IDENTIFICACIÓN MICROBIANA (1)

7/24/2019 IDENTIFICACIN MICROBIANA (1)

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CARACTERSTICAS PARA LAIDENTIFICACIN MICROBIANA


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Se entiende por identificacinmicrobiana al conjunto de tcnicas yprocedimientos que se aplican paraestablecer la identidad de unorganismo.

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Estas tcnicas se utilizan en difeentes!eas"

En el rea clnica es importante conocer cual es el agentecausal de la infeccin que presenta un enfermo parapoder tratarlo.

Investigacin bsica donde se aisla un determinadoorganismo que debe identificarse para comprobar si setrata de un organismo conocido o de uno nuevo parapoder clasificarlo.

En la industria de alimentos, donde las normas de controlde calidad exige que la fabricacin de estos alimentos

debe realizarse en reas controladas con ausencia deciertos organismos, los alimentos son sometidos a unaserie de controles microbiolgicos para asegurar laausencia de organismos que puedan causarinfecciones yo descartar la presencia de toxinascapaces de causar intoxicaciones alimentarias.


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L#s $t#d# $!s utilizad#s %aa la identificaci&n $ic#'iana seclasifican en"

Mtodos basados en criterios morfolgicos. Mtodos basados en tincin diferencial. Mtodos basados en pruebas bioqumicas.

Mtodos basados en pruebas serolgicas. Mtodos basados en deteccin molecular.

No todos los organismos se identifican por las mismas tcnicas,ni con base a un solo mtodo, sino a la combinacin de uno

o ms.


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M(TODOS BASADOS EN CRITERIOS MORFOL)ICOS*

os rasgos morfolgicos !estructurales" #an ayudado a losta$onomistas a clasificar organismos.

%ajo el microscopio pueden ser tan parecidosdificultndose su clasificacin, a&n cuando la morfologacelular dice poco sobre las relaciones filogenticas, siguesiendo &til para la identificacin bacteriana.

'aractersticas macroscpicas, en funcin del tama(o,altura de la colonia, forma, color, olor, te$tura y grado dead#erencia al medio de culti)o.

*or ejemplo+ la presencia de endosporas y su localiacinresulta de muc#a utilidad para la identificacin de bacilosesporulados.


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M(TODOS BASADOS EN TINCIN DIFERENCIAL*

-s posible sacar conclusiones en relacin con la morfologae$aminando una lamina que fue sometida a un proceso detincin.

-stos criterios morfolgicos encabean la primera etapa del

proceso de identificacin la mayor parte de la bacterias te(idascon ram se pueden clasificar como ram positi)as y ramnegati)as.

/inciones fluorescentes !naranja de acridina, rodamina, blancocalcofluor" tincin de inmunofluorescencia directa o indirecta.

/inciones )itales. para la )isualiacin de espiroquetas yprotooos.

/inciones acidorresistentes y otras tinciones para detectarcapsulas, flagelos, esporas0


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M(TODOS BASADOS EN PR+EBAS BIO,+MICAS

-stas pruebas se fundamentan en demostrar si elorganismo es capa de fermentar a&cares, lapresencia de enimas, la degradacin decompuestos, la produccin de compuestoscoloreados.

1un bacterias fuertemente relacionadas pueden

separase en dos especies diferentes con base apruebas bioqumicas.


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*or ejemplo las bacterias entericas ram 2 forman un grupogrande y #eterogneo.

-sta familia -nterobacteriaceae incluye a )arios patgenos

que causan sindromes diarreicos.

os gneros clinicamente ms importantes son+ -sc#eric#ia,Salmonella, S#igella, 'itrobacter y -nterobacter.

-l gnero -sc#eric#ia, -nterobacter y 'itrobacter, fermentanla lactosa con produccin de cido y gas a diferencia de losgneros Salmonella y S#igella que no fermentan la lactosa.


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!emostracin de la produccin de Indol

"qu se emple dos tubos con triptona y se inocul losmicroorganismos Salmonella y Staphylococcus Aureusy se de# incubadoa $% &' por () *oras y despu+s a temperatura ambiente por % das.

El tubo de S. Aureusdio positivo con color a ro#o cereza, esto indica queeste tipo de microorganismo es capaz de degradar al aminocidotritfano formando un producto de *idrlisis de Indol.

ioqumicamente la -almonella se caracteriza por no fermentar lalactosa y por no licuar la gelatina y por no producir Indol, aunque existenalgunas excepciones.

o todos los microorganismos pueden realizar este rompimiento detriptona a indol, por lo cual esta reaccin es de valor taxonmico.

E. coli logr degradar la triptona y reaccionar para producir Indol, esdecir dio positiva la prueba, el microorganismo /ram 0 a pesar de que sele consideraba susceptible, en este medio reaccionan sin ning1nproblema.


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Los sistemas comerciales ms comnmente usados son :

* BBL, ENTEROTUBE II (Becton Dickinson! Es un sistema "ara usar en la

identi#icaci$n de Entero%acterias, de#inida como %astones &ram ', aero%ios oanaero%ios #acultatios, o)idasa ('! onsiste en un tu%o de "lstico con +medios de cultio contenidos en com"artimentos indiiduales -ue se inoculansimultneamente en una eta"a . "ermiten la detecci$n de +/ caracter0sticas%io-u0micas!

* O1I23ER4 TUBE II, (Becton Dickinson! Es un sistema listo "ara usar "ara la

identi#icaci$n de %astones 5ram (', aero%ios o anaero%ios #acultatios,o)idasa (6! onsiste en un tu%o de "lstico de + medios de cultio -ue"ermite la reali7aci$n simultnea de +8 "rue%as %io-u0micas!

* 9I ; E! Es un sistema estandari7ado "ara la identi#icaci$n de Bacterias&ram '! onsiste en una "lantilla con microtu%os conteniendo medios de

cultio des


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2roduccin "lco*lica de 3evadura -n la le)adura que realia una fermentacin alco#lica,

como es el caso de cepas en tubo de ensayo 3pasteuriado4

produjo mayor fermentacin ya que al someterlo al calorse in#ibe el crecimiento bacteriano que no son de nuestrointers y al inocular le)adura esta se desarrolla sin ningunadificultad5

lo que ocurri en el tubo rotulado, no pasteuriado ya queaunque crecieran le)aduras y la fermentacin no fuecompleta, ya que parte de la glucosa all e$istente fueconsumida por los dems microorganismos.


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2roduccin de 4(- por los microorganismos

1qu se inocul los microorganismos E. coli y Salmonellaen un tubo de ensayo cada uno con agar inclinado.

-n el primer tubo con E. Coli no cambio color, dionegati)o, no reacciono con el aufre o no es capa de producircido sulf#drico en un medio de aminocido que contengaaufre, el microorganismos no se desarrolla en medio de 67 eneste caso.

Mientras que la salmonella si desarroll !en este mediocon aminocido" !87S", esta prueba dio positi)o.

/ambin #ubo presencia del gas en medio del agar, estegas demuestra la presencia de !87S". /ambin elennegrecimiento en la lnea de siembra, nos indica que #uboproduccin de cido sulf#drico


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M(TODOS BASADOS EN DETECCIN MOLEC+LAR

1 tra)s de procedimientos y reacti)os, sepueden detectar determinadas secuenciasde 19N que son propias de un

determinado agente microbiano.

*': se aplica generalmente para laidentificacin de organismos que no

pueden ser culti)ados por mtodoscon)encionales


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;. Separacin de las cadenas de 19N, ello se realiaaumentando la temperatura, la cual rompe los enlacesde 8 que mantiene unidos a las cadenas de 19N.

7. 1dicin de cadenas cortas de polinucletidos,denominados cebadores que se unen porcomplementariedad de bases a cada una de las cadenasdel fragmento de 19N que se desea amplificar, uno se

une a la cadena ?= y otro a la cadena ?=>


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ejemplos

%acterias Vibrio cholerae, helicobacter pylori,Staphylococcus aureus. Shigella dysenteriae,

Escherichia coli, Mycobacterium tuberculosis.

Airus+ *ar)o)irus, :ota)irus, 1deno)irus:#ino)irus.

*rotooarios+ Toxoplasma gondii, entamoebahistolyticum, Tripanosoma cruzi.


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6tro mtodo se fundamenta en lacomplementariedad de bases de cidos

nucleicos. Son aquellos que utilian sondas de 19N, que

se define como secuencias de oligonucleotidosde 19N marcados, con un elemento radioacti)o

!?7*, ;7


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M(TODOS BASADOS EN PR+EBAS SEROL)ICAS*

Bmplican la utiliacin de preparaciones deinmunoglobulinas especficas pro)enientes de suero ode un reacti)o y que pueden ser de gran utilidad en laidentificacin microbiana en muestras puras o

muestras biolgicas.

'ada uno tiene un fundamento particular, pero enlneas generales todos se basan en la reaccin de unantgeno presente en el agente microbiano con suanticuerpo correspondiente.

os serotipos permiten diferenciar organismos a ni)el desubespecie, algo de gran importancia en epidemiologa.


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Bnmunofluorescencia puede utiliarse para la identificacindel organismo aislado o presente en una muestrabiolgica.

-n el mtodo directo se fija la muestra problema a unalamina y se pone en contacto con el antisuero especficomarcado con una sustancia fluorescente !rodamina ofluorescena" transcurrido el tiempo para que tenga lugar la

reaccin antgeno anticuerpo se e$pone la lamina a laradiacin ultra)ioleta para )isualiar la reaccin

.


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E3I-" Enzyme Linked Immuno Sorbent Asssay5 por sus siglas

en ingl+s que significan Ensayo Inmuno Enzimtico"bsorbente. Estudio inmunolgico de laboratorio pormedio de reactivos para detectar diversos g+rmenes,

tales como virus o protozoarios.

-e basa en la deteccin de un antgeno inmovilizadosobre una fase slida mediante anticuerpos que directao indirectamente producen una reaccin cuyo producto,

por e#emplo un colorante, puede ser medidoespectofotom+tricamente


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as @ fases de un ensayo -BS1 son las siguientes +

'on#ugacin del anticuerpo o del antgeno con un enzima !pero$idasa, fosfatasaalcalina,...". -l antgeno marcado se emplea en ensayos de competicin de antgeno.

6nin del antgeno 7o del anticuerpo8 a los pocillos. se realia con facilidad a lasuperficie de plsticos tratados que tienen gran afinidad por protenas.

9ormacin de una o ms capas de inmunocomple#os. -n el caso del antgeno unido ala placa se puede detectar mediante un anticuerpo anti>antgeno marcado !-BS1 directo"o empleando un anticuerpo primario anti>antgeno y un secundario anti primario marcado!-BS1 indirecto". -ste segundo mtodo permite la amplificacin de la se(al al poderseunir uno o ms anticuerpos secundarios a cada anticuerpo primario. -n el caso delanticuerpo unido a la placa se incuba con una mecla de antgeno y antgeno marcado. Seensayan diferentes relaciones de antgeno fro frente a una cantidad fija de antgenomarcado. -s el ensayo de competicin del antgeno.

:evelado de la reaccin enzimtica. 9espus de un la)ado para eliminar todos lasmolculas marcadas no fijadas en forma de inmunocomplejos se a(ade el sustratoenimtico en solucin. Se deja reaccionar y se lee la densidad ptica !9.6." medianteespectrofotometra.
http://es.wikipedia.org/wiki/Fr%C3%ADohttp://es.wikipedia.org/wiki/Fr%C3%ADo


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Esta prueba se utiliza ampliamente en loslaboratorios clnicos y le permite al m+dico+

"nalizar la sangre del paciente con un antgeno 7e#., virus obacterias8 para ver si su sistema inmunolgico lo reconocecomo algo que *a visto antes.

"nalizar la sangre del paciente para ver si una sustanciaparticular como una *ormona 7un antgeno8 est presenteen su organismo.


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