Informe 1 - Crecimiento Celular - Cortés Plaza Fabiani

UNIVERSIDAD DE SANTIAGO DE CHILE FACULTAD TECNOLGICA DEPARTAMENTO DE CIENCIA Y TECNOLOGA DE LOS ALIMENTOS INGENIERA DE ALIMENTOS LABORATORIO INGENIERA DE BIOPROCESOS

INFORME N 01

CRECIMIENTO CELULAR

Luis Corts A., Lisette Plaza P., Loreto Fabiani M.

Profesor: Sergio Aguilera Moya

Ayudante: Luis Lpez Matus

Pauta de evaluacin informes

ITEMS PTJE MAXIMO PTJE ASIGNADO

PORTADA 0,5

INTRODUCCION 1

OBJETIVOS 0,5

RESULTADOS 1

DISCUSIONES 2,5

CONCLUSIONES 1

REFERENCIA 0,5

23 de Diciembre 2011

SergioNota adhesivaMg. Sergio Aguilera Moya

SergioNota adhesiva0,5







SergioNota adhesivaNota Final = 4,5

INTRODUCCIN

En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento ordenado de las

estructuras y los constituyentes celulares de un organismo. Cuando se siembran

microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a

dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo

para "fabricar" nuevos microorganismos. (Pumarola, 1999)

Sin embargo el crecimiento est normalmente limitado por el agotamiento de

nutrientes o por la acumulacin de productos del mismo metabolismo microbiano,

que les son txicos a la poblacin. La consecuencia es que el crecimiento al cabo

de un cierto tiempo llega a disminuir hasta detenerse.

Por lo general se puede medir el crecimiento de las bacterias, calculando el

aumento numrico y teniendo en cuenta, por lo tanto, la magnitud de sus

poblaciones. Para ello existen distintos mtodos los cuales se pueden clasificar en

directos e indirectos. Los mtodos directos permiten una estimacin aproximada

del nmero de bacterias mientras que los indirectos son empleados para

determinaciones de masas celulares. (Pumarola, 1999)

El crecimiento de las bacterias sobre un medio de cultivo lquido es claramente

exponencial, y la determinacin de este crecimiento cuantitativo se puede

representar mediante una curva en la que se distinguen distintas fases o perodos.

En este caso se utiliz La levadura Saccharomyces cerevisiae es un hongo

ascomiceto que ha sido ampliamente estudiado dada su importancia en la

industria panadera y vitivincola, as como por su capacidad de producir etanol.

Este microorganismo muestra 5 fases de crecimiento bien definidas cuando es

cultivado en medios lquidos con glucosa como fuente de carbono: la fase lag, la

fase logartmica, el cambio diuxico, la fase postdiuxica y la fase estacionaria.

(Folch-Mallol y col, 2004).

SergioNota adhesivaLos nombres de los microorganismos se escriben con cursiva.

SergioNota adhesivaFalt- Datos bibliogrficos de las variables a medir. Yxs, u, td.

OBJETIVOS

Objetivo general

Monitorear el crecimiento de un cultivo de levadura (Sccharomyces

cerevisiae) en un medio de laboratorio por medio del uso de mtodos

directos e indirectos.

Objetivos especficos

Construir y caracterizar la curva de crecimiento de Saccharomyces

cerevisiae EC-1118, utilizando los datos obtenidos en el recuento celular.

Determinar la viabilidad (%) del cultivo durante su crecimiento, mediante el

recuento celular en cmara de Nuebahuer, determinado la cantidad de

clulas vivas y muertas con uso de azul de metileno (tincin).

Relacionar el consumo de sustrato y absorbancia v/s tiempo con la curva de

crecimiento del microorganismo obtenido del recuento celular en cmara de

Neubahuer.

Determinar el rendimiento de Glucosa en el medio de cultivo con

concentraciones iniciales y finales del microorganismo en la fase

exponencial de la curva de crecimiento.

RESULTADOS

Cmara de Neubahuer:

Concentracin celular, construccin y caracterizacin curva de crecimiento:

Tabla 1: Datos recuento celular cmara de Neubahuer y promedio clulas.

Muestra Tiempo (h)

Factor de Dilucin

(FD)

Clulas azules

(muertas)

Clulas blancas (vivas)

Clulas totales

Promedio clulas

1 0 2 2 16 18 2

3 4 2 3 29 32 3,56

5 8 10 25 209 234 26

6 12 10 13 167 180 20

7 16 10 18 270 288 32

9 24 10 23 348 371 41,2 * Tener en consideracin que se contaron 9 cuadrculas de la cmara, por lo que el promedio ser: x= [cel totales/9].

Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Para clculo Concentracin celular (Clulas/mL), se utilizar la siguiente ecuacin,

con resultados en tabla 2, y con obtencin grfico 1:

Ecuacin 1

Donde:

C: Concentracin celular (clulas/mL).

(X): Promedio de clulas contadas en la cmara Neubahuer.

FD: Factor de dilucin utilizado.

Tabla 2: Resultados concentracin celular obtenida desde la cmara de

Neubahuer a diferentes tiempos.

Muestra Tiempo (hr)

Promedio clulas

Factor de Dilucin (FD)

Concentracin celular (cl/mL)

1 0 2 2 1,02E+06

3 4 3,56 2 1,81E+06

5 8 26 10 6,60E+07

6 12 20 10 5,08E+07

7 16 32 10 8,13E+07

9 24 41,2 10 1,05E+08

SergioNota adhesivaNO MAS Fuente:Elaboracin propia

Grafico N1: Relacin Concentracin celular/tiempo para un cultivo de

Saccharomyces cerevisiae EC-1118


Ahora para calcular umx y td debemos transformar los resultados de concentracin

celular a logaritmo natural (Ln), resultados tabulados en tabla 3, y obtencin

grfico 2 (Crecimiento celular), pero primeramente debemos conocer la ecuacin

para un cultivo por lote (Batch), usando el modelo biolgico.

Ecuacin 2

Tabla 3: Resultados Logaritmo natural concentracin celular [Cl./mL].

Muestra Tiempo (hr)

Promedio clulas

Factor de Dilucin

(FD)

Concentracin celular

(cl/mL)

Ln[Cl/mL]

1 0 2 2 1,02E+06 13,84

3 4 3,56 2 1,81E+06 14,41

5 8 26 10 6,60E+07 18,01

6 12 20 10 5,08E+07 17,74

7 16 32 10 8,13E+07 18,21

9 24 41,2 10 1,05E+08 18,47 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

SergioNota adhesivaPara la prxima porfavor hacer grficos sin leyenda y ms grandes.

SergioNota adhesivaEl nombre del grfico es curva de crecimiento S cerevisiae en medio YPD.

Grafico N2: Relacin Ln[Concentracin celular]/tiempo para un cultivo de

Saccharomyces cerevisiae EC-1118 (Crecimiento celular)


Para obtener parmetros ms ajustables a la fase exponencial de la curva de

crecimiento se tomaran los tiempos desde 4 hasta las 16 horas, eliminndose

dentro del rango, el tiempo 8 [h]. Todo tabulado en tabla 4, y con ello, obtencin de

grfico 3:

Tabla 4: Resultados Logaritmo natural concentracin celular [Cl./mL] zona

exponencial

Muestra Tiempo (hr)

Promedio clulas

Factor de Dilucin

(FD)

Concentracin celular

(cl/mL)

Ln[Cl/mL]

3 4 3,56 2 1,81E+06 14,41

6 12 20 10 5,08E+07 17,74

7 16 32 10 8,13E+07 18,21 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

SergioNota adhesivaSI la curva empieza arriba, ajustar la escala para que se vea la tendencia.

Grafico N3: Relacin Ln[Concentracin celular]/tiempo para un cultivo de

Saccharomyces cerevisiae EC-1118

Al obtener la grfica 3, se puedo obtener una ecuacin lineal que representa a la

zona exponencial, correspondiente a la siguiente ecuacin, con un R2 = 0,9525:

Ecuacin 3

Ahora usando ecuacin 2 y 3, obtenemos lo siguiente:

Donde:

Ln [Xf] = y Ln [Xo] = 13,257 t = X = 0,3309

Por lo tanto, nuestro correspondiente a nuestro organismo en este medio

especficamente Comportamiento (representando en la zona exponencial:

mx., para un cultivo Batch) es igual a 0,3309 [h-1].

Ahora, si bien conocemos la velocidad de crecimiento del microorganismo en este

medio de cultivo, podemos determinar el tiempo de duplicacin, debido a que

sabemos, que corresponde al tiempo en que el microorganismo se duplica, es

decir, si inicialmente se tena X, al tiempo de duplicacin obtendremos 2X, con

esto, obtenemos la ecuacin 4, con uso de ecuacin 2 (modelo biolgico):

SergioNota adhesivaNombre del grfico Fase exponencial de la curva de crecimiento

SergioNota adhesivaPor favor grficos ms grandes y ejes ajustados!

Ecuacin 4

Con ecuacin 4, y resultado de obtencin de velocidad del microorganismo en el

medio, podemos finalmente calcular el tiempo de duplicacin:

Viabilidad Celular:

Tabla 5: Datos recuento celular cmara de Neubahuer.

Muestra Tiempo (hr)

Clulas azules

(muertas)

Clulas blancas (vivas)

Clulas totales

1 0 2 16 18

3 4 3 29 32

5 8 25 209 234

6 12 13 167 180

7 16 18 270 288

9 24 23 348 371 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

El porcentaje de viabilidad de calcula con la siguiente ecuacin, cuyos resultados

se encuentran tabla 6:

Ecuacin 5

Taba 6: Porcentaje de viabilidad medio de cultivo a diferentes tiempos.

Muestra Tiempo (hr)

% Viabilidad Celular

1 0 88,89

3 4 90,63

5 8 89,31

6 12 92,78

7 16 93,75

9 24 93,8 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Espectrofotometra:

Dados los valores de absorbancia obtenidos en la experiencia (turbidez: biomasa

formada), se establece una relacin con el tiempo de desarrollo del medio de

cultivo, descrito por tabla 7.

Tabla 7: Valores de Absorbencia obtenida en diferentes tiempos del cultivo a una

longitud de onda de 600 nm.

Muestra Tiempo (hora)

Absorbancia

Factor de Dilucin

Absorbancia corregida

1 0 0,064 -- 0,064

2 2 0,047 -- 0,047

3 4 0,120 -- 0,120

4 6 0,301 -- 0,301

5 8 0,428 -- 0,428

6 12 0,289 2 0,578

7 16 0,320 2 0,640

8 20 1,020 3 3,060

9 24 1,000 3 3,000

10 28 0,919 3,676 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Con los datos obtenidos en tabla 7, podemos observar curva de crecimiento

absorbancia v/s tiempo, como se muestra en Grfico 4:

SergioNota adhesivaHora = h NO hr

SergioNota adhesivaaumento de turbidez --> aumento de biomasa.

SergioNota adhesivarecuerden que la Abs no se corrije, si no que la concentracin o en este caso la biomasa.

SergioNota adhesivaQue sucedi ac?

Grafico N4: Relacin absorbancia/tiempo para un cultivo de Saccharomyces

cerevisiae EC-1118


Consumo de glucosa:

Para determinar la concentracin de glucosa consumida primero debemos obtener

la glucosa residual que se obtiene al transcurso del tiempo, tabulado en tabla 8:

Tabla 8: Datos Obtenidos Absorbancia a diferentes tiempos de Concentracin

Residual de Glucosa

Tiempo [h] Absorbancia [nm]

0 0,075

6 0,013

16 0,100

28 0,060 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Con los datos de la tabla 8 y la ecuacin 7, se obtiene la concentracin de glucosa

residual, tabulados en tabla 9 y grfico 5:

Ecuacin 7

SergioNota adhesivaTtulo es curva de crecimiento

SergioNota adhesivaEl eje es Abs600nm

SergioNota adhesivaAh? La tabla es de absorbancia a diferentes tiempos de incubacin.

Tabla 9: Datos de la concentracin de Glucosa residual a diferentes tiempos.

Tiempo [h] Concentracin [mg/L]

Factor de Dilucin

[FD]

Concentracin [g/L]

0 0,017730 1000 17,730

6 0,003073 1000 3,073

16 0,02364 100 2,364

28 0,01418 100 1,418 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Con los datos de la tabla 9 se obtiene el Grfico N5:

Grfico 5: Curva consumo Glucosa Residual a diferentes tiempos.


Finalmente para clculo, consumo de Glucosa, se utiliz datos de tabla 9, y

ecuacin 8, cuyos resultados estn tabulados en tabla 10 y grfico 6:

Ecuacin 8

SergioNota adhesivaTtulo Glucosa residual durante el crecimiento de S. cerevisiae. IDEM para la glucosa consumida.

Tabla 10: Datos de la concentracin de Glucosa consumida a diferentes tiempos.

Tiempo [h] Concentracin Glucosa inicial y residual

[g/L]

Concentracin Glucosa consumida

[g/L]

0 17,730 0

6 3,073 14,66

16 2,364 15,37

28 1,418 16,312 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Grfico 6: Curva consumo Glucosa consumida a diferentes tiempos.


Rendimiento Glucosa:

Podemos determinar el rendimiento de Glucosa en el medio, sabiendo que este

parmetro es calculado desde el tiempo 4 a las 16 horas (correspondiente a la

fase exponencial de la curva de crecimiento), correspondiente a la concentracin

inicial y final en el proceso (zona exponencial) de Glucosa, para ello usaremos

datos de tabla 12 y ecuacin 10 (Correspondiente al rendimiento). Pero como no

conocemos la concentracin de glucosa residual a las 4 horas, debemos obtenerlo

de datos de tabla 11 (datos tabla 9: 3 datos y linealizacin con logaritmo natural

para mejor correlacin), y con ello obtencin grfico 7:

SergioNota adhesivaDebo acotar que el rendimiento de glucosa no necesariamente se asocia solo a la fase de crecimeinto exponencial. La glucosa comienza a consumirse desde el inicio del crecimiento.

Tabla 11: Datos de la concentracin de Glucosa residual necesarias para clculo

concentracin residual a las 4 horas.

Tiempo [h] Concentracin Glucosa residual

[g/L]

Ln Concentracin Glucosa consumida

[g/L]

0 17,730 2,88

16 2,364 0,86

28 1,418 0,35 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

Grfico 7: Relacin concentracin Glucosa residual v/s tiempo

Fuente: Elaboracin propia.

De Grfico 7, obtenemos ecuacin necesaria (R2: 0,9394) para calcular

concentracin residual al tiempo 4 horas en la curva de crecimiento (inicio zona

exponencial)

Ecuacin 9

7

Donde y calculado corresponde a Ln (Concentracin Glucosa) a tiempo 4 horas,

para obtencin concentracin extraer logaritmo natural.

SergioNota adhesivaNOOO... Porqu calcularon eso?

SergioNota adhesivaNO!

/*e

10,43 [g/L]

Finalmente, con el dato anterior obtenido, correspondiente a la glucosa residual en

proceso a las 4 (horas) zona exponencial determinamos rendimiento:

Tabla 12: Datos de glucosa y concentracin celular (inicial y final: fase

exponencial)

Tiempo [h] Concentracin Glucosa [g/L]

Concentracin celular [cel/mL]

Concentracin celular [cel/L]

4 10,43 1,81x106 1810

16 2,364 8,13x107 81300 Fuente: Elaboracin propia, 2011.

0SS

XXY

f

if

sx

Ecuacin 10

Donde

: Rendimiento

fX : Clulas finales (clulas/L)

oX : Clulas iniciales (clulas/L)

fS : Sustrato final (mg/L)

0S : Sustrato inicial (mg/L)

]/[43,10/364,2

1810/81300

LgLg

celLLcelY

sx

aGludegClulasYs

x cos/95,9854

SergioNota adhesivaMal calculado. Error en clculos y adems hay error conceptual. Se expresa en notacin cientfica.

SergioNota adhesivaComo calcularon esto? No tiene sentido que si en 1mL tienen 1810000 clulas, en 1L van a tener 1810?Mal calculado.

DISCUSIONES

Comparacin grficos: concentracin celular vs tiempo , absorbancia vs tiempo y

Concentracin de glucosa v/s tiempo: En estos grficos (1 y 4) se puede observar

que las curvas presentan un comportamiento similar, sin embargo existe una

diferencia en cuanto al tiempo, ya que en el caso de la concentracin celular

comienza a aumentar desde las 4 horas y en el caso de la absorbancia, sta

comenz a aumentar a las 16 horas, esto pudo deberse a que ocurrieron una serie

de errores durante el procedimiento de medicin de absorbancia por la mala

introduccin de la cubeta en espectrofotmetro, mala manipulacin del blanco y

adems se debe considerar que son diferentes mtodos. Tambin, para el caso de

absorbancia v/s tiempo, como se trat de un mtodo basado en la turbidez del

medio pudo afectar errores en la absorbancia el medio (YPD), ya que pudo

presentar caractersticas de longitud de onda similares al del microorganismo

interfiriendo con los resultados y/o posible error en clculos en los factores de

dilucin (mayor dilucin real, que la registrada), provocando un clculo de turbidez

menor habiendo una mayor concentracin y con ello, una menor absorbancia. Y al

observar, grficos 1,4 y 5, se pudo notar un aumento en la concentracin celular y

Absorbancia, y una disminucin de sustrato. Esto, debido a que como el

microorganismo consumi Glucosa para aumentar de tamao y Nitrgeno para

su divisin, la concentracin inicial de glucosa disminuye. Adems, se observa,

una disminucin marcada en la concentracin de glucosa al inicio, puesto que el

organismo no se divide inicialmente, pero si aumenta de tamao, ocupando y

sintetizando la glucosa para la formacin de protenas, especficamente enzimas y

formacin de ARNm para su posterior divisin, y una vez comenzada la fase

exponencial, el microorganismo se divide, disminuyendo con eso, el consumo de

Glucosa, lo que se ve reflejado en el Grfico 6.

Caracterizacin curva de crecimiento celular: Al realizar una comparacin con un

estudio realizado con cultivos en medios diferentes pero con esta misma levadura

se pudo observar que el rango de velocidad de crecimiento va desde

aproximadamente 0,3 0,6 [h-1] (Rubio y col, 2010) y el valor obtenido

SergioNota adhesivaHay un leve aumento antes de las 16 horas.

SergioNota adhesivaComprobaron esto? Que diferencias hay entre los dos mtodos?

SergioNota adhesivaNo. Si no no lo hubisemos hecho en el prctico.

SergioNota adhesivaEsta observacin es errada. Se revis cuando se realiz el experimento.

SergioNota adhesivaen la concentracin de glucosa.

SergioNota adhesivaporqu comillas?

SergioNota adhesivaocupando y sintetizando glucosa? Referencia para este dato?

SergioNota adhesivaglucosa para formacin de protenas, enzimas y ARNm? Uqe se obtiene al metabolizar la glucosa?

SergioNota adhesivaError.

SergioNota adhesivaQu sucedi con el rendimiento de sustrato?. No discuten sobre este parmetro.

experimentalmente fue de 0,3309 [h-1] el cual se encuentra dentro del rango, sin

embargo, se debe tener en cuenta que esta velocidad depende de una serie de

factores tales como: medio de cultivo, tipo de sustrato y del microorganismo, entre

otros. Otro estudio similar se realiz con cultivos en medio YPD de dos cepas

diferentes de esta misma levadura obtenindose a tiempo de incubacin de 10

horas un = 0,3 [h-1] (Valdivieso, 2006). Adems, se obtuvo el tiempo de

duplicacin (2,09 [h]) del microorganismos en este medio de cultivo, el cual nos

proporciona informacin relevante y vital al momento de uso industrial, ya que

gracias a ello, se puede determinar el tiempo necesario para producir una cantidad

especfica de biomasa, y que es caracterstico de cada microorganismo y estar

en funcin de las propiedades iniciales de inoculo (adaptacin, edad, entre otros) y

las cualidades del medio (sustrato, contaminacin, agitacin, aeracin, entre

otros).

Viabilidad: Se puede observar que la viabilidad para cada una de las muestras fue

aumentando, siendo sta bastante alta, debido posiblemente a que el cultivo de

levaduras utilizadas era fresco, adems se le proporcion un medio rico (YPD), lo

que permiti que dichas levaduras pudieran desarrollarse de manera eficiente.

Rendimiento: El rendimiento obtenido fue de 9854,95 [cel/mg glucosa]. De

acuerdo al grfico 5, se observa que el consumo de glucosa fue rpido en primera

instancia y luego se mantuvo constante, esto debido a que el microorganismo se

encontraba adaptado al medio lo que explica que fuese tan rpido, haciendo notar

que el cultivo de levaduras era fresco y viable. En estas condiciones el

microorganismo requiere de nutrientes para su desarrollo, tales como carbono

utilizado por el microorganismo para crecer y nitrgeno utilizado para la divisin

celular. Por lo tanto se produce la sntesis de ARNm y la consecuente generacin

de biomasa.

SergioNota adhesivaPero de que depende la viabilidad de un cultivo?

SergioNota adhesivaNo tiene nada de discusin del resultado.

CONCLUSIONES

Se confeccion curva de crecimiento celular para Saccharomyces

cerevisiae EC-1118 con datos de cmara de Neubahuer.

Se determin fase exponencial de la curva de crecimiento y con ello, la

velocidad de crecimiento y el tiempo de duplicacin.

Se clculo la viabilidad de los microorganismo en forma porcentual con uso

de cmara de Nuebahuer y azul de metileno.

Se determin el comportamiento del consumo de sustrato (Glucosa)

durante el tiempo de desarrollo del medio de cultivo. Adems, de

proporcionar informacin del rendimiento de Glucosa en el cultivo.

Se confeccion curva Absorbancia v/s tiempo y su comparacin, tanto con

la curva de crecimiento celular como el consumo de sustrato en el tiempo.

SergioNota adhesivaque fueron ..... y que comparados con bibliografa resultaron ser....

SergioNota adhesivaPero como fue!

SergioNota adhesivaIDEM segunda comclusin.

SergioNota adhesivaConclusiones mal enfocadas. Si yo voy, sin leer el informe, y me baso en las conclusiones para ver que se logr en el prctico no llego a nada.

BIBLIOGRAFIA

Abril N., Brcena J., Fernndez E., Galvn A., Jorrn J., Peinado J., Toribio

F., Tnez I., Espectrofometra: Espectros de absorcin y cuantificacin

colorimtrica de biomolculas, Departamento de Bioqumica y Biologa

Molecular, Facultad de Medicina, Campus Universitario de Rabanales,

Crdoba.

Ana Rubio, Mara Hernndez. Identificacin preliminar in vitro de

propiedades probiticas en cepas de S. cerevisiae. Pontificia Universidad

Javeriana. Facultad de Ciencias. Lab. de Biotecnologa Aplicada. Bogot,

Colombia. Aceptado: Enero 10 de 2008

Agustin Pumarola., Microbiologa y parasitologa mdica (1999). Masson

S.A. pg. 62-63.

Fernndez E., Galvn A., Tne I., Determinaciones colorimtricas

especficas de compuestos: determinacin de glucosa (mtodo glucosa-

oxidas). Determinacin de nitrito (mtodo de la sulfanilamida: N-NEDA).

Giraldo G., Loango N., Mejia C., (2010): Laboratorio de bioqumica: una

visin prctica, Facultad de Ciencias Bsicas y Tecnologas, Facultad de

Ciencias Agroindustriales, Universidad de Quindio.

Jorge Luis Folch-Mallol, Adriana Garay-Arroyo, Fernando Lledas, Alejandra

A. Covarrubias Robles. Respuesta a estrs en la levadura Saccharomyces

cerevisiae. Revista Latinoamericana de Microbiologa, Vol. 46, No. 1-2.

Enero - Marzo (2004)

Magdalena Valdivieso Ugarte. Obtencin y caracterizacin de cepas S.

cerevisiae superproductoras de glutatin (2006). Dpto de biologa,

Universidad de Granada. Pag 123.

SergioNota adhesivaao?

SergioNota adhesivaao? revista?

SergioNota adhesivaNo se sigue el protocolo puesto en la pauta de elaboracin de informes.

Pierce Genetica: Un Enfoque Conceptual (2010). Editorial Mdica

Panamericana. Pg. 201-202.

Quesada Mora S., (2007). Manual de experimentos de laboratorio para

Bioqumica, Universidad Estatal a Distancia, San Jos, Costa Rica.

ANEXO

Definir medio rico, medio mnimo, medio complejo

Un medio rico es aquel medio con todos los tipos de requerimientos nutritivos

(fuente de carbono, nitrgeno, fsforo, azufre, sales minerales y factores de

crecimiento) que permiten el crecimiento de la mayora de microorganismos

hetertrofos.

Los medios mnimos son medios definidos que nicamente le proporcionan al

microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse

ptimamente. Se trata de un medio que slo contiene compuestos inorgnicos

con la adicin de una fuente de carbono orgnica.

Un medio complejo es aqul del cual no se conoce su composicin exacta. A

menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras,

extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se

desconoce la composicin qumica exacta. Estos medios son muy utilizados para

cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy

complejos (Pierce, 2010).

Coeficiente extincin Glucosa

El coeficiente de extincin molar, es una constante para cada sustancia (Quesada

Mora S., 2010). Considerando el coeficiente de extincin se puede realizar la

determinacin de la glucosa (inicial y final) usando la ley de Lambert y Beer. Sus

unidades estn determinadas por las unidades de concentracin con que se

trabaje y las unidades de espesor de la disolucin en la cubeta o celda. Se

expresa en cm (Giraldo G., Loango N., Mejia C., 2010). La ley de Lambert y Beer,

expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de longitud de onda

fija) y concentracin de un cromforo en solucin. Adems, de que el coeficiente

SergioNota adhesivajuestificar.

de extincin es una constante y que es especfica de cada cromforo. La

representacin de Lambert-Beer, A = cl, nos permitir calcular el valor del

coeficiente de extincin molar, que corresponde a la pendiente de la recta

(Concentracin molar cromforo v/s Absorbancia) (Abril N., Brcena J., Fernndez

E., Galvn A., Jorrn J., Peinado J., Toribio F., Tnez I.). La determinacin de

glucosa (mtodo glucosa - oxidasa) est basado en: La glucosa oxidasa oxida a la

glucosa originando cido glucnico y H2O2. El perxido de hidrgeno liberado

reacciona con un cromgeno (fenol/4-aminoantipirina) por la reaccin de Trinder,

para dar una quinona que absorbe entre 492 y 550 nm. La intensidad de color

producida es directamente proporcional a la concentracin de glucosa (Fernndez

E., Galvn A., Tne I.). Por lo que podemos inferir, que segn revisin

bibliogrfica, el coeficiente de extincin depende de la longitud de onda del equipo,

de la cubeta (espesor: recorrido) y de la concentracin del cromforo, que en este

caso es una quinona, y que es especifico para esta sustancia en esta

condiciones. Adems de ser proporcional a la glucosa, y poder ser obtenida de la

grfica Concentracin cromforo v/s absorbancia. Por lo que es nico,

dependiendo de mtodo, las sustancias a utilizar y las condiciones de trabajo.

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