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Universidad de Puerto Rico en Humacao
Facultad de Ciencias Naturales
Departamento de Biología
Simulación de la Prueba de Huella Digital de DNA
Sharon M. Boschetti-Medina
801-01-0907
BIOL 3306 Sec. 00
Prof. Baerga
Introducción
El ácido desoxirribonucleico (DNA) es una substancia química encontrada en
todos los seres vivientes. Contiene el código para todos nuestros atributos físicos así
como las instrucciones para todas las funciones del cuerpo, incluyendo crecimiento,
desarrollo, y replicación. Gracias a esto cada persona es diferente tanto físicamente
como genéticamente. En términos generales se puede decir que el genoma es muy
parecido entre los individuos de la especie humana, esto es que 99.99% es común en
todos. Este genoma esta compuesto por tres mil millones de nucleótidos de los cuales
se han identificado alrededor de 1.4 millones en los cuales se han encontrado
diferencias de un individuo a otro. La técnica de la huella digital del DNA (DNA
fingerprinting) en términos generales permite detectar las diferencias en el DNA en
diferentes personas. Los métodos para utilizar esta técnica se basan en el análisis de
fragmentos dados por el corte de ciertas regiones variables con enzimas de restricción.
Esto envuelve cuatro pasos básicos: 1) aislar el DNA del individuo; 2) Corte del DNA
en secciones mas pequeñas y manejables; 3) Separación de los pedazos por tamaño e
identificar los que corresponden a las regiones variables y; 4) Analizar el perfil de
pedazos de cada individuo. Ese análisis es lo que generalmente se conoce como DNA
fingerprinting.
Este método es utilizado en una variedad de procesos tales como determinación
de paternidad, casos legales (asesinato, violaciones y otros delitos menores),
identificación de cadáveres, en las ciencias entre otros. A pesar de ser un método
técnicamente infalible, cabe la posibilidad de hallarse errores, como por ejemplo si la
muestra utilizada se contamina, si el método de cálculo para la determinación del
porcentaje varía entre otros. En lo antes dicho cabe mencionar el caso de O.J.
Simpson. Para este caso, la prueba se aplicó para determinar su culpabilidad o
inocencia en el asesinato de su ex esposa y un amigo de esta. Pero debido a que la
evidencia expuesta supuestamente se hallaba contaminada la prueba realizada fue
descartada. Este ejercicio de laboratorio tiene como objetivo familiarizarnos con la
técnica de DNA fingerprinting y de sus aplicaciones en el estudio de la biología.
También tiene como objetivos familiarizarnos con el análisis de perfiles de restricción
en diferentes individuos y como la prueba es aplicable a cada uno de estos casos.
Materiales y Métodos
Para la realización de esta simulación se utilizaron una serie de ejercicios en los
cuales se aplicaron los siguientes pasos: Aislamiento del DNA genómico, corte de DNA
genómico con enzimas de restricción, separación, y el análisis de los pedazos de DNA.
Para el primero se explicó que los métodos de rompimiento de tejidos, las envolturas
que rodean la célula y la membrana plasmática son los utilizados y que mayormente
para romper los mismos se utilizan detergentes. Una vez rota la pared celular y
separado el DNA genómico se procedió al siguiente paso. El corte del DNA genómico
con enzimas de restricción. Estas enzimas de restricción son endonucleasas de
reconocimiento de secuencias específicas dentro del DNA. Estas catalizan la ruptura
del enlace fosfodiester entre dos nucleótidos dentro de esa secuencia conocida como
RE palindromica (en dirección 5’a 3’ en cada cadena, la secuencia es la misma). Una
vez cortado el DNA, los pedazos son separados por tamaño en una gelatina de agarosa
por el método conocido como electroforesis. La electroforesis es una técnica para la
separación de moléculas (proteínas o ácidos nucleicos) sobre la base de su tamaño molecular y
carga eléctrica. Los ácidos nucleicos ya disponen de una carga eléctrica negativa, que los dirigirá al
polo positivo, mientras que las proteínas se cargan con sustancias como el SDS (detergente) que
incorpora cargas negativas de una manera dependiente del peso molecular. Para la separación se
usa un gel de agarosa o poliacrilamida (fibras cruzadas, como una malla). Al poner la mezcla de
moléculas y aplicar un campo eléctrico, éstas se moverán y deberán ir pasando por la membrana a
través de los poros, por la que las pequeñas se moverán mejor y más rápidamente. Así, las más
pequeñas avanzarán más y las más grandes quedarán cerca del lugar de partida. Finalmente se
inicia el análisis de los pedazos de DNA ya separados y de ahí se determina lo que compone la
huella genética del individuo.
Resultados e Interpretación
Ejercicio 1: Enzimas de restricción
1. Localiza la secuencia que reconoce la enzima Hae III (5’GGCC 3’). Corte cada pedazo de DNA (Hae III corta entre G y C).
José
a. Cromosoma materno:
5’ ATCTTGACCAATGTGAAAGGCCAATATAGCATTGGCCAAGCTCTC 3’
3’ TAGAACTGGTTACACTTTCCGGTTATATCGTAACCGGTTCGAGAG 5’
b. Cromosoma paterno:
5’ATCTTGGCCAATGTGAAGGCCAATATAGCATTGGTCAAGTTCTC 3’
3’TAGAACCGGTTACACTTCCCGGTTATATCGTAACCAGTTCAAGAG 5’
María
a. Cromosoma materno
5’ ATGTTGGCCAATGTGAGGACCAATATAGCATTGGCAAAGCTCTCG 3’
3’ TACAACCGGTTACACTCCTGGTTATATCGTAACCGTTTCGAGAGC 5’
b. Cromosoma paterno
5’ATCTTGGCCAATATCAAAGACCAATATAGCATTGGCCAAGCTCTC 3’
3’TAGAACCGGTTATAGTTTCTGGTTATATCGTAACCGGTTCGAGAG 5’
2. ¿Cuantos fragmentos se producen al cortar el cromosoma materno de José y María; de qué tamaño son estos?
a. José: 3 fragmentos; sus tamaños son de 20, 15, y 10 bp.
b. María: 2 fragmentos; sus tamaños son de 7 y 38 bp.
3. ¿Cuántos fragmentos se producen al cortar el cromosoma paterno de José y María y de que tamaños son estos?
a. José: 3 fragmentos; sus tamaños son de 7,13 y 25 bp.
b. María: 3 fragmentos; sus tamaños son 7, 28 y 10 bp.
4. ¿Cuántos fragmentos se producen de la muestra de DNA de José y María y de que tamaño son estos?
a. José: 6 fragmentos; sus tamaños son 20, 15, 10, 7, 13 y 25 bp.
b. María: 5 fragmentos; sus tamaños son 7, 7, 28, 38 y 10 bp.
5. Separe por tamaño los fragmentos generados del DNA de José y María en una gelatina de agarosa.
Marcador de tamaño Maria José
40
393837363534333231302928272625242322212019181716151413121110987654321
6. ¿Identifica esta prueba diferencias genéticas entre José y María?
a. Si
7. Explique genéticamente a que se deben esas diferencias.
a. Estas diferencias genéticas se deben a que existen regiones variables dentro del
genoma. Las diferencias en el genoma se pueden dar de dos maneras. Uno es el
simple cambio de bases o la repetición de secuencias pequeñas de nucleótidos,
como en este caso que las diferencias entre ambos genomas consistió en un
cambio de bases; en el cromosoma materno de José había ATC mientras que en el
cromosoma materno de María comenzaba con ATG.
Ejercicio 2: Se mezclan tres bebes en un hospital
Resumen:
Tres familias tuvieron hijos a la misma hora y el mismo día en el mismo hospital. Una
alarma de incendios fue activada y los infantes fueron desalojados inmediatamente. Una vez
pasado el peligro el personal del hospital se percató que ninguno de los infantes había sido
identificado. Por ello se realizo una prueba de DNA Fingerprinting para determinar que bebe le
pertenecía a cada familia.
a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos
i. El bebé número 1 pertenece al Sr. y la Sra. Stevenson. Esto es así ya que tanto el
patrón como el tamaño de las bandas del bebé concuerdan con la de ambos padres.
Por las mismas razones el bebé número 2 pertenece al Sr. y la Sra. Jones y el bebé
número 3 pertenece al Sr. y la Sra. Smith.
Ejercicio 3: Un caso de paternidad
Resumen:
El Sr. Megabucks muere recientemente. Repentinamente aparecen tres mujeres alegando
tener un hijo de este hombre. El Sr. Megabucks anticipándose a los eventos antes de morir dejó
una muestra de su sangre congelada para que se pudiese realizar una prueba de DNA y así
determinar cual de estos es su hijo.
a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos
i. El hijo del Sr. Megabucks es el numero 2. Esto es así ya que tanto el tamaño y la
posición en donde se hallan las bandas concuerdan con el marcador obtenido del Sr.
Megabucks. A pesar de que los hijos 1 y 3 también tenían bandas compatibles, loa
gran mayoría de las bandas las obtuvo el hijo numero 2 porque tenia igual proporción
de bandas de la madre que del padre
Ejercicio 4: El caso del cuchillo ensangrentado
Resumen:
Heinrich Millhouse, un ladrón internacional de joyas es asesinado durante un robo al
Museo de Arte Nacional. En la escena del crimen se halló debajo del cuerpo de la victima un
cuchillo ensangrentado. Al día siguiente la policía arresto a su compañero de crimen ocasional,
Englewood Smink, el cual durante el interrogatorio admitió que había tenido un accidente en la
cocina esa mañana debido al cuestionamiento con respecto a una cortadura en al mano. Ante
esto el inspector ordeno se realizaran pruebas de DNA a la victima, la sangre en la ropa de la
victima, la sangre en el cuchillo encontrado bajo la victima y de Smink.
a. ¿Cual es tu interpretación de esos datos? Presenta tus argumentos
i. Pudo haber resultado como una emboscada de parte de Millhouse hacia Smink, donde
Millhouse ataco a Smink haciéndole una cortadura en la mano. Como respuesta Smink
le dispara a Millhouse, matándolo y huyendo con las joyas. Es por esto que considero
de acuerdo a los resultados obtenidos en la prueba de DNA que el señor Smink es
Culpable. Las pruebas nos demuestran que la sangre encontrada en el cuchillo era de
ambos. Mientras que la sangre en la ropa era solo de Millhouse.
b. ¿Debe ser liberado Smink? ¿Por qué?
Smink no deberá ser liberado. Hasta que se pruebe quien mato a Millhouse y/o tenga una
cuartada con la cual justifique su declaración de los hechos por la cortada de su brazo. Esto
también lo ayudara en no ser acusado por la muerte de Millhouse.
c. ¿Deben llevarse a cabo otras pruebas?
Se pueden y se deberían realizar más pruebas con las cuales se resuelvan los casos de la
muerte de Millhouse y el robo de las joyas.
Referencias:
Manual de Laboratorio Genética 2006. Baerga-Santini, Carmen; Cintrón Isabel;
Dávila, Iván. pp. 226-235.
Conceptos de Genética 5ta Edición 1999. Klug, William. ; Cummings, Michael. pp.
498-500.
http://www.pruebadepaternidad.info/
http://www.query.nytimes.com/gst/fullpage.html?
res=990CE4DE163CF935A15755C0A962958260