Libro de resúmenes: Sesión de carteles Farmadrid XX

8/3/2019 Libro de resmenes: Sesin de carteles Farmadrid XX

1/16

iMedPub JournalsThis article is available from:http://www.farmatoxicol.com/ FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA

Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License 1

2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

Libro de resmenes:Sesin de carteles Farmadrid XX

Comit Organizador: Emilio Ambrosio Flores, Alejandro Higuera Matas,Javier Ibias Martn, Nuria del Olmo Izquierdo, Miguel Miguns Vzquez,

Santiago Morales Coria, M Amparo Assis Duart, David Roura Martnez,Gonzalo Lpez Montoya

Departamento de Psicobiologa. Facultad dePsicologa. UNED

LugarFacultad de PsicologaSaln de ActosC/ Juan del Rosal, 10Ciudad Universitaria28040 - MADRID

Pgina web: http://www.farmadrid.org.es

P.1. Sistemas de liberacin controlada (micropartculas) demolculas proapoptticas .

Martn Sabroso, C., Torres Surez, A.I. Departamento de Farmacia y Tecnologa Far-macutica. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de Madrid

La apoptosis es un conjunto de reacciones bioqumicas encaminadas a producirla muerte celular de manera controlada. En situaciones normales los mecanismospro- o anti-apoptticos actan de forma equilibrada, y si se rompe este equilibriose pueden desencadenar diferentes cuadros patolgicos. Enfermedades asociadasa la inhibicin de apoptosis son el cancer y las enfermedades autoinmunitarias. Lainduccin de los procesos de apoptosis en una clula supone la activacin de lasenzimas citoslicas denominadas caspasas (cisteinil-aspartato proteasas), y se puedeproducir por dos vas distintas: 1) Va mitocondrial: estmulos internos o externos pro-vocan cambios inicos entre la matriz de la mitocondria y el citosol que aumentan la

permeabilidad de la membrana interna mitocondrial. produciendose la liberacin deprotenas como el citocromo C que activan las caspasas,. Los glucocorticoides, comola dexametasona, son algunas de las sustancias exgenas que actuan a este nivelpromoviendo la apoptosis. 2) Va extrnseca: debida a la unin de ligandos especfi-cos a los receptores de muerte celular, localizados en la membrana plasmtica. Ala proteina Fas (CD95) se une su ligando, FasL, y desencadenan la activacin de lascaspasas efectoras y la apoptosis. El objetivo del trabajo es elaborar micropartculasque contengan molculas con capacidad proapopttica (dexametasona y proteinaFas), que vehiculicen estas molculas evitando su degradacin y que liberen las mo-lculas activas de forma prolongada en el tiempo tras una nica administracin, pro-longando as sus efectos. Se ha logrado poner a punto un mtodo de elaboracin demicropartculas de dexametasona y de ovoalbnina (utilizada como protena mode-lo) obtenindose, en ambos casos, sistemas microtransportadores de tamao menor

a 100 m, altos rendimientos y eficacias de encapsulacin, asi como una liberacincontrolada durante 20 das en el caso de la dexametasona y 4 meses para la protena.

P.2. La pleiotrona y la midkina regulanlos efectos antinociceptivos inducidospor morna a travs de mecanismosindependientes del tono alfa-2-adrenrgico.

Martn, Y.B., Gramage, E., Herradn, G. Universidad San Pablo-CEU.

La pleiotrofina (PTN) y la midkina (MK), son dos citoquinas fun-cionalmente muy redundantes y con capacidad neurotrfica,que se encuentran sobre-expresadas en situaciones de daodel tejido nervioso. Se ha demostrado que la administracinde diferentes frmacos, como la morfina, regula de manera

significativa los niveles de expresin de estas citoquinas enel cerebro, lo que sugiere que PTN y/o MK podran estar in-volucradas en los efectos farmacolgicos inducidos por mor-fina. Para probar esta hiptesis, hemos estudiado los efectosantinociceptivos inducidos por morfina en ratones knockoutde MK (MK-/-), knockout de PTN (PTN-/-) y en ratones salvajes(WT+/+) empleando el test de la placa caliente y el test de la

retirada de la cola. En situacin basal, pudimos comprobar quelas respuestas nociceptivas a nivel supraespinal no difieren en-tre ratones PTN-/-, MK-/- y WT+/+ en el test de la placa caliente.Sin embargo, las latencias basales en el test de retirada de lacola fueron significativamente mayores en ratones PTN-/- en


2/16


2 Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License

2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

comparacin con MK-/- y WT +/+. No encontramos diferenciasentre genotipos administrando una dosis alta de morfina (10mg/kg) en el test de la placa caliente. Por el contrario, una dosis

intermedia de morfina (5 mg/kg) retras significativamente laaparicin de la respuesta dolorosa en ratones PTN-/- en com-paracin con MK-/- y WT+/+ en el test de la placa caliente. Porotra parte, los efectos antinociceptivos de la morfina (5 mg/Kg) en el test de la retirada de la cola aumentaron significa-tivamente en ratones PTN-/- y MK-/- en comparacin con ra-tones WT+/+. Curiosamente, la co-administracin de morfinacon yohimbina (antagonista del receptor alfa-2-adrenrgico)no alter los efectos antinociceptivos inducidos por morfinaen ratones PTN-/- y MK-/- en el test de la retirada de la cola.Nuestros resultados sugieren un papel importante de PTN enla transmisin del dolor a nivel espinal y demuestran la modu-lacin por parte de la PTN endgena de los efectos analgsicos

de la morfina a nivel espinal y supraespinal. Los datos tambindemuestran que la MK regula significativamente la analgesiainducida por morfina a nivel espinal. A diferencia de PTN, la MKendgena no ejerce un papel importante en el procesamientodel dolor a nivel espinal y no altera la analgesia inducida pormorfina a nivel supraespinal. Adems, los datos demuestranque el aumento de los efectos antinociceptivos de la morfinaa nivel espinal en ratones PTN-/- y MK-/- en comparacin conlos WT+/+ no estn causados por un excesivo incremento enel tono noradrenrgico provocado por el opiceo en ratonesPTN-/- y MK-/-.

P.3. Regulacin de CCL2/MCP-1 por receptoresadrenrgicos en astrocitos.

Hinojosa, A. E., Garca-Bueno, B., Caso, J.R., Grate, I., Madrigal,J.L.M. Departamento de Farmacologa, Facultad de Medicina,Universidad Complutense de Madrid. Centro de Investiga-cin Biomdica en Red de Salud Mental (CIBERSAM), Madrid,Espaa.

Tras observar la induccin por noradrenalina (NA) de MCP-1/CCL2 (protena quimioatrayente de monocitos) en astrocitos atravs de la activacin de receptores beta adrenrgicos, hemos

analizado los mecanismos implicados en este proceso, en par-ticular el efecto de frmacos antidepresivos moduladores de laNA. As, hemos comprobado que el tratamiento de cultivos pri-marios de astrocitos con inhibidores de la recaptacin de nora-drenalina como desipramina o toxometina induce la expresiny sntesis de CCL2/MCP-1 en estas clulas. El efecto de ambosfrmacos in vitro sugiere que la expresin de esta quimioqui-na podra modularse tambin por algn mecanismo indepen-diente de la elevacin de NA. Esto se ha confirmado al detectaruna reduccin en la produccin de CCL2/MCP-1 en astrocitostratados con el agonista del receptor alfa 2 adrenrgico clonidi-na. Adems, el bloqueo de receptores alfa 2 adrenrgicos conyohimbina potenci la produccin de MCP-1 causada por la

activacin de receptores beta adrenrgicos. Basndonos en es-tos datos podemos concluir que mientras que la activacin delos receptores beta adrenrgicos y la consecuente elevacin deAMPc parecen ser las vas ms importantes para la induccinde MCP-1 por NA, nuestros datos indican que los receptores

alfa 2 adrenrgicos tambin participan inhibiendo la expresinde MCP-1. Estos resultados indican un posible efecto (antiinfla-matorio/regulador) de frmacos antidepresivos que podra ser

til en procesos de neuroinflamacin asociados a patologasneuropsiquitricas.

P.4. Deteccin de hepatotoxicidad secundaria afrmacos a travs de seales de laboratorio.

Prez de la Campa, C., Snchez Rojas, S.D., Snchez Hernndez,A., Ochoa Mazarro, M.D., Abad-Santos, F.Hospital Universitariode la Princesa. Madrid.

El objetivo esencial de este estudio ha sido el de detectar loscasos probables de hepatotoxicidad secundarios a frmacosen pacientes ingresados en el Hospital Universitario de la Princ-

esa en Madrid. Para ello, mediante un programa diseado porel Servicio de Informtica del Hospital, se tratan de identificaraquellos pacientes que durante su ingreso presentan una el-evacin de la enzima GPT 3 veces el lmite superior de la nor-malidad y/ o bilirrubina total (BT) 2 veces el lmite superior dela normalidad. Posteriormente, se revisan sus historias clnicasy se realiza un seguimiento de los pacientes durante el ingresohospitalario, o bien, si ya han sido dados de alta, la revisin desu historia clnica se realiza solicitando al archivo su historia.Los casos que se consideran probables reacciones adversas amedicamentos (RAM) son notificados de manera electrnicaal Centro de Farmacovigilancia de la Comunidad de Madrid.

Los resultados indicaron que desde el 28/09/2009 hasta el31/05/2011, se han detectado 1159 seales, descontando lasrepetidas en un mismo paciente. De estas seales 74 (6.38%)se han considerado como probables casos de hepatotoxicidadpor frmacos. Los principales frmacos implicados han sido losantibiticos (betalactmicos) y los anticonvulsivantes. Otroshan sido los antifngicos y levofloxacino. Estos datos sugierenque el sistema de seales de laboratorio es un mtodo til parala deteccin de reacciones adversas medicamentosas (RAM).Presenta una gran sensibilidad terica para la bsqueda deeste tipo de RAM dentro de los pacientes que son ingresados,pudindose realizar as una adecuada labor de farmacovigilan-

cia. Este mtodo es aplicable para muchas otras RAM.

P.5. Pharmacokinetics and bioequivalenceevaluation of two product of Digoxin 0.25mgtablets after a single dose administrationin healthy volunteers: an open, crossoverrandomised bioequivalence clinical trial.

Ochoa Mazarro M.D., Romn Martnez M., Moreno Arza I., Sn-chez Rojas S., Abad-Santos F. Clinical Pharmacology Service ofHospital Universitario de La Princesa. Instituto de InvestigacinBiomdica del Hospital de la Princesa.

Digoxin is a cardiotonic drug used as an antiarrhythmic, in atrialfibrillation. The main aims of our study were to evaluate thepharmacokinetic of two different formulations of digoxin 0.25mg and to assess the bioequivalence. This was a randomized,single-centre, single-dose, crossover study. Forty young


3/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

healthy volunteers were enrolled. Each participant received asingle oral dose of digoxin 0.25 mg, and the wash-out periodwas 14 days. Two market formulations containing digoxin were

studied and designed as: product test, which is Digoxina testtablets 0.25 mg and product reference was Digoxina Teofarmareference tablets 0.25 mg, both of Laboratorios Teofarma S.r.L.Digoxin serum concentrations were determined by HPLC. Thepharmacokinetic parameters Cmaxand Tmaxwere obtained di-rectly from digoxin serum concentrations; AUC 0- (as the ad-dition of AUC0-t+ Ct/k) was calculated by the linear trapezoidalrule for both digoxin. The pharmacokinetics parameters AUC

0-and Cmaxwere tested for bioequivalence after log transfor-mation of data. Following administration of product test andproduct reference, the mean maximum serum concentration(Cmax) was 1.64 0.56 ng/ml and 1.76 0.54 ng/ml respec-tively. These values were similar in both formulations (p < 0.05).

The mean ratio of Cmaxtest over reference was calculated asof 92.07 with 90% confidence intervals of 84.82-99.93, that iswithin the 80 to 125% interval proposed by the current regula-tions of the EMEA for bioequivalence. There was no significantdifference in time to maximum concentration median Tmax, itwas 1h for both formulations. 90% confidence intervals of Tmaxcalculated according to the Hauschke non parametric methodwere 83.5 to 116. The overall bioavailability judged from AUC0-72h was found mean value (SD) of Digoxina test was 21.06(3.96) ng/mL and Digoxina reference was 20.49 (3.98). Theratio between logarithmically transformed means of Digoxinatest and Digoxina Teofarma reference was 103.04 with a 90% CI

of 97.36-109.06, that is within the 90 to 111% interval proposedby the current regulations of the EMEA for bioequivalence fordrugs with narrow therapeutic range. These results suggestthat both formulations of digoxin were found to be bioequi-oth formulations of digoxin were found to be bioequi-valents and therefore interchangeable.

P.6. Contribucin de los diferentes subtipos decanales de calcio a la excitabilidad elctricaen rodajas de glndula adrenal de rata.

Albiana E., Hernndez-Guijo J.M.

Hemos determinado las propiedades electrofisiolgicas delas clulas cromafines en rodajas de glndula adrenal de rata(RRCs), utilizando la tcnica de patch clamp en configuracinde parche perforado y caracterizando los canales de calcio im-plicados en la excitabilidad celular. Con un potencial de reposode -56mV, las clulas cromafines de rata disparan potencialesde accin de forma espontnea, stos se generan principal-mente por la entrada de Na+y en menor medida por la de Ca +2 y finalmente terminan por la activacin de canales de K+

tanto calcio como voltaje dependientes. Pequeas inyeccionesde corriente generan potenciales de accin con una frecuenciaaproximada de 7-9 Hz. La aplicacin de bloqueantes de los di-ferentes subtipos de los canales de Ca+2demostr que estos

canales tienen distintos papeles en la generacin y disparo delos potenciales de accin. La entrada de calcio a travs de ca-nales sensibles a nifedipino parece estar implicada en la repo-larizacin e hiperpolarizacin del potencial de accin, as comopara alcanzar el potencial umbral, mientras que los canales P/Q

parece que solo estn parcialmente implicados en la fase derepolarizacin. Los canales N no parecen intervenir en la exci-tabilidad celular. Los canales de potasio calcio dependientes

tienen un importantsimo papel en la excitabilidad en nuestromodelo de estudio. La aplicacin de Cd+2 permiti conocer laimportancia relativa real de la corriente de potasio dependien-te de calcio. El bloqueo del canal de tipo L por nifedipino re-dujo la activacin de la corriente a travs de los canales BK enun 60%. En cambio, el bloqueo de los canales N o P/Q apenasmostraron efecto en la corriente de estos canales. A pesar dela presencia de al menos tres tipos de canales de calcio, la ac-tivacin de los canales BK durante la repolarizacin y la hiper-polarizacin est acoplada predominantemente a la entradade calcio a travs de canales de calcio de tipo L, el cual apenasconstituye el 45% del total de la corriente de calcio. Este estu-dio demuestra que los canales de calcio de tipo L juegan un

papel clave en la modulacin de la excitabilidad de las clulascromafines de rata. Durante el potencial de accin, la entradade calcio a travs de canales de calcio sensibles a nifedipinoes el responsable de la activacin de canales de potasio quecontribuyen a las fases de repolarizacin e hiperpolarizacin.Financiado por el Instituto de Salud Carlos III (PI080227) y laFundacin Tefilo Hernando.

P.7. Cambios en la excitabilidad de la membrana,movimiento vesicular y liberacin cuantalen clulas cromanes de ratn excitadas porpulsos sostenidos de acetilcolina.

Calvo-Gallardo, E., Machado,D., Borges, R., Garca, A.G., de Die-go, A.M.G. Instituto Tefilo Hernando y Departamento de Far-macologa, Facultad de Medicina, Universidad Autnoma deMadrid; Unidad de Farmacologa, Facultad de Medicina, Uni-versidad de La Laguna

Las respuestas a acetilcolina (ACh) han sido ampliamente estu-diadas en las clulas cromafines de varias especies animales, asaber: gato, perro, cerdo, vaca, rata, jerbo, cobaya y humano.La contribucin de los receptores nicotnicos y muscarnicos aestas respuestas tambin ha sido extensamente analizada. Es

sorprendente, sin embargo, que solo est disponible un es-tudio con datos limitados sobre los efectos de los receptoresmuscarnicos en la excitabilidad de la membrana en mdu-la adrenal intacta de ratn (Nassar-Gentina et al., 1998, Am JPhysiol 254:C675-83). Dado que los ratones C57 son amplia-mente utilizados para desarrollar modelos transgnicos dediversas enfermedades, pensamos que sera de inters estu-diar los efectos de una estimulacin prolongada con 100Mde ACh (para describir la respuesta transitoria de la activacindel receptor nicotnico) en la excitabilidad de la membrana,liberacin cuntica de catecolaminas y movimiento vesicularen clulas cromafines de ratones C57. La ACh produjo poten-ciales de accin seguidos de una despolarizacin sostenida.

Estas dos fases pueden ser explicadas por una corriente deentrada que se inactiva rpidamente, seguida por una peque-a corriente residual no inactivable, producida por la ACh. Ladespolarizacin parece estar asociada al bloqueo por la AChde las corrientes de salida de K+dependientes de Ca2+. La ACh


4/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

activa una respuesta cuntica de vesculas nicas consistenteen una rfaga transitoria de espigas secretoras, seguida de unarespuesta menor no inactivable; estas dos respuestas pueden

ser asociadas, respectivamente, a la activacin de los recepto-res nicotnicos y muscarnicos. Estas respuestas fueron parale-las a cambios similares en los movimientos vesiculares, comose observ con microscopa TIRF. Estos datos sern tiles pararealizar experimentos comparativos para estudiar alteracionesde la excitabilidad celular y la liberacin de neurotransmisoresen ratones C57 transgnicos modelos de la enfermedad deAlzheimer y de esclerosis lateral amiotrfica, ambas enferme-dades de inters en nuestro laboratorio.

P.8. El agonista 7 nicotnico PNU 282987 reducela muerte celular inducida por privacinde oxgeno y glucosa: implicacin de la

microglia.

Parada, E., Egea, J., Negredo, P.,Buenda, I.,Lpez, M.G.InstitutoTefilo Hernando, Universidad Autnoma de Madrid. Departa-mento de Farmacologa y Teraputica; Facultad de Medicina,Universidad Autnoma de Madrid. Servicio de FarmacologaClnica. Hospital Universitario de la Princesa, Madrid Departa-mento de Anatoma, Histologa y Neurociencia; Facultad deMedicina, Universidad Autnoma de Madrid.

Tras evidenciar la proteccin post-estrs del agonista selecti-vo de los receptores nicotnicos 7, PNU 282987, en trabajos

anteriores del grupo (Parada E, et al, 2010), nos propusimosinvestigar si el mismo compuesto era capaz de proteger enun modelo ms complejo como es el cultivo organotpico derodaja de hipocampo. Empleamos la privacin de oxgeno yglucosa (POG) como modelo de isquemia in vitro en cultivosorganotpicos de hipocampo rata de 8-9 das. La lesin celularse cuantific usando las tcnicas de medida de necrosis de io-duro de propidio (IP) y del mtodo de reduccin del MTT. Tras7 das en cultivo, las rodajas de hipocampo se sometieron aun periodo de privacin de oxigeno y glucosa (POG) durante15 minutos y, posteriormente, se mantuvieron durante 24 h.Tras dicho periodo la muerte celular increment a un 180,2+2,1

% respecto a la basal. El agonista nicotnico

7, incubado du-rante las 24 h post-POG, redujo la muerte celular de formaconcentracin dependiente; a la concentracin de 10 mM, elPNU 282987 redujo de forma significativa la muerte celular aun 110,1 9,1 %. El PNU 282987 aument la expresin de laenzima antioxidante hemoxigenasa-1 (HO-1) hasta dos vecesla basal, vindose el mayor aumento de sta a la concentra-cin de 10 M. Para corroborar que la proteccin ofrecida pornuestro compuesto era debida fundamentalmente al aumentode la expresin de esta enzima, se usaron cultivos de rodaja dehipocampo de ratn KO Nfr2 (factor de transcripcin que regu-la la expresin inducible de numerosos genes de enzimas de-toxificantes y antioxidantes, entre ellos la HO-1. Para analizar el

papel antiinflamatorio que podra ejercer el agonista nicotnico7 en este modelo, se evalu la expresin de la microglia acti-vada. El PNU 28298 a 10 M revirti la microgliosis producida

por la POG hasta niveles cercanos a la basal. Tambin se midila expresin de una de las citoquinas anti-inflamatorias msimportante como esIL10 y de su receptor IL10R1A por Q-PCR. A

la concentracin de 10 M, el PNU 282987 duplic la expresinde IL10. Para determinar la implicacin de la microglia en elpapel protector del PNU, se realiz la deplecin in vitro desta, usando una toxina dirigida hacia este tipo celular, la Mac1-sap. Los resultados obtenidos sugieren que una intervencinsobre los receptores nicotnicos7 neuronales puede poner enmarcha mecanismos antiinflamatorios e induccin de enzimasanti-oxidantes, como la HO-1, capaces de ofrecer neuroprotec-cin ante un estmulo isqumico.Financiado por MICIIN Ref:SAF2009-12150 e Instituto Carlos IIIRef: RETICS-RD06/0026

P.9. Desconjugacin vascular del glucurnido de

quercetina.

Menndez,C., Dueas, M., Gonzalez-Manzano, S., Moreno,L.,Cogolludo, A., Duarte, J., Santos-Buelga, S., Prez-Vizcaino, F.Departamento de Farmacologia, Facultad de Medicina, UCM.Instituto de Investigacin Sanitaria del Hospital Clnico SanCarlos (IdISSC). Madrid. Ciber Enfermedades Respiratorias (CI-BERES). Instituto de Fisiologa, Benemrita Universidad Auto-noma de Puebla, Mexico. Servicio de Anatomia Patolgica,Hospital Universitario de Getafe, Madrid. Department of Pedi-atrics, Maastricht University Medical Center (MUMC+), Schoolfor Oncology and Developmental Biology (GROW), Maastricht,

the Netherlands.

El consumo de flavonoides en la dieta se asocia con una reduc-cin de la morbi-mortalidad cardiovascular. Dado que la quer-cetina, el principal flavonoide de la dieta, se metaboliza rpi-damente dando metabolitos glucuronizados menos activoso inactivos y que las concentraciones de quercetina libre enplasma son muy bajas, se ha puesto en duda una gran cantidadde datos cientficos acumulados durante dcadas en ensayos invitro con los compuestos no conjugados. En el presente estu-dio, nos planteamos estudiar si la quercetina-3-O-glucurnido(Q3GA) se puede desconjugar in situy si esta desconjugacin

da lugar a un efecto biolgico. La quercetina y el Q3GA se per-fundieron a travs del lecho mesentrico aislado. La quercetinase metaboliz rpidamente mientras que las concentracionesde Q3GA se redujeron lentamente, acompaadas de un au-mento progresivo de quercetina en el lquido de perfusin yen el tejido durante 6h. Este efecto se previno por el inhibidorde -glucuronidasa sacarolactona. La incubacin de anillosde arteria mesentrica montados en un bao de rganos conQ3GA durante 1 h dio lugar a una inhibicin significativa de larespuesta contrctil que tambin se previno con sacarolactona.Adems, la administracin intravenosa de Q3GA dio lugar a unreduccin lenta y progresiva de la presin arterial, lo que de-muestra por primera vez efectos in vivo del Q3GA. Estos datos

sugieren que el Q3GA se comporta como un transportador dequercetina que se desconjuga in situ liberando la forma aglico-na que es el efecto final.


5/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

P.10. Efecto de la metanfetamina en la activacinde las metaloproteinasas: Implicacin en laneurotoxicidad.

Urrutia, A., Rubio-Araiz, A., Gutierrez-Lpez, M.D.; El Ali, A.,Hermann, D.M., OShea, E., Colado, M.I. Departamento de Far-macologa. Facultad de Medicina. Universidad Complutense deMadrid.

(+)-Metanfetamina (METH) induce, inmediatamente despusde su administracin, una respuesta hipertrmica y un proce-so de estrs oxidativo/nitrosativo que estn implicados en laneurotoxicidad dopaminrgica inducida por la droga (Krasno-va and Cadet, 2009). En diversos modelos experimentales am-bos factores aumentan la actividad de las metaloproteinasas(MMPs) (Alam et al, 2011; Rosenberg, 2009). El objetivo es eva-luar el efecto de METH sobre la expresin y actividad de MMPsy su relacin con la neurodegeneracin dopaminrgica produ-cida por la droga. Ratones C57BL/6J recibieron METH (4mg/kg,i.p cada 3 horas, 3 veces consecutivas) a 22C y a 4C y se sacri-ficaron 1h, 3h, 24h y 7 das despus. Un grupo de animales fueinyectado con el inhibidor de la actividad de MMPs Batimastat(50mg/kg, i.p. 30 min antes de la primera y ltima inyeccin deMETH). En estriado se cuantific la expresin de MMP-9, su ac-tividad (zimografa en gel) y localizacin (zimografia in situ) ascomo la fosforilacin de JNK1/2. Se cuantific la concentracinde dopamina (HPLC) y la densidad de su transportador (DAT)([3H]-WIN 35,428). METH aument la expresin y actividad

estriatal de MMP-9 1h despus del tratamiento nicamente.Simultneamente se observ un aumento en la fosforilacinde JNK1/2. Cuando METH se administr a animales manteni-dos a 4C, el aumento en la actividad de MMPs fue sustancial-mente menor. Una semana despus de la administracin deMETH se observ una reduccin en la concentracin estriatalde dopamina y en la densidad de DAT, efectos que no fueronmodificados por la administracin de Batimastat. METH induceun incremento en la actividad y expresin de MMP-9 que esparcialmente dependiente de la respuesta hipertrmica queinduce la droga pero que parece no estar implicado en la neu-rotoxicidad dopaminrgica.

Referencias:

1. Krasnova I and Cadet J. 2009. Methamphetamine toxicity andmessengers of death. Brain Res Rev, 60, 379-407

2. Alam M, Mohammad A, Rahman S, Todd K, Shuaib A. 2011.Hyperthermia up-regulates matrix metalloproteinases andaccelerates basement degradation in experimental stroke.Neurosci Lett, 495, 135-139

3. Rosemberg GA. 2009. Matrix metalloproteinases and theirmultiple roles in neurodegenerative diseases. Lancet Neur, 8,205-216

Financiado por: MICINN (SAF2010-21529; RD06/0001/006),PNSD (PR47/10-17826), UCM (910258), FEDER y RTA.

P.11. La activacin de PPAR/previene laalteracin de la relajacin va AMPc enarterias coronarias expuestas a alta glucosa.

Barreira, B., Moral, J., Moreno, L., Moreno, E., Menndez, C., Es-colano, L., Duarte, J., Prez Vizcano, F., Cogolludo, A.Departamento de Farmacologa. Facultad de Medicina. Univer-sidad Complutense de Madrid. Departamento de Farmacolo-ga. Facultad de Farmacia. Universidad de Granada.

En diversos modelos de diabetes se ha encontrado que, ade-ms de disfuncin endotelial, las arterias coronarias muestranuna reducida relajacin inducida por la va del AMPc. En losltimos aos, se ha puesto de manifiesto que los agonis-tas de PPAR/ producen efectos beneficiosos en diversaspatologas tales como la hiperlipidemia, la aterosclerosis,la obesidad y la diabetes. El objetivo del presente estudioes determinar el posible efecto protector de los agonistasPPAR/ sobre la relajacin inducida por la va del AMPc enla diabetes experimental. Para ello, se utilizaron anillos dearteria coronaria de ratas Wistar macho incubados duran-te 20 horas en un medio con un contenido de glucosa bajo(5mM) o alto (30mM), en ausencia o en presencia de GW0742 (10-6 M o 10-5M), agonista selectivo de PPAR/. Las arteriascoronarias, pero no las pulmonares, presentaban una menorrelajacin al activador de AMPc forskolina tras la incubacincon alta glucosa. El tratamiento con Gw0742 aumentaba demanera concentracin dependiente la relajacin inducida por

forskolina y su efecto se prevena en presencia del antagonistaselectivo de PPAR/GSK0660 (10-6M). El tratamiento con elinhibidor de los canales Kv (DPO-1, 10 -6M), reduca la relajacininducida por forskolina en arterias coronarias expuestas a bajaglucosa o a alta glucosa + Gw0742 pero no en las incubadascon alta glucosa + vehculo. As, en presencia de DPO-1, la re-lajacin inducida por forskolina era similar en los tres grupos.En conclusin, la exposicin a alta glucosa reduce la relajacininducida por la va del AMPc, mediada a travs de la activacinde canales Kv, en arterias coronarias. La activacin de recep-tores PPAR/ previene dicha alteracin. Por tanto, nuestrosdatos sugieren que la activacin de receptores PPAR/tiene

una accin beneficiosa sobre la disfuncin vascular diabtica.

P.12. Irvalec Inserts into the Plasma MembraneCausing Rapid Loss of Integrity andNecrotic Cell Death in Tumor Cells.

Macas, A., David, M., Moreno, C., de la Cruz, A., Prieto, A.,Gonzlez, T., Galmarini, C.M., Valenzuela, C. Instituto de Inves-Instituto de Inves-tigaciones Biomdicas Alberto Sols (CSIC-UAM). Madrid.

Irvalec (PM02734, Elisidepsin) is a marine-derived cytotoxicdepsipeptide that is currently undergoing phase II clinical stud-ies in non-small cell lung cancer. In vitro treatment of tumor

cells with Irvalec induces necrotic cell death, a process asso-ciated with rapid loss of membrane integrity and subsequent


6/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

cell permeabilization. These results suggested an effect of thedrug, either on an ion channel or in the plasma membrane.In order to explore this hypothesis patch-clamp experiments

were performed in different tumor cell lines (HeLa, A549 andHCT116). Treated cells underwent rapid and dramatic mor-phological changes, including cell blebbing, severe swelling,plasma membrane permeabilization and cell lysis. Apart fromthe numerous small blebs, membranes from damaged cellsalso re-organized to form enormous bubbles surrounded bycell membrane. Using electrophysiological techniques, it wasshown that Irvalec induced an important increase in mem-brane conductance. The compound permeabilized the plasmamembrane to ions, even when the cells were not pulsed, caus-ing important changes in the holding current. It has been de-scribed that zinc attenuates the drastic effects of some mem-brane disrupting agents. Hence, to test if zinc exerted some

protective effect against Irvalec effects, cells were treatedwith this drug in the presence or absence of zinc salts and itsmembrane permeability was analyzed by using electrophysiol-ogy techniques, measuring the variations in the ion currentsinduced by the drug. Interestingly, in cells treated with zinc(10 mM), a decrease in the membrane permeability induced byIrvalec was observed. Altogether, these results suggest thatIrvalec induces a rapid membrane permeabilization that leadto a necrotic cell death.Supported by CICYT SAF2010-14916 and FIS (RD06/0014 /0006)Grants.

P.13. Actividad antiinamatoria del diterpenocido metil ster labdanoico (LAME) en unmodelo de sepsis en ratn.

Cuadrado, I., Cidre, F., Herranz, S., Estevez-Braun, A., de las He-ras, B., Hortelano, S. Departamento de Farmacologa, Facultadde Farmacia, Universidad Complutense, Plaza Ramn y Cajals/n, Madrid. Unidad de Inflamacin y Cncer. Centro Nacionalde Microbiologa, Instituto de Salud Carlos III, Madrid. InstitutoUniversitario de Bio-Orgnica Antonio Gonzlez. Universidadde La Laguna, Tenerife.

Los productos naturales siguen constituyendo una fuente po-tencial de nuevos agentes teraputicos. En estudios previoshemos evaluado la actividad antiinflamatoria de una seriede diterpenos labdnicos derivados del labdanediol, capacesde inhibir la liberacin de mediadores inflamatorios como elxido ntrico (NO) y prostaglandina E2 (PGE2) en macrfagosRAW 264.7 (1), siendo el diterpeno cido metil ster labdanoi-co (LAME) el ms activo. En este trabajo hemos evaluado lasdistintas vas de sealizacin implicadas en el efecto antiinfla-matorio del diterpeno LAME, as como su posible efecto tera-putico en un modelo de sepsis en ratn. Nuestros resultadosmuestran que LAME es capaz de inhibir la liberacin de losmediadores NO, PGE2 y citoquinas implicadas en el proceso

inflamatorio (IL-6, TNF-e IP-10) en macrfagos. Mediante tc-nicas de Western blot y PCR cuantitativa se confirm la potenteinhibicin que el compuesto LAME ejerce sobre la expresinde las protenas NOS-2 y COX-2 a nivel transcripcional. Dichosefectos antiinflamatorios parecen estar mediados por la inhibi-

cin del factor de transcripcin nuclear NF-B y el bloqueo dela expresin de las protenas fosforiladas ERK y JNK, pertene-cientes a la familia de las MAPKs. Utilizando un modelo in vivo

de sepsis inducida por el lipopolisacrido LPS en ratones se ob-serv que LAME aumentaba la supervivencia de los animalestratados, disminuyendo los niveles circulantes de citoquinas(TNF-e IL-6). En conjunto, los datos obtenidos muestran queLAME podra constituir una estrategia teraputica en el trata-miento del proceso inflamatorio durante la sepsis.

(1)Girn N, Prez-Sacau E, Lpez-Fontal R, Amaro-Luis JM,Hortelano S, Estevez-Braun A, de las Heras, B.. Eur. J. Med. Chem.45: 3155-3161 (2010).

P.14. Alteraciones en la funcin de lasinervaciones adrenrgica y nitrrgica

inducidas por LPS.

Sastre, E., Blanco-Rivero,J., Lahera, V., Balfagn, G..Departamento de Fisiologa, Facultad de Medicina, Universi-dad Autnoma de Madrid. Departamento de Fisiologa. Facul-tad de Medicina. Universidad Complutense de Madrid.

El shock endotxico se caracteriza por hipotensin, colapsovascular y fallo orgnico mltiple. El tono vascular de la arteriamesentrica est regulado, entre otros mecanismos, por lasinervaciones adrenrgica y nitrrgica. No existen estudios queanalicen el efecto del LPS, utilizado como modelo de shock

endotxico, en la regulacin del tono vascular mesentrico porla inervacin adrenrgica y nitrrgica. Se utilizaron segmentoscontrol e incubados con 10 g/mL de LPS (2 y 5 horas) de ar-teria mesentrica superior de ratas macho Wistar. Se analizen ambos grupos la respuesta a estimulacin elctrica (EE, 200mA, 0.3 ms, 18 Hz, 30 s) en presencia/ausencia de 0.1 mmol/Ldel inhibidor inespecfico de la xido ntrico sintasa (NOS) L-NAME. Se analiz la respuesta vasomotora a noradrenalina(NA) y al donante de xido ntrico (NO) DEA-NO, la liberacinde NA y NO, y la expresin proteica de la NOS neuronal fos-forilada (P-nNOS). La exposicin a LPS indujo una respuestabifsica: a las 2 horas la respuesta contrctil a EE se increment,mientras que a las 5 horas la respuesta contrctil disminuy a

los niveles control. La preincubacin con L-NAME incrementla respuesta vasoconstrictora a todas las frecuencias. Este in-cremento fue menor en arterias preincubadas con LPS tanto alas 2 como a las 5 horas. La respuesta a NA fue mayor en ratasincubadas con LPS a las 2 horas, mientras que a las 5 horasfueron similares a la situacin control. La liberacin de NA no semodific por la preincubacin con LPS. El tratamiento con LPSen ningn caso modific la respuesta vasodilatadora a DEA-NO. La liberacin basal de NO aument por la preincubacincon LPS. Esye aumento se vio abolido por el tratamiento con elinhibidor de la iNOS 1400W. La liberacin de NO inducida porEE y la expresin de P-nNOS disminuyeron con el tratamiento

con LPS en igual medida a las 2 y las 5 horas. Estos resultadossugieren que tras la incubacin con LPS durante 2 horas, lasinervaciones adrenrgica y nitrrgica tratan de contrarrestar lavasodilatacin inducida por LPS, mediante una disminucin dela funcin nitrrgica y un aumento de la funcin adrenrgica.


7/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

La preincubacin con LPS durante 5 horas mantiene la dismi-nucin en la funcin nitrrgica y restablece la funcin adre-nrgica. Financiado por el Ministerio de Ciencia e Innovacin

(SAF2009-10374).

P.15. El CGP37157 protege a las neuronas de lacorteza motora frente a la citotoxicidadproducida por el glutamato.

Arranz Tagarro, J.A., Yez Jato, M., Merino Sanz,C.Garca, A.G.

Instituto Tefilo Hernando y Departamento de Farmacologa yTeraputica. Facultad de Medicina. Universidad Autnoma deMadrid. Espaa. Departamento de Farmacologa. Facultad deFarmacia. Universidad de Santiago de Compostela.

El glutamato es el principal neurotransmisor excitador del

sistema nervioso central de los mamferos. Presenta diversosreceptores, entre los que se encuentran los receptores N-me-til-D-aspartato (receptores NMDA). La citotoxicidad producidapor exceso de glutamato est mediada por la activacin deestos receptores, producindose un aumento en la concentra-cin citoslica del catin calcio ([Ca2+]c) de forma crnica porencima de unos niveles crticos que desencadena una cascadade reacciones patolgicas que causan la muerte neuronal. Lacirculacin mitocondrial del Ca2+(mCC) se debe a la accin dedos transportadores: el captado por el uniportador y el libera-do por el intercambiador Na+/Ca2+ (mNCX). Esta mCC mitigalos cambios bruscos de la [Ca2+]cque se producen durante la

actividad neuronal, mantenindose en niveles adecuados parael funcionamiento ptimo de las neuronas. Considerando loexpuesto con anterioridad, nos propusimos en este estudioinvestigar si la modulacin farmacolgica del mNCX podratener efectos neuroprotectores en las neuronas de la cortezamotora sometidas a estrs por glutamato, empleando para elloel CGP37157 (CGP), que es un inhibidor del mNCX. Las neuronasse sometieron a estrs por glutamato a las concentraciones(0.1 y 1) mM de forma aguda y crnica, y se trataron con CGPa las concentraciones (0.3, 1, 3, 10 y 30) M. El protocolo queseguimos fue una preincubacin con el frmaco durante 24horas, tras las que se aadi el glutamato. ste se dej una hora

(agudo) o 24 horas (crnico) en coincubacin con el frmaco.En el primer caso, cuando se elimin el glutamato, se adiciona los pocillos medio nuevo con el frmaco hasta alcanzar las24 horas. Finalmente, se midi la viabilidad celular medianteel ensayo del MTT. Nuestros resultados muestran una protec-cin estadsticamente significativa a las concentraciones (3, 10y 30) M, salvo en el caso de la incubacin crnica durante24 horas con glutamato a la concentracin 1 mM donde soloprotega la concentracin ms alta de CGP (30 M). En basea los resultados obtenidos y conociendo que el CGP produceun bloqueo parcial de los canales de calcio dependientes devoltaje de la membrana plasmtica, existe la posibilidad de quetal efecto, unido a su accin inhibidora del mNCX, contribuya

a la neuroproteccin.

P.16. Inuencia del envejecimiento en la respu-esta vasoconstrictora inducida por estimu-lacin elctrica en arteria mesentrica de

ratas hembra.

Del Campo, L., Sagredo, A. Aras, R., Ferrer, M. Departamentode Fisiologa. Facultad de Medicina. Universidad Autnoma deMadrid.

Se ha descrito que tanto el sistema nervioso como el endo-crino modulan la funcin vascular. As, en la arteria mesen-trica de rata, la inervacin ejerce un importante papel en laregulacin del tono vascular a travs de la liberacin de losneurotransmisores noradrenalina (NA), xido ntrico (NO) y elpptido relacionado con el gen de la calcitonina (CGRP). A suvez, las hormonas sexuales modulan la liberacin y funcin delos distintos neurotransmisores. Por otra parte, est descritoque el envejecimiento, que cursa con niveles disminuidos dehormonas sexuales, est fuertemente asociado al desarrollode enfermedades cardiovasculares cuya incidencia es sexo-de-pendiente. Puesto que la mayora de los estudios han analiza-do la influencia del envejecimiento sobre la funcin endotelialen animales macho, el objetivo del presente estudio es analizarel efecto del envejecimiento sobre la regulacin nerviosa deltono vascular en animales hembra. Para ello se utilizaron ratashembra jvenes (6 meses) y envejecidas (22 meses), en las quese analizaron la presin arterial y los niveles sricos de 17b-estradiol y progesterona. En la arteria mesentrica superior se

analizaron: la respuesta contrctil y la liberacin de NA, NO yCGRP inducidas por estimulacin elctrica, y la respuesta va-somotora inducida por el donante de NO nitroprusiato sdi-co (SNP), CGRP y NA aadidos exgenamente. Los resultadosobtenidos mostraron que el envejecimiento: (i) no modific lapresin arterial; (ii) disminuy los niveles sricos de estradioly progesterona; (iii) no modific la liberacin de NA e incre-ment la respuesta contrctil a NA exgena; (iv) disminuyla liberacin de CGRP, mientras que no modific la respuestavasodilatadora a CGRP exgeno; (v) no modific la liberacinde NO ni la respuesta vasodilatadora a SNP. Estos resultadosindican que el incremento en la respuesta a NA y la disminu-

cin en la liberacin de CGRP, inducidas por el envejecimiento,podran participar en el incremento de la respuesta vasocons-trictora observada en estos animales. Asimismo, los cambiosinducidos por el envejecimiento podran correlacionarse conniveles disminuidos de hormonas sexuales. A pesar de estasmodificaciones, la presin arterial no se modifica por el enve-jecimiento lo que indica que otros mecanismos podran estarinterviniendo para compensar las alteraciones descritas.Financiado por el Fondo de Investigaciones Sanitarias(PI080831).
http://es.wikipedia.org/wiki/Receptor_NMDAhttp://es.wikipedia.org/wiki/Receptor_NMDA


8/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

P.17. Efecto neuroprotector del ITH33/IQM9.21en modelos de toxicidad inducida porkainato.

Gonzlez Curull, L., Egea,J., Negredo,P., Martn de Saavedra,M.D., Morgado Sanchez, A., Buenda Abaitua, I., Parada, E.,Lpez, M.G. Departamento de Farmacologa y Teraputica.Instituto Tefilo Hernando. Facultad de Medicina. UniversidadAutnoma de Madrid.

El ITH33/IQM9.21 (N-benzoyl-LGLu[NH-2-(1-benzylpiperidin-4-yl)ethyl]-O-nHex) es un compuesto nuevo perteneciente a lafamilia de los derivados glutmicos sintetizado en el Institutode Qumica Mdica-CSIC (Drs. Rodriguez-Franco, Conde y Arce).Este compuesto ha sido diseado y sintetizado como un ligan-do multidiana con el fin de producir un efecto neuroprotectorms eficiente al actuar en varias de las vas de sealizacin quellevan a la muerte neuronal. El objetivo de este estudio ha sidoevaluar el potencial efecto neuroprotector del ITH33/IQM9.21tanto en modelos in vitro (rodajas de hipocampo de rata) comoen modelos in vivo(inyeccin intrahipocampal en ratas) en unmodelo de excitotoxicidad inducida por kainato. En el mode-lo in vivo, a las ratas SD se les inyect salino, o kainato (800mM) solo o junto con el compuesto segn las coordenadas: -3mm anteroposterior, 2 mm mediolateral y 3,5 mm de altura,para acceder al hipocampo. Se inyect un volumen final de2,5 microL en 2,5 minutos. Pasados tres das tras la inyeccinintrahipocampal se sacrificaron los animales y se realizaron

secciones cerebrales; stas se tieron con Nils y se cont elnmero de neuronas piramidales en CA3 mediante esterolo-ga. Se evaluaron las concentraciones de 3 y 10 mM de ITH33/IQM9.21. La concentracin de 3 mM no ofreci proteccinsignificativa, pero la de 10 mM consigui rescatar un 45% delas neuronas piramidales en CA3. En el modelo in vitro, en lasrodajas de hipocampo de rata expuestas a kainato (500 mM)durante 2 h, aument la muerte celular a un 150% respecto ala basal, en la regin CA3. En estas condiciones experimentales,la co-incubacin del compuesto ITH33/IQM9,21 (a 1uM, 3uM o10 uM) con el txico ofreca una proteccin mxima de 28% ala concentracin de 10 mM. La muerte celular se ha evaluado

mediante la doble tincin con ioduro /Hoescht. Tambin seha evaluado la produccin de ROS y el potencial de membra-na mitocondrial con las sondas fluorescente DCFDA y TMRE,respectivamente, y se han cuantificado protenas por westernblot. Con el fin de determinar que rutas neuroprotectoras me-dian la accin del compuesto, en otra serie de experimentosobservamos que el antagonista de la va PI3K/Akt (LY294002)bloquea las acciones protectoras del ITH33/IQM9.21, mientrasque el antagonista de ERK1/2 (PD098059) no produce un blo-queo significativo en las acciones protectoras del compuesto.Por tanto, estos datos sugieren que la va de sealizacin intra-celular PI3K/AKt participa en el mecanismo neuroprotector delITH33/IQM9,21. En conclusin, estos experimentos muestran la

capacidad neuroprotectora del ITH33/IQM9.21 convirtindoloen un frmaco potencialmente til para el tratamiento de en-fermedades donde la viabilidad neuronal se ve afectada, comoen el caso de la isquemia cerebral o ciertas enfermedades neu-rodegenerativas.

Financiado por MICINN SAF2009/12150, Instituto de Salud Car-los III RETICS-RD06/0026 y Comunidad Autnoma de MadridRef. SAL2006/0275

P.18. El eje angiotensina-(1-7)/mas exhibepropiedades antiinamatorias en clulasvasculares humanas de msculo liso.

Villalobos, L., Romacho, T., Cercas, E., Elgueta, V., Snchez-Fer-rer, C.F., Peir, C. Departamento de Farmacologa y Terapu-Departamento de Farmacologa y Terapu-tica, Facultad de Medicina. Universidad Autnoma de Madrid.

La angiotensina (Ang)-(1-7) es un heptapptido que ejerce susacciones a travs del receptor Mas acoplado a protenas G yque posee acciones contrarias a la Ang II. El objetivo de estetrabajo fue: 1) Determinar la posible accin antiinflamatoria

de la Ang-(1-7) en clulas de msculo liso de aorta humana(CMLAH) estimuladas con Ang II o la citoquina interleuquina(IL)-1, como molcula inflamatoria independiente del sistemarenina angiotensina (SRA), 2) Estudiar el papel del receptor Mascomo mediador de dicha accin, y 3) Definir la ruta de sealiza-cin celular por medio de la cual el eje Ang-(1-7)/receptor Masejerce su accin antiinflamatoria en las CMLAH. Los niveles dela enzima xido ntrico sintasa inducible (iNOS), se determina-ron por Western blotting y los niveles de liberacin de xidontrico (NO) por el mtodo de Griess. La actividad de la enzimaNADPH oxidasa se determin por el mtodo de quimiolumis-cencia derivada de lucigenina. La induccin de la activacin

del factor de transcripcin NF-B, se detect por el ensayo deretardo de movilidad electrofortica (EMSA).

La estimulacin de las CMLAH con (Ang II)-(100 nM) o (IL)-1 (2,5 ng/ml) durante 18 horas aument significativamentelos niveles de iNOS y la liberacin de NO. En presencia de laAng-(1-7) (100 nM), la induccin de iNOS y la liberacin de NOinducida por Ang II e (IL)-1 disminuyeron significativamente.Dicho efecto de Ang-(1-7) se aboli en clulas pretratadas conel antagonista del receptor Mas A779 (1 M). Anlogamente,la estimulacin de las CMLAH con Ang II e (IL) -1provoc unaumento de la actividad NADPH oxidasa, que se vio reducida

por la Ang-(1-7) en un 44% y 53%, respectivamente. Tambinse determin la activacin del factor de transcripcin NF-Bpor Ang II e (IL)-1, que disminuy en presencia de la Ang-(1-7) en un 44% y 40%, respectivamente El antagonista delreceptor Mas A779 (1 M), aboli significativamente la accininhibitoria de la Ang-(1-7) sobre la activacin de la NADPHoxidasa y de NF-kB. Finalmente, para establecer la secuenciade sealizacin de la accin antiinflamatoria de la Ang-(1-7)se emplearon inhibidores como la apocinina y el PDTC, quebloquean a la enzima NADPH oxidasa y al factor de transcrip-cin NF-B, respectivamente. As, la apocinina (30 M) redujolos niveles de iNOS inducidos por Ang II e (IL)-1 en un 37% y50 %, respectivamente y la liberacin de nitritos en un 57% y

45%, respectivamente. En presencia PDTC (100 M), los nivelesde iNOS inducidos por Ang II e (IL)-1disminuyeron significati-vamente en un 42% y 53 %, respectivamente. Estos resultadossugieren que la Ang-(1-7) a travs del receptor Mas previeneparcialmente la inflamacin del msculo liso vascular inducida


9/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

no slo por Ang II, sino tambin por otras molculas inflamato-rias independientes del SRA, como la IL-1. La Ang-(1-7) atenadicha inflamacin mediante el bloqueo de la enzima NADPH

oxidasa y la inactivacin del factor de transcripcin NF-B, loque se manifiesta en una disminucin de la expresin de iNOSy la liberacin de NO.

P.19. Prediccin del Sindrome de Gilbertmediante el polimorsmo UGT1A1*28.

Romn, M., Cabaleiro, T., Ochoa M.D., Talegn, M., Abad-San-tos, F. Servicio de Farmacologa Clnica. Hospital Universitariode la Princesa. ITH. Madrid.

El sndrome de Gilbert (SG) es una alteracin crnica carac-terizada por una hiperbilirrubinemia leve, no conjugada y no

hemoltica. Est causado por alteraciones en la UDP-glucuro-nosiltransferasa (UGT1A1), su polimorfismo ms comn es elUGT1A1*28. El objetivo de este trabajo es comparar los nivelesde bilirrubina total (BT), as como las enzimas hepticas, con losgenotipos de las enzimas metablicas de fase II en voluntariossanos. Para la determinacin de los genotipos de las enzimasmetabolizadoras de fase II se extrajo DNA de 168 voluntarios.La determinacin de cada uno de los polimorfismos se lleva cabo mediante un chip de genotipado, (Pharmachip). Lasdeterminaciones bioqumicas de los voluntarios se obtuvieronmediante las analticas de reclutamiento de 5 ensayos clnicosde bioequivalencia. Un 94% de los voluntarios (n=158) tenan

niveles de BT normales (MDS 0.660.25) y un 6% (n=10) tenanbilirrubinas altas (MDS 1.580.30). No encontramos diferen-cias entre las medias de concentracin de BT entre hombres ymujeres. Un total de 77 sujetos presentaban la variante *1/*1de UGT1A1 (45.8%), 82 voluntarios la variante *1/*28 (48.8%) y9 voluntarios la variante *28/*28 (5.4%). Los voluntarios con ge-notipo *28/*28 tienen una mayor concentracin de BT en san-gre (1.240.52 mg/dl) con respecto a los que tienen el genotipo*1/*1 (0.630.24 mg/dl) (p0.001) as como con los heterocigo-tos *1/*28 (0.730.33 mg/dl) (p0.001). Los pacientes con estamutacin no tienen alteraciones de las dems enzimas analiza-das. No hay ninguna relacin de los polimorfismos de las otras

enzimas de fase II con la elevacin de BT u otros parmetros.Estos resultados sugieren que, de los parmetros analizados,slo obtuvimos una relacin entre los niveles de BT y el genUGT1A1. Los voluntarios con la BT alta son homocigotos para lamutacin UGT1A1*28, mientras que los individuos heterocigo-tos para dicha mutacin solo presentan niveles altos de BT enalgunos casos. La elevacin de BT no se asocia a ningn otropolimorfismo estudiado. Por ltimo concluimos que se puedeconsiderar que el genotipo del polimorfismo UGT1A1*28 es tilpara el diagnstico del Sndrome de Gilbert.

P.20. Design of a polymeric microparticleformulation of prilocaine.

Bragagni, M.1, Gil Alegre, M.E.2, Mura, P.A.3. 1. Department ofPharmaceutical Sciences. Faculty of Pharmacy. University ofFlorence (Italy). 2. Departamento de Farmacia y Tecnologa Far-macutica. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense de

Madrid. 3. Departamento de Ciencias Farmaceuticas. Facultadde Farmacia. Universita degli Studi di Firenze (Italia).

The use of injectable local anesthetics for the treatment ofsevere postoperative pain is limited by the short duration ofthe painkilling effect. A time controlled delivery system couldavoid several administrations, use of catheters and hospitaliza-tion. The aim of the work was the development, optimizationand characterization of an injectable microparticle formulationof prilocaine, an amino-amide type local anesthetic suitable forintravenous, subcutaneous and intramuscular administration.The base form of the drug was extracted in dichloromethanefrom an alkalinized suspension of prilocaine hydrochloride. Mi-croparticles were prepared by double emulsion method usingPLGA polymer (type RG504) and polyvinyl alcohol (PVA). In or-der to calculate the efficacy of encapsulation, the content of

non-encapsulated drug in the filtrate was assayed by UV-VISspectrophotometry (indirect determination). The encapsula-ted drug was quantified after disruption of microparticles inorganic solvents (direct determination). The morphology andsize of MP were investigated by microscopy and dynamic lightscattering analysis. In order to optimize the formulation, thevariation of several parameters was investigated: concentra-tion of PVA, use of isopropanol and span 80 in the formationof the emulsions, pH and volumes of the aqueous phases. Invitro drug release studies of the optimized formulation werealso performed. Microparticles of PLGA encapsulating the localanesthetic prilocaine were developed and fully characterized.

The optimized formulation, biocompatible and able to providea sustained drug release, could represent a novel pharmacolo-gical tool in the treatment of postoperative pain.

P.21. El nuevo compuesto neuroprotector ymultidiana ITH33/IQM9.21 bloquea laentrada de calcio y la exocitosis en clulascromafnes.

Maroto, M.,de Diego, A.M.G.,Albiana, E.,Fernandez-Morales,J.C., Caricati-Neto, A., Jurkiewicz, A.Yez, M., Rodriguez-Fran-co, M.I., Conde, S., Arce, M.P., Hernndez-Guijo, J.M., Garca,

A.G.

Instituto Tefilo Hernando; Departamento de Farmacolo-ga y Teraputica; Instituto Sanitario de Investigacin, Serviciode Farmacologa Clnica, Hospital Universitario de la Princesa.Facultad de Medicina, Universidad Autnoma de Madrid, Ma-drid. Instituto de Qumica Mdica, Consejo Superior de Inves-tigaciones Cientficas, CSIC, Madrid. Departamento de Farma-Departamento de Farma-cologa, Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal deSo Paulo, Brasil. 6Departamento de Farmacologa, Facultad deFarmacia, Universidad de Santiago de Compostela.

El nuevo compuesto ITH33/IQM9.21 (ITH/IQM) pertenece auna nueva familia de derivados del aminocido L- GLUTMICOcon propiedades antioxidantes y neuroprotectoras en mo-

delos de ictus isqumico tanto in vivo como in vitro. Ya queel lesin neuronal que se produce tras un insulto isqumicoest estrechamente relacionado con una excesiva entrada delcatin Ca2+, nos propusimos en este estudio investigar si elcompuesto bloqueaba las seales de Ca2+citoslicas ([Ca2+]


10/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

c) y la consiguiente respuesta exocittica ante estmulos des-polarizantes. En poblaciones de clulas cargadas con la sondafluo-4, el compuesto ITH/IQM redujo la [Ca2+]c evocada por

pulsos de K+

con una CI50 de 5,31 M. En clulas cargadas confura-2 y a la concentracin de 10 M, el ITH/IQM disminuytanto el rea como la amplitud del pico del transiente de Ca2+evocado por alto K+en un 40% y 80%, respectivamente. Estamisma concentracin tambin bloque la secrecin cuantal decatecolaminas evocada por K+ en clula nica (78%) y en po-blaciones (55%). Todos estos efectos fueron consecuencia delbloqueo de los canales de calcio voltaje-dependientes (CCVD).El compuesto mostr una CI50de 6,52 M en la disminucinde la corriente global de Ca2+ que permeaban tales canales. A10 M, el ITH/IQM tambin bloque la corriente de K+depen-diente de Ca2+ dejando el componente voltaje dependientetotalmente intacto. La corriente de entrada de Na+nunca se

vio afectada. Con todo esto, creemos que gran parte de losefectos del compuesto aqu descritos podran contribuir en laneuroproteccin ejercida por el ITH/IQM en las neuronas vul-nerables durante un insulto isqumico-cerebral.

P.22. Anti-inammatory effects of acanthoicacid-derived diterpenoids.

Pimentel Santillana, M., Gonzlez Travs, F., Terrn Arcos, V.,Martn Sanz, P., Bosc Gomar, L.

In last years the level of research activity into terpenoids has in-

creased to search for new anti-inflammatory natural products;however, only few reports have examined the mechanisms in-volved in the anti-inflammatory actions of these molecules. Inthis study, five acanthoic acid-derived molecules were tested forpotential anti-inflammatory activity. One of these compounds,DTP5, was selected to evaluate its effects on the generation ofinflammatory mediators in peritoneal macrophages activatedwith different TLR ligands. The results obtained showed thatDTP5 exerts potent inhibitory effects on the expression of NF-B responsive genes, such as iNOS and COX-2, after stimulationwith TLR2, TLR3 and TLR4 ligands. In addition, we observed aclear inhibition of pro-inflammatory cytokines released after

stimulation with TLR ligands. Examination of the effects of thisditerpenoid on NF-B signaling showed that DTP5 inhibits IKKphosphorylation, preventing the IB-degradation, after ac-tivation with TLR2 and TLR4 ligands. However, there werenteffects with TLR3 ligand. Inhibition of MAPKs pathways wasalso analysed. p-p38 was reduced in macrophages stimulatedwith TLR ligands and pre-treated with DPT5, while p-ERK wasdecreased only in LPS-stimulated macrophages and JNK phos-phorylation induced by LPS, poly(I:C) and LTA, was unaffectedby DTP5. On the other hand, treatment of macrophages withditerpenoids resulted in an up-regulation of Akt phosphor-ylation, suggesting that this Akt phosphorylation induced byDTP5 could explain some anti-inflammatory effects observed

with this diterpenoid. In conclusion, the anti-inflammatory ef-fects of this compound, together with its low cell toxicity, sug-gest potential therapeutic applications in the regulation of theinflammatory response.

P.23. Las especies reactivas de oxgeno participanen la hipertension y en las alteraciones car-diovasculares inducidas por angiotensina

II.

Avendao, M.S., Martnez-Revelles, S., Garca-Redondo, A.B.,Aguado, A., Alonso, M.J., Briones, A.M., Salaices, M.1 Departa-mento de Farmacologa y Teraputica. Facultad de Medicina.Universidad Autnoma de Madrid.

En la hipertensin se ha descrito un incremento en los nivelesde Angiotensina II (Ang II) que se ha asociado a un aumentoen la produccin de especies reactivas de oxgeno (ERO) comoel anin superxido generado por la NADPH oxidasa, los cua-les a su vez, pueden contribuir a las alteraciones en la funcinvascular descritas en esta patologa. El propsito de este estu-dio fue analizar la participacin de ERO en la hipertensin, lahipertrofia cardaca y en las alteraciones en las respuestas fun-cionales en aorta de ratn infundidos con Ang II. Se utilizaronlos siguientes grupos de ratones C57BL6 (25-35 gr): 1) control;2) tratados con AngII (minibomba osmtica subcutnea, 1440g/kg/da, 14 das); 3) tratados con AngII y el inhibidor de laNADPH oxidasa, apocinina (1.5 mM) y 4) tratados con AngII yun mimtico de la superxido dismutasa 1(SOD1), Mito-TEMPO(0.7 mg/Kg/da). La presin arterial se midi mediante pletis-mografa de cola. Se determin la hipertrofia del ventrculo iz-quierdo y las respuestas funcionales de la aorta se analizaronmediante migrafo de alambres. La produccin in situ de

O2.- y de xido ntrico (NO) se determinaron mediante las son-das fluorescente hidroetidina (HE) y diaminofluoresceina (DAF),respectivamente. Los resultados indicaron que la infusin conAng II increment la presin arterial y tanto el tratamiento conapocinina como con Mito-Tempo disminuyeron dicho efecto(Control: 953.4 mm Hg; AngII: 1466.7 mm Hg p


11/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

participan en la hipertensin, en las alteraciones cardacas yen el incremento de las respuestas vasoconstrictoras inducidaspor AngII posiblemente a travs de la disminucin de NO. Ade-

ms, las especies reactivas de oxgeno son responsables de laincrementada participacin de prostanoides en las respuestasvasoconstrictoras inducida por Ang II.Financiado por MICINN (SAF 2006-02376, SAF 2009-07201)ISCIII (Red RECAVA, RD06/0014/0011) y FMM.

P.24. La propafenona modula los canalescardiacos de K+con recticacin internaKir2.x.

Gmez, R., Caballero, R., Amors, I., Barana, A., Dolz, P., de laFuente M.G., Tamargo, J., Delpn, E. Departamento de Farma-cologa. Facultad de Medicina. Universidad Complutense de

Madrid.

El aumento de la corriente de K+con rectificacin interna (IK1)estabiliza y acelera el giro de los frentes espirales que originanlas arritmias fibrilatorias. La IK1es generada por homotetrme-ros de protenas Kir2.1 a nivel ventricular y por heterotetrme-ros de protenas Kir2.1, 2.2, y 2.3 a nivel auricular. La propafeno-na (P) es un antiarrtmico muy eficaz para el tratamiento de lafibrilacin auricular que presenta efectos proarrtmicos a nivelventricular que limitan su uso. En este trabajo hemos analizadolos efectos de P sobre la IK1registrada en miocitos auricularesprocedentes de pacientes sometidos a ciruga cardiaca y sobre

las corrientes generadas por canales Kir2.1, 2.2, y 2.3 registra-das utilizando la tcnica del parche de membrana en clulas deovario de hmster chino transfectadas transitoriamente. La P (1M) no modifica la IK1registrada en miocitos auriculares huma-nos. La P a concentraciones en el rango 0.01-10 M aumenta,mientras que a concentraciones ms altas (20-100 M) inhibela IKir2.1generada a potenciales de membrana ms despolari-zados del potencial de inversin del K+. Por el contrario, la P noaumenta la IKir2.2ni la IKir2.3a ninguna de las concentracionesensayadas, inhibiendo ambas corrientes a concentraciones >20M. La P no aumenta la corriente generada por heterotetr-meros Kir2.1/Kir2.2 o Kir2.1/Kir2.3. Ms an, el aumento de la

IKir2.1 es suprimido por la sustitucin de la Cys311 por Ala, elresiduo presente en la posicin equivalente en canales Kir2.2y Kir2.3. El aumento tambin se suprime en canales Kir2.1 conmutaciones en los sitios citoplsmicos de unin de poliaminasD255R y E299A. La P aumenta el tiempo medio y la frecuenciade apertura de los canales Kir2.1 y, como consecuencia, la pro-babilidad de apertura de dichos canales. El bloqueo producidopor P no se modifica al aumentar el flujo de K+ a travs delcanal y aumenta en los mutantes D255R y E299A. Los resulta-dos demuestran que, a concentraciones teraputicas (1 M),la P aumenta la IKir2.1a potenciales de membrana fisiolgicosunindose al residuo Cys311 lo que aumenta la probabilidad deapertura de los canales. Adicionalmente, la P se une a un sitio

de baja afinidad presente en canales Kir2.x que no est en elporo. Estos resultados explicaran que sus efectos proarrtmi-cos sean especficamente ventriculares.

P.25. Efecto de las dietas grasas en el aprendizajeespacial y en el metabolismo de glutamatoen ratones.

Valladolid-Acebes,I., Merino, B., Morales, L., Barbas, C., Garca,A., Lorenzo, M.P., Fernndez-Alfonso, M., del Olmo, N., Cano, V.,Ruiz-Gayo, M. Departamento de Ciencias Farmacuticas y dela Alimentacin. Facultad de Farmacia. Universidad San Pablo-CEU. Madrid. Departamento de Qumica Analtica y Centro deExcelencia Metabolmica y Bioanlisis (CEMBIO). Facultad deFarmacia. Universidad San Pablo-CEU. Madrid. Instituto Plu-ridisciplinar-Facultad de Farmacia. Universidad Complutense.Madrid.

El glutamato, el neurotransmisor excitador ms abundante enel Sistema Nervioso Central, tras su liberacin y unin a re-ceptores sinpticos, se recapta por transportadores especficosentre los cuales estn el transportador neuronal (EAAT-3) y lostransportadores gliales (GLT-1, GLAST). Por otro lado, algunosautores apuntan a que la obesidad provoca el deterioro dedeterminados tipos de aprendizaje y la memoria, aunque losprocesos moleculares que subyacen a este fenmeno perma-necen sin esclarecer. El objetivo principal de este trabajo fueevaluar el efecto de un tratamiento de 8 semanas con unadieta de alto contenido en grasas (HF; 45% caloras procedende grasas animales) en i) el aprendizaje y la memoria depen-dientes de hipocampo y ii) el metabolismo del glutamato enel hipocampo. Para ello, utilizamos ratones C57BL/6 a los que

se les administr la dieta HF durante 8 semanas y tras el tra-tamiento se sometieron a ensayos de aprendizaje espacial enel laberinto radial de 8 brazos (RAM). Con el fin de conocersi estas dietas afectaban a la transmisin glutamatrgica, secalcularon la constante de Michaelis-Menten (KM) y la Vmax delos transportadores de glutamato en el hipocampo as comose identificaron por western blotting los transportadores deglutamato GLT-1, GLAST, EAAT-3 y las principales enzimas delmetabolismo de este neurotransmisor, la glutamina-sintasa(GS) y la glutamato-decarboxilsas (GAD-65 and GAD-67). Nues-tros resultados demuestran que los animales tratados con ladieta HF presentaron dificultades para el aprendizaje una tarea

en el RAM ya que tardaron ms tiempo y cometieron ms erro-res que los animales control al realizar dicha tarea. Los estudiosde la recaptacin de glutamato mostraron una disminucin enlaKMy un incremento en la Vmax de los transportadores enlos ratones HF. Adems, en los animales tratados con dieta HF,los transportadores GLT-1 y GLAST parecen estar regulados alalza, mientras que las enzimas de degradacin del glutama-to (GS, GAD-65 and GAD-67) estn reguladas a la baja. Estosresultados parecen indicar que las 8 semanas de tratamientocon dieta HF dificultan el aprendizaje espacial dependiente dehipocampo a travs de inducir alteraciones en el metabolismodel glutamato. Financiado por el Ministerio de Ciencia e Inno-vacin (SAF 2009-09714; SAF 2008-02902), la Universidad San

Pablo-CEU y la Universidad Complutense de Madrid.


12/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

P.26. Estudio de la contraccin neurognica en laarteria femoral de ratas Zucker obesas.

Martnez, A.C., Pagn, R.M., Hernndez, M., Garca-Sacristn,A., Prieto, D., Benedito, S. Seccin Departamental de FisiologaAnimal. Facultad de Farmacia. Universidad Complutense deMadrid.

Las alteraciones asociadas al sndrome metablico contri-buyen en gran medida a la disfuncin vascular. El sndromemetablico no slo acompaa, sino que precede y predice ladiabetes mellitus tipo 2. Entre las complicaciones a largo plazoms frecuentes de este tipo de diabetes se encuentran las neu-ropatas perifricas. El objetivo de este estudio fue determinarsi la respuesta de la arteria femoral a la estimulacin elctricatransmural (EET) se encontraba alterada en un modelo de ratasprediabticas. Las arterias procedentes de ratas Zucker controly obesas (17-18 semanas) fueron montadas en un migrafo mi-crovascular para el registro de la tensin isomtrica. Se reali-zaron curvas frecuencia-respuesta de EET. Las contraccionesprovocadas por EET fueron inhibidas por tetrodotoxina y fen-tolamina confirmando su naturaleza neurognica y adrenr-gica. Las contracciones neurognicas fueron menores en lasratas obesas respecto a las controles. La eliminacin mecnicadel endotelio desvel la participacin de un factor contrctilendotelial que fue de menor magnitud en las ratas obesas. Lainhibicin de la sntesis de xido ntrico (NO) con L-NOARG in-crement la respuesta neurognica tanto en las ratas controles

como en las obesas, sin embargo, este efecto nicamente fuedependiente de endotelio en el grupo control. La eliminacinde especies reactivas con la enzima superxido dismutasa(SOD) redujo la vasoconstriccin neurognica exclusivamenteen anillos con endotelio de ratas obesas. La participacin deun prostanoide contrctil endotelial fue desvelada cuando laindometacina, un inhibidor de la enzima ciclooxigenasa, dismi-nuy la vasoconstriccin inducida por EET en arterias de ratascontrol pero no de obesas. En conclusin, la menor contraccinneurognica observada en un modelo de ratas prediabticaspodra estar causada por una menor contribucin de un factorcontrctil endotelial y por una disminucin en la sntesis de

NO endotelial, que parece derivar en una mayor implicacinde radicales libres. Se observa adems una participacin deNO independiente de endotelio de carcter compensatorioque no existe en ratas controles. Financiado por el proyecton SAF2006-09191 y el SAF2009-10448 del Ministerio de Cien-cia e Innovacin.

P.27. El nuevo compuesto ITH33 reduce elvolumen de infarto cuando se administradespus de la isquemia cerebral focal enratones.

Lorrio, S., Gmez-Rangel, V., Rodrguez, M., Negredo, P., Rodr-

guez-Franco, M.I., S. Conde,S., Arce,M.P., Villarroya, M., Roda,J.M., Lpez, M.G.Instituto Tefilo Hernando, Departamento de Farmacologa yTeraputica, Facultad de Medicina, Universidad Autnoma deMadrid. 2Instituto de Investigacin Sanitaria del Hospital Uni-

versitario La Paz (IdiPAZ), Madrid. Instituto de Qumica Mdica(CSIC), Madrid. Departamento de Farmacologa y Teraputica,Facultad de Medicina, Universidad Autnoma de Madrid. 5Ser-

vicio de Neurociruga, Hospital Universitario La Paz, Madrid.

El ITH12233 es un compuesto de nueva sntesis, derivado delL-glutamato, sintetizado qumicamente como posible trata-miento para las demencias de tipo Alzheimer y vascular. Enel compuesto se han aunado tres farmacforos: N-bencilpi-peridina, que inhibe la acetilcolinesterasa (ACE) unindoseal sitio cataltico; un grupo N-benzolo que interacciona conel sitio perifrico de la ACE, implicado en la agregacin de laprotena amiloide (A); y un ster lipoflico para facilitar elpaso a travs de la barrera hematoenceflica (Arce MP et al, JMed Chem 2009;52:7249-7257). En cultivos celulares de neu-roblastoma humano, el compuesto ejerce proteccin frente

a: sobrecarga de calcio, radicales libres, hiperfosforilacin detau y A 1-42. En rodajas de hipocampo de rata sometidasa privacin de oxgeno y glucosa, el compuesto protege un55%. Estos resultados in vitro nos animaron a comprobar siel ITH33/IQM9.21 podra inducir neuroproteccin en modelosin vivo de lesin cerebral. Realizamos experimentos usandoel modelo de isquemia cerebral focal por fototrombosis en ra-tones. El ITH33/IQM9.21 inyectado i.p. 1 h antes de la isquemiaredujo significativamente el volumen de infarto a las dosis de1.25, 2.5 y 5 mg/kg (46, 46 y 45%, respectivamente). En vista deestos resultados realizamos ms experimentos administrandoel compuesto 1 h despus de la isquemia a la dosis de 5 mg/

kg. Sacrificamos los ratones 72 h despus de la isquemia, re-alizamos rodajas coronales del cerebro y las teimos en frescocon TTC para medir el volumen de infarto. El ITH33/IQM9.21 fuecapaz de reducir significativamente el volumen de infarto enun 49%. Utilizamos la melatonina como control positivo (ZouLY et al, J Pineal Res 2006;41:150-156), que redujo en un 29%el volumen de infarto cerebral cortical. Creemos que estos re-sultados demuestran que el ITH33/IQM9.21 es un interesantecompuesto con evidente potencial teraputico neuroprotec-tor en enfermedades cerebrovasculares.Financiado por proyectos del MICINN SAF2009-12150(M.G.L.) y SAF2006-03589 (A.G.G.), ISCIII RETICS-RENEVAS-

RD06/0026/0009 (A.G.G.), Comunidad Autnoma de MadridS-SAL-0275/2006 (A.G.G.), Agencia Lan Entralgo NDG07/9(A.G.G.) y la Fundacin Tefilo Hernando.

P.28. Sobreexpresin del receptorcannabinoide 2 (CB2) y excitotoxicidad yneuroinamacin inducidas por estrs.

Zoppi, S. Departamento de Farmacologa. Facultad de Medici-na. UCM. CIBERSAM.

Diferentes estudios epidemiolgicos han demostrado que loscannabinoides afectan a la ansiedad y la respuesta al estrs.

Ha sido demostrada una reduccin del receptor CB2 en estria-do y hipocampo en modelos animales de depresin. (Onaiviet al., 2008) y un aumento de su expresin ha sido relacionadoa procesos de defensa contra el estrs oxidativo (Yiangou etal., 2006), y a la activacin de la microglia en procesos neuro-


13/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

degenerativos (Ehrhart et al., 2005). La presencia del receptorCB2 en los circuitos neuronales involucrados en la respuestaa estrs sugiere que puede jugar un papel en la regulacin

neuroendocrina/neuroinflamatoria y en las respuestas com-portamentales al estrs. Para aclarar el posible papel del CB2en la modulacin de la excitotoxicidad y neuroinflamacin in-ducidas por estrs por inmovilizacin, ratones macho adultostransgnicos que sobreexpresan el receptor CB2 (CB2xP) y con-troles CB1 (WT) fueron expuestos a inmovilizacin subcrnicay a estrs acstico utilizando un bao de ultrasonidos (2 horasde 13.00h a 15.00h durante 4 das). Los ratones CB2xP estresa-dos presentaron una disminuicin de iNOS y COX2 y nivelesms bajos de malonildialdehido y nitritos comparado con susrespectivos controles. Los posibles mecanismos relacionadosson la disminuicin de la activacin de la va del factor nu-clear proinflamatorio kappa B (NFB) y de las citocinas TNF

y IL-1. La sobreexpresin del receptor CB2 previno la acumu-lacin de estos mediadores proinflamatorios. Estos resultadosdemuestran que el receptor CB2 puede tener un papel en larespuesta cerebral a estrs y en los cambios inflamatorios in-ducidos por ste. Los ratones que sobreexpresan el receptorCB2 presentan un perfil antiinflamatorio en nuestro modelode estrs subcrnico sugiriendo que este receptor podra seruna diana teraputica en condiciones donde se presenta neu-roinflamacin y dao oxidativo.

P.29. Papel de las especies reactivas de oxgenoy los prostanoides en las respuestas

vasoconstrictoras en ratones infundidoscon angiotensina.

Martnez-Revelles, S., Avendao, M.S., Garca-Redondo, A.B.,Garca-Redondo, L., Alonso M.J., Briones, A.M., Salaices, M .

Departamento de Farmacologa y Teraputica. Facultad deMedicina. Universidad Autnoma de Madrid.

La Angiotensina II (Ang II) est implicada en los procesos pato-fisiolgicos que ocurren en la hipertensin a travs de sus ac-ciones proinflamatorias en la pared vascular. La Ang II aumentala produccin de citoquinas y especies reactivas de oxgeno

(ERO) e induce la expresin de cicloxigenasa-2 (COX-2) en clu-las musculares. El propsito del estudio fue estudiar el papel deERO, de los postanoides derivados de COX-2 y del xido ntrico(NO) en los cambios vasculares observados en aorta de ratonesinfundidos con Ang II. Se utilizaron los siguientes grupos de ra-tones C57BL6 (25-35 gr): 1) control; 2) tratados con Ang II (mini-bomba osmtica subcutnea, 1440 g/kg/da, 14 das); 3) trata-dos con Ang II y el inhibidor de COX-2 celecoxib (20 mg/Kg/da).La presin arterial se midi mediante pletismografa de cola.Las respuestas contrctiles y vasodilatadoras de la aorta indu-cidas por fenilefrina (1 nM-100 M) y acetilcolina (1 nM-10M),respectivamente, se analizaron mediante el migrafo de alam-bres. La produccin in situ de anin superxido (O2

.-) y de

NO en aorta de ratn se determin con la sondas fluorescentehidroetidina (HE) y diaminofluorsceina (DAF) respectivamente.La infusin de Ang II increment la presin arterial (953.4 vs1466.7 mm Hg p


14/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

claudin-5. Para estudiar la permeabilidad de la BHE cuantifica-mos la cantidad de inmunoglobulina G extravasada al estriadodesde los vasos sanguneos y observamos un incremento 1h

y 3h despus de la ltima inyeccin. En conjunto estos resul-tados indican que la metanfetamina altera la permeabilidadde la barrera hematoencefalica, y este efecto es parcialmentedependiente de la respuesta hipertrmica.

Referencias:

1. Abbott NJ, Patabendige A, Dolman D, Yusof SR, Begley DJ. 2010.Structure and function of the bloodbrain barrier. Neurobiologyof Disease, 37, 1325.

2. Krasnova IN and Cadet JL. 2009. Methamphetamine toxicity andmessengers of death. Brain Research Reviews, 60, 379-407.

Financiado por MICINN (SAF2010-21529; RD06/0001/006), PNSD

(PR47/10-17826), UCM (910258) y FEDER y RTA.

P.31. BK channels from bovine chromafn cellsinuences action potential shape in theabsence of Ca2+ entry.

Bustillo-Merino, D., Alcides Olivos-Or, L., Scott, R.S., Cuchillo-Ibaez, I., Barahona, M.V., Carbone, E., Artalejo, A.R. Departa-Departa-Departa-mento de Toxicologa y Farmacologa e Instituto de investiga-cin en Neuroqumica. Universidad Complutense de Madrid.28040 Madrid. Instituto de Neurociencias UMH-CSIC. Campusde San Juan. Sant Joan dAlacant. Alicante Dipartimento diNeuroscienze. Universit degli Studi di Torino. 10125 Torino.Italy.

BK channels modulate cell firing in excitable cells in a voltage-dependent manner regulated by fluctuations in free cytosolicCa2+ during action potentials. Indeed, Ca2+-independent BKchannel activity has ordinarily been considered not relevantfor the physiological behaviour of excitable cells. We employedthe patch-clamp technique and selective BK channel blockersto record K+ currents from bovine chromaffin cells at minimalintracellular (about 10 nM) and extracellular (free Ca2+) Ca2+concentrations. Despite their low open probability under theseconditions (V50 of +146.8 mV), BK channels were responsible

for more than 25% of the total K+ efflux during the first mil-lisecond of a step depolarisation to +20 mV. Moreover, BK chan-nels activated about 30% faster ( = 0.55 ms) than the rest ofavailable K+ channels. The other main source of fast voltage-dependent K+ efflux at such a low Ca2+ was a transient K+ (IA-type) current activating with V50 = -14.2 mV. We also studiedthe activation of BK currents in response to action potentialwaveforms and their contribution to shaping action potentialsboth in the presence and the absence of extracellular Ca2+.Our results show that BK channels activate during action po-tentials and accelerate cell repolarisation even at minimal Ca2+concentration, and suggest that they could do so also in the

presence of extracellular Ca2+, before Ca2+ entering the cellfacilitates their activity.

P.32. Estrs oxidativo y remodelado vascular enhipertensin.

Garca-Redondo, A.B., Roque, F.R., Martnez-Revelles, S., Aven-dao, M., Stanescu, C., Fortuo, A., Salaices, M., Briones, A.M.Departamento de Farmacologa y Teraputica. Facultad de Me-dicina. Universidad Autnoma de Madrid.

Cambios en la estructura de elastina en la vasculatura de resis-tencia estn asociados a un empeoramiento en sus propieda-des mecnicas en la hipertensin. El objetivo principal de esteestudio ha sido analizar la contribucin de especies reactivasde oxgeno (ROS) sobre la incrementada rigidez vascular y lasalteraciones en la estructura de la elastina con la hipertensin.Ratas normotensas Wistar Kyoto y espontaneamente hiper-tensas (SHR) se trataron con: el antagonista del receptor deAngiotensina II (AngII), losartn (15 mg/kg/da, 12 semanas), elantioxidante tempol (1 mM, 17 das), el antioxidante e inhibidorde la NADPH Oxidasa apocinina (2 mmol/l, 17 das) o el anlo-go de la superoxido dismutasa mitocondrial mito-tempo (0.7mg/kg, 17 das). Se utilizaron tambin ratones C57BL6 infun-didos o no con AngII (1440 g/kg/da, 2 semanas) en ausenciao presencia de apocinina o mito-tempo. La presin arterial semidi mediante pletismografa. La estructura y mecnica de lasarterias de resistencia se estudi con miografa de presin. Laproduccin de ROS se evalu mediante fluorescencia inducidapor dihidroetidio o quimioluminiscencia por lucigenina. Los re-sultados indicaron que losartn, pero no tempol, apocinina o

mito-tempo, redujo la presin arterial sistlica en SHR. Sin em-bargo, tanto apocinina como mito-tempo previnieron, en par-te, el desarrollo de hipertensin inducida por AngII en ratones.Losartn mejor la incrementada relacin pared:luz en SHR.Ningn antioxidante mejor este parmetro ni en SHR ni en elmodelo de infusin por AngII. Sin embargo, los tratamientosantioxidantes mejoraron el incremento en la rigidez vascular,las alteraciones en la estructura de la elastina, la incrementadaproduccin de ROS y la incrementada activacin de la NADPHoxidasa observados en ratas SHR o ratones infundidos conAngII. Resultados similares se encontraron con el tratamientode ratas SHR con losartan. Estos datos sugieren que el estrs

oxidativo inducido por AngII participa en la alteracin en la es-tructura de la elastina y el incremento en la rigidez vascular enhipertensin. Estos efectos de las ROS pueden constituir daovascular temprano que participara en el posterior desarrollode hipertensin.

Financiado por MICINN (RD06/0014/001, SAF-200907201), SEF-Almirall Prodesfarma.

P.33. Efecto de la edad y la pioglitazona sobreclulas de msculo liso vascular humanas.

Redondo, S., Tejerina, T., Navarro-Dorado, J., Ramajo, M., Alon-

so, M., Fuster, J.J., Andrs, V. Departamento de Farmacologa,Facultad de Medicina, UCM. Madrid. Servicio de Ciruga Gene-ral. Hospital Clnico San Carlos. Madrid. Laboratorio de Fisio-patologa Cardiovascular Molecular y Gentica. CNIC. Madrid.


15/16



2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

En los ltimos aos se ha demostrado que la edad es un de-terminante fundamental en la fisiopatologa y farmacologavascular. Sin embargo, no se conoce todava si la edad puede

modular la capacidad proliferativa de clulas de msculo lisovascular humanas. Se obtuvieron clulas de msculo liso vas-cular de arteria mesentrica inferior de pacientes sometidos aciruga abdominal por cncer de colon, apendicitis aguda, obe-sidad mrbida o enfermedad inflamatoria intestinal. La proli-feracin se midi mediante un kit de incorporacin de BrdU.La apoptosis se midi mediante un ELISA de fragmentacin deDNA. En algunos experimentos, se aadi pioglitazona a 100mcM. Los resultados indicaron que las clulas de msculo lisovascular de pacientes de ms de 65 aos proliferaron menosque las obtenidas de pacientes ms jvenes. En concreto, deuna tasa de proliferacin de 100 6.038% en menores de 20aos se pas o una de 62.49 8.675 % en mayores de 75 aos.

La pioglitazona no tuvo efectos significativos. Tampoco se ob-servaron diferencias significativas entre los grupos cuando semidi la apoptosis. Estos datos sugieren que la edad es un im-portante modulador de la proliferacin de clulas de msculoliso vascular humanas. El efecto de la edad es ms acusado queel de la pioglitazona. Este hallazgo puede tener aplicacin enel diseo de terapias ajustadas a la edad en los desrdenesvasculares proliferativos. Financiado por FIS PI080920 (Fondode Investigaciones Sanitarias) y Red Temtica de InvestigacinCardiovascular RECAVA RD/06/0014/1007 y RD06/0014/0027(Instituto de Salud Carlos III, Ministerio de Sanidad).

P.34. Efectos de donadores de xido ntricosobre corrientes de potasio en miocitos dearterias pulmonares.

Moral-Sanz, J., Barreira, B., Menndez, C., Moreno, E., Escolano,L., Moreno, L., Cogolludo, A., Prez-Vizcano, F.Departamento de Farmacologia, Facultad de Medicina, UCM.Instituto de Investigacin Sanitaria del Hospital Clnico SanCarlos (IdISSC). Madrid. Ciber Enfermedades Respiratorias (CI-BERES). Instituto de Fisiologia, Benemrita Universidad Auto-noma de Puebla, Mexico. Servicio de Anatomia Patologica,Hospital Universitario de Getafe, Madrid. Department of Pedi-

atrics, Maastricht University Medical Center (MUMC+), Schoolfor Oncology and Developmental Biology (GROW), Maastricht,the Netherlands.

Los canales Kv7 han sido recientemente implicados en el con-trol del tono vascular pulmonar. Sin embargo, en la actuali-dad se desconoce la posible modulacin de estos canales pormediadores vasoactivos. El objetivo del presente trabajo fueanalizar los efectos de donadores de xido ntrico (NO) sobrelos canales de potasio, en especial Kv7, presentes en miocitosde arterias pulmonares de resistencia. Se registraron corrien-tes inicas en clulas aisladas frescas de arterias pulmonares(PASMC) de resistencia de ratas Wistar macho y de donantes

humanos, empleando la tcnica de Patch Clamp en su con-figuracin de clula entera. Los donadores de NO, como ladietilamina nonoato (DEA-NO) y el nitroprusiato sdico (NPS)hiperpolarizaron las PASMC y produjeron un efecto dual sobrelas corrientes nativas, caracterizado por un aumento de la am-

plitud de la corriente a potenciales desde -40 mV hasta -10 mVy una disminucin a potenciales ms positivos. La flupirtina,frmaco activador de Kv7, mimetiz ambos efectos. El aumen-

to de corriente generado por los dadores de NO se previnototalmente en presencia de 4-aminopiridina (bloqueante decanales Kv) pero slo parcialmente por DPO-1, un bloqueanteselectivos de canales Kv1. El aumento de la corriente y la hiper-polarizacin inducidos por los dadores de NO fueron preveni-dos en presencia de los bloqueantes selectivos de canales Kv7linopirdina y XE-991. Estos efectos se confirmaron en PASMCprocedentes de tejidos humanos. Finalmente los efectos delDEA-NO no se observaron en condiciones de hipoxia. En con-clusin, los canales Kv7 son activados por NO y contribuyen asu accin hiperpolarizante en PASMC. Estos datos, resaltan laimportancia fisiolgica de estos canales en la funcin arterialpulmonar.

P.35. Effect of the synthetic cannabinoid receptoragonist WIN-55,212-2 on Conditioned PlacePreference in Lewis and F344 rats.

Latorre-Canteli, G., Nez-Carranza, A.E., Coria, S.M., Higuera-Matas, A., Ambrosio, E., Garca-Lecumberri, C.Departmento de Psicobiologa. Universidad Nacional de Edu-cacin a Distancia (UNED). Madrid.

Although cannabis is the illicit drug most widely consumedin the world and recent evidence provides support for the

existence of a cannabis dependence syndrome in humans, anumber of studies have failed to show self-administration be-haviour of natural and synthetic cannabinoid compounds inlaboratory animals. In a previous work with Lewis (LEW) andFischer 344(F344) rats -two inbred rat strains that are widelyused as an animal model of drug abuse vulnerability, we alsofound that the synthetic cannabinoid receptor agonist WIN-55,212-2 was not self-administered by these animals. Giventhat several reports have described that cannabinoid agentsinduce conditioning in the place preference paradigm (CPP) inoutbred rat strains, the aim of the present study was to analyzeif administration of WIN-55,212-2 (0.05 mg/kg and 0.5 mg/kg

i.p.) to LEW and F344 rats might produce place preference orplace aversion in the CPP test. Results show that the dose of0.5 mg/kg produced similar aversive effects in both rat strains,decreasing the time spent in the drug-paired compartment.These data are in accordance with other reports showing aver-sive effects of WIN-55,212-2 in a similar rank of doses. In con-trast, a dose ten times lower (0.05 mg/kg) did not produce anyeffect, although a trend to produce aversion to drug-pairedcompartment was seen in LEW, but not in F344 strain. Takentogether, our self-administration and CPP data suggest that thesynthetic cannabinoid receptor agonist WIN-55,212-2 has notreinforcing effects in LEW or F344 rats. Supported by Ministeriode Educacin y Ciencia (SAF2007-064890); Ministerio de Sani-

dad y Consumo (RD06/001/0029, Instituto de Salud Carlos III;Plan Nacional sobre Drogas 2008-2010); Direccin General deInvestigacin de la Comunidad de Madrid (S-SAL/0261/2006;Consorcio I+D CANNAB-CM); and UNED (Plan de Promocinde la Investigacin) Grants.


16/16


2012Vol. 2 No. 1:1

doi: 10:3823/602

P.36. Papel de la traslocacin bacteriana en laneuroinamacin inducida en un modelode depresin en rata.

Grate, I., McDowell, K.S., Zoppi, S., Caso, J.R., Madrigal, J.L.M.,Garca-Bueno, B. Departamento de Farmacologa. Facultad deMedic

Documents

Libro de resúmenes: Sesión de carteles Farmadrid XX