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7/23/2019 Laboratorio de Ciencia Bsica III Cromatografia Grupo 2
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Laboratorio de Ciencia Bsica III
Cromatografa: Separacin yExtraccin de pigmentos
Vegetales.
7/23/2019 Laboratorio de Ciencia Bsica III Cromatografia Grupo 2
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Cromatografa Mtodo de separacin de una mezcla de dos o ms compuestos
entre dos fases inmisci!les: una fase m"il# $ue transporta las
sustancias $ue se separan y $ue progresa en accin con la otra#
denominada fase estacionaria $ue sir"e como adsor!ente del
eluyente. %e forma general# consiste en pasar una fase m"il a
tra"s de una fase estacionaria fi&a slida# donde dic'o mo"imiento#
estar determinado por las afinidades polares de los pigmentos con
el eleyente(fase m"il) y el adsor!ente (fase estacionaria).
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Cromatografas dependiendo la naturalezade las fases involucradas
Cromatografa l$uida.
*a fase m"il es un disol"ente o mezcla de disol"entes y la fase estacionaria
un slido $ue interact+a con las sustancias $ue se desea separar
(cromatografa l$uido,slido)# o !ien un l$uido inmisci!le con la fase
m"il# depositado en la superficie de un slido (cromatografa l$uido,
l$uido). Esta forma de cromatografa puede realizarse con diferentes
arreglos experimentales: en columna# en capa delgada o en papel.
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Cromatografas dependiendo la naturalezade las fases involucradas
Cromatografa de -ases
En este caso la fase m"il es un gas inerte ('elio o nitrgeno) y la fase
estacionaria es un slido (cromatografa gas,slido) o un l$uido
sostenido/ por un slido inerte (cromatografa gas,l$uido). Este tipo de
cromatografa siempre es en columna# ya $ue es la +nica manera de $ue la
fase m"il gaseosa se mantenga fluyendo# confinada dentro del sistema.
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Cromatografa en Capa Fina *a cromatografa en capa fina se !asa en la preparacin de una capa#
uniforme# de un adsor!ente mantenido so!re una placa de "idrio u otro
soporte. *os re$uisitos esenciales son# pues# un adsor!ente# placas de
"idrio# un dispositi"o $ue mantenga las placas durante la extensin# otro
para aplicar la capa de adsor!ente# y una cmara en la $ue se desarrollen las
placas cu!iertas. Es preciso tam!in poder guardar con facilidad las placas
preparadas y una estufa para acti"arlas
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Cromatografa en Capa Fina Ventajas:
*a cromatografa en capa fina presenta una
serie de "enta&as frente a otros mtodos
cromatogrficos (en columna# en papel# enfase gaseosa) ya $ue el material $ue precisa
es ms simple. El tiempo $ue se necesita
para conseguir las separaciones es muc'o
menor y la separacin es generalmente
me&or. 0ueden usarse re"eladores
corrosi"os# $ue so!re papel destruiran el
cromatograma. El mtodo es simple y los
resultados son fcilmente reproduci!les# lo
$ue 'ace $ue sea un mtodo adecuado para
fines analticos.
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Cromatografa en Capa Fina 1sos de la CC2
*a CC2 es usada frecuentemente a ni"el industrial para prue!as preliminares
a la cromatografa en columna# ya $ue en sta tcnica podemos identificar
los compuestos una "ez separados. *a C.C.2. se realiza con material muy
!sico# a comparacin de la C.C.# aparte de ser rpida# econmica y semuestra me&or la separacin.
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Cromatografa en Capa Fina Concepto de 3f
*a relacin de las distancias
recorridas por el compuesto
y por el disol"ente# desde el
punto de origen del
cromatograma# se conoce
como Rf# el cual posee un
"alor constante para cada
compuesto en condiciones
determinadas.
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Cromatografa en Capa Fina
3e"eladores
*a mayor parte de las placas de cromatografa lle"an un indicador fluorescente $ue
permite la "isualizacin de los compuestos acti"os a la luz ultra"ioleta El indicador
a!sor!e la luz 1V y emite luz "isi!le. *a presencia de un compuesto acti"o en el 1V
e"ita $ue el indicador a!sor!a la luz en la zona en la $ue se encuentra el producto#
y el resultado es la "isualizacin de una manc'a en la placa $ue indica la presencia
de un compuesto. En el caso de compuestos $ue no a!sor!en luz 1V# la
"isualizacin (o re"elado) del cromatograma re$uiere utilizar un agente re"elador.
Este tiene $ue reaccionar con los productos adsor!idos proporcionando
compuestos coloreados.
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Cromatografa en Columna Concepto
*a CC es una "ariedad de la cromatografa en la $ue la fase m"il es l$uida y
pasa a tra"s de la fase estacionaria# slida# l$uida# $ue esta retenida en un
recinto cilndrico. Esta modalidad consiste en 'acer pasar mediante
gra"edad la fase l$uida so!re el slido retenido en la columna. Esta
"ariante de la cromatografa se realiza# normalmente# despus de las
prue!as con CC2 para compro!ar $ue disol"entes se utilizan en la
separacin del pigmento.
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Cromatografa en Columna *os compuestos $ue se encuentran disueltos en la fase m"il# poco a poco saldrn de la columna
cromatogrfica# y se recogen en fracciones. *as fracciones menos polares# $ue son por lo general
las $ue se retienen poco o nada en el a!sor!ente# sern las primeras en salir de la columna. En
cam!io# las sustancias ms polares# $uedan retenidas por ms tiempo en el a!sor!ente# y a
menudo es necesario el uso de diferentes disol"entes con la finalidad de incrementar su polaridad
para $ue sean arrastradas por estos.
El eluato es la sustancia $ue se separa o sale de la columna despues de cada extraccion. este
metodo es de separacion y ademas es cualitati"o y cuantitati"o.
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Cromatografa en Columna
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Cromatografa en Columna 4plicaciones
5. Separaciones de componentes de plantas medicinales.
6. Separacin de componentes de una sntesis orgnica.
7. separacin de colorantes.
8. separacin e identificacin de 'ioscina y de morfina.
9. separacin de acido acetico# alco'ol cetilico y metil,etil cetona.
. separacin e identificacin de los compuestos intermedios de una sntesis
orgnica# por e&emplo en la sntesis del naftaleno# identificacin de acido
ftalico# an'idrido ftalico# !enceno.
;. En la produccin sinttica de acetaminofen# identificacin de la imina de la
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Cromatografa en capa fina 0ara la cromatografa en capa fina se utiliz los siguientes materiales y
reacti"os:
Materiales Reactivos
0orta o!&etos -el Slice
2rascos =exano
0apel filtro 4cetona
Capilares 0asto
Estufa
-radilla
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Cromatografa en capa fina El past se macer en un mortero donde posteriormente se le a>adi una
mezcla de disol"entes# dic'a mezcla se realiz a !ase de metanol y
cloroformo. *a mezcla se coloc en un frasco am!ar y se de& reposar por 5
da.
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Cromatografa en capa fina 4ntes de realizar la C.C.2. se prepar las cromatoplacas con el gel slice y
posteriormente se colocaron en el 'orno a 5??@C por 7? min para acti"arlas# es
decir para eliminar la 'umedad $ue tenga.
Con ayuda de un encendedor# se $uema y se rompe el capilar en dos partes de
forma $ue la punta $uede fina y es con sta parte del capilar con la $ue se coloc
la muestra en la cromatoplaca a 5 cm. 4prox. %e la !ase de la cromatoplaca.
En un frasco se coloc papel filtro en las paredes internas# posteriormente se
a>adi unos mililitros de eluyente en el frasco# ste procedimiento se realiza
para facilitar la separacin al colocar la cromatoplaca en el frasco (cmara de
elusin).
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Cromatografa en capa fina 3esultados
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Cromatografa en columna: Pasto 0ara la cromatografa en columna# se utilizaron los siguientes reacti"os y
materiales (ta!la 5):
Materiales Reactivos
Soporte 1ni"ersal =exano C=58
0inzas de do!le presin 4cetona C=7(CA)C=7
Bureta de 69ml -el slice (preparado)u!os de ensayo 0igmento (pasto)
Em!udo
4lgodn
4rena
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Cromatografa en columna: Pasto El e$uipo se mont y se coloc un
poco de algodn a manera de
taponar salida de la columna. *a
arena se coloc en una pe$ue>a
capa de 5 cm. 4prox. para
despus colocar el gel slice 'asta
a!arcar D partes de la columna yse coloc# nue"amente# 5 cm
aprox. de arena. En la ultima
parte del llenado se coloc la
muestra (de 7 a 9 ml).
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Cromatografa en columna: Pasto *a separacin comenz al a>adir el
disol"ente menos polar# =exano en
ste caso. El disol"ente se a>adi'asta completar la separacin del
primer pigmento.
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Cromatografa en columna: Pasto 1na "ez terminada la
separacin del compuesto
menos polar (pigmento
amarillo)# se a>adi el
disol"ente ms polar# es decir#
el acetona y de esa forma se
inici la separacin del
pigmento "erde.
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Cromatografa en columna: Pasto 3esultados:
Pigmento Amarillo
u!o 7 5mL
u!o 8 mL
u!o 9 55mL
u!o mL
Pigmento Verde
u!o 7.9ml ClorofilaF
u!o G 6.9mL ClorofilaH
u!o 5? 8.;mL ClorofilaH