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MEDIOS DE CULTIVO Y
TÉCNICAS DE INOCULACIÓN
Dra. Natalia Izurieta CergneuxPRÁCTICA No. 3 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGIA Y MICOLOGIA
GENERALIDADES
El crecimiento de
microorganismos en
sustancias alimenticias
artificiales es una de las
técnicas más importantes
usadas en el laboratorio.
GENERALIDADES
• Permite reconocer las
características
culturales de las
bacterias.
• A partir de estas se
puede obtener cultivos
puros
GENERALIDADES
MEDIO DE CULTIVO
• Conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y
otros componentes.
• Se crean condiciones
adecuadas de desarrollo y
reproducción de manera
artificial.
• No existe un medio universal
común.
• Para su óptimo crecimiento es necesario dar condiciones ambientales
adecuadas para su desarrollo en medios artificiales.
• Estas son: temperatura, pH, humedad, presión de oxígeno, grado de acidez o
alcalinidad del medio…
• Las características más importantes de los microorganismos a ser
consideradas al momento de preparar un medio de cultivo son:
Tipo trófico: autótrofos, heterótrofos, quimiotrofos, fotótrofos.
Tipo respiratorio: aerobios, anaerobios, anaerobios facultativos,
microaerófilos.
Temperatura: psicrófilos, mesófilos y termófilos.
pH: acidófilos, neutrófilos, basófilos.
COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS
• FUENTE DE CARBONO:
Pueden ser CO2 o compuestos carbonados orgánicos.
Se utilizan en la construcción de innumerables moléculas necesarias para la
célula.
Los hidratos de carbono se consideran fuente de carbono y energía.
COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS
• FUENTE DE NITRÓGENO
Es metabolizado para proveer proteínas, ácidos nucleicos y polímeros de
pared.
Algunos microorganismos pueden incorporar nitrógeno en forma de
aminoácidos, bases purínicas o pirimidínicas.
En ciertos medios de cultivo, el aporte de nitrógeno es realizado por las
peptonas
COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS
• FUENTE DE FÓSFORO
Se agrega fosfatos de sodio o
potasio.
El fósforo se incorpora a ácidos
nucleicos, fosfolípidos, polímeros
de membrana, ATP, y sustancias
de reserva.
• FUENTE DE AZUFRE
Se adiciona como SO4, cisteína
o metionina.
En la célula se incorpora a
aminoácidos y diferentes
coenzimas.
COMPOSICIÓN QUÍMICA - MACROELEMENTOS
• FUENTE DE K+ , Mg2+ , Ca2+
Son cationes que estabilizan
macromoléculas aniónicas.
K+ actúa como coenzima y
estabilizador de RNA.
Mg2+ se integra a la clorofila en
organismos fotosintéticos.
Ca2+ abunda en esporas como
dipicolinato de calcio.
• FUENTE DE Na
Contribuye a equilibrar la
presión osmótica del medio
extracelular.
Se suele suministrar como
NaCl.
COMPOSICIÓN QUÍMICA – FACTORES DE CRECIMIENTO
• Son compuestos orgánicos requeridos en muy bajas concentraciones.
• No pueden ser sintetizados por la propia célula.
• Deben ser agregados al medio de cultivo
• Pueden ser aportados en forma de:
Extracto de carne
Extracto de levadura
Extracto de malta
COMPOSICIÓN QUÍMICA – AGENTES SOLIDIFICANTES
• Su uso es opcional y el más usado es el agar.
• Se le adiciona en diferentes
concentraciones.
1.5 – 2 % en medios sólidos
0.2 – 0.3% en medios semisólidos
5% en medios de consistencia firme
COMPOSICIÓN QUÍMICA – AGUA
• Representa del 80-90% del peso total de una
célula.
• Es fundamental para la realización de todos los
procesos metabólicos, funciones enzimáticas ….
• Los medios de cultivo se preparan en el
laboratorio con agua destilada.
TEMPERATURA
pH
HUMEDAD
PRESIÓN OSMÓTICA
LUZ
CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Composición
Finalidad
POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS LÍQUIDOS
• Llamado también caldo.
• USO:
diluciones
homogenizar mezclas
enriquecer cultivos
rehidratar cepas liofilizadas
POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SÓLIDOS
• Llamado también agar.
• Se le añade 2% de agar.
• En cajas petri o en tubos
• USO:
Para separar
microorganismos
Para favorecer el desarrollo
de colonias aisladas
POR SU COMPOSICIÓN
MEDIOS SEMISÓLIDOS
• Consistencia leve o
gelatinosa.
• Medio líquido al que se
adiciona agar (0.4 a 0.8%).
• USO:
Para determinar la movilidad
de los microorganismos
microaerófilos.
POR SU FINALIDAD
MEDIO COMÚN
Contiene los nutrientes mínimos necesarios para el desarrollo de bacterias
poco exigentes: caldo común, caldo carne, etc.
POR SU FINALIDAD
MEDIO DE ENRIQUECIMIENTO
Son medios líquidos que favorecen el crecimiento
de un tipo de microorganismo en
particular.
Permite aumentar el número de
microorganismos de ese tipo.
POR SU FINALIDAD
MEDIO ENRIQUECIDO
Se le agrega una sustancia que
aumenta el poder nutritivo.
Aporta algún factor de crecimiento
necesario para el microorganismo que el medio no lo posea.
POR SU FINALIDAD
MEDIO SELECTIVO
Favorece el crecimiento de un grupo de
microorganismos e inhiben el crecimiento de otros.
Útiles en muestras mixtas.
Al medio se le adiciona sustancias inhibitorias
como antibióticos o ciertos colorantes.
POR SU FINALIDAD
MEDIO DIFERENCIAL
Permite diferenciar bioquímicamente a las
bacterias por su actividad metabólica.
Revela características fisiológicas de los microorganismos.
POR SU FINALIDAD
MEDIO SELECTIVO DIFERENCIAL
Contiene sustancias inhibidoras y sustancias
diferenciales.
El medio Sal Manitol para Staphylococcus
POR SU FINALIDAD
MEDIO DE TRANSPORTE
Medio líquido o semisólido.
Permite el mantenimiento de muestras clínicas
Contiene agua y amortiguadores del
pH.
PREPARACIÓN – MEDIO DE CULTIVO
Pesar Añadir agua Someter a baño maría
Colocar en cajas petri o
tubos
