TEMA:INHIBICION DE LA HEMOAGLUTINACIN (IHA)

CATEDRA: VIROLOGA

ESTUDIANTE: LEON MARTIN, OMAR RAMOS PACHECO JOHNCAMARENA INGAROCA CARLASUAREZ MEZA FREDDY

CATEDRTICO:LIC.TM. JUAN CORTEZ ALEJANDRO

CICLO: VI

HUANCAYO - 2013

OBJETIVO

1. Aprender a desarrollar la tcnica de Inhibicin de la Hemaglutinacin para determinar el ttulo de un suero problema.

2. Aprender a interpretar los resultados obtenidos al realizarla prueba de IHA

INTRODUCCIN

Para realizar un diagnstico definitivo se debe realizar una prueba que demuestreuna respuesta especfica del husped hacia este virus, dicha respuesta est representada por la presencia de anticuerpos y la prueba empleada para ello se conoce como Inhibicin de la Hemaglutinacin (IHA).Esta prueba se basa en la unin de un anticuerpo especfico hacia la hemaglutinina del virin que impida la formacin de puentes entre el ligando viral y el receptor celular. Este hecho permite identificar plenamente al virus y se conoce como neutralizacin vrica.

INHIBICION DE HEMAGLUTINACION

FUNDAMENTOEstas pruebas se basan en la capacidad de algunos patgenos (p.ej. el virus de la influenza) para causar la aglutinacin de los eritrocitos. Pueden utilizarse para detectar el patgeno (pruebas de hemaglutinacin) o los anticuerpos dirigidos contra las hemaglutininas del microorganismo (inhibicin de la hemaglutinacin). Suelen ser pruebas especficas de serotipo o subtipo y bastante sensibles.La inhibicin de la aglutinacin de los eritrocitos recubiertos con antgeno por el antgeno homlogo es un mtodo sensible y especfico para la identificacin de pequeas cantidades de antgeno soluble en la sangre o en otros lquidos de los tejidos. El principio de este anlisis es que, el anticuerpo incubado previamente con antgenos homlogos solubles o de reaccin cruzada, es inactivada cuando se incuba con eritrocitos recubiertos de antgeno.

APLICACIONES

Diagnostico presuntivoCatalogar cualitativamente la patogenicidad viral

MATERIALES Solucin salina fisiolgica una tri aviar Sangre total de pollo 2%-3% Tubos 12 x 75 o 13 x 100(26 tubos por grupo) Suero o plasma de pollo Vacuna tri aviar Espejo Micro pipetas 10-100ml y de 100ml - 1000ml con sus respectivos punteros Solucin de hipoclorito de sodio 10000ppm Guantes de ltex Guardapolvo Mascarilla Lentes

PROCEDIMIENTO1.- Prepara dilucin de la vacuna tri aviar que contenga 4UHA en volumen superficie para realizar la prueba (por duplicado).

Tubo:4UHA

Dilucin: 1/8 1/16C1 . V1 = C2 . V2X = 262.5ml vacuna tri aviar + 5625ml de Na Cl

2.-Realizar diluciones al doble del suero de pollo desde hasta 1/1024 (obs. No agregar suero al tubo control)a. Agregar 300ul de SSF a todos los tubos incluyendo el tubo control.b. Dispensar en el pozo N 1,300 ul de suero de pollo y mezclar por aspersin y dispersin de 2-3 veces.c. Transferir 300 ul de esta dilucin al pozo N 2 mezclar de la misma manera que el paso b.d. Repetir sucesivamente este procedimiento hasta el tubo N 10 que corresponder una dilucin 1/1024 desechar los 300 ul del tubo N 10.

300ul DECANTAR300ul suero de pollo300ul suero de pollo

300ul SSF

1/8 1/16 . . . . . . . . . . . . . 1/1024Volumen d cada Reactivo para realizar las diluciones

Pozo123456789

a)SSF(l)757575757575757575

Dilucin1.21:41:81.161:321:641:1281.256Control

2)4UHA7575757575757575-----

3)INCUBARATEMPERATURAAMBIENTEDURANTE10MIN

4)Eritrocitosal1%(l)757575757575757575

3 .Dispensar 300ul de agente viral Uha (vacuna a todos los tubos a excepcin de tubo control. Homogenizar y dejar reposar x 10 min.4. Agregar 300ul de GR. De pollo al 2-3% a todos los tubos sin excepcin.Dejar en reposo a temperatura ambiente y lecturar cuando el tubo de control. Se produce en patrn de sedimentacin.

5.-lectura:Patrones negativos (sedimentacin) Patrones positivos (hemaglutinacin)

RESULTADO

La sangre utilizada en la prctica fue de humano resultando la prueba de titulacin negativa en el doble procedimiento.

La cuarta unidad hemaglutinante (4 UHA) sali negativa.

Se dispenso el agente viral en seis de los 10 tubos

CONCLUSIN

La prueba sali negativa por que una de las causas falta de tiempo en la prctica que no se pudo esperar el tiempo adecuado que repose el antgeno viral.

Tanto el 4 UHA como los dems salieron negativa.

Se dispenso 6 de los 10 tubos por falta de contenido de agente viral en el envase.

PREGUNTAS1. Por qu usamos para esta prctica 4UHA de antgeno viral?

ES IMPORTANTE LA CONCENTRACION VIRAL

2. Por qu realizamos dilucin seriada del suero y no del Ag. Viral?

POR LA CARGA VIRAL

3. Por qu despus de dispensar el Ag. viral se deja reposar a 10 min?

PARA QUE HAYA UNA POSIBLE REACCION ENTRE EL Ag. VIRAL Y LOS ANTICUERPOS.

4. la prueba es especfica, sensible, especfica y sensible, ninguna?

ES ESPECFICA

5. H.A se usa glbulos rojos humanos grupo o ?

ES POR QUE EL GRUPO O NO PRESENTA ANTIGENOS COMO LOS DEL GRUPO A, B, AB; QUE PODRIAN DAR INTERFERENCIAS CON LOS ANTIGENOS DE LA PRUEBA DE IHA