IDENTIFICACION Y AISLAMIENTO DE CUMARINAS EN LA RUDA (RUTA GRAVEOLENS)

Alfaro Molina Willy Javier1, Choque Alegre Devora Lizeth1, Paredes Añari Melanie

Shirley1, Uzátegui Ibáñez María del Rosario1.

1Programa Profesional: Farmacia y Bioquímica, Facultad de Ciencias Farmacéuticas, Bioquímicas y Biotecnológicas, Campus U.C.S.M., Arequipa – Perú.

1. RESUMEN

En esta práctica se puede observar y consultar algunas de las propiedades de las cumarinas presente en la ruda así mismo el interés biológico así como su uso. También vimos cómo es la extracción de cumarinas con el disolvente orgánico adecuado que es el cloroformo, el producto de vamos a obtener un extracto, un poco se colocó en un le añadimos unos reactivo para la presencia de cumarinas el resto de extracto que lo utilizaremos la para cromatografía de capa fina.

La identificación de cumarinas presentes en las muestras extraídas de las hojas y flores de la ruda, por medio del método de cromatografía de capa fina; como fase estacionaria utilizaremos silica gel y la fase móvil compuesta de tolueno y éter etílico saturada en acido acético dicho procedimiento se realizara en la pera de decantación de ahí se espera a la separación de fases y se elimina el agua que es la que termina en la fase de abajo una ves obtenido la que será la fase móvil se coloca en la cámara de cromatografía y se espera hasta que sature el ambiente dentro de la misma, mientras esperamos se procede a sembrar las muestras en la placa de cromatografía, este proceso de sembrado se repite hasta 10 veces por cada una de las dos muestras, una ves terminado este proceso de sembrado y estando seca las muestras en la placa se colocan en la cámara de cromatografía. Al retirar la placa de la cámara de cromatografía se marca el avancé de la fase móvil con un lápiz y se espera al secado, luego utilizamos un gabinete de visualización de cromató gramas de capa fina. Incluye lámpara UV 254 nm o 360 nm.

Observamos las manchas a diferentes grados y las marcamos para tener registro de ellas, a continuación roseamos la placa de cromatografía con hidróxido de potasio para llevarlo de nuevo hacia la lámpara y observar el resultado. Finalmente marcamos todas las manchas observadas y determinamos el Rf de cada una de las manchas.

Palabras clave: Cumarina, método de análisis Ruda (Ruta graveolens).

2. ABSTRACT

In this practice you can observe and see some of the properties of coumarins present in the same rough and biological interest and use. We also saw as coumarins extraction with suitable organic solvent is chloroform, the product we obtain an extract, a bit is placed in a few reactive we add to the presence of the remaining extract coumarins that use the thin layer chromatography.

The identification of coumarins present in samples taken from the leaves and flowers of rue, by the method of thin layer chromatography; use as stationary phase silica gel and the mobile phase comprised toluene and ethyl ether saturated acetic acid this procedure is held in the bulb there decanting expected to phase separation and the water is removed that is ending in the bottom phase obtained once a mobile phase will be placed in the chamber chromatography and waits until saturate the atmosphere inside it, while waiting to proceed in plant samples chromatography plate, this process is repeated until seed 10 times for each of the two samples, this process is completed once a seeding and being dry samples are placed on the plate in the chromatography chamber. When removing the plate from the chromatographic chamber marks the advancement of mobile phase with a pencil and is expected to dry, then use a display cabinet programs thin layer chromatograph. Includes UV lamp 254 nm or 360 nm.

Spots observed at different grades and registration mark to have them, then roseamos chromatography plate with potassium hydroxide to bring him back to the lamp and observe the result. Finally mark all the spots observed and determined the Rf of each of the spots.

Key words: Coumarin, analysis method, Rue (Ruta graveolens).

3. INTRODUCCION

La cromatografía es un método físico o de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.

Las técnicas cromatográficas1 son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado en un sólido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas velocidades y se van separando. Después de que los componentes hayan pasado por la fase estacionaria, separándose, pasan por undetector que genera una señal que puede depender de la concentración y del tipo de compuesto.

Diferencias sutiles en el coeficiente de partición de los compuestos da como resultado una retención diferencial sobre la fase estacionaria y por tanto una separación efectiva en función de los tiempos de retención de cada componente de la mezcla.

La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:

Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).

Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

Clasificación de la cromatografía

Tipos Fase móvil Fase estacionariaCromatografía en

papelLíquido Líquido (moléculas de agua contenidas en la

celulosa del papel)Cromatografía en capa

finaLíquido Sólido

Cromatografía de gases

Gas Sólido o líquido

Cromatografía líquidaen fase inversa

Líquido (polar)

Sólido o líquido(menos polar)

Cromatografía líquidaen fase normal

Líquido(menos polar)

Sólido o líquido(polar)

Cromatografía líquidade intercambio iónico

Líquido (polar)

Sólido

Cromatografía líquidade exclusión

Líquido Sólido

Cromatografía líquidade absorción

Líquido Sólido

Cromatografía defluidos supercríticos

Líquido Sólido

Cromatografía en capa fina

La cromatografía en capa fina (CCF), TLC (Thin layer chromatography) es una técnica cromatográfica. La fase estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte.

En cromatografía en capa fina se utiliza una placa cromatográfica inmersa verticalmente en un eluyente apolar; La placa cromatográfica consiste en una fase estacionaria polar (comúnmente se utiliza sílica gel) adherida a una superficie sólida con algún agente cementante. El eluyente debe ser un compuesto líquido apolar,

generalmente orgánico. Para realizar la CCF, se debe apoyar la placa cromatografica sobre algún recipiente o cámara que contenga la fase líquida a aproximadamente 1 cm (la distancia entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar). la cromatografía en capa fina es la combinación de todos los colores en un papel.

Aplicación de las muestras

Los productos a examinar se disolverán, cuando sea posible, en un disolvente orgánico que tenga un punto de ebullición lo suficientemente bajo para que se evapore después de la aplicación, lo más común es usar acetona. Frecuentemente se emplean disoluciones al 1%, de manera que al aplicar 2 µl resulta en la carga 20 µg de producto sólido. Muchos reactivos de revelado llegan a detectar 0.1 µg de material; por esto con esta carga puede llegarse a observar un 5% de impurezas.

Existen una gran variedad de micro pipetas y micro jeringuillas para realizar el proceso de siembra de la muestra a analizar. También pueden usarse tubos capilares. El proceso de siembra se realiza tocando con la punta del capilar (micro pipeta, etc.) sobre la placa preparada. Dejando una distancia al borde inferior de un centímetro aproximadamente. El punto de aplicación de la muestra se denomina toque.

Una vez colocado el toque se deja secar para evaporar el disolvente, de forma que en la placa solo quedará la muestra a analizar.

Desarrollo de la cromatografia

El desarrollo de los cromatogramas en capa fina se realiza normalmente por el método ascendente, esto es, al permitir que un eluyente ascienda por una placa casi en vertical, por la acción de la capilaridad. La cromatografía se realiza en una cubeta. Para conseguir la máxima saturación posible de la atmósfera de la cámara, las paredes se impregnan del eluyente.

Generalmente el eluyente se introduce en la cámara una hora antes del desarrollo, para permitir la saturación de la atmósfera. El tiempo de desarrollo, por lo general, no llega a los 30 minutos. El tiempo de una cromatografía cualitativa suele ser de un par de minutos, mientras que el tiempo de una cromatografía preparativa puede llegar a un par de horas.

Las placas pueden desarrollarse durante un tiempo prefijado, o hasta que se alcance una línea dibujada a una distancia fija desde el origen. Esto se hace para estandarizar los valores de RF. Frecuentemente esta distancia es de 10 cm.; parece ser la más conveniente para medir valores de RF. Después del desarrollo, las placas pueden secarse rápidamente con una corriente de aire caliente.

La mejor posición de desarrollo para un componente es el punto medio entre el origen y el frente del eluyente, ya que permite separar las impurezas que se desplazan con

mayor y menor velocidad. El frente del eluyente nunca debe llegar a tocar el borde de la placa.

Localización de las sustancias

Si los compuestos separados no son coloreados es necesario revelar la posición de dichos compuestos, para ello existen dos tipos de métodos:

Métodos químicos. Métodos físicos.

Métodos físicos. El más común consiste en añadir al adsorbente un indicador fluorescente. De tal forma que al colocar la placa bajo una lámpara ultravioleta, y dependiendo del indicador y de la longitud de onda, aparecen manchas fluorescentes en las zonas en las que hay componentes, o en otros casos aparece toda la placa fluorescente excepto donde hay componentes.

Algunos compuestos poseen cierta fluorescencia (aunque no es normal) con lo que pueden ser detectados directamente en una lámpara de ultravioleta.

Constantes de Rf y R x

La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal, mide la retención de un componente. Se define como: RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del eluyente desde el origen

La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la mancha, los cálculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los RF sean reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase móvil, fase estacionaria, cantidad de muestra). El máximo valor de RF que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7.

Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos pueden ser iguales o no serlo.

Si se sospecha que dos compuestos son muy parecidos se eluyen sobre la misma placa con el mismo eluyente u otros de menor polaridad, hasta apreciar una separación mínima. En este caso no se pueden usar reveladores químicos, ya que alterarían los compuestos, sino indIcador ultravioleta.

También se puede operar de la manera siguiente: Se selecciona un compuesto (X), que tenga una posición de desarrollo conveniente; todos los demás compuestos sobre la

placa se relacionan con éste. De esta manera se tiene el, RX , ya que: Rx= Distancia recorrida por el compuesto de referencia(X)/Distancia recorrida por el eluyente.

Cumarinas

La cumarina Número CAS 91-64-5 es un compuesto químico que posee el esqueleto de un anillo bencénico unido a un solo oxígeno.

Deriva de un fenilpropanoide al que se le delecionaron dos carbonos de la cadena propánica. Es biosintetizada por las plantas por la vía del ácido shikímico, a partir de fenilalanina.

Serie química

Las cumarinas se consideran todo un grupo demetabolitos secundarios de las plantas fenólicos, que comparten la misma vía biosintética y esqueleto químico.

En plantas, se encuentran en los tegumentos de las semillas, frutos, flores, raíces, hojas, y tallos, aunque la mayor concentración se encuentra en general en frutos y flores. Originalmente la cumarina se aisló de la Haba de Tonka. Su rol en las plantas parece ser de defensa, dándole propiedades de rechazo a la alimentación (en inglés antifeedant), antimicrobiana, captadora de radiación UV e inhibidora de la germinación.

La mejor propiedad conocida de las cumarinas indirectamente demuestra su rol en la defensa de las plantas. La ingesta de cumarinas de plantas como el trébol puede causar hemorragias internas en mamíferos. Este descubrimiento llevó al desarrollo del raticida Warfarin (R) y el uso de compuestos relacionados para tratar y prevenir la apoplejía.

warfarina (RS)-4-hidroxi-3- (1-fenil-3-oxo-butil)-cumarina.

El compuesto u 8-metoxipsoraleno, contiene ácido desoxido ribonucleico.

Una forma comparable de dermatitis inducida por cumarina puede ocurrir durante la manipulación del apio.

El Psoralen es ahora usado exitosamente en varios desórdenes de la piel (eccemas, psoriasis) a través de una combinación de ingesta oral con exposición a radiación UV-A.

En la familia de las cumarinas encontramos furanocumarinas lineales como el psolareno, furanocumarinas angulares como la angelicina, piranocumarinas como el seselin en inglés, y cumarinas pirona-sustituidas.

La cumarina como sustancia de consumo:

La cumarina es moderadamente tóxica para el hígado y los riñones, con una dosis letal 50 (LD50) de 275 mg/kg. La Occupational Safety and Health Administration considera a la cumarina como un compuesto carcinogénico específico del pulmón.1

La cumarina es una sustancia que incrementa la adicción del consumidor a los cigarrillos. El compuesto fue prohibido para su uso como aditivo en cigarrillos en 1997, y está listado por la FDA (EE. UU.) Entre las sustancias cuya adición directa para uso en productos con destino al consumo por humanos está prohibida.

Ruda (Ruta graveolens)

Descripción

Es un arbusto muy ramificado que puede vivir varios años, debido a esta longevidad el tallo puede volverse leñoso. Alcanza alturas de entre 70 a 100 cm. Las hojas semi-perennes, de color verde glauco, son alternas compuestas por varios segmentos de los cuales los laterales son alargados y el terminal ovalado o blanquecino, de consistencia algo carnosa. Las flores, forman ramilletes y tienen entre cuatro y cinco pétalos, siendo de un color amarillo vivo. El fruto es una especie de cápsula con cinco lóbulos. La planta

entera tiene un aroma característico difícil de confundir con otros. El sabor de las hojas es ligeramente picante pero éste queda enmascarado por el intenso aroma que despide.

Composición Química y Propiedades Medicinales

La ruda posee distintos tipos de principios activos. De ellos, destacan dos: un aceite esencial y un glucósido flavónico. También posee vitamina C. De los dos primeros, derivan sus cualidades terapéuticas más reputadas.

El aceite esencial está compuesto principalmente por dos cetonas que constituyen cerca del 90% de él: metilheptilcetona y metilhonilcetona (Schauemberg, 1972; Thompson, 1981; Font Quer, 1982; Valnet, 1984).

El glucósido flavónico es la rutina, que por hidrólisis puede degradarse en quercitina, como la genina o aglucona y las gluconas, glucosa y ramnosa (Font Quer, 1982).

A la esencia, se le puede atribuir propiedades antiespasmódicas, emenagogas, antiparasitarias y rubefacientes.

A la flavona, es posible asignarle la propiedad hemostática que posee esta planta, por aumento de la resistencia capilar, función que se ve apoyada por la presencia de la vitamina C.

La ruda es conocida por su uso para calmar las molestias digestivas que se originan en los intestinos irritables y en los gases. También tiene reputación para ayudar a regular y provocar la menstruación.

El uso de la ruda para combatir la sarna ha cobrado mucha importancia debido a la frecuencia del mal y a la efectividad de esta planta para tratarla. Por último, se usa para ayudar a calmar las hemorragias internas y de las heridas.

Uso de la Ruda

Infusión: (Para las molestias digestivas y de menstruación). Se pone agua hervida caliente sobre tres a cinco hojas. Se deja reposar y se bebe caliente. Puede endulzarse con miel.

Cocimiento: (Para la sarna). Se pone a hervir un puñado grande de ruda en un litro de agua durante 15 minutos. Se aplica en todo el cuerpo desde el mentón hasta los pies y después se coloca la pomada

Fitotoxicidad

Aunque sirve para repeler insectos, cuando se aplica la ruda en la piel se puede producir un efecto fotoirritante en algunos casos. Contiene varios aceites esenciales y

alcaloides que pueden causar extrema sensibilidad a los rayos ultravioletas, con la aparición de ampollas y lesiones en la piel.

OBJETIVOS Reconocer las cumarinas en la Ruta graveolens “Ruda”. Aprender el proceso de extracción de cumarinas. Mejorar nuestra técnica de cromatografía. Ampliar nuestros conocimientos sobre la cromatografía en capa fina. Elaborar una fase móvil con tolueno y éter etílico. Determinar por medio de la cromatografía la presencia de cumarina en

nuestras muestras. Determinar el Rf (Ratio of Front) de varias sustancias.

4. MATERIALES Y REACTIVOS

- Micropipeta de 10 ml- Erlenmeyers de 250 ml- Papel filtro- Pipetas volumétricas de 5, 10,

25 ml- Vaso beaker- Pera de decantación- Frasco ámbar - Pipetas - Papel filtro- Balanza analítica- Tubos de ensayo- 5 gr de vegetal de la ruda

(hojas, flores y semillas)- Alcohol etanol- Acetato de plomo al 5 %- Agua destilada - Ácido acético al 10%- Cloroformo- Hidróxido de amino- Sulfato de sodio

- Soportes- Balones volumétricos- Vasos de precipitado- Cápsulas de porcelana- Campana de desecación- Mortero y pilón,- Placa de cromatografía - Capilares- Cámara de cromatografía - Lámpara UV- Muestras de extracto de hojas y

flores de ruda

EQUIPOS:- Agitador magnético- Balanza analítica- Baño termostático- Desecador o Campa- Rotaevaporador- Estufa

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

Pesar 5 gramos de las hojas verdes frescas del vegetal en este caso es la ruda, luego de pesar las hojas colocarlo en un matraz añadirle 100 ml de etanol, el alcohol hierve

a una temperatura de 80°C luego someter todo esto a reflujo por lo menos 20 minutos.

Cuando colocamos a reflujo observamos que la mezcla tiene una coloración verde claro tener el sistema de reflujo, tener cuidado y estar a fuego leve no tan elevado, desde cuando empieza a hervir se toma el tiempo hasta que pase el tiempo

determinado, cada vez la muestra se vuelve un color más intenso .

Figura N°1: Pesar 5 gr de ruda y someterla al sistema en reflujo

Teniendo sacar la muestra:

Tener doblado el papel filtro en la forma adecuada en forma de paraguas para poder filtrar. Filtrar el extracto obtener un primer filtrado e eso añadir acetato de plomo al 5 % en solución alcohólica la parte solvente (arriba) de 1 a 3 ml con esto para eliminar taninos, aplicamos un exceso de 1ml adicional para luego agitar vigorosamente luego dejamos que se forme un precipitado.

Filtrar nuevamente obtendremos un segundo filtrado y lo que nos queda en el papel filtro son los taninos, el liquido transparente obtenido eliminar a sequedad dentro de la campana.

Figura N°2: filtrado después del reflujo.

Ya lo obtenido en el vaso vamos a adicionar 50 ml de agua destilada y luego añadir acidificar 5ml de acido acético al 10%. Colocar el contenido en una pera de decantación.

Luego extraer tres veces con 10 ml de cloroformo:

1) La primera lavada nos da un verde pardo café oscuro. Añadir un poco de sulfato de sodio para eliminar el agua

2) La segunda lavada nos da un color verde oscuro.3) La tercera lavada ya nos da muy poco

de un color verde intenso.

Figura N°3: Separación de fases y agregación de sulfato de sodio.

Recibir todo en el vaso para luego colocar todo lo extraído en un frasco de color ámbar. Para los resultados necesitamos tres tubos de ensayo.

1. Tubo la mitad de la solución añadir 1 ml de cloruro férrico al 5 %.

2. Tubo 0.5 ml de la solución añadir 1 ml de hidróxido de amonio.

Guardar el resto para la cromatografía de capa fina.

Primero en una cromatografía de capa fina se procede a cortar la placa de cromatografía, estamos utilizando una placa con base de aluminio así q podremos cortarla y consecutivamente medimos un centímetro desde la base de la placa haciendo una línea paralela, con cuidado de no desprender la fase estacionaria.

Figura N°4: Proceso de cortar placas de cromatografía

Una vez hecha las medidas y separados los espacios de las cuatro muestras (primera muestra: extracto de hojas de ruda; segunda muestra: extracto de las flores de ruda.) se procede con el sembrado, cada una de las muestras serán colocada cuidadosamente y en cantidades aproximadamente iguales con ayuda de los capilares.

Figura N°5: Sembrado de los extractos de hojas y semillas de la ruda.

Se repite el sembrado de las muestras hasta diez veces por cada una de las muestras procurando tener un sembrado homogéneo de todas las muestras de la placa de cromatografía, una vez realizado el sembrado se espera unos minutos a que seque, para posteriormente pasar a la cámara de cromatografía.

La cámara de cromatografía contiene en su interior 5 ml. De un eluyente. Solventes no polares y medianamente polares respectivamente. Se coloca en forma vertical inclinada hacia las paredes y con las muestras sumergidas en el solvente.

Figura N°6: Separación de fases y uso de cámara de cromatografía

Se retira la placa después de unos minutos o hasta que se alcance una línea dibujada a una distancia fija desde el origen. Terminado esto se procede a la localización de las muestras por medio del método físico. Para ello utilizamos un gabinete de visualización de cromatógramas de capa fina. Incluye lámpara UV 254 nm o 360 nm.

Figura N°7: Presencia de cumarinas en distintos Rf y en distintos nanómetros de la lámpara UV.

Se hecha a la placa de cromatografía por medio de un aspersor, hidróxido de potasio y se le lleva de nuevo hacia la lámpara UV 254 nm o 360 nm y el resultado es el que se aprecia en las imágenes. Por ultimo procedemos a marcar las con un lápiz cada una de las manchas que se aprecian en la placa de cromatografía.

Figura N°8: El uso de un sellador para intensificar la presencia de cumarinas.

6. RESULTADOS Y DISCUSION

Las cumarinas tienen diferentes aplicaciones farmacológicas las principales se destaca la de anticoagulante, en esta práctica aprendimos de conocer más de ellas también observamos cómo es la extracción de cumarinas esta práctica se realizó en dos etapas:

Una primera etapa en esta consistió la extracción de la ruda en el sistema de reflujo. La cual optimiza nuestro trabajo ya que el solvente en esta en contacto con nuestra muestra y hace posible una mejor extracción de los principios activos en este caso de las cumarinas.

En una segunda etapa el extracto lo sometimos al rotavapor se concentró para la identificación de cumarinas y para su próximo análisis mediante la cromatografía de capa fina.

Para los resultados necesitamos tres tubos de ensayo.

1 Tubo la mitad de la solución añadir 1 ml de cloruro férrico al 5%. Observamos la coloración y nos da un verde pardo. ( fig.1)

2 Tubo 0.5 ml de la solución añadir 1 ml de hidróxido de amonio.Observamos una coloración de verde claro (fig. 1)

Figura N°9: resultado de la presencia de cumarinas.

Figura N°10: En el filtrado obtuvimos taninos.

Al finalizar nuestra practica nos hemos dado cuenta de que son abundantes las manchas que se pueden apreciar en nuestra placa de cromatografía después de que hemos marcado cada una de estas manchas utilizamos la formula del Rf para la identificación de cada una de estas manchas y axial poder saber de que compuesto se trata valiéndonos de una escala que nos proporciono el doctor encargado de dirigir esta practica.

Tenemos dos distintas muestras una de hojas de la ruda y otra de las flores de la misma.

La constante RF (Ratio of Front) es simplemente una manera de expresar la posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal, mide la retención de un componente. Se define como:

RF= Distancia de la muestra desde el origen/Distancia del eluyente desde el origen.

- Hojas de la ruda

RF1= 0.8/8.2= 0.1

RF2= 1.5/8.2= 0.18 - dafnetina

RF3= 2.2/8.2= 0.26 - γ-fagarine

RF4= 2.8/8.2= 0.34 - escopoletina

RF5= 3.2/8.2= 0.39 - umbeliferona

RF6= 3.7/8.2= 0.45 - umbeliferona

RF7= 4/8.2= 0.48 - xantotoxina prueba

RF8= 4.4/8.2= 0.53 - xantotoxina prueba

RF9= 4.8/8.2= 0.58

RF10= 5.2/8.2= 0.63 en partes se superponen

RF11= 5.6/8.2= 0.68 las zonas del

RF12= 5.7/8.2= 0.7 alcance de los RF 0.55-0.85

RF13= 6.9/8.2= 0.84 (psoraleno, bergapteno, rutamarin, isoimperatorin)

RF14= 7.2/8.2= 0.87

RF15= 7.7/8.2= 0.93 – dimetil-alil herniarin

RF16= 8.2/8.2= 1

- Flores y capsulas de la ruda

RF1= 2.5/8.2= 0.3 - escopoletina

RF2= 3.1/8.2= 0.37 - kokusaginin

RF3= 3.4/8.2= 0.41 - umbeliferona

RF4= 3.7/8.2= 0.45 - umbeliferona

RF5= 5/8.2= 0.6 en partes se superponen

RF6= 5.3/8.2= 0.64 alcance de los RF 0.55-0.85

RF7= 6.4/8.2= 0.78 (psoraleno, bergapteno, rutamarin, isoimperatorin)

RF8= 6.9/8.2= 0.84

RF9= 7.3/8.2= 0.9 - dimetil-alil herniarin

RF10= 7.7/8.2= 0.93 - dimetil-alil herniarin

RF11= 7.8/8.2= 0.95

RF12= 8.1/8.2= 0.98

7. CONCLUSIONES

Se reconoció la presencia de cumarinas (principio activo) en la ruda (ruta graveolens).

Se optimizo nuestro trabajo en cromatografía de capa fina para poder realzar este proceso, desde la preparación de la fase móvil hasta la identificación de los principios activos de la muestra.

8. BIBLIOGRAFIA

a. http://www.google.com.pe/webhp?hl=es&tab=ii

b. http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa Pág. 1.

c. 1↑ Técnicas analíticas de separación. Miguel Valcárcel Cases. Editorial Reverte, 1994. ISBN: 8429179844. Cap. 12: Introducción a la cromatografía. Pág.333

d. http://es.wikipedia.org/wiki/Cromatograf%C3%ADa_en_capa_fina Pág. 2 hasta la Pág. 4.

e. http://es.wikipedia.org/wiki/Cumarina Pág. 5, 6.

f. http://es.wikipedia.org/wiki/Cumarina

g. http://www.elergonomista.com/fitoterapia/cumarinas.htm