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INSTITUTO DE CIENCIAS BASICAS Y PRECLINICAS “VICTORIA DE GIRON”
DEPARTAMENTO DE HISTOLOGÍA
EFECTOS DE LA INGESTION CRÓNICA DE ETANOL SOBRE LA ESTRUCTURA DE LOS TESTÍCULOS DE LA RATA ALBINA
Dra. María Caridad García Barceló
Teléf. 862 5896
Dr. Andrés Dovale Borjas
Teléf. 832 3377
RESUMEN Numerosos estudios afirman que, el consumo crónico de etanol provoca
alteraciones de la estructura y función testiculares. En nuestro trabajo evaluamos
los efectos del consumo crónico de etanol sobre el peso de los testículos, el
diámetro de los túbulos seminíferos, el volumen nuclear de las células de Leydig y
los niveles plasmáticos de testosterona, la ganancia de peso corporal y el
consumo de pienso y líquidos en ratas sometidas a la ingestión forzada de etanol
al 15 %, en el agua de beber, durante 8, 16 y 24 semanas. A todas las ratas se les
administró Polivit como complemento vitamínico. Se encontró una disminución
significativa del consumo de líquido, de pienso y de la ganancia de peso corporal
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en las ratas experimentales. No se encontraron diferencias significativas en el
peso de los testículos, el diámetro de los tubos seminíferos, en el volumen nuclear
de las células intersticiales de Leydig, ni en las concentraciones de testosterona
en sangre. Estos resultados difieren de lo reportado por otros autores y se
atribuyen a un posible efecto protector de las vitaminas aportadas por el Polivit.
Palabras clave Rata albina, etanol, testículos, tubos seminíferos, células de Leydig, testosterona,
vitaminas
Introducción Los trastornos de la espermatogénesis son las alteraciones más frecuentes
observadas en la infertilidad masculina; una de sus causas es la acción de
agentes químicos, entre los cuales se destaca el alcohol (1, 2, 3). El alcoholismo
es la más trascendente y difundida de las toxicomanías; por lo que se considera la
drogadicción típica y un mecanismo portero para la adquisición de otras
dependencias (4). Se afirma que, alrededor del 70 % de la población mundial de
16 años y más consume el tóxico, y que de ellos el 10 % se convierten en
alcohólicos (5). Sin duda, el alcoholismo es el problema de droga más importante
en el mundo por las complicaciones físicas, mentales y sociales que produce; y se
considera responsable de la reducción de 12 años de la expectativa de vida en los
alcohólicos (2, 6).
El consumo crónico de alcohol limita la absorción intestinal en general y acelera el
recambio de ácido fólico, tiamina y piridoxina, siendo una de las causas más
3
importantes de las deficiencias de folato (7, 8), tiamina, piridoxina, y de vitaminas
A, D, E, C, B2 y B12 en alcohólicos crónicos (9, 10, 11, 12).
En el hombre el alcoholismo crónico es causa de hipogonadismo y feminización,
pérdida del vello pubiano, de la libido, disfunciones sexuales eréctiles y
orgásmicas e infertilidad. Estos trastornos se acompañan de una disminución de
los niveles séricos de testosterona (2, 3, 6, 13).
En individuos alcohólicos se ha reportado disminución del peso y volumen
testicular, atrofia testicular, disminución del diámetro de los túbulos seminíferos,
con pérdida de celularidad de los mismos (14, 15, 16).
Por lo antes expuesto, nos planteamos conocer los efectos que ocasiona la
ingestión crónica de etanol sobre el peso de los testículos, el diámetro de los
túbulos seminíferos, el volumen nuclear de las células de Leydig, los niveles
plasmáticos de testosterona, la ganancia de peso corporal y el consumo de pienso
y líquido en ratas Wistar adultas.
Material y Método Se emplearon 48 ratas Wistar adultas macho de 10 semanas de nacidas,
procedentes del Centro Nacional para la Producción de Animales de Laboratorio
(CENPALAB), divididas al azar en tres grupos de 18, 15 y 15 ratas cada uno. A 10
animales de cada grupo se les administró como agua de beber solución de etanol
15 g por cada 100 ml, durante 8, 16 y 24 semanas respectivamente, los restantes
animales fueron tomados como controles y tuvieron libre acceso al agua. A todos
los animales se les administró una tableta de Polivit por cada 500 ml de solución.
Los animales se mantuvieron en cajas plásticas independientes y recibieron
4
ratonina suministrada por el CENPALAB. Se midió el consumo diario de líquido y
de pienso y se controló semanalmente el peso corporal.
Al concluir el experimento las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico,
40 mg/Kg. de peso por vía IP, se les extrajo 5 ml de sangre del ventrículo
izquierdo y se decapitaron. Se extrajeron los testículos y se fijaron por inmersión
en líquido de Bouin durante 48 h, se pesaron en una balanza analítica BLA-2002-
MT y posteriormente se incluyeron en parafina. Se realizaron cortes histológicos
de 6 µm de grosor y se colorearon con hematoxilina y eosina. Las láminas fueron
observadas en un fotomicroscopio Olympus BH2 acoplado a un equipo de
digitalización de imágenes (DIGIPAT) (17) con objetivo 4X y se midieron los
diámetros de 50 tubos seminíferos en cada animal. Se realizó además cariometría
de 50 núcleos de las células intersticiales de Leydig en cada animal con un
microscopio Karl Zeiss con objetivo 100 x, ocular 7 x y optovar 1.6 x, y se calculó
el volumen nuclear mediante el programa MFT (18).
Los niveles de testosterona en el plasma sanguíneo fueron determinados por el
método de radioinmunoanálisis (RIA), para el cual se empleó el kit TESTO-CT2
para tests in vitro de CIS Bio International. La lectura se realizó en un contador
minigamma LKB-1275. Los valores fueron expresados en nmol/l.
Se calcularon los estadígrafos media y desviación estándar de todas las variables
para cada grupo y condición, y se realizó un análisis de la varianza de dos vías
cuyos efectos principales fueron el grupo y la condición, con inclusión del efecto de
interacción para estudiar el efecto de la administración de alcohol y del tiempo sobre
cada una de las variables. Este análisis se llevó a cabo mediante el software
5
comercial Systat 7.0. El nivel de significación estadística utilizado fue 0.05.
Resultados y Discusión Las ratas sometidas a la ingestión crónica de etanol al 15 % durante 8, 16 y 24
semanas consumieron menos pienso, ingirieron menos líquido y tuvieron una
menor ganancia de peso que sus respectivos controles (Tablas 1, 2 y 3), lo que
coincide con lo reportado por Gómez (19) y pudo deberse al efecto depresor general
de la actividad celular que ejerce el alcohol (20), lo que reduciría sus necesidades de
líquido y de pienso, y también pudiera estar relacionado con el aporte calórico del
alcohol, aunque sólo entre el 15 - 41 % es aprovechado (10). La menor ganancia de
peso corporal en las ratas experimentales de los tres grupos está directamente
relacionada con el menor consumo de pienso y líquido, y coincide con lo referido por
otros autores (14, 19, 21, 22).
La ausencia de diferencias significativas en el peso de los testículos entre ratas
experimentales y controles (Tabla 4) no concuerda con lo referido por otros autores,
quienes reportan una reducción de la masa testicular y de más del 50 % de la masa
de la próstata y de las vesículas seminales (14, 22).
En nuestro experimento, el tratamiento con alcohol no modificó los diámetros de los
túbulos seminíferos (Fig. 1, Tabla 5). En este sentido es de notar que, los cambios
encontrados por Gómez y Dovale (18) y por Gómez (19) tampoco fueron
significativos, aunque en su experimento se empleó una concentración menor de
etanol y también se administró un complemento vitamínico a las ratas.
La disminución del diámetro de los tubos seminíferos como consecuencia del
consumo crónico de alcohol ha sido referida anteriormente por varios autores (14,
6
22-25), y relacionada con la pérdida de celularidad del epitelio germinativo,
secundaria al déficit de testosterona (14, 23) o de ácido retinoico, ya que este se
sintetiza a partir del retinol por la acción de las alcohol deshidrogenasas I y IV,
enzimas que se encuentran afectadas por la inhibición competitiva que produce el
etanol (26).
No se encontraron variaciones en el volumen nuclear de las células de Leydig
(Fig. 2, Tabla 6), lo que se correspondió con la conservación de los niveles de
testosterona observados en sangre (Tabla 7).
Nuestros resultados pueden estar en relación con la administración del complemento
vitamínico, pues el mismo aportó, entre otras, una dosis de vitamina A que constituye
más del doble de su requerimiento diario en humanos, la que pudo resultar suficiente
para conservar el epitelio germinativo.
Conclusiones La administración de etanol al 15 % en el agua de beber a ratas Wistar adultas
macho, durante 8, 16 y 24 semanas, provocó una disminución del consumo de
líquido, del consumo de pienso y de la ganancia de peso corporal que se relaciona
con el aporte de calorías vacías de esta droga, sin afectar el peso de los
testículos, el diámetro de los tubos seminíferos, el volumen nuclear de las células
de Leydig ni los niveles séricos de testosterona, por lo que planteamos un posible
efecto protector del complemento vitamínico Polivit contra las afectaciones del
etanol sobre los testículos reportadas en la literatura.
7
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TABLA 1 Consumo diario de líquido (ml/Kg)
Media y desviación estándar. Análisis de la varianza
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM. 16 SEM 24 SEM F(g) = 5.678 p = 0.007
CONTROL 91.0 (17.7)
n = 8
109.8 (32.2)
n = 5
139.7 (41.4)
n = 5
F(c) = 85.351 p = 0.000
ALCOHOL 58.4 (8.3)
n = 8
53.2 (7.7)
n = 8
58.4 (3.5)
n = 8
F(c * g) = 5.511 p = 0.008
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
Tabla 2 Consumo promedio diario de pienso (gramos por Kg)
Media y desviación estándar. Análisis de la varianza
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM. 16 SEM 24 SEM F(g) = 16.938 p = 0.000
CONTROL 60.3 (3.1)
n = 8
58.3 (4.3)
n = 5
52.5 (2.6)
n = 5
F(c) = 119.75 p = 0.000
ALCOHOL 47.6 (6.3)
n = 8
30.7 (2.5)
n = 8
48.5 (4.9)
n = 8
F(c * g) = 23.79 p = 0.000
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
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Tabla 3 Ganancia de peso (gramos) Media y desviación estándar. Análisis de la
varianza
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM 16 SEM 24 SEM F(g) = 8.720 p = 0.001
CONTROL 127.1 (29.8)
n = 8
263.8 (35.0)
n = 5
325.4 (54.3)
n = 5
F(c) = 0.027 p = 0.870
ALCOHOL 86.3 (51.3)
n = 8
228.5 (22.2)
n = 8
269.2 (37.5)
n = 8
F(g * c) = 1.787 p = 0.182
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y
experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
Tabla 4 Peso de los testículos (gramos) Media y desviación estándar. Análisis de la
varianza
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM 16 SEM 24 SEM F(g) = 8.720 p = 0.001
CONTROL 3.32 (0.62)
n = 8
3.79 (0.36)
n = 5
4.33 (0.33)
n = 5
F(c) = 0.027 p = 0.870
ALCOHOL 3.68 (0.27)
n = 8
3.7 (0.45)
n = 8
4.05 (0.36)
n = 8
F(g * c) = 1.787 p = 0.182
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y
experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
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Tabla 5 Diámetro de los tubos seminíferos (µm) Media y desviación estándar.
Análisis de la varianza.
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM 16 SEM 24 SEM F(g) = 8.264 p = 0.001
CONTROL 206.8 (11.5)
n = 8
190.5 (11.3)
n = 5
209.1 (21.4)
n = 5
F(c) = 0.279 p = 0.601
ALCOHOL 191.9 (20)
n = 8
189.1 (7.1)
n = 8
218.1 (14.6)
n = 8
F(g * c) = 2.345 p = 0.110
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
TABLA 6 Volumen nuclear de células intersticiales de Leydig (µm3) Media y desviación
estándar. Análisis de la varianza.
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM 16 SEM 24 SEM F(g) = 0.958 p = 0.393
CONTROL 60.3 (7.2)
n = 8
55.9 (3.6)
n = 5
59.2 (4.2)
n = 5
F(c) = 0.868 p = 0.358
ALCOHOL 58.3 (7.8)
n = 8
58.3 (5.7)
n = 8
53.4 (5.7)
n = 8
F(c * g) = 1.413 p = 0.256
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
13
Tabla 7 Concentración de testosterona en sangre (nmol/l) Media y desviación estándar.
Análisis de la varianza.
GRUPO ANÁLISIS DE LA VARIANZA
CONDICIÓN 8 SEM 16 SEM 24 SEM F(g) = 0.099 p = 0.906
CONTROL 31.6 (12.9)
n = 8
21.7 (2.7)
n = 5
17.4 (15.5)
n = 5
F(c) = 3.722 p = 0.061
ALCOHOL 23.8 (20.4)
n = 8
31.6 (10.5)
n = 8
40.91 (13.9)
n = 8
F(c * g) = 4.451 p = 0.019
F: estadígrafo de la razón de las varianzas; g: grupo; c: condición (control y experimental); c * g interacción condición - grupo; p: probabilidad.
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Fig. # 1 Tubos seminíferos de ratas del grupo de 16 semanas. Izquierda: control; derecha: alcohol. Coloración hematoxilina y eosina, aumento X 310.
Fig. # 2 Células intersticiales de Leydig del grupo de 24 semanas. Izquierda: control; derecha: alcohol. Coloración hematoxilina y eosina. Aumento X 800.
