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7/25/2019 Laboratorio n8 Final
http://slidepdf.com/reader/full/laboratorio-n8-final 1/5
Universidad Católica Boliviana “San Pablo” Alejandro FuentesLaboratorio N-8 Andres Gonzales
Cristhian Lopez auricio !errazas
P"#C!$CA N% 8
C"&A!&G"AF'A (N CAPA )(LGA)A
$ntroducci*n
Los metodos cromatogrficos son metodos d sparacin qu involucran la
transfrncia rvrsibl d un compusto qu st absorbido n una fas stacionaria
(absorbnt) a una fas mvil (disolvnt) qu fluy a traves d la fas stacionaria.
La sparacin surg d las intraccions mutuas d componnts d una mustra,
disolvnt y absorbnt. El absorbnt st prsnt n un gran xcso, con una gran
suprfici y con sitios polars capacs d unir rvrsiblmnt pquasconcntracions d sustancias por un procso sncialmnt lctrosttico.
El disolvnt compit con los componnts d la mustra por los sitios d unin. Estos
componnts son dspla!ados rvrsibl y continuamnt n la dirccin dl flu"o dl
disolvnt. El procso dscrito pud scribirs como un quilibrio comptitivo n
dond #ay una particin d los componnts ntr la fas stacionaria y la fas mvil$
componnts % adsorbnt & disolvnt % adsorbnt & componnt%disolvnt
Entr ms polar sa un compusto, ms furtmnt s absorb n la fas stacionaria,
por lo qu su migracin a lo largo d lla s mnor, sindo lu'do (arrastrado) ms
lntamnt por la fas mvil, qu los compustos mnos polars. st modo, lasparacin slctiva d los componnts d una mustra, por cromatograf'a, s db a
7/25/2019 Laboratorio n8 Final
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Universidad Católica Boliviana “San Pablo” Alejandro FuentesLaboratorio N-8 Andres Gonzales
Cristhian Lopez auricio !errazas
las difrncias n la migracin d los componnts individuals a lo largo d la fas
stacionaria.
partamnto d ngnir'a y *incias +u'micas. nivrsidad broamricana.
Laboratorio d +u'mica -rgnica plicada. /rctica 0. *romatograf'a n /laca lgada
y n /apl 01 En la cromatograf'a n fas l'quida s usa una fas mvil (l'quida) y una
fas stacionaria (slida), sindo los
absorbnt ms comuns la s'lica gl (2i-3.43-), al5mina (3-6) y clulosa.
La distribucin d los componnts ntr la fas slida y l'quida s dtrminada,
adms d por la polaridad propia d cada compusto, por l grado d actividad dl
absorbnt (l cual dpnd principalmnt dl grado d #idratacin y d la polaridad
dl disolvnt).
El principal factor para controlar l moviminto d los difrnts compustos n un
cromatograma s la polaridad dl disolvnt. na lista d los disolvnts ms usados n
los difrnts tipos d cromatograf'a, n ordn d polaridad crcint, s indica n la7abla 0. Entr ms polar sa un disolvnt, ms rpido s l moviminto d los
compustos y mnos fctiva la sparacin.
arco teorico
/ara sparar pquas cantidads d una m!cla (#asta unos 011 mg) o avriguar l
n5mro d sus componnts idntificarlos por cromatograf'a, s pud usar una capa
dlgada d adsorbnt ad#rida sobr un soport r'gido. La tecnica s dnomina
cro+ato,ra.a en capa del,ada, abrviada **. El adsorbnt mas mplado s l
gl d s'lic o cido sil'cico finamnt dividido. /ara qu los adsorbnts s ad#iran a
la suprfici r'gida, s m!clan con 0 8 39 d yso (sulfato d calcio mono#idratado).
*omo soport s usa vidrio, lminas r'gidas d poliestr o d aluminio. *omo
adsorbnts tambien s usan al5mina nutra activada, clulosa pulvri!ada o
policaprolactama (nylon :) o polivinilpirrolidona (/;/) (/olyclar 7).
Los adsorbnts, m!clados con l aglutinant, s mbadurnan sobr la suprfici dl
soport, usualmnt d < a 31 cm d longitud. *uando s usa vidrio, las placas pudn
sr portaob"tos o mdir 3 x = x 01 cm y 31 x 31 cm. La capa mbadurnada db tnr
un spsor constant, d 01 a =1 >m. na v! mbadurnada la placa, s sca a ?1 8 011
@* durant unos 61 minutos. /ostriormnt la mustra s coloca a 0 8 3 cm d unxtrmo d la placa, mdiant un tubo capilar, como una diminuta manc#a circular o
como una dlgada raya. La placa s introduc n una cmara cromatogrfica qu llva
suficint cantidad d una m!cla d disolvnts, para qu su suprfici qud a unos
1,= cm por dba"o d la manc#a o l'na. La cmara s tapa para qu los solvnts
ascindan por capilaridad y comincn a luir y movr difrncialmnt a los
componnts d la manc#a. *uando los solvnts s aproximan a la part suprior d la
placa, s la saca, rayndos la placa a la altura alcan!ada por l frnt dl solvnt. La
placa s sca, s xamina a la lu! natural, lugo con lu! ultraviolta y finalmnt s l
aplica un agnt cromogenico, qu convirt n manc#a colorida una incolora. El
n5mro d manc#as dtrmina l n5mro m'nimo d componnts d la m!cla. El
cocint d la distancia a rcorrida por cada componnt o manc#a ntr la distancia srcorrida por l frnt dl solvnt, s dnomina R f .
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Cristhian Lopez auricio !errazas
A f B aC s
A f s una caractr'stica para cada sustancia. El agnt cromogenico pud sr
spc'fico para cirtos grupos funcionals. s', la 3,D%dinitrofnil#idra!ina da manc#as
con los grupos carbonilo, l a!ul d bromotimol con los cidos, l cloruro ferrico con
los fnols. -tros, como l yodo, son gnrals.
Procedi+iento
Los portaob"tos usados n microscopio son muy vnta"osos para la **. 2on muy
baratos, s pudn rcubrir con capas muy dlgadas d absorbnt sin aplicadors
spcials, rquirn mustras pqu'simas (0 a 31 >g) y timpos cortos (= a 0=
minutos) para sparar sus componnts. untar por sus caras dos portaob"tos limpios ydsngrasados, introducirlos n un frasco d boca anc#a (d unos : cm d anc#o y ? cm
d alto) con tapn d rosca, n l qu s #aya introducido una suspnsin prviamnt
bin disprsada d unos 01 g d gl d s'lic F (marca GrcH o quivalnt) n D1 mL
d cloroformo, ttracloruro d carbono o d agua. 2acarlos nsguida, spararlos y
ponrlos a scar. El frasco s tapa cuando no s usa.
Las placas mbadurnadas s scan y activan calntndolas a ?1 8 001 @* durant 01 a 0=
minutos. Las placas dbn consrvars n atmsfra sca, pudn guardars n una ca"a
para portaob"tos. /ara usars, a unos = a 01 mm dl xtrmo infrior d la placa s
tra!a con un lpi! d grafito o con una nava"a, una raya suprficial qu sala l orign
dl cromatograma. Gdiant una micropipta, s aplican pqu'simos vol5mns (= a01 >l) d la mustra, procurando consrvar l dimtro d las manc#as n 0 a 3 mm. 2i
n una misma placa van varias manc#as, s aplican sparadamnt a intrvalos d 01 a
31 mm. *onvin dlimitarlas mdiant muscas vrticals tra!adas con la punta fina
d un lpi! o nava"a. La placa s coloca vrticalmnt o n ngulo d ?1@ n una
cmara cromatogrfica, n la qu prviamnt s stabili! l disolvnt con su
atmsfra. /ara llo, convin colocar sobr la pard un tro!o d papl filtro. El
disolvnt db qudar a unos 6 a = mm d distancia por dba"o dl punto n qu stn
las mustras. El disolvnt ascind por la placa arrastrando los componnts d la
mustra. *uando l frnt dl disolvnt s aproxima a unos 01 a 0= mm dl xtrmo
suprior d la placa, s db rtirar la placa d la cmara. La placa s sca a
tmpratura ambint o a 011 @*. na v! sca la placa, s xamina visualmnt, buscndos manc#as coloridas. Ensguida, s obsrva ba"o una lu! ultraviolta.
spues la placa s trata con un agnt cromogenico apropiado. /or "mplo, s pud
introducir n una cmara qu tnga unos cuantos cristals d yodo y qu n corto
timpo dan manc#as cafes. 2 mid la distancia rcorrida por l cntro d cada manc#a
y la rcorrida por l disolvnt. El cocint d la primra distancia sobr la sgunda nos
da l A f d la mustra.
Separación de antocianinas
/sar = g d cáscaras d uvas ngras. 7riturar n un mortro l matrial vgtal,
m!clado con un poco d arna, con 31 mL d 4*l al 09 n tanol. "ar dcantar lasuspnsión n un vaso d prcipitados d =1 mL. plicar con una micropipta la fas
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tanólica a la placa con gl d sí lic. ntroducir n un vaso d prcipitados d 3=1 mL
31 mL d m!cla n%butanol – ácido acético – agua (D$0$=) vCv, tapando con un vidrio
d rlo" para qu la atmósfra al intrior d vaso d prcipitados s satur con los
vapors d la m!cla d solvnts. ntroducir la placa cromatogr áfica con la mustra
smbrada dntro dl vaso d prcipitados y tapar con l vidrio d rlo". Lugo d la
lución, d"ar scar la placa, obsrvar primro con lu! normal y lugo con lu!
ultraviolta la placa. Garcar con la punta d un lá pi! todas las manc#as qu s
obsrvn. Gdir las distancias rcorridas por cada manc#a y calcular sus A f (mdir
dsd l cntro d la manc#a aplicada n la placa #asta l cntro d la manc#a luida).
Pre,untas
0. I*untas manc#as s obsrvan y culs son sus A f J
2 mustran D manc#as dond$
Ganc#a0$ a B 1 cm
Ganc#a3$ a B D.0 cm
Ganc#a6$ a B D.: cm
Ganc#aD$ a B =.= cm
2B:.D cm.
/ara$
Ganc#a 0$ Af$ 1C:D B 1
Ganc#a 3$ Af$ D.0C:.D B 1.:D0 Ganc#a 6$ Af$ D.:C:.D B 1.<0K
Ganc#a D$ Af$ =.=C:.D B 1.?=K
3. I+ue structuras tinn las antocianinas y n que tipos d plantas s pudn
ncontrarJ
Las antocianinas al sr pigmntos, s ncuntran n algunas frutas qu van
dl color ro"o al a!ul o morado, como los arndanos, agon'a, frsas,
frambusas, las cr!as, la col lombarda y las cirulas o las uvas.
/arc sr qu algunos d stos principios s pirdn cuando los frutos son
consrvados n frio, por lo qu sria rcomndabl tomarlos frscos n la
tmporada d produccin.
7ambin s #a comprobado qu las antocianinas aumntan n un fruto dt
trminado a mdida qu sta madura, por la qu no convin comr los fru
tos bin maduros.
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