Integración de DNA en microorganismos:

herramientas genéticas I

Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano

• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima

– Transposición

Homologous pairing

Resolution

One-strand repair/replication

Recombinación homóloga

3’

5’RecBCD

3’

5’

3’

5’

5’3’

Recombinación homóloga: respuesta a DSB

3’

5’RecBCD

3’

5’RecBCD

RecA3’

5’

Chi sites:E. coli 5’GCTGGTGG3’B. subtilis 5’ACTGCG3’L. lactis 5’GCGCGTG3’

Recombinación homóloga: RecBCD y Chi

RecA3’

5’

RecA

Recombinación homóloga: desplazamiento de hebra

RuvABC

A

B

A B

RuvAB

RuvCRuvC

Intermediario de Holliday

Integración tipo Campbell Conversión génica

Integrando DNA por recombinación homóloga

marker

marker

Intercambio alélico

marker

marker

marker

Resolución de secuencias en tandem

marker

3’

5’

3’

5’RecBCD

RecBCD

Chi mejora el intercambio alélico

Genes marcadores de selección positiva y negativa

sacBR (B.subtilis)

Production of levansucrasa in presence of 5% sacarosa es tóxica en Gram -

nar1Necesario para asimilar nitrato, tóxico en presencia de clorato

Ab

Ab

Ab

Conversión génica

Ab

Conversión génica y Chi, haciendo más facil el trabajo

Ab

Ab

X XAb

X X

Ab

X XAb

Ab

Conversión génica: para KOs y mas...

Integración de DNA exogeno en el genoma bacteriano

• Recombinación homóloga• Recombinación sitio-específica• Recombinación ilegítima

– Transposición

Recombinación específica de sitio

Estructura de una diana de SSR

SSR en acción

SSR en acción

SSR en acción

SSR en acción

Invertasas

Sistemas de variación de fase

Resolvasas/Integrasas

Estabilidad plasmidica, transposición...