INMUNOFIJACIONCombina los principios de la electroforesis y la inmunoprecipitacin. La tcnica fue descrita en 1964 por Wilson. Posteriormente modificada por Alper y Johnson en 1969.

Utilizada para la identificacin monoclonal de inmunoglobulinas, en el estudio del polimorfismo proteico y para estudios genticos tales como alfa-1-antitripsina.

En la inmunofijacin de protenas, la muestra es colocada sobre un gel de agarosa en diferentes posiciones, y sometida a un corrimiento electrofortico. Posteriormente, cada corrimiento por separado es cubierto con un suero monoespecfico para IgG, IgA, IgM, kappa y lambda.

Despus de un perodo de incubacin en donde se forman los complejos inmunes antgeno anticuerpo, si es que existe una cantidad equilibrada de anticuerpo un exceso, se harn evidentes los complejos inmunes formados, ya que son muy grandes e insolubles para ser eliminados por lavado, mientras que la fraccin de anticuerpo no unida y las dems protenas son removidas, dejando slo los inmunoprecipitados.

muestrasSuero fresco o refrigerado LCRORINANO UTILIZAR PLASMAS PORQUE EL FIBRINOGENO PRESENTA EN LA MUESTRA OCASIONA INTERFERENCIA

VENTAJAS1. El proceso es ms rpido que una Inmunoelectroforsis. Aproximadamente 2 1/2 hrs.2. Es fcil distinguir las diferentes bandas cuando tenemos una gamapata biclonal con movilidad similar y de la misma clase de inmunoglobulina.3. El personal no requiere gran experiencia para interpretar las bandas como en el caso de la Inmunoelectroforsis.4. La inmunofijacin es ms exacta en la deteccin de la protena de Bence Jones.5. La inmunofijacin tiene una mejor resolucin de bandas pequeas bandas muy cercanas entre s.

INMUNOCROMATOGRAFIA:PRUEBAS RAPIDAS

Tcnicas InmunolgicasLas tcnicas de serologa diagnstica caen en tres categoras generales:Pruebas de unin primaria (miden directamente el enlace Ag-Ac)Pruebas de unin secundaria (miden los resultados de la interaccin Ag-Ac in-vitro)Pruebas de unin terciaria (miden el efecto protector real de los Ac en un animal)

Pruebas InmunodiagnsticasUnin Primaria: - Enzimticas: ELISA, IHQ, Dot Blot, Western Blot. - Fluorescentes: IFD, IFI. - Radiactivas: RIA. - Metales: InmunocromatografaUnion Secundaria: - Aglutinaciones. - Precipitaciones. - Fijacin del Complemento.Union Terciaria: Sistemas Vivos

Pruebas de unin primariaEste tipo de pruebas se realizan combinando antgenos y anticuerpos y despus midiendo directamente las cantidades de inmunocomplejos que se hayan formado.Son tcnicas de inmunomarcado. Se utilizan marcadores como radioistopos, colorantes fluorescentes, o enzimas para identificar uno de los reactivos.

CONCEPTOLa inmunocromatografa es una de las tcnicas de inmunodiagnstico ms modernas cuyas principales ventajas son la sencillez y rapidez del test. No es necesario reactivos ni instrumentacin adicional, como en el campo clnico. El ejemplo ms conocido son los test de embarazo de las farmacias.

Membrana de nitrocelulosa o nylon hay absorbidos en la lnea de reaccin anticuerpos contra el antgeno que buscamos La lnea control anticuerpos anticonjugado, de forma que cuando la muestra contiene antgeno, este fluye por la membrana quedando retenido en la lnea de reaccin.El conjugado, que tambin es un anticuerpo especfico frente al antgeno que buscamos, est marcado con una molcula de oro coloidal, que tambin fluye por la membrana, .

Es retenido por el antgeno en la lnea de reaccin y por el anticuerpo en la lnea control. En el caso de muestras negativas que no contienen antgeno, el conjugado es retenido nicamente en la lnea control. Ests tcnicas son rpidas, obtenindose resultados en 15-30 minutos

InmunocromatografaSon tcnicas cualitativas sencillas que utilizan anticuerpos marcados con metales pesados como el oro (color rosa) o el selenio (color azul). El ejemplo ms clsico es la prueba de embarazo en humanos.

La tcnica consiste en hacer que una solucin de Ag (por ej. sangre entera) fluya a travs de una tira porosa. El Ac puede estar marcado con oro (banda color rosa) o con selenio (banda color azul).

Sobre una membrana de nitrocelulosa, se encuentran absorbidos en la lnea de reaccin anticuerpos contra el antgeno que buscamos y sobre la lnea control anticuerpos anti-conjugado, de forma que cuando la muestra contiene antgeno, este fluye por la membrana quedando retenido en la lnea de reaccin. El conjugado, que tambin es un anticuerpo especfico frente al antgeno que buscamos, est marcado con una molcula no contienen antgeno, el conjugado es retenido nicamente en la lnea control. Ests tcnicas de oro coloidal, que tambin fluye por la membrana, es retenido por el antgeno en la lnea de reaccin y por el anticuerpo en la lnea control. En el caso de muestras negativas, el conjugado ser retenido nicamente en la lnea de control. Los resultados se dan visualizan entre 15 y 30 minutos.

TCNICA DE INMUNOCROMATOGRAFACTSFUNDAMENTO DE INMUNOCROMATOGRAFA PARA DETECCIN DE ANTGENOSTIRA NITROCELULOSA

PROCEDIMIENTO

RESULTADOSPOSITIVONEGATIVO

El mtodo basado en el oro coloidal como marcador ha tenido un gran desarrollo en los ltimos aos y sto por diversas razones:En primer lugar las partculas de oro se pueden fabricar en diferentes tamaos, de entre 2-3 nm a 100-150 nm, con todas las posibles medidas intermedias. Estas partculas pueden fabricarse en el laboratorio aunque actualmente existe una amplia disponibilidad comercial. Las partculas de oro absorven todo tipo de protenas formando complejos muy estables. Muchas de las protenas acomplejadas con oro mantienen sus propiedades y actividad biolgica. Los tamaos de 2 a 3 nm son los menores disponibles para un marcador y por ello el oro es el marcador que permite la mxima resolucin.

La utilizacin del oro como marcador unido a protena A, anticuerpos u otras protenas, se ha limitado tradicionalmente a la microscopa electrnica, pero recientemente el desarrollo de mtodos de amplificacin de la seal mediante precipitacin de plata metlica ha permitido su aplicacin en microscopa ptica.Los mtodos de amplificacin de seal se basan en la propiedad del oro de catalizar la reduccin de iones plata a plata metlica en presencia de un agente reductor. Durante este proceso las partculas de oro son rodeadas por plata metlica haciendose visibles al microscopio ptico con una coloracin marrn oscuro. Se utiliza el lactato de plata como donador de iones y la hidroquinona como reductor a un pH de aproximadamente 3.5. Actualmente el oro coloidal unido a anticuerpos o a protena A es el marcador ms empleado en microscopa electrnica.