Laboratorio_9_Ecometra[1]

Manual Práctico de Microbiología de Alimentos ____________________________________________________________________________

Enrique Alfonso Cabeza Herrera, Ph.D. ____________________________________________________________________________

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Control de Calidad de Medios de Cultivo: Test Ecométrico.

9.1 COMPETENCIAS Al finalizar la práctica el estudiante estará en capacidad de:

Reconocer y Aplicar las diferentes metodologías para controlar la calidad de los medios de cultivo empleados en el diagnóstico microbiológico (entendiendo como control el correcto estado de funcionamiento de los medios de cultivo, es decir, su capacidad de recuperabilidad y selectividad microbiana).

Tener conciencia sobre la importancia que representa para el aseguramiento de la calidad e inocuidad de los alimentos el contar con un programa de calidad de medios de cultivo microbiológicos en un laboratorio.

Diseñar programas de control de calidad de medios de cultivo sólidos y líquidos como una parte integral de implementación de un programa de Buenas Prácticas de Laboratorio.

9.2 INTRODUCCION Los servicios de análisis microbiológico representan uno de los elementos fundamentales de todo programa de inocuidad y de control de calidad de los alimentos. El laboratorio de microbiología más que un simple servicio de apoyo, se constituye en una herramienta veraz y eficaz para confirmar si un alimento puede ser o no fuente o vehículo de ETAs, ayuda a identificar el origen de la contaminación (materia prima, superficies, ambientes, manipuladores, etc.) y juega un papel importante en el control, monitorización y validación de un programa de aseguramiento de la calidad como lo es el sistema de Análisis de peligros y puntos de control críticos (HACCP).

9.3 FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA

9.3.1 Generalidades Medios de cultivo y reactivos: la importancia que tiene la calidad en la fabricación de los medios de cultivo deshidratados así como su preparación, conservación y uso, es el punto de partida para lograr que estudios los microbiológicos y sus resultados sean confiables.



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Los laboratorios utilizan diversos medios de cultivo sin efectuar la comprobación de su eficiencia, en la mayoría de los estudios sobre calidad en los laboratorios uno de los puntos críticos son los medios de cultivo reconstituidos. Inicialmente los fabricantes de medios de cultivo ofrecen una buena calidad de los mismos en cuanto a su capacidad de recuperación y/o selectividad, estado físico (granulado, en polvo, deshidratado, etc.), pero su uso inadecuado, así como su almacenamiento, preparación y elementos que intervienen durante esta operación pueden conducir a un deterioro de los mismos, y como consecuencia se evaluaran inadecuadamente la contaminación real de las muestras analizadas o alteración de los datos en una investigación microbiológica. La evaluación con cepas control es un punto importante para determinar la calidad del medio.

9.3.2 Criterios mínimos para asegurar un control de calidad de medios de cultivo

∗ A cada lote se le debe realizar pruebas de funcionalidad del medio preparado para confirmar que es satisfactorio y si cumple con las especificaciones para el propósito señalado.

∗ El laboratorio deberá tener un criterio serio para la compra de medios de cultivo, así como para su almacenamiento y conservación.

∗ Realizar un procedimiento operativo estandarizado para la preparación, manipulación y conservación de cada medio de cultivo.

∗ Desarrollar o implementar métodos y procedimientos para verificar la esterilidad, pH, capacidad de crecimiento, pruebas de funcionalidad (productividad, selectividad y estabilidad), etc.

∗ Seleccionar los microorganismos de prueba (cepas control) de acuerdo con el tipo de medio a evaluar.

∗ Implementar un programa definido para la esterilización, eliminación y disposición final de los medios de cultivos usados.

∗ Utilizar agua destilada o desmineralizada para la preparación de medios de cultivo que satisfagan las exigencias requeridas.

∗ Preparar y aplicar un programa de supervisión de la calidad del agua destilada, comprobar que no contenga trazas de compuestos inhibidores o bactericidas, control de pH, minerales, etc.

∗ Utilizar para la preparación, medios de cultivo, equipo, materiales, reactivos, que cumplan con los requisitos de calidad adecuados.



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∗ Conservar y registrar los resultados de las pruebas control.

∗ Cuando no se conozca la fecha de vencimiento de un medio de cultivo lo ideal es descartarlo o destinarlo como de segunda, pero en el caso donde deba ser usado para cualquier ensayo, se debe valorar primero su funcionalidad.

∗ Los medios de cultivo deshidratados deben contar con una hoja de registro que contenga mínimo la siguiente información: nombre, marca, número de lote, fecha de adquisición, fecha de apertura, fecha de vencimiento, número de codificación, datos de preparación, indicador biológico usado para su control, resultados de los controles de calidad, nombre del preparador y observaciones.

∗ Los medios de cultivo son higroscópicos (esto es que al ser deshidratados ganan humedad del medio ambiente con facilidad), por lo tanto deben mantenerse bien cerrados para evitar cambios a nivel de pH, alteraciones del color, de las sustancias que los componen, de la solubilidad, etc.

∗ Deben almacenarse a temperatura ambiente (entre los 15ºC a 25ºC), en ambiente seco y libre de luz, así como boca abajo para evitar la entrada de aire sobre los mismos.

∗ Los medios de cultivo preparados deben almacenarse a temperaturas entre los 12ºC a 15ºC por 1 o 2 semanas, para prolongar su periodo de uso los medios pueden ser almacenados en refrigeración cuidando siempre que la temperatura no sea inferior de 0ºC ya que se desestabiliza el gel. En cualquier caso, deben protegerse de la luz.

∗ Los medios de cultivo y los reactivos se deben almacenar en frascos color ámbar u oscuros cuando así lo indiquen los fabricantes, y después de preparados se deben proteger de la luz ya sea envolviendo el frasco en papel aluminio u otro papel o medio oscuro, o depositándolos en un cuarto oscuro.

∗ Si un medio o reactivo cambian de color o se hidratan, se deben dar de baja.

∗ No mezclar lotes de producto.

∗ Para ajustar el pH de un medio no se deben emplear ácidos o bases débiles sino fuertes como el ácido clorhídrico (HCl) y el Hidróxido de Sodio (NaOH) 0,1 N.

∗ Todos los lotes deben cumplir con la prueba de esterilidad para verificar que pueden ser usados sin problemas de contaminación.

9.3.3 Pasos para la preparación de un medio de cultivo

Todas las etapas durante la preparación de los medios de cultivo son consideradas como puntos críticos que deben ser controladas para una correcta elaboración de los mismos. Los



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pasos para la preparación de los medios son comunes, estos son: 1. Pesar. Debe tenerse en cuenta la cantidad a pesar dependiendo del volumen final de medio a preparar. Siempre es conveniente pesar un poco más de la cantidad requerida si el pesaje se hace a parte del recipiente que contendrá el medio final. Para aquellos medios que no deben autoclavarse es recomendable emplear recipientes estériles para la preparación de los mismos. 2. Disolver. Adicionar 2/3 partes del volumen de agua destilada (estéril en el caso de aquellos medios que no deben autoclavarse) a temperatura templada sobre las paredes del recipiente para arrastrar el medio deshidratado que haya quedado adherido a las mismas. Agitar y adicionar el contenido restante de agua. 3. Calentamiento-Ebullición. Este paso se lleva a cabo siempre en constante agitación y su fin es facilitar la disolución completa del medio deshidratado. En aquellos medios que no se autoclavan el calentamiento se debe llevar a ebullición por el tiempo indicado en las instrucciones del medio con el fin de facilitar la formación del gel y la no destrucción de sus componentes más termosensibles. 4. Esterilizar. Esta etapa solo se realiza para aquellos medios que en su formulación / composición no posean componentes termosensibles o cuando el fabricante así lo recomiende. En general, el régimen de temperatura-tiempo para la esterilización de medios de cultivo es 121ºC por 15 minutos pero pueden emplearse temperaturas más bajas por tiempos más largos. Es recomendable emplear frascos taparosca para este fin, teniendo en cuenta que la tapa debe quedar algo floja para, facilitar la salida del aire frío con el subsecuente calentamiento más rápido y por otro lado, evitar la acumulación de gases en el espacio de cabeza del medio y no elevar su presión más de lo debido. 5. Servir. Finalmente, una vez terminado el tiempo de esterilización debe dejarse atemperar el medio hasta alcanzar temperaturas de 55ºC antes de dispersarlo en las placas. No se recomienda verter más caliente ya que desprende vapor de agua y así las placas quedarán muy húmedas y consensadas, pero tampoco más frío por la compactación del gel. Nota: Es importante verificar siempre el estado de limpieza de la cristalería empleada, la presencia de residuos de detergentes u otras sustancias químicas o biológicas en los mismos.



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9.3.4 Control de calidad de medios de cultivo En la mayoría de los laboratorios no se presta mucha atención al funcionamiento de los medios de cultivo y por ende se pueden emitir resultados que no sean del todo correctos. Para su control es necesario realizar una prueba de productividad donde se determine el rendimiento, la recuperación, el crecimiento de un microorganismo que habitualmente se desarrolla en un medio de cultivo y la selectividad o supresión del crecimiento del microorganismo, que se espera sea inhibido en el medio. Normalmente se determina en los controles positivos la productividad y no la selectividad. En ocasiones, por costos, se observan laboratorios que trabajan con medios de cultivo con fecha de vencimiento ya expirada y/o alteradas. Para el control de calidad de medios de cultivo se debe usar un agar de referencia que puede ser Agar Infusión Cerebro Corazón (BHI), Agar Tripticasa de Soya (TSA o CASOY) o Agar Estándar para conteo en placa (SPC). El espesor de la capa de agar debe ser de unos 4 mm y deben estar bien secas (preincubados a 35ºC por 2 horas o 55ºC por 10 minutos máximo). Todos los medios de cultivo selectivos utilizados durante el trabajo ordinario deben ir acompañados de un control positivo -microorganismo(s) que se desea(n) recuperar o microorganismo(s) deseado(s)- y otro negativo -microorganismo(s) que se desea(n) inhibir total o parcialmente- llamado interferente. Los medios no selectivos deben ir acompañados de un control positivo. Todos los medios de cultivo de cada lote adquirido por el laboratorio deben ser probados para demostrar su capacidad de reproductibilidad, selectividad y estabilidad. Cepas control. Las cepas control se usan para determinar la eficiencia de los medios de cultivo sintéticos y semisintéticos deshidratados, estas cepas son un cultivo de un microorganismo conocido y certificado por alguna entidad o laboratorio conocido, por ejemplo la American Type Culture Collection (ATCC, USA) que cuenta con la colección más amplia de bacterias, hongos y levaduras patógenas y no patógenas o la National Collection

of Type Cultures (NCTC, Gran Bretaña), la cual es una colección de bacterias en general. Otras colecciones de cepas son:

∗ DSM (Deutsche Sammlung von Mikroorganisman., hongos y bacterias no patógenas).

∗ NCIB (National Collection of Industrial Bacteria: Bacterias no patógenas).

∗ NRRL (Northern Regional Research Laboratory ARS Culture Collection:



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Microorganismos de importancia agrícola).

9.3.5 Evaluación de medios de cultivo sólidos empleando el método ecométrico (basado en el método descrito por Mossel y col., 1983; 1995).

Mossel y colaboradores describieron en 1983 un método que permite evaluar la sensibilidad de los medios de cultivo selectivos al desarrollo de un microorganismo deseado y la resistencia a la colonización por microorganismos indeseados y la selectividad de los medios no selectivos, que se denominó MÉTODO ECOMÉTRICO. Este método utiliza un procedimiento normalizado de siembra en estrías para obtener una dilución progresiva de una suspensión de prueba de un microorganismo en una placa del medio que se está colocando a prueba. Usando este procedimiento se obtiene un resultado semi-cuantitativo. En una placa de petri antes de verter el medio a evaluar, es dividida en cuatro cuadrantes sobre la base de la misma y en cada cuadrante se trazan cinco (5) líneas paralelas y una línea en el centro de la misma tal y como se muestra en la Fig.1. Posteriormente se adiciona el medio a evaluar en una capa cuyo grosor deberá ser de unos 4 mm. Posteriormente se procede a evaluar la recuperabilidad, selectividad y reproducibilidad del medio, sembrando en cada línea de cada cuadrante el microorganismo prueba a partir de un cultivo del mismo mantenido en crecimiento toda la noche; la siembra se hace de forma sucesiva y sin cargar de nuevo el asa en las cinco líneas en la sección 1, a continuación, en la sección 2, y así sucesivamente, terminando con una línea única en el centro (Fig. 2). El índice de crecimiento absoluto según Mossel (ICA) viene dada por la última línea en la que se presenta el crecimiento. Estos ICAs pueden ser usados para comparar diferentes lotes del mismo medio. También se pueden utilizar para determinar la acción inhibitoria del medio selectivo contra el organismo determinando la proporción del ICA en el medio selectivo y el ICA en un medio no selectiva óptimo de crecimiento (a esto lo denominó Mossel como el índice de crecimiento relativo, o ICR). Es importante en el caso de los medios selectivos demostrar un ICA alto para un organismo deseado frente a un ICA bajo de los organismos no deseados. Procedimiento. A continuación vamos a explicar la forma como se debe realizar el test Ecométrico:

1. Se dividen las placas en cuatro cuadrantes marcados de forma conveniente sobre la base de la caja de petri, de acuerdo con la siguiente figura (Fig 1.)



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Figura 1. Representación de las divisiones de la placa de petri para la ejecución del test Ecométrico.

2. Depositar el medio de cultivo a evaluar en una capa cuyo grosor deberá ser de unos 4 mm.

3. A partir de cada uno de los cultivos en fase exponencial (mantenidos en crecimiento toda la noche o 18 horas de incubación), tome con una asa calibrada de 1 microlitro y trace sobre la superficie del medio 5 estrías paralelas a las líneas dibujadas en cada cuadrante y una estría central, de forma progresiva y sin recargar, retorcer, repisar o esterilizar el asa (Fig. 2). Hacer lo mismo con el medio de referencia.

Figura 2. Representación de la secuencia de siembra del test Ecométrico.

Primer paso

1

Segundo paso

Quinto paso

4 2

Cuarto paso Tercer paso

3

4. Incubar las placas en posición invertida por el tiempo necesario y a la temperatura apropiada según el método.

1

4

3

2



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5. Transcurrido el tiempo, efectuar la lectura de las cajas, teniendo en cuenta que cada estría tiene un valor de 0.2 y la estría central de 1.0.

6. Multiplicar por el número de estrías en las cuales se observa crecimiento, y determinar el Índice de crecimiento absoluto (ICA). Si hay crecimiento en las cinco estrías de los cuatro cuadrantes y la estría central (1), el ICA es igual a 5. El ICA es igual al número del cuadrante cuando todas las estrías de este y de los cuadrantes anteriores muestren un crecimiento completo, mientras no se observe crecimiento en ninguna estría del cuadrante siguiente.

7. Efectuar la misma operación con el medio de referencia. Una vez obtenida las lecturas en cada medio (ICA), sacar el Índice de Crecimiento Relativo (ICR), comparando el ICA del medio en evaluación y el medio de referencia.

ferenciaICAmediorealuadoICAmedioevICR

OBSERVACIONES:

El ICR deberá estar cercano a 1.

Para evaluar la productividad de un medio selectivo, se mide teniendo en cuenta que las cepas esperadas (microorganismos deseados) deben dar un ICA no menor a 2.5 – 3.

Para evaluar la selectividad de un medio, se mide teniendo en cuenta que el microorganismo interferente (no esperado) debe dar un ICA no mayor de 2.

9.3.6 Evaluación de Medios líquidos selectivos y no selectivos

Para evaluar el índice de crecimiento en medios de cultivo líquidos selectivos y no selectivos, se puede emplear el METODO ECOMÉTRICO empleado para evaluación de medios sólidos o un método general en agares no selectivos. El procedimiento general es el siguiente:

1. Se distribuyen 10 ml de caldo de referencia (Agua peptona 1%) y del que se va a ensayar en tubos taparosca.

2. Se esteriliza en autoclave según instrucciones del fabricante.

3. A partir de cultivos en fase exponencial (18 horas de incubación), se siembran los caldos por duplicado con 0.1 ml de cultivo de cada microorganismo que contenga 105 UFC/ml (Fase exponencial 1:100).



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4. Se retira 0.1 ml del caldo de análisis y se coloca sobre la superficie de una caja bien seca que contenga agar no selectivo. Con ayuda de un asa de Hockey se extiende sobre la superficie de la caja.

5. Incubar caldos y cajas de acuerdo al microorganismo en estudio.

6. A intervalos de tiempo diferentes, se retira una parte de cada caldo con asa calibrada, pipeta o micropipeta, si es necesario se diluye y distribuye sobre cajas de petri que contenga el mismo medio utilizado anteriormente. Es posible evaluar resultados mediante observación directa o registrando el recuento en función del tiempo en una gráfica. Se debe analizar cada lote de caldo selectivo adquirido por el laboratorio para verificar el número de células del microorganismo deseado que permite detectar. Para ello se verifica el desempeño del medio con una mezcla de cultivos deseados e indeseados.

El método de la evaluación del desempeño del caldo selectivo con una mezcla de cultivos deseados e indeseados se desarrollo inicialmente para valorar medios para Salmonella spp., y consiste en lo siguiente: 1. Preparar cajas petri con Agar Tripticasa de Soya u otro Agar no selectivo. 2. Con cultivos de la cepa deseada en fase estacionaria, preparar diluciones decimales

consecutivas (10–1 a 10–10) en solución salina peptonada, preparada según la formulación que se indica enseguida (NaCI 8.5 g, peptona 1.0 g y agua destilada 1L pH (7 – 7.2), estimar el número de UFC/ml con siembra en superficie sobre un Agar no selectivo, seleccionar una dilución que permita un recuento. Al mismo tiempo preparar un pool de cepas patrón no deseadas tomando 1 ml de cada uno de los microorganismos no deseados y diluir 10-1 en solución salina peptonada

3. Para determinar la capacidad que tiene el caldo de enriquecimiento selectivo de recuperar pequeñas concentraciones del microorganismo deseado, siembre 1 ml de cada dilución de dicho microorganismo en 10 ml de ese caldo.

4. Incube en las condiciones normales del método y siembre por estrías sobre la superficie del Agar no selectivo y selectivo que normalmente se usa en el método.

5. Observar las placas y calcular el número de microorganismos necesarios para activar el desarrollo en el caldo de enriquecimiento selectivo



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6. Para determinar la capacidad que tiene el caldo de enriquecimiento selectivo de recuperar pequeños números del microorganismo deseado a partir de una mezcla de cepas, transfiera 1 ml de cada una de las diluciones del microorganismo deseado (en solución salina peptonada) en tubos separados que contengan 10 ml de caldo de enriquecimiento y 0.02 ml de la dilución 10-1 del pool.

7. Incubar a la temperatura apropiada por 18 a 24 horas y sembrar en estrías sobre Agar no selectivo y selectivo normal del método, aislar e identificar colonias deseadas por confirmación bioquímica.

8. Registrar los resultados de la máxima dilución que permita aislar el microorganismo deseado aparte o en conjunto con los indeseados.

La productividad de un caldo de cultivo selectivo debe permitir el desarrollo de un cultivo puro de la cepa deseada con un inoculo de 20 células o menos. Al colocar el microorganismo en placas de Agar selectivo y no selectivo se puede manifestar cualquier interacción de los medios líquidos con los sólidos. La selectividad de un caldo de cultivo permite el desarrollo de las cepas deseadas en los caldos de enriquecimiento que contienen microorganismos competidores (no deseables) se debe detectar utilizando la máxima dilución que permita el desarrollo del cultivo puro.

9.4 PROCEDIMIENTO 9.4.1 Material Material de vidrio y otros

Tubos para dilución. Cajas de petri. Pipetas de 10 ml, 1 ml y 0,1 ml. Asas de platino calibradas. Tubos tapa rosca. Incubadoras a 25ºC, 35ºC y 45ºC.

Material biológico

Cepas bacterianas de 18 horas de incubación y repicadas por tres días consecutivos: - Staphylococcus aureus.



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- Escherichia coli. - Salmonella typhimurium. - Staphylococcus epidermidis. - Enterobacter aerogenes. - Micrococcus spp.

Medios: Agar BHI, CASO, SPC, Baird Parker, Salado Manitol, VRBA, EMB, XLD, Salmonella – Shigella, Bismuto sulfito, Hektoen, Chromocult, Caldo tetrationate, Caldo Rapaport, Caldo selenite, Caldo Brilla.

9.4.2 Métodos Evaluación de medios sólidos y líquidos Seguir la metodología descrita anteriormente. En las tablas 1 y 2 se presentan algunos ejemplos de medios de cultivo a evaluar con sus respectivos microorganismos deseados e interferentes. Estas listas no son excluyentes, esto es, que se pueden emplear otros géneros bacterianos para evaluar la selectividad y productividad de los medios cuando estos lo permitan. Tabla 1. Microorganismos deseados e interferentes para evaluación de medios sólidos por ecometría.

AGAR EVALUAR MICROORGANISMO TIEMPO

INCUBACION MEDIO

REFERENCIA DESEADO INTERFERENTE

Baird Parker S. aureus. E. coli. 48 horas. TSA / BHI

EMB E. coli. S. aureus. 24 horas. TSA / BHI

VRBA E. coli. P. vulgaris. 24 horas. TSA / BHI

Bismuto Sulfito Salmonella spp E. coli. 24 horas. TSA / BHI

Hektoen Salmonella spp E. coli. 24 horas. TSA / BHI

S – S Salmonella spp E. coli. 24 horas. TSA / BHI

XLD Salmonella spp E. coli. 24 horas. TSA / BHI



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Tabla 2. Microorganismos deseados e interferentes para la prueba de productividad y selectividad de medios líquidos.

CALDO EVALUAR MICROORGANISMO

DESEADO INTERFERENTES

Selenite cisteína. Salmonella spp E. coli, Citrobacter spp, Klebsiella spp, S. aureus.

Tetrationate Salmonella spp E. coli, Citrobacter spp, Klebsiella spp.

Brilla. E. coli. Salmonella spp, Klebsiella spp, E. aerogenes.

LMX Fluorocult. E. coli. Salmonella spp, Klebsiella spp, S. aureus.

Rapaport. Salmonella spp E. coli, Citrobacter spp, Klebsiella spp.

9.5 RESULTADOS A manera de ejemplo vamos a suponer que se está evaluando un medio de cultivo “X”. Después de incubado se observa el crecimiento del microorganismo deseado en el medio notándose que en las 5 líneas del primer cuadrante hubo crecimiento y en tres líneas del segundo cuadrante. Así las cosas el ICA obtenido para este medio es 1,6. Este resultado sale de multiplicar las 5 líneas del primer cuadrante por 0,2 + 3 líneas del segundo cuadrante por 0,2.

9.6 BIBLIOGRAFÍA Mossel, D.A.A., Bonants-Van Laarhoven, T., Ligtemberg-Markus, A.M.Th., et al. (1983). Quality

assurance of selective culture media for bacteria, moulds and yeasts: an attempt at standardization at the international level. Journal of Applied Bacteriology, 54, 313-327.

Mossel, D.A.A., Correy, J.E.L., Struijk, C.B., et al. (1995). Essentials of the Microbiology of Foods.

Chichester, UK: John Wiley. Harrigan, W.F. (1998). Laboratory Methods in Foo Microbiology, 3rd Ed. San Diego, California, USA:

Academic Press.

9.7 ANEXOS A continuación encontrará 2 modelos de formatos para la evaluación de medios sólidos y líquidos selectivos y no selectivos.



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FORMATO 1 VALORES DE REPRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD - MÉTODO ECOMÉTRICO

FECHA: _____________________ Cepa Interferente: ________________________________ Cepa deseada: ________________________________ Instrucciones: Frente a la línea de cada cuadrante coloque un (+) si se presenta crecimiento y (-) si no hay crecimiento. Sume el número de positivos para cada cuadrante y multiplique por 0.2. En la fila correspondiente a suma coloque el resultado para cada cuadrante, y en la línea 5 si hay crecimiento coloque un valor de 1. Finalmente sume los resultados y obtendrá el ICA para cada medio. Medio de referencia: Agar ________________________. 1 2 3 4 5 SUMA Cuadrante 1 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 2 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 3 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 4 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Línea 5 ______ ICA: _______ Medio a valorar productividad: Agar ________________________. 1 2 3 4 5 SUMA Cuadrante 1 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 2 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 3 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 4 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Línea 5 ______ ICA: _______ Medio a valorar selectividad: Agar ________________________ 1 2 3 4 5 SUMA Cuadrante 1 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 2 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 3 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Cuadrante 4 ____ ____ ____ ____ ____ ______ Línea 5 ______ ICA: ________ Valor de Índice de Crecimiento Relativo (ICR): _______



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FORMATO 2 REGISTRO DE VALORES DE REPRODUCTIVIDAD Y SELECTIVIDAD

MEDIOS LÍQUIDOS (ej. Caldo Lauryl sulfato + MUG para Coliformes Totales y fecales) FECHA: _____________________ Medios evaluados: ______________________________________________________ Cepa deseada: ________________________________ Instrucciones: Frente a la línea de cada cuadrante coloque un (+) si se presenta crecimiento y (-) si no hay crecimiento. Sume el número de positivos para cada cuadrante y multiplique por 0.2. En la fila correspondiente a suma coloque el resultado para cada cuadrante, y en la línea 5 si hay crecimiento coloque un valor de 1. Finalmente sume los resultados y obtendrá el ICA para cada medio. RESULTADOS Segundo día. Conteo 10-7 10-8 10-7 10-8 Agar no selectivo ____ ____ _____ _____ Reporte final ________________ UFC/ml Caldo __________________________________________. Dilución -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 -10

Turbidez _______________________________________________________________________________ Gas _______________________________________________________________________________ Fluorescencia _______________________________________________________________________________ Control (+) Control (-)

RESULTADOS Tercer día. Medio __________________________________________. Dilución -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 -10 Crecimiento

Productividad _______________________________________________________________________________ Selectividad _______________________________________________________________________________



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Valor ecométrico _______________________________________________________________________________ Control (+) Control (-)

RESULTADOS Cuarto día. Medio __________________________________________. Dilución -1 -2 -3 -4 -5 -6 -7 -8 -9 -10 Crecimiento

Productividad Kovacs/gas______________________________________________________________________ Selectividad Kovacs/gas______________________________________________________________________ Productividad Colonias (+) _____________________________________________________________________ Selectividad Colonias (-) _____________________________________________________________________ TSI LIA UREA Resultados colonia 1 2 3 1 2 3 1 2 3 ____________________________________________________________________ Control (+) Control (-)

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