LABORATORIO No 1 Manejo Del Microscopio

7/24/2019 LABORATORIO No 1 Manejo Del Microscopio

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LABORATORIO No.1

ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

INTRODUCCIN

Desde los inicios de la microscopia, losinvestigadores vienen desarrollandomtodos cada vez ms sensibles,eficaces y con mejor resolucin. Alprincipio ellos debieron enfrentarse a losproblemas de aberraciones pticas,imgenes borrosas y pobre desarrollo delentes, los cuales se mantuvieron hastamediados del siglo XIX que aparecieronlos lentes objetivos que reducan laaberracin cromtica con una aperturanumrica entre 0.65 y 1.25. Estos

avances se iniciaron con los reportessobre los mtodos de iluminacin quepropuso el profesor August Klher, en1893, y que sentaron las bases de lamicrofotografa moderna. En las ltimasdcadas se ha incrementado laaplicacin de la microscopa ptica en loslaboratorios de investigacin de unaamplia variedad de disciplinas como labiologa celular y molecular,microbiologa, inmunologa y virologa. Elrpido desarrollo de diferentes mtodos

como los de fluorescencia, contraste defases, confocal y de campo oscuro entreotros, que sumados a los avances en ladigitalizacin y anlisis de imgenes, hanpermitido a los microscopistas obtenerresultados rpidos, cuantificables yconfiables de una gran variedad deespecmenes biolgicos. Al margen deestos avances, las bases delfuncionamiento de los distintos tipos demicroscopios pticos siguen siendo losmismos que se presentan en esta

prctica y con los cuales el estudiantedeber familiarizarse.

BREVE HISTORIA DEL MICROSCOPIOTres eminentes holandeses, Antn VanLeeuwenhoek, Hans y ZacchariasJanssen, fabricantes de lentes,contribuyeron al desarrollo de lamicroscopa. El museo de Middleburg, en

Holanda, conserva uno de los primeros

microscopios conocidos, probablementefabricado por uno de los hermanosJanssen. Estos aparatos, eranextremadamente simples, por lo que solopermitan el examen de cuerpos opacos.

A fines del siglo XVII el italiano Campingconstruy un microscopio que hizoposible la observacin de preparacionestransparentes. Las imgenes obtenidaspor estos microscopios eran muydeficientes.En Inglaterra el cientfico Robert Hooke,

trat de construir lentes ms eficaces,pero sus resultados no fueronsatisfactorios; sin embargo, susobservaciones contribuyeron alestablecimiento de la microscopa comociencia. Mientras, en el siglo XVII JonhMarshall y otros fabricantes demicroscopios, perfeccionaron mucho eldiseo mecnico, pero no la calidad delos lentes. Pero fue, durante el siglo XIX,que se realizaron grandes progresos enlos sistemas pticos y en la microscopa

en general; aun as, fue imposible evitarla dispersin de la luz en sus colorescomponentes en la fabricacin demicroscopios. Este fenmeno conocidocomo aberracin cromtica, produca unaimagen borrosa y coloreada.Las primeras lentes adecuadamentecorregidas para microscopios,denominadas acromticas, hicieron suaparicin alrededor de 1830; pero laaberracin esfrica, tambin producauna imagen desenfocada. En 1886, Ernot

Abbe y Caol Zeiss en Alemaniafabricaron unas lentes apocromticasque corrigieron ambas aberraciones.

A finales del siglo XIX, los microscopioscomenzaron a adquirir la forma quetienen actualmente, con los aportes deKhler.Desde el ao 1900, los microscopios sehan modificado poco en sus principios


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fundamentales, pero mucho en susdetalles. Estos perfeccionamientosincluyen, la incorporacin de variosobjetivos, cada uno de aumento diferentey roscado a un tambor giratorio orevolver.

En 1935, Frizt Zenique invento la tcnicade contraste de fase que hace posible laobservacin de especmenes antesinvisibles.El microscopio electrnico, desarrolladoen vsperas de la segunda guerramundial, ha sido de gran utilidad para elestudio de molculas qumica, virus yorganelas celulares.Existe un tipo de microscopio electrnico,llamado de barrido, que ha adquirido unaextraordinaria utilidad, ya que ofrece

representaciones tridimensionales muyreales de las clulas y las estructurascelulares.

1.1 OBJETIVOS:1.1.1 OBJETIVO GENERAL: Valorar la importancia del microscopio

como instrumento bsico para elestudio e investigacin en lasCiencias Biolgicas.

1.1.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Identificar las diferentes partes queconstituyen el microscopio yreconocer las funciones de cada unade ellas

Adquirir habilidad en el uso y manejocorrecto del microscopio, siguiendolas indicaciones de las guas delaboratorio.

1.2 MATERIALESMicroscopiosPorta-objetos y cubre-objetos

Papel limpia lentes (papel de arroz)Goteros o Pipetas PasteurHilos de lana y algodnFlores con polen

Agua de charcaPartes de insectoPinzas de diseccin

1.3 CLASES DE MICROSCOPIOS:Existen dos tipos de microscopios:simples y compuestos

Microscopios simples:Consta de un solo sistema delente

Microscopios compuestos:Constan de dos (2) sistemas delentes: el objetivo y el ocular. Elmicroscopio compuesto es uninstrumento que aumentaconsiderablemente la imagende los objetivos que en l seobservan. Entre las variedadesde ste microscopioencontramos el electrnico y elfotnico u ptico. Este ltimotipo de microscopio est

formado por una partemecnica y una parte ptica.(Figura No.1.1)

Parte Mecnica:a. Pie o Base: Generalmente en formade herradura o rectangular, es el apoyode las dems piezas del microscopio. Elpie debe ser slido y pesado paraasegurar su estabilidad.b. Columna o Brazo: Este elementorelaciona el tubo del microscopio con el

pie; sostiene la platina y el condensadory de ella se agarrar el microscopiocuando se traslada durante los trabajos.En algunos microscopios la columna esmvil.

Figura No.1.1 Microscopio ptico


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Para obs ervar imgenes de las d iferent es

partes d el mic rosc opio haz cl ick aqu

c. Tubo del Ocular: Est colocado en laparte superior del microscopio, dondeestn acoplados los oculares, que

pueden tener movimiento vertical, conayuda de una cremallera sobre lacolumna. En algunos microscopios eltubo ocular es inclinado y se mantienefijo, en este caso se mueve la platina.d. Revlver o Disco Giratorio: Estdebajo del tubo ocular donde estnacoplados los objetivos, presentamovimiento giratorio para facilitar elcambio de un objetivo a otro.e. Platina: Es una placa que puede sercuadrada, circular o rectangular, con un

orificio central que permite el paso de laluz a travs de ella. Su funcin essostener las placas con los preparadosbiolgicos que se van a observar.f. Carro: Es un dispositivo ubicado sobrela platina, cuya funcin es sujetar ymover la placa que se va a estudiar.Posee dos tornillos que permitenmovimientos horizontales y verticales(hacia adelante, hacia atrs, hacia laizquierda y hacia la derecha) delportaobjetos. Cuando la platina carece

del anterior dispositivo, lleva dossoportes para fijar las placas llamadasganchos o uas.g. Mecanismos de Movimiento: Estintegrado por el tornillo Macromtrico y elMicromtrico.

Tornillo Macromtrico:Acerca oaleja rpidamente el objetivo delpreparado a observar; su funcines lograr un enfoque ms omenos claro o aproximado delobjeto.

Tornillo Micromtrico: Acerca oaleja el objetivo del preparado,pero lentamente, casiimperceptiblemente, permitedesplazamientos muy finos de laplatina o del tubo del ocular.Durante la observacin y enfoqueeste tornillo debe estarsemoviendo permanentemente; su

funcin es darle nitidez alenfoque.

Parte ptica:Esta integrada por los objetivos, ocularesy el aparato de iluminacin (espejo,

diafragma, condensador y filtros). Estoselementos son los que permiten lailuminacin, ampliacin y la visinaumentada del objetivo.a. Objet ivo: Es la pieza ms importantedel microscopio. Ellos se acoplanmediante roscas estndar al revlver ypueden ser cambiados de posicin conslo rotarlos. Reciben el nombre deobjetivos porque son los lentes que estnms cerca del objeto. La mayora de losmicroscopios tienen tres o cuatro

objetivos. Las lentes de los objetivos sonde aumentos diversos, los ms usadosson: Objetivos de pequeos aumentos3.5x; 4x, 5x, 6x, 8x y 10x; objetivos degrandes aumentos 40x, 45x, 50x yobjetivos de inmersin 90x, 95x y 100x.Las lentes de inmersin se emplean conaceite de cedro para conectar la lentefrontal (lente inferior del objetivo) alporta-objeto. Entre el objetivo y el objetose produce una prdida de luz porreflexin que se corrige adicionando al

preparado unas gotas de aceite de cedro(aceite de inmersin) cuyo ndice derefraccin 1.515, es prximo al cristal.Este aceite tambin reduce o suprimepor completo la refraccin de los rayosde luz provenientes de la fuenteluminosa.

Figura No. 1.2 Especificaciones de losobjetivos.


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b. Ocular: Estn colocados en la partesuperior del tubo ocular. Est formadopor dos sistemas de lentes dispuestos enun cilindro. Su finalidad es aumentar laimagen dada por el objetivo yeventualmente corregir algunos defectos

de la misma. Reciben dicho nombreporque son las lentes que se encuentranms cerca del ojo. Hay oculares de 3.5x;5x; 6.3x; 10x; 12.5x; 15x; 20x y 25x.El aumento de la imagen de un objetoobservado a travs de un microscopio,se calcula multiplicando el nmero deaumento del objetivo con el cual se esttrabajando por el nmero de aumento delocular que se est utilizando.c. Aparato de i luminacin: Estconformado por la fuente de luz, el

diafragma, el condensador y los filtros.d. Fuente de Luz: Puede ser natural oartificial, cuando es natural (solar) oprocede de un foco luminoso situadofuera del microscopio, un espejo recogela luz del medio y la refleja a travs delobjeto y del sistema de lentes. La luzartificial la constituye un bombillo en elmicroscopio y conectado a un circuitoelctrico de bajo voltaje.e. Diafragma: Est ubicado entre lafuente de luz y el condensador,

inmediatamente debajo de la platina, sufuncin es regular la intensidad de luzque atraviesa el objeto. El diafragmatiene una palanquita que al moverlahacia adelante o hacia atrs agranda oachica el orificio central, dejando pasarmayor o menor cantidad de luzrespectivamente.f. Condensador: Es un elemento cnicoque posee un sistema de dos lentesconvergentes que recogen o concretanlos rayos luminosos para enviarlos al

objetivo por el agujero de la platina.Existe un tornillo manual que permitegraduar la altura del condensador. Estagraduacin es importante cuando setrabaja con objetivos de gran aumento(40x y 100x), debido a que en la medidaque se trabaja con estos objetivos elcondensador debe subirse. Lo contrario

sucede cuando se trabaja con objetivosde menor aumento (4x y 10x).g. Fil tros: Entre la fuente de luz y elcondensador de algunos microscopiosexiste un portafiltros en el cual se puedencolocar filtros a voluntad del observador.

Los filtros son elementos de cuarzo o devidrio, pueden ser de color azul, amarilloo verde. Ellos interceptan el haz de rayosluminosos antes de entrar alcondensador, esto se hace con el objetode seleccionar un tipo de luzdeterminada para una experiencia dada.Para obs ervar imgenes de filtr os h az

c li ck aq u

1.4 LA LUZ:La luz es una forma de energatransportada continuamente por elespacio a velocidades muy elevadas(330.000 Km/s en el vaco). La luz estformada por pequeos corpsculos quesalen de un foco luminoso en forma deondas. El brillo de la luz es proporcionala la altura o amplitud de la onda y sucolor depende de la longitud de sta. Laluz blanca est constituida por una gamade colores del espectro visible, estoscolores son: rojo, anaranjado, amarillo,verde, azul y violeta.Cada color corresponde a una longitudde onda determinada, por consiguiente,la luz blanca se compone de muchosrayos de luz, todos vibrando condiferentes longitudes de onda. (Figuras1.3 y 1.4)

Fig. No. 1.3 Naturaleza ondulatoria de laluz


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La luz de una sola longitud de onda sellama monocromtica. Si bien se utilizancasi solo microscopios de luz blanca, lamayora de las lentes modernas estndiseadas para el uso de luzmonocromtica verde.

Fig. No. 1.4 Espectro de luz visible.

1.5 LENTES:Las lentes son el componente msimportante del microscopio; se fabricande vidrio u otros materialestransparentes.Pueden ser convexas o cncavas enambas superficies, planas en una cara otener cualquier combinacin de stas dosformas en su superficie.

Las lentes son de dos tipos: positivas ynegativas. Lentes Positivas: Hacen

converger los rayos de luz, esdecir, los concentra para formaruna imagen real.

Lentes Negativas: Hacendivergir los rayos de luz, sinformar ninguna imagen real.

1.6 PREPARACIONESMICROSCPICAS:

Debemos tener en cuenta que a travsdel microscopio solamente se puedenobservar objetos que dejan pasar rayosde luz, por esta razn el preparado debeser lo ms delgado y transparenteposible, pues un preparado grueso solonos permite observar una mancha negra.Los detalles solo se observan si lapreparacin es lo suficientemente

delgada para que sea transparente conla luz que recibe. Para realizarpreparaciones microscpicas la porta y lacubre-objetos deben limpiarse antes deusarse. Un buen mtodo es guardarlosen alcohol y antes de utilizarlos secarlos

con un pao limpio y libre de grasa. Loscubre-objetos deben limpiarse conmucho cuidado porque son frgiles.Las preparaciones microscpicas puedenser acuosas o en seco. Laspreparaciones acuosas son las mssimples y fciles usadas para examinarcualquier objeto fluido, como agua deestanque o sangre. Se deposita unagotita del lquido que se desea observaren el centro del porta-objeto, se coloca elcubre-objeto sobre el porta, forme con

las dos lminas un ngulo de 45 grados yluego deje caer suavemente la laminilla(cubre-objeto) sobre el preparado,evitando la formacin de burbujas.El lquido no debe rebosar los bordes delcubre-objeto, en caso de que sucedaseque cuidadosamente el lquidosobrante usando papel absorbente opapel toalla. La preparacin queda aslista para la observacin. Estaspreparaciones son de corta duracinporque se secan rpidamente; para

hacerlas ms duraderas debe cerrarsehermticamente los bordes del cubreobjeto; la duracin de sta preparacinno es indefinida. Los bordes se puedencerrar con vaselina o esmalte. Un cierrems hermtico se consigue cerrando conblsamo de Canad (Euparal).Las preparaciones en seco como londica su nombre, se hacen paraobservar objetos secos, tales como alasde insectos. Aqu se utiliza gomaarbiga, la cual se extiende sobre el

porta, luego se deposita el objeto sobrela superficie y se deja endurecer lagoma. Una vez endurecida la goma sepone un poco de blsamo de Canadsobre el objeto y se coloca el cubre-objeto.

Fig. No. 1.5 Preparaciones Acuosas


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1.7 COLORANTES:Los colorantes son sales compuestas porun cido y una base. Se clasifican encidos, bsicos y neutros, segn la partede los mismos que imparta el color. Enlos colorantes cidos el grupo cromforo,

el que imparte el color, es el componentecido, el componente bsico es incoloro.Lo contrario sucede con los colorantesbsicos. Los colorantes neutros tienencoloreado el componente cido y elbsico.La mayora de los colorantes sonsintticos, aunque se emplean todavaalgunos naturales. La hematoxilina y elcarmn son los colorantes naturales msimportantes para la tincin de tejidos. Elcarmn es producido por la conchinilla

(Coccus cacti). La hematoxilina se extraede la madera de un rbol de Mxico, elpalo Campeche. Otro colorante es laorcena que se extrae de lquenes.Existen tres tcnicas de tincin de usogeneral: la coloracin seca o de tejidosmuertos, la coloracin vital o de tejidosvivos y la histoqumica, en la cual seutilizan las reacciones de los colorespara hacer visible los elementosestructurales de las clulas y de lostejidos. Una reaccin histoqumica muy

conocida es la de Feulgen, en la que seemplea el reactivo incoloro de Schiff parateir el DNA en tonos rojizos purpreos.

Fig. No. 1.6 Colorantes.

1.8 MANEJO DEL MICROSCOPIO:Antes de iniciar una observacinmicroscpica se debe iluminarcompletamente el campo visual, para locual se procede de la siguiente manera:1. Gire el revlver hasta que el objetivo

de menor aumento quede en posicin detrabajo, o sea que quede alineado conlos oculares. Usted sentir un golpecito(como un clic) cuando el objetivo llegue asu posicin de uso.2. Lleve el condensador a su posicinms alta.3. Accione el tornillo macromtrico hastaque el objetivo de menor aumentodescienda lo mximo posible o hasta quela mesa ascienda lo mximo posible,segn sea el modelo del microscopio.

Esta operacin se hace llegar hasta unpunto de parada (tope).4. Mire a travs del ocular o gire elespejo hacia la fuente de luz hastaobtener un mximo de iluminacin. Si elcampo visual no queda uniformementeiluminado, baje lentamente elcondensador hasta obtener unailuminacin uniforme. Si su microscopioes elctrico siga los pasos 1, 2 y 3.Enchufe el cable del transformador a lafuente de energa.

Conecte el cable del microscopio altransformador y luego accione el botnde este para que encienda la bombilla.Mire por el ocular.5. Una vez lograda una correctailuminacin coloque el preparado sobrela platina. Mirando de lado, asegreseque el objeto a observar est centrado

justo debajo del objetivo de menoraumento.6. Mirando a travs del ocular muevasuavemente el tornillo Macromtrico, si el

objeto esta bien centrado aparecer suimagen en el campo visual. Dele nitidezal enfoque accionando el tornillomicromtrico. Mueva el carro endiferentes direcciones para seleccionar elmejor campo posible. Puede controlar laintensidad de la luz, mediante eldiafragma o el regulador de la intensidadde la luz de la bombilla.


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Para hacer un mayor enfoque con mayoraumento debe seguir las indicacionesanteriores. Una vez obtenido el enfoquecorrecto con menor aumento, mueva elrevolver y coloque en posicin de trabajoel objetivo de mayor aumento. Si su

microscopio esta bien calibrado debeaparecer enfocada la imagen del objeto.Este enfoque se refina accionando eltornillo micromtrico.Cuando el microscopio es monoculardebe acostumbrarse a mantener tambinabierto el ojo que no utilice en laobservacin microscpica, esto le evitacansancio.

1.9 RECOMENDACIONES QUE DEBENTENERSE EN CUENTA PARA EL

BUEN USO Y CUIDADO DELMICROSCOPIO:1. El microscopio es un instrumentocostoso y de precisin, con muchaspartes delicadas, por lo tanto, debemosdarle le mejor cuidado posible.2. Si su microscopio presenta algndefecto, consulte con su Profesor oTecnico de Laboratorio. No trate dearreglarlo Usted.3. Las lentes del microscopio cuestancasi tanto como todas las dems partes

juntas. Mantenga las lentes limpias. Notoque las lentes con los dedos, debido aque el sudor las daa. Nunca limpie laslentes con otra cosa que no sea papelespecial para lentes.4. No permita que lquidos,especialmente cidos o alcoholes, sepongan en contacto con su microscopio.5. Use siempre cobre-objetos cuandoobserve en agua u otros lquidos.6. Localice siempre el objeto con elobjetivo de menor aumento.

7. Los sedimentos de grasa, el aceite deinmersin y los residuos de estosproductos deben eliminarseinmediatamente con un poco dedisolvente como ter o xilol. Nunca debeemplearse alcohol, debido a que disuelveel cemento utilizado en la fabricacin delos lentes. La limpieza final es ms

efectiva usando un poco de aguadestilada.8. Cuando no se est usando elmicroscopio, debe mantenerse siemprecubierto con una funda.9. Al finalizar sus actividades de

laboratorio, tenga en cuenta lo siguiente:9.1 Antes de apagar la fuente de luz,llevar el dispositivo que regula laintensidad luminosa a cero.9.2 Dejar el microscopio con el objetivode menor aumento en la posicin deenfoque y la platina en su mximaposicin superior.9.3 Desenchufar el microscopio ycolocarle la funda protectora.

2.0 EJERCICIO DE APLICACIN:Con las siguientes prcticas se ejercitarinicialmente al estudiante en el uso ymanejo del microscopio.Con las siguientes prcticas se ejercitarinicialmente al estudiante en el uso ymanejo del microscopio.

1. Fibra de lana o algodn:Coloca varias fibras de lana o algodn dediferentes colores sobre un portaobjetos,coloque el cubre-objetos, enfoque con

menor y mayor aumento. Esquematicesus observaciones.

2. Granos de polen:Coloque los granos de polen del estigmade una flor en un porta-objetos, luegocon ayuda de un gotero ponga una gotade agua, ubique el cubre-objetos yobserve con menor y mayor aumento.Haga un esquema de lo observado.

3. Agua de charca:

Con ayuda de una pipeta Pasteur, tomaruna o dos gotas del agua de charca ycolocarla en la porta-objeto, luego ubiqueel cubre-objeto y observe con menor ymayor aumento. Esquematice loobservado.


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4. InsectoTome la parte del insecto que deseeobservar (pata, cabeza, torso, etc.) conayuda de la pinza de diseccin,colquela en la porta-objeto y se leadiciona una o dos gotas de Blsamo de

Canad, ubique encima el cubre-objeto yobserve con menor y mayor aumento.Realice esquemas de lo observado.

3.0 CUESTIONARIO:1. Coloque los nombres a las diferentespartes del microscopio numeradas en lafigura No. 1.6 e investigue las funcionesde cada una de ellas.2. Qu otros tipos de microscopios seutilizan en la investigacin biolgica?

3. Qu son objetivos secos?4. Qu son objetivos de inmersin?5. Para que se utiliza el aceite de cedrocuando usamos el objetivo de inmersin?

Cuando se utiliza un microscopio deespejo:6. Qu importancia tiene utilizar la partecncava del espejo?7. Qu importancia tiene utilizar la parteplana del espejo?8. Investigue sobre en funcionamiento de

los diferentes microscopios electrnicos yestablezca diferencias entre ellos.9. Describa las principales tcnicas depreparacin de muestras empleadas enmicroscopa ptica.10. Qu son los colorescomplementarios y que utilidad tendranen microscopa ptica?

3.1 ENLACES http://bioservice77.obolog.com/

partes-microscopio-108433Como usar el microscopio, partes,funcionalidad y generalidades.

http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/Pgina con atlas de imgenesobtenidas en diferentes tipos demicroscopios.
http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://www.itg.uiuc.edu/technology/atlas/http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433http://bioservice77.obolog.com/partes-microscopio-108433


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Fig. No. 1.6 Imagen del Microscopio ptico.


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GALERIA DE IMGENES

1. LAS PARTES DEL MICROSCOPIO1.1OCULARES

1.2OBJETIVOS Y REVOLVER

1.3PLATINA Y CARRO

1.4 DIAFRAGMA

1.5CONDENSADOR

1.6. TORNILLOS

1.7. BRAZO

1.6

1.7

1.8

1.8LA IMAGEN


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2. FILTROS2.1 FILTROS POLARIZADORES

2.2 FILTROS MONOCROMATICOS

2.3 UBICACIN DE LOS FILTROS

2.4

COLORES COMPLEMENTARIOS

3. TINCION DE MUESTRAS

4. ESTRUCTURA INTERNA DE UN

INSECTO

A) Cabeza; B) Trax y C) Abdomen.

5. MICROORGANISMOS (AGUA DE

CHARCA)

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