Lectura 2-Adicional Genética Molecular

1

MATERIAL ADICIONAL DE LECTURA SLO PARA PROPSITOS DEL CURSO

Rev. md. Chile v.127 n.8 Santiago. Agosto 1999

Medicina molecular: Presente y futuro Molecular medicine: Present and future

Silvana Zanlungo M, Marco Arrese J, Attilio Rigotti R.

The genetic background of individuals is recognized as an important clue in the analysis of classical hereditary and multifactorial acquired diseases. This new concept derives from the development and increasing use of molecular genetics in clinical medicine. The application of molecular biology techniques in biomedical investigation has encompassed the identification of the pathogenesis and etiology of diseases, prenatal diagnosis the production of new therapeutic agents, gene therapy and the development of pharmacogenetics. The impact on the fundamentals and practice of clinical medicine that will have the use of molecular biology is analyzed in this review. (Key Words: Epidemiology, molecular; Genetics, biochemical; Molecular biology).

Todas las enfermedades humanas pueden ser consideradas como el resultado de una interaccin entre la constitucin gentica de un individuo y el medio ambiente. Dentro de este concepto de enfermedad, el rol de la individualidad gentica del organismo husped resulta trascendental, no slo para las enfermedades primariamente de origen gentico, como en los casos de enfermedades mendelianas clsicas, sino que tambin en enfermedades multifactoriales con alta frecuencia, como las enfermedades crnicas del adulto.

Este concepto de enfermedad genera una nueva perspectiva en la medicina, derivada del desarrollo y la utilizacin creciente de la gentica molecular en la actividad clnica. En particular, las consecuencias de la aplicacin de las tcnicas de biologa molecular en la investigacin biomdica han sido inmensas y sin duda que su aplicacin, cada vez ms difundida en la actividad clnica, permite vislumbrar un enorme impacto en los fundamentos y en la prctica diaria de la medicina del presente y del futuro (Tabla 1).

El propsito de este artculo es analizar las implicancias de la gentica molecular en el conocimiento biomdico y en la prctica de la medicina. El anlisis de las repercusiones de la biologa molecular en las diferentes especialidades de la medicina, ser materia de futuros artculos de esta

serie de Medicina Molecular de la Revista Mdica de Chile.

Identificacin y aislamiento de genes relacionados a enfermedades.

Corresponde a la aplicacin de la biologa molecular al descubrimiento de genes, que contribuyen al desarrollo de enfermedades.

Se lleva a cabo bsicamente a travs de dos aproximaciones experimentales, conocidas como clonamiento funcional y clonamiento posicional, las

Tabla 1. Aplicaciones de la medicina molecular en el estudio y manejo de las enfermedades

Identificacin de la etiologa gentica

Estudio de patogenia

Diagnstico prenatal, pre-mrbido y mrbido

Produccin de nuevos agentes teraputicos

Terapia gnica

Desarrollo de la farmacogentica

Prevencin

2


cuales fueron analizadas en el artculo previo de esta serie. Mediante el uso del clonamiento funcional se han identificado los genes asociados a la -talasemia, el sndrome de Lesch-Nyhan, la fenilcetonuria y la deficiencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa. Por otro lado, el clonamiento posicional ha permitido descubrir los genes causantes de la fibrosis qustica, la distrofia muscular de Duchenne, la obesidad, el corea de Huntington, la poliposis colnica y el cncer mamario.

Para cualquiera de las estrategias de clonamiento de genes asociados a enfermedades, en la fase final siempre debe tenerse en cuenta la discriminacin entre variantes no relevantes en la secuencia de cido desoxiribonucleico (ADN) (las cuales pueden estar solamente asociadas, pero no ser causa directa de la enfermedad) y mutaciones de real significado patognico (las cuales causan directamente la enfermedad). La posible relevancia etiopatognica de una mutacin, puede revelarse cuando la supuesta mutacin cambia la secuencia aminoacdica en una regin clave del producto proteico codificado por el gen candidato. Sin embargo, la prueba final que un gen candidato est realmente determinando la enfermedad en estudio, requiere tener evidencias de que el gen normal no mutado corrige el fenotipo anormal y/o que la forma mutante del gen produce el fenotipo anmalo. Una vez identificado el gen responsable de una enfermedad se abren amplias perspectivas para la comprensin de sus mecanismos patognicos, diagnstico, tratamiento y prevencin.

Estudio de la patogenia de las enfermedades. En el contexto de una enfermedad con base gentica, se puede afirmar que su origen radica en el ADN y en una mutacin del mismo. El gran desafo consiste en comprender los mecanismos asociados que determinan el fenotipo anormal, en un sistema biolgico complejo como el cuerpo humano. El poder de la medicina molecular tambin se manifiesta en el estudio de los mecanismos, que permiten que el genotipo se traduzca en el fenotipo anormal de una enfermedad. Esta aplicacin de la medicina molecular se ha denominado gentica funcional o patogentica y tiene importancia no slo para entender los mecanismos de una enfermedad sino tambin para el desarrollo de nuevos tratamientos.

Con frecuencia las causas genticas de muchas enfermedades se conocen con gran detalle, hasta el nucletido especfico que est mutado, el aminocido alterado o ausente y la alteracin que esto produce en la estructura y funcin de una protena. Sin embargo, suele existir un enorme desconocimiento de cmo el gen o la protena defectuosa producen los sntomas y signos en el paciente enfermo. La comprensin de la patogenia de una enfermedad de origen gentico es muy compleja, debido a que entran en juego diferentes factores como la naturaleza misma (delecin, insercin, mutacin sin sentido, etc) y funcional (prdida, ganancia o cambio de funcin o cambios en el nivel de expresin) de la alteracin gentica, la naturaleza del producto gnico (enzima, transportador, protena estructural, protena reguladora, factor de transcripcin, etc) y el tipo de sistema metablico y biolgico en el cual funciona. Por otro lado, el estudio de la patogenia de una enfermedad de origen gentico en humanos, tiene una complejidad intrnseca derivada de la baja frecuencia de los casos ndices, la heterogeneidad gentica de los casos, la variabilidad en las manifestaciones clnicas, la dificultad en el desarrollo de estudios fisiopatolgicos y en la obtencin de muestras de tejidos en diferentes estadios del proceso patolgico.

La aplicacin de la gentica molecular en el diseo de modelos animales de enfermedades humanas, ha permitido un importante avance en el conocimiento de la patogenia de condiciones patolgicas generadas por un gen defectuoso. La capacidad de generar cepas de animales manipuladas, genticamente, ha tenido un enorme impacto en biomedicina y hoy da un nmero cada vez mayor de fisiopatlogos tradicionales, bilogos del desarrollo, bilogos celulares, morflogos y fisiopatlogos estn utilizando esta estrategia experimental en el estudio de la patogenia de las enfermedades. Los modelos animales constituyen una interesante alternativa de estudio, ya que pueden permitir comprender cmo un defecto gentico molecular especfico llega a traducirse en un fenotipo particular, en un sistema vivo integrado y complejo. Adems de la existencia de diferentes especies que presentan mutaciones espontneas que sirven como modelos naturales de enfermedades con base gentica, la preparacin de cepas de animales genticamente manipulados, particularmente ratones transgnicos (que sobreexpresan) y knockout (que no

3


expresan) para un gen de inters, han contribuido enormemente en la identificacin, el anlisis de la secuencia temporal y de la interrelacin de los diferentes fenmenos patognicos derivados de la funcin anormal de dicho gen, los que llevan al desarrollo de un fenotipo equivalente a la enfermedad humana. El impacto de la utilizacin de estos modelos experimentales animales se ha manifestado en el estudio de enfermedades monogenticas (fibrosis qustica, enfermedad de Gaucher, sndrome de Lesh-Nyhan) y de enfermedades multifactoriales con base gentica (aterosclerosis, cncer, obesidad, diabetes mellitus, hipertensin arterial).

Diagnstico molecular presintomtico y sintomtico de las enfermedades. Como en cualquier especie, el genoma humano no es una entidad esttica, sino que est sujeta a mutaciones, las cuales pueden definirse como cambios hereditarios en la estructura del ADN. Estos cambios del genoma pueden ocurrir a gran escala, como aberraciones cromosmicas, o a menor escala, como mutaciones ms simples que generan deleciones, inserciones o sustituciones de una o varias bases nucleotdicas. Las mutaciones tienen importancia etiopatognica cuando la secuencia alterada est asociada a un gen, ya sea a nivel de la secuencia codificante del gen (donde se encuentran la mayora de las mutaciones de relevancia patognica), de la secuencia intragnica no codificante (secuencias intrnicas necesarias para la correcta expresin gnica) y de secuencias reguladoras fuera de la regin codificante (que regulan los niveles de expresin) de un gen.

Una de las principales aplicaciones clnicas actuales de la gentica molecular humana, es el diagnstico de mutaciones genticas que contribuyen al desarrollo de enfermedades. Este uso de la gentica molecular puede realizarse tanto para el diagnstico prenatal, para la identificacin de sujetos presintomticos (basado en antecedentes familiares), para la confirmacin del diagnstico de una enfermedad, planteado sobre un cuadro bioqumico y/o clnico definitivo, o para fundamentar el diagnstico cuando existe un cuadro clnico sospechoso.

El principio utilizado para la deteccin de mutaciones genticas con aplicacin diagnstica es el mismo que

una prueba diagnstica tradicional, es decir, la deteccin de diferencias relevantes entre el gen analizado en un paciente particular comparado con el ADN normal. Los mtodos disponibles actualmente permiten detectar virtualmente cualquier mutacin en la secuencia del ADN, ya sea una mutacin puntual, en la cual un base nucleotdica es sustituida por otra, o cambios ms sustanciales como deleciones, inserciones, duplicaciones o aumentos variables en las secuencias repetitivas de ADN.

Los mtodos de anlisis de mutaciones para el diagnstico clnico son muy variados y la seleccin especfica de ellos, para cada caso particular de enfermedad gentica, depende de la heterogeneidad de las mutaciones y de la naturaleza de las mutaciones mismas que presenta un gen relacionado a una enfermedad en particular. Por lo tanto, el diagnstico gentico-molecular de grandes deleciones en genes pequeos, como el gen de -globina (2.000 pares de bases), que causan la -talasemia, es significativamente diferente en comparacin con la bsqueda de mutaciones puntuales a lo largo de todo un gen de mucho mayor tamao, como el gen que codifica el factor VIII de coagulacin (186.000 pares de bases) que causa la hemofilia A. Como consecuencia, los laboratorios de diagnstico molecular cuentan actualmente con tests diseados selectivamente para cada enfermedad con base gentica, los cuales con gran frecuencia combinan tcnicas moleculares (RPC, Southern blot, hibridacin con oligonucletidos mutacin-especficos, secuenciacin), buscando desarrollar tcnicas que sean relativamente simples, confiables, aplicables a escala y de bajo costo.

A pesar de que las tcnicas diagnsticas de biologa molecular son poderosas y entregan informacin muy precisa, la experiencia y los controles de calidad de los laboratorios que las aplican pueden ser muy variadas. Por otro lado, la interpretacin de los resultados de un anlisis molecular en el contexto clnico o epidemiolgico puede ser muy complejo y no siempre existe una relacin estricta entre genotipo y fenotipo. Por lo tanto, es esencial que los clnicos que se enfrentan a estos nuevos mtodos diagnsticos, estn familiarizados con la calidad de los laboratorios que proveen estos servicios y sean extremadamente cuidadosos en la interpretacin de los datos

4


moleculares en el contexto global de cada situacin clnica particular.

Produccin de agentes teraputicos, terapia gnica y farmacogentica. Desde un punto de vista conceptual, el tratamiento de una enfermedad se puede focalizar desde el manejo del fenotipo clnico, pasando por el fenotipo metablico y proteico hasta la terapia gnica propiamente tal. La utilidad de la medicina molecular en una terapia dirigida al fenotipo clnico se deriva de su aplicacin en el diagnstico especfico de la enfermedad, permitiendo instaurar medidas mdicas tradicionales para la condicin fisiopatolgica encontrada. Sin embargo, lo ms novedoso e importante de la implicancia de la gentica molecular en el tratamiento mdico son las aplicaciones en la produccin de agentes teraputicos, en la terapia gnica y en la farmacogentica.

Produccin de agentes teraputicos. El mayor impacto teraputico de la biologa molecular se ha manifestado en el manejo del trastorno fenotpico metablico y proteico, derivado de la aplicacin de la tecnologa de ADN recombinante en la preparacin de protenas, que pueden usarse exitosamente para el tratamiento de las manifestaciones fenotpicas de una amplia variedad de enfermedades. Esta estrategia de obtencin de protenas de uso teraputico tiene como ventajas la facilidad en la obtencin de grandes cantidades del producto, as como la proteccin frente al riesgo de contaminacin con agentes patgenos que se generaba cuando el producto proteico era obtenido de fuentes naturales. Como ejemplos de la aplicacin e impacto de esta estrategia teraputica derivada de la biologa molecular, se puede destacar el uso de la insulina (el primer producto comercial producido por la empresa biotecnolgica para uso en humanos) en la diabetes mellitus, la eritropoyetina en la anemia de la insuficiencia renal crnica, la estreptoquinasa y el activador tisular del plasmingeno en el infarto agudo del miocardio, los factores estimulantes de la formacin de leucocitos en disfunciones hematolgicas, el factor VIII de la coagulacin en hemofilia clsica, el interfern en las hepatitis virales crnicas, etc. Por lo tanto, la tecnologa de ADN recombinante est permitiendo la obtencin de productos proteicos para el tratamiento de una gama cada vez mayor de enfermedades, desde patologas

genticas mendelianas clsicas hasta enfermedades de origen multifactorial como cncer, alergias, enfermedades autoinmunes, trastornos neurolgicos, infecciones y heridas.

La aplicacin de la tecnologa de ADN recombinante tambin se ha considerado en el desarrollo de vacunas contra las enfermedades infecciosas. A pesar de la efectividad de las vacunas producidas mediante inactivacin o atenuacin de los agentes patgenos, siempre existe el riesgo de contaminacin con patgenos activos o el problema generado por la dificultad en el cultivo de los agentes patgenos. La estrategia de ADN recombinante permite la produccin selectiva de protenas presentes en la superficie de los agentes infecciosos, las cuales pueden usarse como antgeno no infeccioso en vacunacin para generar respuesta inmune. El primer ejemplo de una vacuna generada mediante el uso de la estrategia de ADN recombinante es la vacuna contra el virus de la hepatitis B.

Terapia gnica. Muchas enfermedades de origen gentico se traducen en defectos en la expresin de protenas, las cuales son difciles de administrar o modificar mediante tcnicas farmacolgicas ya sea por su tamao, complejidad o inaccesibilidad celular. Una de las aplicaciones futuras ms promisorias de la gentica molecular en el tratamiento de las enfermedades es la implementacin de la terapia gnica, la cual puede ser definida como la administracin e introduccin de material gentico en un tipo celular o tejido apropiado para afectar la expresin gnica con el fin de obtener un efecto teraputico deseado, superando las barreras de una terapia farmacolgica convencional.

El xito de cualquier protocolo de terapia gnica exige la existencia de un gen susceptible de manipulacin teraputica, un vector que facilite la entrega del material gentico en las clulas apropiadas y un mtodo que permita el acceso de ese vector al tejido correspondiente. El material gentico utilizado puede ser ADN, cido ribonucleico (ARN), oligonucletidos sintticos o ribozimas (ARN catalticos). Los mtodos disponibles para la introduccin del ADN en las clulas deseadas son variados e incluyen vectores virales (adenovirus, retrovirus deficientes en replicacin, virus

5


herpes, etc) y vectores no virales (liposomas, conjugados ADN-protena). La administracin del ADN a las clulas somticas se puede hacer ex vivo (el vector con ADN se introduce en las clulas de inters en cultivo y se administran al paciente) o in vivo (donde el ADN asociado al vector se administra directamente al individuo, empleando mtodos que permitan su llegada al tejido o clula blanco). Actualmente, la mayora de los protocolos en desarrollo utilizan vectores virales para introducir ADN en clulas o tejidos y se espera que una mejora significativa en la eficiencia y la selectividad de los vectores sea clave en el futuro desarrollo y difusin de la terapia gnica.

La terapia gnica en humanos se hizo realidad en 1990, cuando se inici el primer protocolo clnico financiado por los Institutos Nacionales de Salud, de Estados Unidos, para el tratamiento de dos pacientes con deficiencia de adenosina deaminasa. Actualmente existen ms de 100 protocolos en curso, que involucran a ms de 1.500 pacientes en centros de investigacin biomdica de todo el mundo. Aunque inicialmente la terapia gnica estuvo restringida a enfermedades monognicas, la lista de enfermedades candidatas para terapia gnica ha crecido progresivamente, incluyendo enfermedades de etiopatogenia diversa y multifactorial como cncer, SIDA, aterosclerosis y enfermedades autoinmunes.

Farmacogentica. Otra importante implicancia teraputica de la medicina molecular se relaciona con la farmacogentica, disciplina que estudia la variabilidad de la respuesta farmacolgica derivada de influencias genticas individuales. Como consecuencia de nuestros sistemas endgenos de defensa ante agentes qumicos, los cuales son variables de sujeto en sujeto y de raza en raza por factores genticos, existe una amplia variabilidad en la respuesta a la administracin farmacolgica. Dentro de los mecanismos metabolizadores de drogas conocidos por su variabilidad de origen gentico estn las enzimas de la familia de las esterasas (como la butirilcolinesterasa, que controla la duracin de la accin de relajante muscular de la succinilcolina), transferasas (como la tiopurina-metiltrasferasa, cuya deficiencia genetica puede ser fatal en el tratamiento de neoplasias o de enfermedades autoinmunes con

tiopurina), deshidrogenasas (como la alcohol-deshidrogenasa, que metaboliza el etanol), oxidorreductasas (como la monoamino-oxidasa, que metaboliza frmacos psicotrpicos) y de los citrocromos P450 (como la debrisoquinahidroxilasa, que es codificada por un gen altamente polimrfico lo que determina gran variabilidad en la metabolizacin y por consiguiente en el efecto farmacolgico de mltiples drogas como antiarrtmicos, -bloqueadores adrenrgicos, neurolpticos y antidepresivos tricclicos). El descubrimiento y la identificacin de los genes y sus respectivas variantes que controlan la metabolizacin de drogas puede tener importantes consecuencias en la prctica clnica durante la seleccin de una terapia farmacolgica, evitando efectos colaterales indeseables, junto con prevenir la morbilidad y mortalidad asociadas al uso de frmacos convencionales. Las implicancias de la farmacogentica tambin son enormes para el desarrollo de nuevas drogas y para la toxicologa.

Prevencin y epidemiologa gentica. En la prctica clnica es cada vez ms importante reconocer que existen enfermedades que tienen una importante contribucin de un gen nico o, lo que es ms frecuente, que muchas enfermedades complejas y multifactoriales tienen un significativo componente gentico. El reconocimiento de esta realidad derivada del desarrollo de la medicina molecular, trae consigo importantes implicancias de manejo y consejo clnico para sujetos y/o poblaciones sometidas a anlisis gentico molecular, cuya utilizacin en este contexto es del todo homologable al screening de enfermedades con mtodos no moleculares.

La identificacin de mutaciones genticas especficas causantes de enfermedades como estrategia de screening puede ser aplicada en el diagnstico presintomtico de la enfermedad con perspectivas de intervencin, en el screening de portadores para ofrecer consejo reproductivo y en el diagnstico prenatal. En cualquiera de estos casos de aplicacin del screening gentico, la medicina molecular debiera estar estrechamente asociada a un consejo gentico apropiado, el cual a su vez requiere un diagnstico molecular correcto y un conocimiento acabado del riesgo relativo y de la variabilidad y severidad de la expresin clnica del fenotipo anormal. Esta

6


informacin permite instaurar medidas mdicas convencionales (educacin, intervencin farmacolgica, ciruga) que prevengan, mejoren o reviertan parcialmente las manifestaciones clnicas deletreas que pueden llegar a producirse como traduccin fenotpica de la mutacin gnica.

La identificacin de la variabilidad gentica mediante el anlisis de polimorfismos tambin tiene importancia como otra alternativa de screening molecular. Un polimorfismo gentico corresponde a una variacin en la secuencia de ADN que ocurre con una frecuencia mayor a 1% en la poblacin general. Estos polimorfismos constituyen la base molecular de la diversidad de nuestra especie y pueden tener importantes implicancias en trminos del riesgo para el desarrollo de enfermedades. La implementacin de la epidemiologa molecular ha logrado combinar el poder de las tcnicas de biologa molecular con el anlisis estadstico poblacional, lo que ha permitido medir el efecto de la variabilidad de determinadas regiones gnicas sobre rasgos fenotpicos clnicamente relevantes para el desarrollo de enfermedades multifactoriales crnicas tales como: hipertensin arterial, diabetes mellitus, aterosclerosis, enfermedad de Alzheimer, cncer y enfermedades autoinmunes y psiquitricas. La utilizacin del screening de polimorfismos genticos puede llegar a ser una importante herramienta de medicina preventiva, haciendo posible intervenciones farmacolgicas o de estilo de vida sobre los individuos con riesgo gentico aumentado para el desarrollo de una enfermedad.

A pesar del gran poder de la aplicacin del screening gentico de mutaciones y polimorfismos, es importante reconocer que su utilidad no es siempre segura, especialmente cuando la especificidad del test es baja y el riesgo potencial y la posibilidad de intervencin es incierta.

Proyecto Genoma Humano. El Proyecto del Genoma Humano es un esfuerzo colaborativo internacional iniciado a mediados de los aos 80, cuyo objetivo es establecer la secuencia completa del ADN genmico humano. La meta del proyecto es identificar la secuencia de los 3 billones de pares de bases nucleotdicas que constituyen la base qumica del genoma humano. El conocimiento de esta secuencia

va a permitir identificar 50.000 a 100.000 genes presentes en la especie humana y las regiones gnicas que regulan la expresin de los mismos. Tcnicamente, el desarrollo del proyecto se basa fundamentalmente en la utilizacin de una amplia gama de mtodos de biologa molecular y constituye la aplicacin ms compleja e integrada del anlisis molecular al estudio del patrimonio gentico de una especie.

Adems de permitirnos conocer mejor los mecanismos biolgicos bsicos que ocurren en la especie humana, el proyecto del genoma humano debiera traducirse en un gran avance en el conocimiento de las enfermedades que presentan alguna base gentica, ya sean de origen monognico o multifactorial. La informacin gentica derivada de este proyecto va a contribuir enormemente en la prevencin, el diagnstico y el tratamiento del hombre enfermo.

Riesgos del uso de la Medicina Molecular. La informacin derivada de estudios gentico-moleculares es diferente de otros tipos de informacin mdica, porque tiene un valor predictivo y no es slo un mero dato histrico de la salud de una persona. En forma adicional, el conocimiento del genotipo de una persona automticamente proporciona informacin de sus familiares, con o sin su consentimiento o participacin activa. Por estas razones, la informacin gentica de un individuo debiera ser mantenida bajo mxima confidencialidad, usada prudentemente y mantenida fuera de registros mdicos hasta que se desarrollen sistemas de seguridad, que garanticen que la informacin gentica diagnstica y/o predictiva de un sujeto y su grupo familiar correspondiente no pueda ser utilizada inapropiadamente.

La informacin gentica obtenida por el desarrollo de la medicina molecular debe ser usada slo para el beneficio del sujeto en estudio, con su consentimiento informado dentro de un intento por responder una pregunta de ndole personal y privada. Por lo tanto, resulta imperativo que los individuos no sean discriminados arbitrariamente por su constitucin gentica y es un desafo tanto para la comunidad mdica como para la sociedad en general, que prevalezcan los beneficios por sobre los riesgos de la

7


aplicacin cada vez ms creciente de la biologa molecular en medicina.

De acuerdo a lo revisado en este artculo, la medicina molecular trae consigo, sin lugar a dudas, innumerables ventajas y beneficios para un mejor conocimiento de las enfermedades y el manejo del sujeto enfermo. Sin embargo, debemos estar alertas ante su uso indebido, el cual puede traer aparejado serios inconvenientes ticos, sociales y legales.

Agradecimientos La preparacin de este artculo fue parcialmente financiada por los proyectos FONDECYT 1981048 y 1990519.

REFERENCIAS

1. BEAUDET AL. Genetics and Disease. En Harrison's Principles of Internal Medicine. Dcima Cuarta Edicin. Fauci AS, Braunwald E, Isselbacher KJ, Wilson JD, Martin JB, Kasper DL, Hauser SL, Longo DL, Eds McGraw-Hill, Inc New York 1998; 365-95.

2. BRIDGE PJ. The calculation of Genetic Risks. The John Hopkins University Press. Baltimore. 1994.

3. BRITISH MEDICAL JOURNAL PUBLISHING GROUP. Basic Molecular and Cell Biology. Segunda Edicin. London 1993.

4. BROCK DJH. Molecular Genetics for the Clinician. Cambridge University Press. Cambridge. 1993.

5. CHIEN KR, Ed. Molecular Basis of Cardiovascular Disease. WB. Saunders Co. Philadelphia. 1999.

6. KHOURY MJ, BEATY TH, COHEN BH. Fundamentals of Genetic Epidemiology. Oxford University Press, Inc Oxford 1993.

7. KING RA, ROTTER JI, MOTULSKY AG, Eds. The Genetic Basis of Common Diseases. Oxford University Press, Inc. New York. 1992.

8. NICHOLS EK. Human Gene Therapy. Harvard University Press. Cambridge. 1988.

9. OLIVA R. Genoma Humano. Masson SA. Barcelona, 1996.

10. PRIMROSE SB. Principles of Genome Analysis. Blackwell Science Ltd. Oxford. 1995.

11. SCRIVER CR, BEAUDET AL, SLY WS, VALLE D, Eds. The Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease. Sptima Edicin. McGraw-Hill, Inc. New York. 1995.

12. STRACHAN T, READ AP. Human Molecular Genetics. John Wiley & Sons, Inc. New York. 1996.

13. VOGELSTEIN B, KINZLER KW, Eds. The Genetic Basis of Human Cancer. McGraw-Hill, Inc. New York. 1998.

14. WATSON JD, GILMAN M, WIRKOWSKI J, ZOLLER M. Recombinant DNA. Segunda Edicin. Scientific American Books. New York. 1992.

15. ZANLUNGO S, RIGOTTI A, ARRESE M. Biologa Molecular: Conceptos bsicos. Rev Md Chile 1999; 127: 839-47.

CUESTIONARIO

1. Por qu se considera que todas las enfermedades que afectan al ser humano son el resultado de la

interaccin entre la constitucin gentica y el medio ambiente? Explique con tres ejemplos.

2. Qu son enfermedades multifactoriales y cules son sus principales diferencias con respecto a las

enfermedades mendelianas clsicas?

3. Defina y diferencie a travs de un esquema el clonamiento funcional y el clonamiento posicional.

4. Cmo se analiza la relacin de un gen con el desarrollo de una enfermedad en el ser humano?

5. Qu es gentica funcional o patogentica?

6. Cul es la funcin de los ratones transgnicos de sobreexpresin y los ratones knockout en el estudio de la

gentica molecular?

Documents

Lectura 2-Adicional Genética Molecular