuadro 2).

Todo lo anterior coincide con lodescrito para el grupo del BCMV, queincluye los virus: Azuki bean mosaicvirus, Blackeye cowpea mosaic virus,Cowpea (aphid-borne) mosaic virus,Cowpea vein-banding mosaic virus,Peanut blotch virus, Peanut stripe vi-rus y algunos aislamientos en soya,además se distinguen varias razas deeste virus (3).

"Tucutunemo".Aislamiento del virus. Al ino-

thology described by other authors forthis specie (3); although is pointed outlike susceptible host (4). Meanwhile,at inoculated plants of Pisum lunatuslocal lesion appeared at day 5 andwhen necroses were rounded by ayellow hale; there were not systemicsymptoms manifestation as reported(24). However, this specie has beennamed as immune to BSMV (8).

Electron Microscopy andSerologic Tests: A lot of viral particleswere observed of 26.72 nm diameterapproximately, with isometric shape,some of them are empty and some lookfilled. In test of agar immune diffusion,a reaction of identity happened throughprecipitation band formation welldefined between antigen("Tucutunemo") and anti serum againstSBMV that confirm southern mosaic ofbean virus presence (2, 15, 24).

Cowpea isolation.Blackeye.Virus isolation. It was

confirmed that virus is multiplied andit is maintained in Tuy variety (9) Ina efficient way which confirms thisvariety is appropriated for viruspropagation and maintenance.

Determination of biologicalproperties of isolation.

Stability test on sap. PIT at65ºC in 10 min match with previouscharacterizations of CpSMV, and TIPvalue is between 65 y 70ºC. PFDbetween 10-4 and 10-5 match withranges established by several authors(2, 3). LIV was of 4 days; cultivar usedin test as well as the environmentalconditions are supposed to influent onit. There are reports of LIV from 5days for bean of Pinto variety. Otherauthors says that virus keep infective

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cular plantas sanas de P. vulgaris var.Tacarigua se observó un mosaico, don-de se alternan tonalidades bien mar-cadas de verde claro y oscuro, a lospocos días, después que aparece elmosaico las hojas afectadas tienden asufrir un estrechamiento con alarga-miento y con la presencia de ampo-llas en la lámina foliar, los tallos sontan delgados que se produce un retor-cimiento, lo que ocasiona la disminu-ción del tamaño de las plantas. Estavariedad permite propagar el viruseficientemente.

Determinación de las pro-piedades biológicas del aisla-miento.

Pruebas de estabilidad en sa-via. Se pudo constatar que este virusse inactivó a temperaturas por enci-ma de los 90°C, la dilución máximaen la cual todavía se manteníainfectivo estuvo entre los 10–4 y 10-6

en las pruebas realizadas, además elvirus en extracto crudo de savia a tem-peratura ambiente de 22°C, fueinfectivo durante un periodo de 144horas, coincidiendo con lo reportadopara el SBMV (4, 8, 16).

Transmisión a través de in-sectos. El virus se logró transmitirmecánicamente y a través decoleópteros identificados como de la es-pecie Andrector arcuatus (Oliver); rea-lizándose la transmisión con un 33,33%de eficiencia (cuadro 2); la transmisióna través de áfidos fue negativa.

Evaluación de loshospedantes diferenciales Al ino-cular los hospedantes diferenciales, lasespecies que mostraron síntomas fue-ron Pisum sativum y Pisum lunatus.Las plantas de Pisum sativum inocu-ladas con el aislamiento se tornaron

from 3-5 days, depending onenvironmental conditions (3, 25).

Transmission through insects.Virus was transmitted by A. arcuatusreported as a vector of CpSMV (2, 3, 9).

Differentials host transmission:Species that showed symptoms were:Chenopodium amaranthicolor, C.Quinoa, Nicotiana tabacum, N. Glu-tinosa, Gomphrena globosa,Phaseolus lunatus and Canavliaensiformis. Leaves inoculated at day5 showing chlorotics local lesions of 1nm diameter approximately thatbecomes necrotic. Systemic symptomswere not consistent with otherauthors (2, 3). Chenopodium did notreact although had been susceptibleto virus (2, 3).

Datura stramonium, Pisumsativum and Dolichus labladdeveloped chlorotic lesions; Vignaradiate and Cajanus cajan developedmosaic and ampouling. Virus did notaffect leguminous group: Arachishypogaea, Cicer arientum, Vicia faba,Lens culinaris, other species did notreact to be inoculated: Cucumissativus, C. pepo and Datura metel,matching with described for otherspecies (2).

Electron MicroscopySerological Test: A highconcentration of polyedric viralparticles of 27.27 nm diameter, ofisometric shape, by showing an emptyappearance and aggregation betweenviral particles. Agar immune diffusiontest in front of anti serum CpSMV,reaction resulted positive; thatindicates the presence of CpSMV (3,25); identified at Aragua Valleys bythe first time in Venezuela (9).

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cloróticas, sobre todo las nervadurasde las hojas, luego la infección se hacesistémica, coincidiendo lasintomatología con la descrita por otrosautores para esta especie (3); aunquetambién es señalada como hospedantesusceptible, aunque no describe lossíntomas (4). Mientras que, en lasplantas de Pisum lunatus inoculadasaparecieron a los cinco días lesioneslocales que luego al necrosarse se ro-dearon de un halo amarillo; no hubomanifestación de síntomas sistémicos,como ha sido reportado (24), sin em-bargo, esta especie ha sido señaladacomo inmune al BSMV (8).

Microscopía electrónica ypruebas serológicas. Fueron obser-vadas numerosas partículas viralesde aproximadamente unos 26,72 nmde diámetro y de forma isométrica, al-gunas de apariencia vacía y otras seobservan llenas. En la prueba deinmunodifusión en agar, ocurrió unareacción de identidad al formarse unabanda de precipitación bien definidaentre el antígeno (aislamiento"Tucutunemo") y el antisuero contrael SBMV que reafirma que se tratadel virus del mosaico sureño de lacaraota (2, 15, 24).

Aislamiento proveniente defríjol.

Ojo Negro.Aislamiento del virus. Se con-

firmó que el virus se multiplica ymantiene eficientemente en la varie-dad Tuy (9), confirmándose las bon-dades de la variedad para la propa-gación y mantenimiento del virus.

Determinación de las pro-piedades biológicas del aisla-miento.

Prueba estabilidad en savia.

Conclusions

From 4 representative isolationsof viral symptomathology studied, 3viral isolations were obtained frombean by identifying BSMV in two ofthem. First one comes fromTucutunemo Valley sample (Araguastate) whereas second one wasbrought from Colombia, collected inSanare (Lara state), being the firsttime referred at Lara state.

In relation to fourth isolation, incowpea was identified CpSMV fromPortuguesa and Falcon states.

Virus presence BSMV, BCMVand CpSMV at new producer areasshows its dissemination in country.

Respect to viruses, it isnecessary a higher control of purityin seed for sowing, and seedcertification.

End of english version

El PIT a los 65°C en 10 min. coinci-den con lo señalado en caracterizacio-nes previas del CpSMV y que el valordel PIT se encuentra entre 65° y 70°C.El PFD entre 10-4 y 10-5 coincidió conlos rangos señalados por varios auto-res (2, 3). La LIV fue de 4 días, se creeque influyeron tanto el cultivar em-pleado en la prueba como las condi-ciones ambientales; existen reportesde LIV de cinco días para caraota dela variedad Pinto; otros autores seña-lan que el virus puede permanecerinfectivo de 3 a 5 días dependiendo delas condiciones ambientales (3, 25).

Transmisión a través de in-sectos. El virus fue transmitido porA. arcuatus reportado como vector delCpSMV (2, 3, 9).

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Evaluación de loshospedantes diferenciales. Las es-pecies que mostraron síntomas fue-ron: Chenopodium amaranthicolor, C.Quinoa, Nicotiana tabacum, N. Glu-tinosa, Gomphrena globosa,Phaseolus lunatus y Canavaliaensiformis. las hojas inoculadas a loscinco días presentaron lesiones loca-les cloróticas de aproximadamente unmm de diámetro, que luego se volvie-ron necróticas, no se observaron sín-tomas sistémicos, coincidiendo conotros autores (2, 3). Chenopodiumalbum, no reaccionó aunque ha sidoseñalada susceptible al virus (2, 3).

Datura stramonium, Pisumsativum y Dolichus lablad desarrolla-ron lesiones cloróticas; Vigna radiatay Cajanus cajan desarrollaron mosai-co y ampollamiento; el virus no infec-to al grupo de leguminosas: Arachishypogaea, Cicer arientum, Vicia faba,Lens culinaris; otras especies que noreaccionaron al ser inoculadas fueron:Cucumis sativus, C. pepo y Daturametel, coincidiendo con lo descritopara estas especies (2).

Microscopía electrónica ypruebas serológicas. Se observó unaalta concentración de partículas viralespoliédricas de unos 27,27 nm. de diá-metro, de forma isométrica, mostran-do algunas una apariencia vacía y agre-gación entre las partículas virales. Enla prueba de inmunodifusión en agarfrente al antisuero CpSMV la reacciónresulto positiva. Todo lo anteriormenteseñalado, indica que se trata delCpSMV (3, 25); identificado por prime-ra vez en el país en los valles del estadoAragua (9).

Conclusiones

De los cuatro aislamientos re-presentativos de la sintomatologíaviral estudiada, tres aislamientosvirales provenían de caraota, se iden-tifica el BSMV en dos de estos aisla-mientos; el primero proviene de unamuestra del valle de Tucutunemo enel estado Aragua, mientras que el se-gundo, en un material de caraota ne-gra procedente de Colombia colecta-do en Sanare, estado Lara, tomándo-se este hecho, como el primer reporteen el estado Lara.

En cuanto al cuarto aislamien-to, se identificó en fríjol al CpSMV apartir de semilla de los estados Por-tuguesa y Falcón.

La presencia de los virus BSMV,BCMV y CpSMV en nuevas áreas pro-ductoras indican su diseminación enel país.

Se ratifica la necesidad, con res-pecto a las virosis, de un mayor con-trol de la pureza en la semilla para lasiembra y se corrobora la importan-cia de la certificación de semilla y deeste tipo de transmisión de virus.

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