Lista y descripción de los métodos de análisis

II

(Comunicaciones)

COMUNICACIONES QUE PROCEDAN DE LAS INSTITUCIONES OacuteRGANOS Y ORGANISMOS DE LA UNIOacuteN EUROPEA

COMISIOacuteN EUROPEA

Lista y descripcioacuten de los meacutetodos de anaacutelisis contemplados en el artiacuteculo 120 octies paacuterrafo primero del Reglamento (CE) n o 12342007 del Consejo ( 1 )

[publicadas de conformidad con el artiacuteculo 15 apartado 2 del Reglamento (CE) n o 6062009 de la Comisioacuten de 10 de julio de 2009 ( 2 )]

(2010C 4301)

El cuadro que figura maacutes abajo recoge la lista de meacutetodos de anaacutelisis aplicables para el control de los liacutemites y exigencias fijados en la normativa comunitaria en relacioacuten con la produccioacuten de productos vitiviniacutecolas En la tercera columna se encuentra respecto a cada uno de los paraacutemetros la referencia del meacutetodo de anaacutelisis correspondiente descrito en el Compendio de los meacutetodos internacionales de anaacutelisis de los vinos y de los mostos de la OIV (Recueil des meacutethodes internationales danalyse des vins et des moucircts) en la uacuteltima edicioacuten (2009) disponible a fecha de la presente publicacioacuten Respecto a cada paraacutemetro solo se describen los meacutetodos de referencia (laquotipo Iraquo o laquotipo IIraquo en la clasificacioacuten de la OIV) salvo los paraacutemetros para los que actualmente no existe ninguacuten meacutetodo de tipo I o II validado La descripcioacuten de los meacutetodos se recoge en el anexo de la Comunicacioacuten

Recordatorio

El Compendio de la OIV establece en su anexo A seccioacuten I la definicioacuten de los distintos tipos de meacutetodos de anaacutelisis y en particular el tipo I (Meacutetodo de referencia criterio) el tipo II (Meacutetodo de referencia) y el tipo IV (Meacutetodo provisional)

Los meacutetodos de anaacutelisis del plomo y del cadmio se describen ahora en el Reglamento (CE) n o 3332007 de la Comisioacuten de 28 de marzo de 2007 (anexo C-3) ( 3 ) Por otra parte el Reglamento (CE) n o 4012006 de 23 de febrero de 2006 ( 4 ) establece criterios generales para los meacutetodos de anaacutelisis de la ocratoxina A en su anexo II4 por lo que no es necesario describir ninguacuten meacutetodo de ensayo de esta sustancia que sea especiacutefico de los productos vitiviniacutecolas

LISTA DE MEacuteTODOS DE ANAacuteLISIS

N o Paraacutemetro Meacutetodo del Compendio de la OIV Tipo

1 Densidad absolutarelativa AS-2-01-MASVOL I

2 Iacutendice refractomeacutetrico AS-2-02-SUCREF I

3 Extracto seco total AS-2-03-EXTSEC I

4 Relacioacuten isotoacutepica 18 O 16 O del agua del vino AS-2-09-MOUO18 II

ES 1922010 Diario Oficial de la Unioacuten Europea C 431

( 1 ) DO L 299 de 16112007 ( 2 ) DO L 193 de 2472009 p 1 ( 3 ) DO L 88 de 2932007 p 29 ( 4 ) DO L 70 de 932006 p 12


5 Iacutendice de Folin AS-2-10-INDFOL IV

6 Contenido en azuacutecar (= glucosa + fructosa) AS-311-02-GLUFRU II

7 Contenido en sacarosa (medido por HPLC) AS-311-03-SUCRES II

8 Resonancia magneacutetica nuclear ndash Deuterio del etanol del vino

AS-311-O5-ENRRMN (en revisioacuten) I

9 Grado alcohoacutelico volumeacutetrico en (GAV) AS-312-01-TALVOL I

10 Relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C del etanol del vino AS-312-06-ETHANO II

11 Acidez total AS-313-01-ACITOT I

12 Acidez volaacutetil AS-313-02-ACIVOL I

13 Aacutecido ciacutetrico AS-313-09-ACIENZ II

14 Aacutecido soacuterbico AS-313-14-ACISOR IV

15 pH de los mostos AS-313-15-PH I

16 Aacutecido ascoacuterbico AS- 313-22 ACASCO II

17 CO 2 en gl AS-314-01-DIOCAR II

18 CO 2 en gl (manometriacutea) AS-314-04-CO2MAN II

19 Sobrepresioacuten de CO 2 AS-314-02-SURPRES I

20 Lisozima AS-315-14-LYSOZY IV

21 Sulfato de potasio AS-321-05-SULFAT II

22 Hierro AS-322-05-FER IV

23 Cobre AS-322-06-CUIVRE IV

24 Sulfitos (SO 2 ) o dioacutexido de azufre total

AS-323-04-DIOSU II

La descripcioacuten de algunos meacutetodos de anaacutelisis estaacute siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Estas descripciones se publicaraacuten en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV

ES C 432 Diario Oficial de la Unioacuten Europea 1922010

ANEXO

IacuteNDICE

1 DENSIDAD ABSOLUTA A 20 degC Y DENSIDAD RELATIVA A 20 degC (OIV-AS2-01-MASVOL) mdash Meacutetodo de tipo I 4

2 EVALUACIOacuteN MEDIANTE REFRACTOMERIacuteA DEL CONTENIDO EN AZUacuteCARES DE MOSTOS MOSTOS CONCENTRADOS Y MOSTOS CONCENTRADOS RECTIFICADOS (OIV-AS2-02-SUCREF) mdash Meacutetodo de tipo I 8

3 EXTRACTO SECO TOTAL (OIV-AS-2-03-EXTSEC) Materias secas totales mdash Meacutetodo de tipo I 10

4 DETERMINACIOacuteN DE LA RELACIOacuteN ISOTOacutePICA 18 O 16 O DEL AGUA DEL VINO (OIV-AS-2-09-MOUO18) mdash Meacutetodo de tipo II 11

5 IacuteNDICE DE FOLIN-CIOCALTEU (OIV-AS-2-10-INDFOL) mdash Meacutetodo de tipo IV 12

6 GLUCOSA Y FRUCTOSA (OIV-AS-311-02-GLUFRU) mdash Meacutetodo de tipo II 14

7 DETERMINACIOacuteN DE AZUacuteCARES POR HPLC (SACAROSA) (OIV-AS-311-03-SUCRES) mdash Meacutetodo de tipo II 17

8 DETECCIOacuteN DEL AUMENTO DEL GRADO ALCOHOacuteLICO NATURAL DE MOSTOS DE UVA DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS RECTIFICADOS Y DE VINOS POR APLICACIOacuteN DE LA RESONANCIA MAGNEacuteTICA NUCLEAR DEL DEUTERIO (OIV-AS-311-05-ENRRMN) mdash Meacutetodo de tipo I 18

9 GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO (OIV-AS-312-01-TALVOL) mdash Meacutetodos de tipo I 19

10 DETERMINACIOacuteN DE LA RELACIOacuteN ISOTOacutePICA 13 C 12 C POR ESPECTROMETRIacuteA DE MASA ISOTOacutePICA DEL ETANOL DEL VINO O DEL ETANOL OBTENIDO POR FERMENTACIOacuteN DE MOSTOS MOSTOS CONshyCENTRADOS O MOSTOS CONCENTRADOS RECTIFICADOS (OIV-AS-312-06-ETHANO) mdash Meacutetodo de tipo II 20

11 ACIDEZ TOTAL (OIV-AS-313-01-ACITOT) mdash Meacutetodo de tipo I 27

12 ACIDEZ VOLAacuteTIL (OIV-AS-313-02-ACIVOL) mdash Meacutetodo de tipo I 30

13 AacuteCIDO CIacuteTRICO (OIV-AS-313-09-ACIENZ) mdash Meacutetodo de tipo II 33

14 AacuteCIDO SOacuteRBICO (OIV-AS-313-14-ACISOR) mdash Meacutetodo de tipo IV 36

15 pH (OIV - AS-313-15-PH) mdash Meacutetodo de tipo I 39

16 DETERMINACIOacuteN SIMULTAacuteNEA DE AacuteCIDO L-ASCOacuteRBICO Y DE AacuteCIDO D-ISOASCOacuteRBICO POR HPLC Y DETECCIOacuteN UV (OIV-AS-313-22-ACASCO) mdash Meacutetodo de tipo II 41

17 DIOacuteXIDO DE CARBONO (OIV-AS-314-01-DIOCAR) mdash Meacutetodo de tipo II 45

18 DETERMINACIOacuteN DEL DIOacuteXIDO DE CARBONO EN EL VINO POR MEacuteTODO MANOMEacuteTRICO (OIV - AS314-04-CO2MAN) mdash Meacutetodo de tipo II 47

19 MEDICIOacuteN DE LA SOBREPRESIOacuteN DE LOS VINOS ESPUMOSOS Y DE AGUJA (OIV - AS-314-02-SURPRES) mdash Meacutetodo de tipo I 48

20 DETERMINACIOacuteN DE LA LISOZIMA EN EL VINO POR HPLC (OIV-AS-315-14) mdash Meacutetodo de tipo IV 73 51

21 SULFATOS (OIV- AS-321-05-SULFAT) mdash Meacutetodo de tipo II 54

22 HIERRO (OIV - AS-322-05-FER) mdash Meacutetodo de tipo IV 55

23 COBRE (OIV - AS 322-06) mdash Meacutetodo de tipo IV 56

24 DIOacuteXIDO DE AZUFRE (OIV - AS-323-04-DIOSU) mdash Meacutetodo de tipo II 58


1 DENSIDAD ABSOLUTA A 20 degC Y DENSIDAD RELATIVA A 20 degC (OIV - AS2 - 01- MASVOL) mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 DEFINICIONES

La densidad absoluta es la proporcioacuten entre la masa de un determinado volumen de vino o mosto a 20 degC y ese volumen Se expresa en gramos por mililitro y su siacutembolo es ρ 20 degC

La densidad relativa a 20 degC o densidad 20 degC20 degC es la relacioacuten expresada en nuacutemero decimal entre la masa de cierto volumen de vino o de mosto a 20 degC y la masa del mismo volumen de agua a la misma temperatura Su siacutembolo es d 20 degC

20 degC

2 PRINCIPIO DE LOS MEacuteTODOS

La densidad absoluta y la densidad relativa a 20 degC se determinan en la muestra problema

bien por picnometriacutea meacutetodo de referencia

bien por densimetriacutea con balanza hidrostaacutetica o por densimetriacutea electroacutenica

Nota

En determinaciones muy precisas debe corregirse la accioacuten del dioacutexido de azufre sobre la densidad absoluta

ρ 20 degC = ρprime 20 degC ndash 00006 bull S

ρ 20 degC = densidad absoluta corregida

ρprime 20 degC = densidad absoluta observada

S = dioacutexido de azufre total en gl

3 TRATAMIENTO PREVIO DE LA MUESTRA

Si el vino o el mosto contiene cantidades importantes de dioacutexido de carbono eliminar la mayor cantidad posible de este agitando 250 ml de vino en un frasco de 1 000 ml o filtrando a baja presioacuten sobre 2 g de algodoacuten colocado en una alargadera

4 MEacuteTODO DE REFERENCIA

41 Material

Material corriente de laboratorio y en particular

411 Picnoacutemetro ( 1 ) de vidrio pyrex con una capacidad de 100 ml aproximadamente y termoacutemetro moacutevil esmeshyrilado graduado en deacutecimas de grado de 10 a 30 degC Este termoacutemetro debe estar contrastado (figura 1)

Figura 1

Picnoacutemetro y su frasco tara

Este picnoacutemetro lleva un tubo lateral de 25 mm de longitud y 1 mm como maacuteximo de diaacutemetro interior terminado en una parte coacutenica esmerilada El tubo lateral puede estar cubierto por un laquotapoacuten receptorraquo constituido por un tubo coacutenico esmerilado terminado en una parte alargada Dicho tapoacuten sirve de caacutemara de dilatacioacuten


( 1 ) Puede utilizarse cualquier picnoacutemetro de caracteriacutesticas equivalentes

Las dos partes esmeriladas del aparato deben estar realizadas con gran cuidado

412 Frasco tara del mismo volumen exterior (con una precisioacuten superior a 1 ml) que el picnoacutemetro y de masa igual a la del picnoacutemetro lleno de liacutequido de densidad 101 (solucioacuten al 2 (mv) de cloruro soacutedico)

Recipiente termostaacutetico que se ajuste exactamente al cuerpo del picnoacutemetro

413 Balanza de dos platos de una capacidad de 300 g por lo menos y una sensibilidad de una deacutecima de miligramo

o

balanza monoplato de una capacidad de 200 g por lo menos y una sensibilidad de una deacutecima de miligramo

42 Calibrado del picnoacutemetro

El calibrado del picnoacutemetro supone la determinacioacuten de las caracteriacutesticas siguientes

mdash la tara en vaciacuteo

mdash el volumen a 20 degC

mdash la masa del agua a 20 degC

421 Utilizacioacuten de una balanza de dos platos

Poner el frasco tara en el plato izquierdo de la balanza y el picnoacutemetro limpio seco y con su laquotapoacuten receptorraquo en el plato derecho equilibrar colocando al lado del picnoacutemetro pesas marcadas (sea su masa p gramos)

Llenar con cuidado el picnoacutemetro con agua destilada a temperatura ambiente y colocar el termoacutemetro secar cuidadosamente el picnoacutemetro y colocarlo dentro del recipiente termostaacutetico agitar por inversioacuten hasta que el termoacutemetro sentildeale una temperatura constante Enrasar exactamente hasta el borde superior del tubo lateral Secar dicho tubo colocar el tapoacuten receptor leer la temperatura t degC con cuidado y en su caso corregir la inexactitud de la escala del termoacutemetro Pesar el picnoacutemetro lleno de agua se denominaraacute p a la masa en gramos con la que se consigue el equilibrio

Caacutelculos

Tara del picnoacutemetro vaciacuteo

Tara en vaciacuteo= p + m

m= masa de aire contenida en el picnoacutemetro

m= 00012 (p ndash pprime)

Volumen a 20 degC

V 20 degC = (p + m ndash pprime) bull F t

F t = factor tomado de la tabla I para la temperatura t degC

V 20 degC debe conocerse con una aproximacioacuten de plusmn 0001 ml

Masa de agua a 20 degC

M 20 degC = V 20 degC bull 0998203

0998203= densidad absoluta del agua a 20 degC

422 Utilizacioacuten de una balanza monoplato

Determinar

mdash la masa del picnoacutemetro limpio y seco P

mdash la masa del picnoacutemetro lleno de agua a t degC P 1 siguiendo las indicaciones que figuran en 421

mdash la masa del frasco tara T 0


Caacutelculos


Tara en vaciacuteo= P ndash m

m = masa de aire contenida en el picnoacutemetro

m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

V 20 degC = [P 1 ndash (P ndash m)] bull F t


El volumen a 20 degC debe conocerse con una precisioacuten de plusmn 0001 ml



0998203 = densidad absoluta del agua a 20 degC

43 Teacutecnica de una medida


Pesar el picnoacutemetro lleno con la muestra problema preparada (punto 3) siguiendo las indicaciones que figuran en 421

Sea pPrime la masa en gramos con la que se consigue el equilibrio a t degC

Masa del liacutequido contenido en el picnoacutemetro = p + m ndash pPrime

Densidad absoluta aparente a t degC

ρ t degC = (p + m ndash pPrime)V 20 degC

Calcular la densidad absoluta a 20 degC utilizando una de las tablas de correccioacuten que figuran a continuacioacuten en funcioacuten de la naturaleza del liacutequido estudiado vino seco (tabla II) mosto natural o concentrado (tabla III) vino dulce (tabla IV)

La densidad 20 degC20 degC del vino se expresa dividiendo la densidad absoluta a 20 degC por 0998203


Pesar el frasco tara sea su masa T 1

Calcular dT = T 1 ndash T 0

Masa del picnoacutemetro vaciacuteo en el momento de la medida = P ndash m + dT

Pesar el picnoacutemetro lleno con la muestra problema preparada (punto 3) siguiendo las indicaciones que figuran en el punto 421 Sea P 2 su masa a t degC

Masa del liacutequido contenido en el picnoacutemetro a t degC = P 2 ndash (P ndash m + dT)


ρ t degC = (P 2 ndash (P ndash m + dT))V 20 degC

Calcular la densidad absoluta a 20 degC del liacutequido estudiado vino seco mosto natural o concentrado y vino dulce tal como se indica en el punto 431

La densidad 20 degC20 degC se obtiene dividiendo la densidad absoluta a 20 degC por 0998203

433 Repetibilidad de la densidad absoluta

para los vinos secos y semisecos r = 000010

para los vinos dulces r = 000018

434 Reproducibilidad de la densidad absoluta

para los vinos secos y semisecos R = 000037

para los vinos dulces R = 000045


TABLA I

Factores F

por los que hay que multiplicar la masa del agua contenida en el picnoacutemetro de vidrio pyrex a t degC para calcular el volumen del picnoacutemetro a 20 degC

[Remitirse a la tabla I del anexo II del meacutetodo AS2 - 01 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]

TABLA II

Correcciones c de temperatura sobre la densidad absoluta de vinos secos y de vinos secos de los que se ha eliminado el alcohol medida en un picnoacutemetro de vidrio pyrex a t degC para referir el resultado a 20 degC

[Remitirse a la tabla II del anexo II del meacutetodo AS2 - 01 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]

ρ 20 = ρ t plusmn (c1 000) ndash si t degC es inferior a 20 degC + si t degC es superior a 20 degC

TABLA III

Correcciones c de temperatura sobre la densidad absoluta de mostos naturales y concentrados medida a t degC mediante un picnoacutemetro de vidrio pyrex para referir el resultado a 20 degC

[Remitirse a la tabla III del anexo II del meacutetodo AS2 - 01 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]


TABLA IV

Correcciones c de temperatura sobre la densidad absoluta de vinos de 13 vol o maacutes que contengan azuacutecar residual medida con un picnoacutemetro de vidrio pyrex a t degC para referir el resultado a 20 degC

[Remitirse a la tabla IV del anexo II del meacutetodo AS2 - 01 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]



2 EVALUACIOacuteN MEDIANTE REFRACTOMERIacuteA DEL CONTENIDO EN AZUacuteCARES DE MOSTOS MOSTOS CONCENTRADOS Y MOSTOS CONCENTRADOS RECTIFICADOS (OIV - AS2 - 02-SUCREF) mdash MEacuteTODO DE

TIPO I

1 PRINCIPIO DEL MEacuteTODO

El iacutendice de refraccioacuten a 20 degC expresado de modo absoluto o como porcentaje en masa de sacarosa se lleva a la tabla correspondiente para obtener el contenido en azuacutecares en gramos por litro y en gramos por kilogramo de mosto mosto concentrado y mosto concentrado rectificado

2 MATERIAL

21 Refractoacutemetro de tipo Abbeacute

El refractoacutemetro utilizado deberaacute estar provisto de una escala que indique

mdash el porcentaje en masa de sacarosa con precisioacuten de 01 o bien

mdash el iacutendice de refraccioacuten con cuatro decimales

El refractoacutemetro deberaacute estar provisto de un termoacutemetro cuya escala estaraacute graduada como miacutenimo de + 15 degC a + 25 degC y de un dispositivo de circulacioacuten de agua que permita realizar las mediciones a una temperatura de 20 degC plusmn 5 degC

Deberaacuten seguirse estrictamente las instrucciones sobre el manejo de este instrumento en particular las conshycernientes al calibrado y a la fuente luminosa

3 PREPARACIOacuteN DE LA MUESTRA

31 Mostos y mostos concentrados

Puede pasarse el mosto a traveacutes de una gasa seca doblada en cuatro tras haber eliminado las primeras gotas de filtrado efectuar la determinacioacuten con el producto filtrado

32 Mostos concentrados rectificados

Utilizar seguacuten su concentracioacuten el mosto concentrado rectificado o bien la solucioacuten obtenida antildeadiendo agua a 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesados hasta llegar a 500 g

4 PROCEDIMIENTO

Llevar la muestra a una temperatura proacutexima a 20 degC Colocar una pequentildea porcioacuten de la muestra en el prisma inferior del refractoacutemetro procurando que estando los prismas en estrecho contacto entre siacute aqueacutella cubra uniformemente la superficie del vidrio y efectuar la medicioacuten con arreglo a las instrucciones de manejo del aparato utilizado

Medir el porcentaje en masa de sacarosa con una precisioacuten de 01 o anotar el iacutendice de refraccioacuten con cuatro decimales

Efectuar al menos dos determinaciones de cada muestra preparada Anotar la temperatura t degC

5 CAacuteLCULO

51 Correccioacuten de temperatura

511 Aparatos graduados en porcentaje en masa de sacarosa Utilizar la tabla I para la correccioacuten de temperatura

512 Aparatos graduados en iacutendices de refraccioacuten llevar el iacutendice medido a t degC a la tabla II para obtener (columna 1) el valor correspondiente del porcentaje en masa de sacarosa a t degC Mediante la tabla I se corregiraacute este valor expresaacutendolo a 20 degC

52 Contenido en azuacutecares de mostos y mostos concentrados

Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 degC a la tabla II para obtener el contenido en azuacutecares en gramos por litro y en gramos por kilogramo El contenido en azuacutecares se expresaraacute en azuacutecar invertido con un decimal

53 Contenido en azuacutecares de mosto concentrado rectificado

Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 degC a la tabla III para obtener el contenido en azuacutecares en gramos por litro y en gramos por kilogramo El contenido en azuacutecares se expresaraacute en azuacutecar invertido con un decimal

Si la medicioacuten se ha efectuado con el mosto concentrado rectificado diluido se multiplicaraacute el resultado por el factor de dilucioacuten

54 Iacutendice de refraccioacuten de mostos mostos concentrados y mostos concentrados rectificados

Llevar el porcentaje en masa de sacarosa a 20 degC a la tabla II para obtener el iacutendice de refraccioacuten a 20 degC Este iacutendice se expresaraacute con cuatro decimales

Nota El grado alcohoacutelico volumeacutetrico en potencia de mostos mostos concentrados y mostos concentrados rectificados puede determinarse utilizando el cuadro de correspondencias que figura en el anexo I del Reglamento (CE) n o 16232000 de la Comisioacuten de 25 de julio de 2000 (DO L 194 de 3172000)


TABLA I

Correccioacuten que deberaacute efectuarse cuando el porcentaje en masa de sacarosa se determine a una temperatura diferente de 20 degC

[Remitirse a la tabla I del anexo del meacutetodo AS2 - 02 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]

TABLA II

Tabla del contenido en azuacutecar en gramos por litro y en gramos por kilogramo de mostos y mostos concentrados determinado mediante un refractoacutemetro graduado bien en porcentaje en masa de sacarosa a

20 degC o bien en iacutendice de refraccioacuten a 20 degC Tambieacuten se indica la densidad absoluta a 20 degC

[Remitirse a la tabla II del anexo del meacutetodo AS2 - 02 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]

TABLA III

Tabla del contenido en azuacutecar en gramos por litro y en gramos por kilogramo de mostos concentrados rectificados determinado mediante un refractoacutemetro graduado en porcentaje en masa de sacarosa a 20 degC o

en iacutendice de refraccioacuten a 20 degC Tambieacuten se indica la densidad absoluta a 20 degC

[Remitirse a la tabla III del anexo del meacutetodo AS2 - 02 descrito en el Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]


3 EXTRACTO SECO TOTAL (OIV-AS-2-03-EXTSEC) MATERIAS SECAS TOTALES mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 DEFINICIOacuteN

El extracto seco total o materias secas totales es el conjunto de todas las substancias que no se volatilizan en determinadas condiciones fiacutesicas Estas condiciones fiacutesicas deben establecerse de tal forma que las substancias que componen el extracto sufran el miacutenimo de alteraciones

El extracto no reductor es el extracto seco total menos los azuacutecares totales

El extracto reducido es el extracto seco total menos los azuacutecares totales que excedan de 1 gl el sulfato potaacutesico que exceda de 1 gl el manitol si lo hubiere y todas las substancias quiacutemicas que se puedan haber antildeadido al vino

El resto del extracto es el extracto no reductor menos la acidez fija expresada en aacutecido tartaacuterico

El extracto se expresa en gramos por litro y debe determinarse con una precisioacuten de 05 g


[La descripcioacuten de este meacutetodo de anaacutelisis estaacute siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Esta descripcioacuten se publicaraacute en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV A tiacutetulo indicativo a la espera de dicha publicacioacuten cabe remitirse al capiacutetulo 4 del anexo del Reglamento (CEE) n o 267690 de la Comisioacuten]


4 DETERMINACIOacuteN DE LA RELACIOacuteN ISOTOacutePICA 18 O 16 O DEL AGUA DEL VINO (OIV-AS-2-09-MOUO18) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

(pm)



5 IacuteNDICE DE FOLIN-CIOCALTEU (OIV-AS-2-10-INDFOL) mdash MEacuteTODO DE TIPO IV

1 DEFINICIOacuteN

El iacutendice de Folin-Ciocalteu es el resultado de la aplicacioacuten del meacutetodo que se describe a continuacioacuten

2 PRINCIPIO

El conjunto de los compuestos fenoacutelicos del vino se oxida con el reactivo de Folin-Ciocalteu Este uacuteltimo estaacute constituido por una mezcla de aacutecido fosfotuacutengstico (H 3 PW 12 O 40 ) y aacutecido fosfomoliacutebdico (H 3 PMo 12 O 40 ) que se reduce en la oxidacioacuten de los fenoles a una mezcla de oacutexidos azules de tungsteno (W 8 O 23 ) y de molibdeno (Mo 8 O 23 )

La coloracioacuten azul producida posee una absorcioacuten maacutexima en torno a 750 nm y es proporcional al porcentaje de compuestos fenoacutelicos

3 REACTIVOS

Los reactivos deben ser de calidad analiacutetica El agua utilizada seraacute agua destilada o agua de pureza equivalente

31 Reactivo de Folin-Ciocalteu

Este reactivo se encuentra en el comercio listo para su empleo Puede prepararse de la forma siguiente disolver en 700 ml de agua destilada 100 g de tungstato de sodio (Na 2 WO 4 times2 H 2 O) y 25 g de molibdato de sodio (Na 2 MoO 4 2 H 2 O) antildeadir 50 ml de aacutecido fosfoacuterico al 85 (ρ 20 = 171 gml) y 100 ml de aacutecido clorhiacutedrico concentrado (ρ 20 = 119 gml) Llevar a ebullicioacuten bajo reflujo durante 10 horas antildeadir a continuacioacuten 150 g de sulfato de litio (Li 2 SO 4 H 2 O) algunas gotas de bromo y hervir de nuevo durante 15 minutos Enfriar y completar hasta 1 litro con agua destilada

32 Carbonato de sodio (Na 2 CO 3 ) anhidro en solucioacuten al 20 (mv)

4 MATERIAL


41 Matraces aforados de 100 ml

42 Espectrofotoacutemetro que permita trabajar a 750 nm

5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos

En un matraz aforado de 100 ml (punto 41) introducir respetando el orden siguiente

1 ml de vino diluido al 15

50 ml de agua destilada

5 ml de reactivo de Folin-Ciocalteu (punto 31)

20 ml de solucioacuten de carbonato de sodio (punto 32)

Enrasar a 100 ml con agua destilada

Agitar para homogeneizar Esperar 30 minutos para que se estabilice la reaccioacuten Determinar la absorbancia a 750 nm en una cubeta de 1 cm con relacioacuten a un testigo preparado con agua destilada en lugar del vino

Si la absorbancia leiacuteda no estaacute proacutexima a 03 conviene modificar la dilucioacuten del vino

52 Vinos blancos

Operar de la misma forma con 1 ml de vino sin diluir


531 Preparacioacuten de la muestra

Utilizar una solucioacuten cuyo contenido en azuacutecares sea del 25 (mm) (25deg Brix) preparada del modo indicado en el capiacutetulo laquopHraquo (punto 412)


532 Medida

Proceder como en el caso de los vinos tintos (punto 51) con 5 ml de muestra preparada de acuerdo con el punto 531 midiendo la absorbancia en relacioacuten con un testigo preparado con 5 ml de solucioacuten de azuacutecar invertido al 25 (mm)

6 EXPRESIOacuteN DE LOS RESULTADOS

61 Modo de caacutelculo

El resultado se expresa en forma de iacutendice obtenido al multiplicar la absorbancia por 100 en el caso de los vinos tintos diluidos al 15 (o por el factor correspondiente a la dilucioacuten empleada) y por 20 en el caso de los vinos blancos En el caso de los mostos concentrados rectificados la absorbancia hay que multiplicarla por 16

62 Repetibilidad

La diferencia entre los resultados de dos determinaciones efectuadas simultaacuteneamente o inmediatamente una despueacutes de otra por el mismo analista no debe ser superior a 1

La buena repetibilidad de los resultados depende de la utilizacioacuten de un material (matraces aforados y cubetas del espectrofotoacutemetro) rigurosamente limpio


6 GLUCOSA Y FRUCTOSA (OIV-AS-311-02-GLUFRU) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

1 DEFINICIOacuteN

La glucosa y la fructosa pueden determinarse por separado mediante un meacutetodo enzimaacutetico con vistas uacutenicamente a calcular la relacioacuten glucosafructosa

2 PRINCIPIO

Se fosforilan la glucosa y la fructosa con adenosina-trifostato (ATP) mediante una reaccioacuten enzimaacutetica catashylizada por la hexocinasa (HK) dando como resultado glucosa-6-fosfato (G6P) y fructosa-6-fosfato (F6P)

glucosa + ATP larrrarr G6P + ADP

fructosa + ATP larrrarr F6P + ADP

En un primer momento el glucosa-6-fosfato se oxida a gluconato-6-fosfato mediante el nicotinamida-adenina- dinucleoacutetido-fosfato (NADP) en presencia de la enzima glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (G6PDH) La cantidad de nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato reducido (NADPH) que se origina corresponde a la cantidad de glucosa-6-fosfato y por lo tanto a la de glucosa

G6P + NADP + larrrarr gluconato-6-fosfato + NADPH + H +

El nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato reducido se determina por su absorcioacuten a 340 nm

Una vez finalizada esta reaccioacuten el fructosa-6-fosfato se transforma en glucosa-6-fosfato por la accioacuten de la fosfoglucosa-isomerasa (PGI)

F6PlarrrarrG6P

El glucosa-6-fosfato reacciona nuevamente con el nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato para dar glucoshynato-6-fosfato y nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato reducido que es el que se determina

3 MATERIAL

mdash Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas a 340 nm maacuteximo de absorcioacuten del NADPH Por tratarse de medidas absolutas (no existe curva de calibrado sino referencia al coeficiente de extincioacuten del NADPH) deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de las absorbancias del aparato

En su defecto utilizar un espectrofotoacutemetro de espectro discontinuo que permita efectuar medidas a 334 nm o 365 nm

mdash Cubetas de vidrio o cubetas desechables de 1 cm de camino oacuteptico

mdash Pipetas para ensayos enzimaacuteticos de 002 005 01 02 ml

4 REACTIVOS

41 Solucioacuten 1 Amortiguador (trietanolamina 03 M pH = 76 4 x 10 -3 M en Mg 2+ ) disolver 112 g de clorhidrato de trietanolamina ((C 2 H 5 ) 3 NHC1) y 02 g de MgSO 4 7 H 2 O en 150 ml de agua bidestilada antildeadir alrededor de 4 ml de solucioacuten 5 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) para obtener un pH igual a 76 y llevar a 200 ml

Esta solucioacuten amortiguadora se conserva 4 semanas a + 4 degC

42 Solucioacuten 2 Solucioacuten de nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato (115 x 10 ndash3 M aproximadamente) disolver 50 mg de nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido-fosfato disoacutedico en 5 ml de agua bidestilada

Esta solucioacuten se conserva 4 semanas a + 4 degC

43 Solucioacuten 3 Solucioacuten de adenosina-5prime-trifosfato (81 x 10 ndash3 M aproximadamente) disolver 250 mg de adenosina-5prime-trifosfato disoacutedico y 250 mg de hidrogenocarbonato soacutedico (NaHCO 3 ) en 5 ml de agua bidesshytilada


44 Solucioacuten 4 Hexocinasaglucosa-6-fosfato-deshidrogenasa mezclar 05 ml de hexocinasa (2 mg de proteiacutenaml es decir 280 Uml) y 05 ml de glucosa-6-fosfato-deshidrogenasa (1 mg de proteiacutenaml)

Esta solucioacuten se conserva un antildeo a + 4 degC


45 Solucioacuten 5 Fosfoglucosa-isomerasa (2 mg de proteiacutenaml es decir 700 Uml) La suspensioacuten se utiliza sin dilucioacuten


Observacioacuten

El conjunto de reactivos necesarios para esta determinacioacuten se comercializa ya preparado

5 PROCEDIMIENTO


En funcioacuten de la cantidad estimada de glucosa + fructosa por litro efectuar las diluciones siguientes

Medida a 340 nm y 334 nm Medida a 365 nm Dilucioacuten con agua Factor F de dilucioacuten

Hasta 04 gl Hasta 08 gl mdash mdash

Hasta 40 gl Hasta 80 gl 1 + 9 10



Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100

Por encima de 400 gl Por encima de 800 gl 1 + 999 1 000

52 Determinacioacuten

Regulando el espectrofotoacutemetro a la longitud de onda de 340 nm efectuar las medidas con respecto al aire (sin cubeta en el camino oacuteptico) o con respecto al agua

Temperatura de 20 a 25 degC

En dos cubetas de 1 cm de camino oacuteptico introducir

Testigo Determinacioacuten

Solucioacuten 1 (41) (a 20 degC) 250 ml 250 ml

Solucioacuten 2 (42) 010 ml 010 ml


Muestra problema 020 ml

Agua bidestilada 020 ml

Mezclar y transcurridos 3 min aproximadamente leer la absorbancia de las soluciones (A 1 ) Desencadenar la reaccioacuten antildeadiendo


Mezclar esperar 15 min medir la absorbancia y verificar el cese de la reaccioacuten cuando hayan pasado 2 min (A 2 )

Inmediatamente despueacutes antildeadir


Mezclar leer al cabo de 10 min comprobar el cese de la reaccioacuten despueacutes de 2 min (A 3 )

Determinar las diferencias de absorbancia

A 2 ndash A 1 correspondiente a la glucosa

A 3 ndash A 2 correspondiente a la fructosa

tanto en relacioacuten con el testigo como con la determinacioacuten


Deducir la diferencia de absorbancia del testigo (ΔA T ) y la de la muestra (ΔA M ) y establecer

para la glucosa ΔA G = ΔA M ndash ΔA T

para la fructosa ΔA F = ΔA M ndash ΔA T

Observacioacuten

El tiempo necesario para la accioacuten de las enzimas puede variar de un lote a otro Aquiacute solo se ha dado a tiacutetulo indicativo Se recomienda determinarlo con cada lote

53 Expresioacuten de los resultados

531 Caacutelculo

La foacutermula general para el caacutelculo de las concentraciones es la siguiente

C = ((V x PM)(ε times d times v times 1 000)) times ΔA (gl)

V = volumen contenido en la cubeta (ml)

v = volumen de la muestra (ml)

PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse

d = camino oacuteptico de la cubeta (cm)

ε = coeficiente de absorcioacuten del NADPH a 340 nm = 63 (mmol ndash1 times l times cm ndash1 )

V = 292 ml para la determinacioacuten de la glucosa

V = 294 ml para la determinacioacuten de la fructosa

v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene

para la glucosa C (gl) = 0417 times ΔA G

para la fructosa C (gl) = 0420 times ΔA F

Si al preparar la muestra se ha efectuado una dilucioacuten multiplicar el resultado por el factor F

Observacioacuten

Si las medidas se han tomado a longitudes de onda de 334 o 365 nm se obtiene

mdash medida a 334 nm ε = 62 (mmol ndash1 times l times cm ndash1 )






532 Repetibilidad (r)

r = 0056 x i

533 Reproducibilidad (R)

R = 012 + 0076 x i

x i = contenido en glucosa o fructosa en gramos por litro


7 DETERMINACIOacuteN DE AZUacuteCARES POR HPLC (SACAROSA) (OIV-AS-311-03-SUCRES) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

(pm)

[La descripcioacuten de este meacutetodo de anaacutelisis estaacute siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Esta descripcioacuten se publicaraacute en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV A tiacutetulo indicativo a la espera de dicha publicacioacuten cabe remitirse al capiacutetulo 6 punto 3 del anexo del Reglamento (CEE) n o 267690 de la Comisioacuten]


8 DETECCIOacuteN DEL AUMENTO DEL GRADO ALCOHOacuteLICO NATURAL DE MOSTOS DE UVA DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS DE MOSTOS DE UVA CONCENTRADOS RECTIFICADOS Y DE VINOS POR APLICACIOacuteN DE LA RESONANCIA MAGNEacuteTICA NUCLEAR DEL DEUTERIO (OIV-AS-311-05-ENRRMN) mdash

MEacuteTODO DE TIPO I

(pm)

[La descripcioacuten de este meacutetodo de anaacutelisis estaacute siendo objeto de reexamen por parte de las instancias cientiacuteficas de la OIV Esta descripcioacuten se publicaraacute en una Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la Asamblea General de la OIV haya adoptado un texto definitivo A tiacutetulo indicativo a la espera de dicha decisioacuten de la OIV cabe remitirse al capiacutetulo 8 del anexo del Reglamento (CEE) n o 267690 de la Comisioacuten]


9 GRADO ALCOHOacuteLICO VOLUMEacuteTRICO (OIV-AS-312-01-TALVOL) mdash MEacuteTODOS DE TIPO I

(pm)

[Las descripciones de estos meacutetodos de anaacutelisis estaacuten siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Se publicaraacuten en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV A tiacutetulo indicativo a la espera de dicha publicacioacuten de la OIV cabe remitirse al capiacutetulo 3 del anexo del Reglamento (CEE) n o 267690 de la Comisioacuten]


10 DETERMINACIOacuteN DE LA RELACIOacuteN ISOTOacutePICA 13 C 12 C POR ESPECTROMETRIacuteA DE MASA ISOTOacutePICA DEL ETANOL DEL VINO O DEL ETANOL OBTENIDO POR FERMENTACIOacuteN DE MOSTOS MOSTOS CONCENTRADOS O MOSTOS CONCENTRADOS RECTIFICADOS (OIV-AS-312-06-ETHANO) mdash

MEacuteTODO DE TIPO II

1 AacuteMBITO DE APLICACIOacuteN

El meacutetodo permite la medicioacuten de la relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C del etanol del vino y del etanol obtenido por fermentacioacuten de productos derivados de la vid (mosto mosto concentrado mosto concentrado rectificado)

2 REFERENCIAS NORMATIVAS

ISO 57251994 laquoFidelidad de los meacutetodos de ensayo Determinacioacuten de la repetibilidad y de la reproducibilidad de un meacutetodo de ensayo normalishyzado por ensayos interlaboratoriosraquo

V-PDB Belemnita de Viena Pee-Dee (R PDB = 00112372)

Meacutetodo OIV AS-311-O5-ENRRMN laquoDeteccioacuten del aumento del grado alcohoacutelico natural de mostos mostos concentrados mostos concentrados rectificados y vinos por aplicacioacuten de la resonancia magneacutetica nuclear del deuterio (FINE-RMN)raquo

3 TERMINOLOGIacuteA Y DEFINICIONES

13 C 12 C Relacioacuten de los isoacutetopos del carbono 13 ( 13 C) y 12 ( 12 C) en una muestra dada

δ 13 C Contenido en carbono 13 ( 13 C) expresado en partes por mil (permil)

FINE-RMN Fraccionamiento isotoacutepico natural especiacutefico estudiado por resonancia magneacutetica nuclear

V-PDB Belemnita de Viena Pee-Dee La PDB referencia primaria para la medicioacuten de las variaciones naturales de los contenidos isotoacutepicos en carbono 13 era un carbonato de calcio procedente de un rostro de belemnita del Cretaacutecico de la formacioacuten Pee-Dee de Carolina del Sur (EEUU) Su relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C o R PDB es R PDB = 00112372 La PDB estaacute agotada desde hace mucho tiempo pero sigue siendo la referencia prishymaria para expresar las variaciones naturales de los contenidos isotoacutepicos en carbono 13 frente a la que se calibran los materiales de referencia disponibles en el Organismo Internacional de la Energiacutea Atoacutemica (OIEA) de Viena (Austria) Las determinaciones isotoacutepicas de la presencia natural de carbono 13 se expresan entonces por convencioacuten respecto a la V- PDB

mz Relacioacuten masacarga

4 PRINCIPIO

En la fotosiacutentesis la asimilacioacuten del gas carboacutenico por los vegetales se efectuacutea seguacuten dos tipos principales de metabolismo que son los metabolismos C 3 (ciclo de Calvin) y C 4 (Hatch y Slack) Estos dos mecanismos de fotosiacutentesis presentan un fraccionamiento isotoacutepico diferente De esta manera los productos de las plantas como los azuacutecares y el alcohol obtenido por su fermentacioacuten presentan contenidos en carbono 13 maacutes elevados si proceden de plantas C 4 que si proceden de plantas C 3 La mayoriacutea de los vegetales como la vid y la remolacha pertenecen al grupo C 3 mientras que la cantildea de azuacutecar y el maiacutez pertenecen al grupo C 4 La medicioacuten del contenido en carbono 13 permite asiacute pues la deteccioacuten y evaluacioacuten del azuacutecar de origen C 4 (azuacutecar de cantildea o isoglucosa de maiacutez) antildeadido a los productos derivados de la uva (mostos de uva vinos etc) La combinacioacuten de la informacioacuten sobre el contenido en carbono 13 con la obtenida mediante FINE-RMN permite igualmente la cuantificacioacuten de la adicioacuten de mezclas de azuacutecares o de alcoholes procedentes de plantas C 3 y C 4

El contenido en carbono 13 se determina en el gas carboacutenico resultante de la combustioacuten completa de la muestra La concentracioacuten de los principales isotopoacutemeros de masa 44 ( 12 C 16 O 2 ) 45 ( 13 C 16 O 2 y 12 C 17 O 16 O) y 46 ( 12 C 16 O 18 O) resultado de las diferentes combinaciones posibles de los isoacutetopos 18 O 17 O 16 O 13 C y 12 C se determina a partir de las corrientes ioacutenicas medidas en tres colectores diferentes de un espectroacutemetro de masa de relacioacuten isotoacutepica Las aportaciones de los isotopoacutemeros 13 C 17 O 16 O y 12 C 17 O 2 pueden despreciarse debido a su escasiacutesima proporcioacuten La corriente ioacutenica correspondiente a mz = 45 se corrige para tener en


cuenta la aportacioacuten de 12 C 17 O 16 O que se calcula en funcioacuten de la intensidad de la corriente medida correspondiente a mz = 46 considerando las concentraciones relativas de 18 O y 17 O (correccioacuten de Craig) La comparacioacuten con una referencia calibrada frente a la referencia internacional V-PDB permite calcular el contenido en carbono 13 en la escala relativa de δ 13 C

5 REACTIVOS

Las sustancias y los materiales fungibles dependen del equipo (6) utilizado por el laboratorio Los sistemas generalmente utilizados se basan en el analizador elemental Este puede estar disentildeado para la introduccioacuten de muestras colocadas en caacutepsulas metaacutelicas hermeacuteticamente cerradas o para la inyeccioacuten de muestras liacutequidas a traveacutes de una membrana mediante una jeringa

Seguacuten el tipo de instrumentacioacuten utilizado pueden utilizarse las siguientes sustancias de referencia reactivos y materiales fungibles

mdash Sustancias de referencia

mdash disponibles en el OIEA

Nombre Material δ 13 C frente a V-PDB (9)

mdash IAEA-CH-6 sacarosa ndash 104 permil

mdash IAEA-CH-7 polietileno ndash 318 permil

mdash NBS22 aceite ndash 297 permil

mdash USGS24 grafito ndash 161 permil

mdash disponibles en el IRMM (Instituto de Materiales y Medidas de Referencia) de Geel (B)


mdash CRMBCR 656 alcohol de vino ndash 2693 permil

mdash CRMBCR 657 glucosa ndash 1075 permil

mdash CRMBCR 660 solucioacuten hidroalcohoacutelica (graduashycioacuten alcohoacutelica 12 vol)

ndash 2672 permil

mdash Muestra patroacuten de trabajo con una relacioacuten 13 C 12 C conocida calibrada frente a materiales de referencia internacionales

mdash La lista indicativa de materiales fungibles que figura a continuacioacuten corresponde a los sistemas de flujo continuo

mdash helio para anaacutelisis (CAS 07440-59-7)

mdash oxiacutegeno para anaacutelisis (CAS 07440-44-7)

mdash dioacutexido de carbono para anaacutelisis utilizado como gas de referencia secundaria del contenido en carbono 13 (CAS 00124-38-9)

mdash reactivo de oxidacioacuten para el horno del sistema de combustioacuten como por ejemplo oacutexido de cobre (II) para anaacutelisis elemental (CAS 1317-38-0)

mdash desecante para eliminar el agua producida por la combustioacuten por ejemplo anhidrona para anaacutelisis elemental (perclorato de magnesio) (CAS 10034-81-8) (innecesario en los equipos dotados de un sistema de eliminacioacuten del agua por separacioacuten mediante el friacuteo o mediante un capilar con permeashybilidad selectiva)

6 EQUIPO Y MATERIAL

61 Espectroacutemetro de masa de relacioacuten isotoacutepica (EMRI)

Espectroacutemetro de masa de relacioacuten isotoacutepica (EMRI) que permita determinar el contenido natural relativo en 13 C del gas CO 2 con una precisioacuten interna del 005 permil o mejor expresado en valor relativo (punto 9) La precisioacuten interna se define aquiacute como la diferencia entre dos medidas de la misma muestra de CO 2 El espectroacutemetro de masa destinado a la medicioacuten de relaciones isotoacutepicas estaacute equipado generalmente con un colector triple para medir simultaacuteneamente las intensidades correspondientes a mz = 44 45 y 46 El espectroacutemetro de masa de relacioacuten isotoacutepica debe estar equipado con un sistema de introduccioacuten doble para medir en alternancia la muestra problema y una muestra de referencia o bien utilizar un sistema integrado que efectuacutee la combustioacuten cuantitativa de las muestras y separe el dioacutexido de carbono de los demaacutes productos de combustioacuten antes de la medicioacuten en el espectroacutemetro de masa


62 Equipo de combustioacuten

Equipo de combustioacuten capaz de convertir cuantitativamente el etanol en dioacutexido de carbono y de eliminar todos los demaacutes productos de combustioacuten incluida el agua sin ninguacuten fraccionamiento isotoacutepico El equipo puede ser un sistema de flujo continuo integrado en la instrumentacioacuten de espectrometriacutea de masa (punto 621) o bien un sistema autoacutenomo de combustioacuten (punto 622) El equipo debe permitir la obtencioacuten de una precisioacuten al menos equivalente a la indicada en el punto 11

621 Sistemas de flujo continuo

Estaacuten constituidos por un analizador elemental o por un cromatoacutegrafo de gases dotado de un sistema de combustioacuten en liacutenea

En caso de sistemas equipados para la introduccioacuten de muestras contenidas en caacutepsulas metaacutelicas se utiliza el material de laboratorio siguiente

mdash microjeringa o micropipeta aforada con puntas apropiadas

mdash balanza con escala de lectura de 1 μg al menos

mdash pinzas para encapsular

mdash caacutepsulas de estantildeo para muestras liacutequidas

mdash caacutepsulas de estantildeo para muestras soacutelidas

Nota

A fin de limitar los riesgos de evaporacioacuten de las muestras de etanol es posible poner en las caacutepsulas un material absorbente (por ejemplo chromosorb W 45-60 mesh) del cual se habraacute comprobado previamente mediante un ensayo en blanco que no lleva ninguna cantidad significativa de carbono que pueda alterar los resultados

Si se emplea un analizador elemental dotado de inyector para liacutequidos o en caso de sistema de preparacioacuten por cromatografiacutea-combustioacuten se utiliza el material de laboratorio siguiente

mdash jeringa para liacutequidos

mdash frascos provistos de cierres estancos y de membranas inertes

Los materiales de laboratorio indicados en las listas anteriores se dan a tiacutetulo de ejemplo y pueden sustituirse por otros materiales de caracteriacutesticas equivalentes seguacuten el tipo de equipo de combustioacuten y de espectrometriacutea de masa utilizado por el laboratorio

622 Sistemas autoacutenomos de preparacioacuten

En este caso las muestras de dioacutexido de carbono procedentes de la combustioacuten de las muestras problema y de referencia se recogen en ampollas que se instalan a continuacioacuten en el doble sistema de entrada del especshytroacutemetro para efectuar el anaacutelisis isotoacutepico Pueden utilizarse varios tipos de equipos de combustioacuten descritos en la bibliografiacutea

mdash sistema cerrado de combustioacuten llenado con gas oxiacutegeno circulante

mdash analizador elemental con flujo de helio y de oxiacutegeno

mdash ampolla sellada de cristal rellena de oacutexido de cobre (II) como agente de oxidacioacuten

7 PREPARACIOacuteN DE LAS MUESTRAS PROBLEMA

El etanol debe extraerse del vino antes de la determinacioacuten isotoacutepica Esta extraccioacuten se efectuacutea mediante destilacioacuten del vino como se describe en el punto 31 del meacutetodo de FINE-RMN (OIV - MA-E-AS311-05- ENRRMN)

Cuando se trate de mosto de uva de mosto de uva concentrado y de mosto de uva concentrado rectificado los azuacutecares deben fermentarse en primer lugar para convertirse en etanol como se describe en el punto 32 del meacutetodo de FINE-RMN (OIV - MA-E-AS311-05-ENRRMN)

8 PROCEDIMIENTO

Todas las etapas preparatorias deben efectuarse evitando que se pierda por evaporacioacuten cualquier cantidad significativa de etanol lo que podriacutea cambiar la composicioacuten isotoacutepica de la muestra


La descripcioacuten que figura a continuacioacuten hace referencia a los procedimientos utilizados generalmente para la combustioacuten de muestras de etanol por medio de sistemas automatizados de combustioacuten presentes en el comercio Para la preparacioacuten del dioacutexido de carbono a fines de anaacutelisis isotoacutepico pueden convenir otros meacutetodos siempre que garanticen que la muestra de etanol se convierte cuantitativamente en dioacutexido de carbono sin ninguna peacuterdida de etanol por evaporacioacuten

Procedimiento experimental basado en la utilizacioacuten de un analizador elemental

a) Encapsulado de las muestras

mdash utilizar caacutepsulas pinzas y placa de preparacioacuten limpias

mdash con ayuda de las pinzas tomar una caacutepsula de dimensiones apropiadas

mdash introducir el volumen necesario de liacutequido en la caacutepsula mediante la micropipeta

mdash Nota

Para obtener 2 mg de carbono hacen falta 384 mg de etanol absoluto o 417 mg de destilado con un grado alcohoacutelico de 92 mm Debe calcularse de la misma manera la cantidad adecuada de destilado seguacuten la cantidad de carbono necesaria en funcioacuten de la sensibilidad del equipo de espectrometriacutea de masa

mdash cerrar la caacutepsula con ayuda de las pinzas

mdash cada caacutepsula debe cerrarse de forma totalmente hermeacutetica en caso contrario hay que eliminar la caacutepsula defectuosa y preparar una nueva

mdash preparar dos caacutepsulas de cada muestra

mdash poner las caacutepsulas en el lugar adecuado sobre la placa del introductor automaacutetico de muestras del analizador elemental cada caacutepsula debe identificarse cuidadosamente con un nuacutemero de orden

mdash poner sistemaacuteticamente caacutepsulas que contengan referencias de trabajo al principio y al final de la serie de muestras

mdash introducir regularmente muestras de control en la serie de muestras

b) Control y ajuste del equipo de anaacutelisis elemental y de espectrometriacutea de masa

mdash ajustar la temperatura de los hornos del analizador elemental y los flujos de gas de helio y de oxiacutegeno para una combustioacuten oacuteptima de la muestra

mdash verificar la ausencia de fugas en el sistema de anaacutelisis elemental y de espectrometriacutea de masa (por ejemplo controlando la corriente ioacutenica de mz = 28 correspondiente al N 2 )

mdash ajustar el espectroacutemetro de masa para medir las intensidades de las corrientes ioacutenicas correspondientes a mz = 44 45 y 46

mdash verificar el sistema con ayuda de muestras de control conocidas antes de comenzar las mediciones de las muestras

c) Desarrollo de una serie de mediciones

Se introducen sucesivamente las muestras situadas en el introductor automaacutetico de muestras del analizador elemental (o del cromatoacutegrafo) El dioacutexido de carbono de cada combustioacuten de una muestra se eluye hacia el espectroacutemetro de masa que mide las corrientes ioacutenicas El ordenador acoplado al equipo registra las intensidades de corriente ioacutenica y calcula los valores δ correspondientes a cada muestra (punto 9)

9 CAacuteLCULO

El objetivo del meacutetodo consiste en medir la relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C del etanol extraiacutedo a partir del vino o a partir de productos derivados de la uva previa fermentacioacuten La relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C puede expresarse mediante su desviacioacuten respecto a una referencia de trabajo La desviacioacuten isotoacutepica del carbono 13 (δ 13 C) se calcula entonces en una escala delta por mil (δ1 000) comparando los resultados obtenidos con la muestra problema frente a los de la referencia de trabajo calibrada anteriormente respecto a la referencia primaria internacional (V-PDB) Los valores δ 13 C se expresan respecto a la referencia de trabajo seguacuten la foacutermula siguiente

δ 13 C muestref permil = 1 000 times (R muest -R ref )R ref

donde R muest y R ref son respectivamente las relaciones isotoacutepicas 13 C 12 C de la muestra y del dioacutexido de carbono utilizado como gas de referencia


Los valores δ 13 C se expresan entonces respecto a la referencia V-PDB seguacuten la foacutermula siguiente

δ 13 C muestV-PDB permil = δ 13 C muestref + δ 13 C refV-PDB + (δ 13 C muestref times δ 13 C refV-PDB )1 000

donde δ 13 C refV-PDB es la desviacioacuten isotoacutepica determinada previamente de la referencia de trabajo respecto al V-PDB

Durante la medicioacuten en liacutenea pueden observarse pequentildeas desviaciones debidas a la variacioacuten de las condishyciones instrumentales En este caso las δ 13 C de las muestras deben corregirse en funcioacuten de la diferencia entre el valor δ 13 C medido con la referencia de trabajo y su verdadero valor calibrado previamente frente al V-PDB comparando con uno de los materiales de referencia internacionales Puede aceptarse que entre dos mediciones de la referencia de trabajo son lineales la desviacioacuten y por tanto la correccioacuten que debe aplicarse a los resultados de las muestras La referencia de trabajo debe medirse al principio y al final de todas las series de muestras Despueacutes puede calcularse la correccioacuten respecto a cada muestra por medio de una interpolacioacuten lineal

10 CONTROL Y GARANTIacuteA DE CALIDAD

Controlar que el valor 13 C de la referencia de trabajo no difiere en maacutes del 05 permil del valor admitido En caso contrario habraacute que controlar los ajustes del equipo de espectrometriacutea y eventualmente proceder a un reajuste

Con cada muestra verificar que la diferencia de resultados entre las dos caacutepsulas medidas sucesivamente es inferior al 03 permil El resultado final correspondiente a una muestra dada es el valor medio de las dos caacutepsulas Si la diferencia es superior al 03 permil debe repetirse la medicioacuten

El control de la correccioacuten de la medicioacuten puede basarse en la intensidad de la corriente ioacutenica correspondiente a mz = 44 que es proporcional a la cantidad de carbono inyectado en el analizador elemental En condiciones tiacutepicas la intensidad de esta corriente ioacutenica deberiacutea ser praacutecticamente constante con las muestras analizadas Una desviacioacuten significativa debe hacer sospechar una evaporacioacuten de etanol (por ejemplo en caso de caacutepsula mal sellada) o bien una inestabilidad del analizador elemental o del espectroacutemetro de masa

11 CARACTERIacuteSTICAS DEL MEacuteTODO (PRECISIOacuteN)

Se realizoacute un primer estudio en colaboracioacuten (punto 111) con destilados de alcoholes de origen viacutenico y de alcoholes de cantildea y de remolacha asiacute como diferentes mezclas de estos tres oriacutegenes Dado que dicho estudio no teniacutea en cuenta la etapa de destilacioacuten se ha prestado atencioacuten asimismo a datos complementarios procedentes de otros ensayos interlaboratorios realizados con vinos (punto 112) y especialmente de grupos de ensayos de aptitud (punto 113) para las mediciones isotoacutepicas Los resultados demuestran que los diferentes sistemas de destilacioacuten utilizados en condiciones satisfactorias y en particular los aplicables en las mediciones FINE-RMN no introducen variabilidad significativa en las determinaciones de δ 13 C del etanol del vino Los paraacutemetros de fidelidad observados respecto a los vinos son casi ideacutenticos a los obtenidos en el estudio en colaboracioacuten (punto 111) con los destilados

111 Estudio en colaboracioacuten sobre los destilados

Antildeo del estudio interlaboratorios 1996

Nuacutemero de laboratorios 20

Nuacutemero de muestras 6 muestras con ocultacioacuten doble

Analito δ 13 C del etanol

Coacutedigo de las muestras Alcohol de origen viacutenico Alcohol de remolacha Alcohol de cantildea

A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100


Muestras AG BC DF EI HK JL

Nuacutemero de laboratorios seleccionados previa eliminacioacuten de los resultados anoacutemalos

19 18 17 19 19 19

Nuacutemero de resultados aceptados 38 36 34 38 38 38

Valor medio (δ 13 C) permil ndash 2532 ndash 2675 ndash 2779 ndash 2526 ndash 2663 ndash 1254

S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041

Desviacioacuten tiacutepica de la repetibilidad (S r ) permil 008 009 006 011 008 006

Liacutemite de repetibilidad r (28 times S r ) permil 022 025 016 032 023 018

S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584

Desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad (S R ) permil 020 018 020 021 018 024

Liacutemite de reproducibilidad R (28 times S R ) permil 055 049 055 060 050 068

112 Estudio interlaboratorios con dos vinos y un alcohol


Nuacutemero de laboratorios 14 estudiaron la destilacioacuten de los vinos y 7 de ellos tambieacuten efectuaron la medicioacuten de δ 13 C del etanol de los vinos 8 efectuaron la medicioacuten de δ 13 C de la muestra de alcohol

Nuacutemero de muestras 3 (vino blanco de graduacioacuten 93 vol vino blanco de graduacioacuten 96 vol y alcohol de graduacioacuten 93 mm)


Muestras Vino tinto Vino blanco Alcohol

Nuacutemero de laboratorios 7 7 8

Nuacutemero de resultados aceptados 7 7 8

Valor medio (δ 13 C) permil ndash 2620 ndash 2620 ndash 2508

Varianza de la reproducibilidad S R 2 00525 00740 00962

Desviacioacuten tiacutepica de la reproducibilidad (S R ) permil 023 027 031

Liacutemite de reproducibilidad R (28 times S R ) permil 064 076 087

Los laboratorios participantes utilizaron diferentes sistemas de destilacioacuten Las determinaciones isotoacutepicas de δ 13 C realizadas en un solo laboratorio con el conjunto de los destilados devueltos por los participantes no mostraron ninguacuten valor anoacutemalo ni significativamente distinto de los valores medios La varianza de los resultados (S 2 = 00059) es comparable a las varianzas de la repetibilidad S r

2 del estudio en colaboracioacuten sobre los destilados (punto 111)

113 Resultados de los ejercicios de los grupos de aptitud para los ensayos isotoacutepicos

Desde diciembre de 1994 se organizan regularmente ejercicios internacionales de aptitud para las determinashyciones isotoacutepicas de los vinos y alcoholes (destilados de graduacioacuten 96 vol) Los resultados permiten a los laboratorios participantes controlar la calidad de sus anaacutelisis La explotacioacuten estadiacutestica de los resultados permite apreciar la variabilidad de las determinaciones en condiciones de reproducibilidad y de esta manera estimar los paraacutemetros de varianza y de liacutemite de reproducibilidad Los resultados obtenidos con las determishynaciones de δ 13 C del etanol de los vinos y destilados se resumen en el cuadro siguiente


Fecha Vino Destilados

N S R S R 2 R N S R S R

2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059

N nuacutemero de laboratorios participantes

114 Liacutemites de repetibilidad y de reproducibilidad

Asiacute pues los datos de los diferentes ejercicios interlaboratorios presentados en los cuadros anteriores permiten establecer para el presente meacutetodo incluyendo igualmente la etapa de destilacioacuten los liacutemites de repetibilidad y de reproducibilidad siguientes

Liacutemite de repetibilidad r 024

Liacutemite de reproducibilidad R 06


11 ACIDEZ TOTAL (OIV - AS-313-01-ACITOT) mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 DEFINICIOacuteN

La acidez total es la suma de los aacutecidos valorables cuando se lleva el pH a 7 antildeadiendo una solucioacuten alcalina valorada

El dioacutexido de carbono no se incluye en la acidez total


Valoracioacuten potenciomeacutetrica o valoracioacuten en presencia de azul de bromotimol como indicador del final de la reaccioacuten mediante comparacioacuten con un patroacuten de coloracioacuten

3 REACTIVOS

31 Solucioacuten amortiguadora de pH 70

Fosfato monopotaacutesico (KH 2 PO 4 ) 1073 g

Solucioacuten M de hidroacutexido soacutedico (NaOH) 500 ml

Agua csp 1 000 ml

Tambieacuten pueden utilizarse soluciones amortiguadoras de referencia comerciales

32 Solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (NaOH)

33 Solucioacuten de azul de bromotimol de 4 gl

Azul de bromotimol (C 27 H 28 Br 2 O 5 S) 4 g

Alcohol neutro 96 vol 200 ml

Una vez solubilizado antildeadir

Agua sin CO 2 200 ml

Solucioacuten M de hidroacutexido soacutedico

csp coloracioacuten verde-azulada (pH 7) 75 ml

Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL

41 Trompa de vaciacuteo

42 Matraz Kitasato de 500 ml

43 Potencioacutemetro con escala graduada en unidades de pH y electrodos El electrodo de vidrio debe conservarse en agua destilada El electrodo de calomelanos y cloruro potaacutesico saturado debe conservarse en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico Generalmente se emplea un electrodo combinado que se conserva en agua destilada

44 Vasos de precipitados de 50 ml de capacidad (en caso de vinos) y de 100 ml de capacidad (en caso de mostos concentrados rectificados)

5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

Eliminacioacuten del dioacutexido de carbono Colocar aproximadamente 50 ml de vino en un matraz Kitasato agitar y al mismo tiempo hacer el vaciacuteo con una trompa de agua La agitacioacuten debe durar de 1 a 2 minutos


Verter 200 g de mosto concentrado rectificado exactamente pesado en un matraz aforado de 500 ml Enrasar con agua Homogeneizar


52 Valoracioacuten potenciomeacutetrica

521 Calibrado del pH-metro

La calibracioacuten del pH-metro se efectuacutea a 20 degC siguiendo las indicaciones del aparato que se utilice mediante la solucioacuten amortiguadora de pH 700 a 20 degC

522 Teacutecnica de una medicioacuten

En un vaso de precipitados (punto 44) verter 10 ml si se trata de vino o 50 ml en caso de mosto concentrado rectificado de muestra preparada como se indica en el punto 51 Antildeadir 10 ml de agua destilada aproximadamente y verter con una bureta la solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) hasta que el pH sea igual a 7 a 20 degC La adicioacuten de licor alcalino debe efectuarse despacio agitando continuamente la solucioacuten Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de NaOH 01 M vertidos

53 Valoracioacuten con indicador (azul de bromotimol)

531 Ensayo previo obtencioacuten del patroacuten de coloracioacuten

En un vaso de precipitados (punto 44) verter 25 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de azul de bromotimol (punto 33) y 10 ml si se trata de vino o 50 ml en caso de mosto concentrado rectificado de muestra preparada como se indica en el punto 51 Antildeadir la solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) hasta obtener una coloracioacuten verde-azulada Antildeadir 5 ml de la solucioacuten amortiguadora de pH 7 (punto 31)


En un vaso de precipitados (punto 44) verter 30 ml de agua destilada y hervida 1 ml de solucioacuten de azul de bromotimol (punto 33) y 10 ml si se trata de vino o 50 ml en caso de mosto concentrado rectificado de muestra preparada como se indica en el punto 51 Antildeadir la solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) hasta obtener una coloracioacuten ideacutentica a la obtenida en el ensayo previo (punto 531) Se denominaraacute n al nuacutemero de mililitros de solucioacuten de hidroacutexido soacutedico 01 M utilizados



611 Vino

La acidez total expresada en miliequivalentes por litro seraacute

A = 10 bull n

El resultado se daraacute con 1 decimal

La acidez total expresada en gramos de aacutecido tartaacuterico por litro seraacute

Aprime = 0075 bull A


612 Mosto concentrado rectificado

mdash Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de mosto concentrado rectificado a = 5 bull n

mdash Acidez total expresada en miliequivalentes por kilogramo de azuacutecares totales

A = (500 bull n)P

P = contenido porcentual (mm) en azuacutecares totales


62 Repetibilidad (r) para la valoracioacuten con indicador (53)

r = 09 meq por litro

r = 007 g de aacutecido tartaacuterico por litro

para los vinos blancos rosados y tintos


63 Reproducibilidad (R) para la valoracioacuten con indicador (53)

Para los vinos blancos y rosados

R = 36 meq por litro

R = 03 g de aacutecido tartaacuterico por litro

Para los vinos tintos




12 ACIDEZ VOLAacuteTIL (OIV-AS-313-02-ACIVOL) mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 DEFINICIOacuteN

La acidez volaacutetil estaacute constituida por los aacutecidos pertenecientes a la serie aceacutetica que se encuentran en los vinos bien en estado libre bien en forma de sal


Valoracioacuten de los aacutecidos volaacutetiles separados del vino por arrastre de vapor de agua y rectificacioacuten de los vapores

Previamente debe eliminarse el dioacutexido de carbono del vino

La acidez del dioacutexido de azufre (tanto libre como combinado) destilado en dichas condiciones debe restarse de la acidez del destilado

Debe restarse asimismo la acidez del aacutecido soacuterbico eventualmente antildeadido al vino

Observacioacuten

El aacutecido saliciacutelico utilizado en algunos paiacuteses para estabilizar los vinos antes del anaacutelisis se encuentra en parte en el destilado Es necesario valorarlo y restarlo de la acidez El meacutetodo de esta determinacioacuten se encuentra en el apartado 7 del presente capiacutetulo

3 REACTIVOS

31 Aacutecido tartaacuterico cristalizado (C 4 H 6 O 6 )


33 Solucioacuten de fenolftaleiacutena al 1 en alcohol neutro de 96 vol

34 Aacutecido clorhiacutedrico (ρ 20 = 118 a 119 gml) diluido 14 (vv)

35 Solucioacuten 0005 M de yodo (I 2 )

36 Yoduro potaacutesico cristalizado (KI)

37 Engrudo de almidoacuten de 5 gl

Desleiacuter 5 g de almidoacuten en unos 500 ml de agua Llevar a ebullicioacuten agitando y mantener hirviendo durante 10 minutos antildeadir 200 g de cloruro soacutedico Una vez friacuteo llevar a 1 litro

38 Solucioacuten saturada de borato soacutedico (Na 2 B 4 O 7 10 H 2 O) es decir aproximadamente 55 gl a 20 degC

4 MATERIAL

41 Aparato de arrastre de vapor de agua compuesto de

1) Un generador de vapor de agua el vapor de agua producido debe estar exento de dioacutexido de carbono

2) Un borboteador

3) Una columna rectificadora

4) Un refrigerante

Este aparato debe responder a los tres ensayos siguientes

a) Poner en el borboteador 20 ml de agua hervida recoger 250 ml de destilado y antildeadirles 01 ml de solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) y 2 gotas de la solucioacuten de fenolftaleiacutena (punto 33) la coloracioacuten rosa debe permanecer estable durante 10 segundos por lo menos (vapor de agua exento de dioacutexido de carbono)

b) Poner en el borboteador 20 ml de solucioacuten 01 M de aacutecido aceacutetico Recoger 250 ml de destilado Valorar con la solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) El volumen empleado debe ser al menos igual a 199 ml (aacutecido aceacutetico arrastrado ge 995 )


c) Poner en el borboteador 20 ml de solucioacuten M de aacutecido laacutectico Recoger 250 ml de destilado y valorar su acidez con una solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32)

El volumen empleado debe ser inferior o igual a 10 ml (aacutecido laacutectico destilado le 05 )

Todo aparato o teacutecnica que satisfaga estos tres ensayos constituye un aparato o teacutecnica oficial internacional


43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO

51 Preparacioacuten de la muestra eliminacioacuten del dioacutexido de carbono

Poner alrededor de 50 ml de vino en un matraz Kitasato agitar y al mismo tiempo hacer el vaciacuteo por medio de la trompa de agua La agitacioacuten debe durar de 1 a 2 minutos

52 Arrastre por vapor de agua

Echar en el borboteador 20 ml de vino desprovisto de dioacutexido de carbono como se indica en el punto 51 Antildeadir unos 05 g de aacutecido tartaacuterico (punto 31) Recoger al menos 250 ml de destilado

53 Valoracioacuten

Valorar con la solucioacuten 01 M de hidroacutexido soacutedico (punto 32) en presencia de 2 gotas de solucioacuten de fenolftaleiacutena (punto 33) Se denominaraacute n ml al volumen utilizado

Antildeadir 4 gotas de aacutecido clorhiacutedrico diluido 14 (punto 34) 2 ml de engrudo de almidoacuten (punto 37) y algunos cristales de yoduro potaacutesico (punto 36) Valorar el dioacutexido de azufre libre con la solucioacuten 0005 M de yodo (punto 35) Se denominaraacute nprime ml al volumen utilizado

Antildeadir la solucioacuten saturada de borato soacutedico (punto 38) hasta que reaparezca la coloracioacuten rosa Valorar con la solucioacuten 0005 M de yodo (punto 35) el dioacutexido de azufre combinado Se denominaraacute nPrime ml al volumen utilizado



La acidez volaacutetil expresada en miliequivalentes por litro con 1 decimal seraacute

A = 5 (n ndash 01 nprime ndash 005 nPrime)

La acidez volaacutetil expresado en gramos de aacutecido aceacutetico por litro con 2 decimales seraacute

0300 (n ndash 01 nprime ndash 005 nPrime)



r = 004 g de aacutecido aceacutetico por litro



R = 008 g de aacutecido aceacutetico por litro

64 Caso de un vino con adicioacuten de aacutecido soacuterbico

Dado que el aacutecido soacuterbico es arrastrado por el vapor de agua en un 96 para un volumen de destilado de 250 ml su acidez debe restarse de la acidez volaacutetil sabiendo que 100 mg de aacutecido soacuterbico corresponden a una acidez de 089 miliequivalentes o de 0053 g de aacutecido aceacutetico y conociendo el contenido en aacutecido soacuterbico (mgl) determinado previamente

7 DETERMINACIOacuteN DEL AacuteCIDO SALICIacuteLICO QUE SE HALLA EN EL DESTILADO UTILIZADO PARA VALOshyRAR LA ACIDEZ VOLAacuteTIL

71 Principio

Una vez efectuada la determinacioacuten de la acidez volaacutetil y la correccioacuten del dioacutexido de azufre la presencia de aacutecido saliciacutelico se caracteriza por la aparicioacuten previa acidificacioacuten de una coloracioacuten violeta tras haber antildeadido una sal de hierro III


La determinacioacuten del aacutecido saliciacutelico que se halla en el destilado con los aacutecidos volaacutetiles se efectuaraacute con un segundo destilado cuyo volumen sea igual al del utilizado para determinar la acidez volaacutetil El aacutecido saliciacutelico se determinaraacute en dicho destilado mediante un meacutetodo colorimeacutetrico de comparacioacuten y el resultado se restaraacute de la acidez volaacutetil

72 Reactivos

721 Aacutecido clorhiacutedrico (HCl) (ρ 20 = 118 a 119 gml)

722 Tiosulfato soacutedico (Na 2 S 2 O 3 times 5 H 2 O) 01 M

723 Solucioacuten de sulfato de hierro III y de amonio (Fe 2 (SO 4 ) 3 times (NH 4 ) 2 SO 4 times 24 H 2 O) al 10 (mv)

724 Solucioacuten de salicilato soacutedico (NaC 7 H 5 O 3 ) 001 M con 160 gl de salicilato soacutedico

73 Procedimiento

731 Caracterizacioacuten del aacutecido saliciacutelico en el destilado de la acidez volaacutetil

Inmediatamente despueacutes de haber efectuado la determinacioacuten de la acidez volaacutetil y la correccioacuten del dioacutexido de azufre libre y combinado verter en el matraz Erlenmeyer 05 ml de aacutecido clorhiacutedrico (punto 721) 3 ml de solucioacuten 01 M de tiosulfato soacutedico (punto 722) y 1 ml de solucioacuten de sulfato de hierro III y de amonio (punto 723)

En presencia de aacutecido saliciacutelico aparece una coloracioacuten violeta

732 Determinacioacuten del aacutecido saliciacutelico

En el matraz Erlenmeyer anterior indicar mediante una sentildeal de referencia el volumen del destilado Vaciar y enjuagar el matraz

Someter una nueva muestra de 20 ml de vino al arrastre por vapor de agua y recoger el destilado en el matraz Erlenmeyer hasta la sentildeal de referencia Antildeadir 03 ml de aacutecido clorhiacutedrico puro (punto 721) y 1 ml de solucioacuten de sulfato de hierro III y de amonio (punto 723) El contenido del matraz Erlenmeyer adquiere una coloracioacuten violeta

En un matraz Erlenmeyer ideacutentico al que lleva la sentildeal de referencia verter agua destilada hasta el mismo nivel que el del destilado Antildeadir 03 ml de aacutecido clorhiacutedrico puro (punto 721) y 1 ml de solucioacuten de sulfato de hierro III y de amonio (punto 723) Verter con una bureta la solucioacuten de salicilato soacutedico 001 M (punto 724) hasta que se obtenga una coloracioacuten violeta de la misma intensidad que la del matraz Erlenmeyer que contiene el destilado de vino

Se denominaraacute nprimeprimeprime al nuacutemero de mililitros utilizados

74 Correccioacuten de la acidez volaacutetil

Restar el volumen 01 times nprimeprimeprimeml del volumen n ml de solucioacuten de hidroacutexido soacutedico 01 M utilizado para valorar la acidez del destilado en la determinacioacuten de la acidez volaacutetil


13 AacuteCIDO CIacuteTRICO (OIV-AS-313-09-ACIENZ) mdash MEacuteTODO DE TIPO II


El aacutecido ciacutetrico se transforma en oxalacetato y acetato en una reaccioacuten catalizada por la citrato-liasa (CL)

Citrato larrrarr oxalacetato + acetato

En presencia de malato-deshidrogenasa (MDH) y de lactato-deshidrogenasa (LDH) el oxalacetato y su derivado de descarboxilacioacuten el piruvato se reducen a L-malato y L-lactato por el nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido reducido (NADH)

Oxalacetato + NADH + H + larrrarr L-malato + NAD +

Piruvato + NADH + H + larrrarr L-lactato + NAD +

La cantidad de NADH oxidado a NAD + en estas reacciones es proporcional al citrato presente La oxidacioacuten de NADH se mide mediante la disminucioacuten de su absorbancia a la longitud de onda de 340 nm

2 REACTIVOS

21 Amortiguador de pH 78

(glicilglicina 051 M pH = 78 Zn 2+ 06 times 10 -3 M)

Disolver 713 g de glicilglicina en 70 ml aproximadamente de agua bidestilada

Ajustar el pH a 78 con 13 ml aproximadamente de solucioacuten de hidroacutexido de sodio 5 M antildeadir 10 ml de solucioacuten de cloruro de cinc ZnCl 2 de 80 mg en 100 ml y llevar a 100 ml con agua bidestilada

La solucioacuten permanece estable por lo menos 4 semanas a + 4 degC

22 Solucioacuten de nicotinamida-adenina-dinucleoacutetido reducido (NADH) (aprox 6 times 10 ndash3 M) Disolver 30 mg de NADH y 60 mg de NaHCO 3 con 6 ml de agua bidestilada

23 Solucioacuten de malato-deshidrogenasa lactato-deshidrogenasa (MDHLDH) (05 mg MDHml 25 mg LDHml)

Hacer una mezcla de 01 ml MDH (5 mg MDHml) 04 ml de solucioacuten de sulfato de amonio (32 M) y 05 ml LDH (5 mgml) Esta solucioacuten se mantiene estable durante 1 antildeo por lo menos a + 4 degC

24 Citrato-liasa CL (5 mg de proteiacutenaml) Disolver 168 mg de liofilizado en 1 ml de agua helada La solucioacuten es estable por lo menos durante 1 semana a + 4 degC y durante 4 semanas congelada

Antes de proceder a la determinacioacuten se recomienda comprobar la actividad de la enzima

25 Polivinil-polipirrolidona (PVPP)

Observacioacuten El conjunto de reactivos necesarios para esta determinacioacuten se comercializa ya preparado

3 MATERIAL

31 Un espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas a 340 nm (maacuteximo de absorcioacuten del NADH)

En su defecto fotoacutemetro de espectro discontinuo que permita efectuar medidas a 334 nm o a 365 nm Dado que se trata de medidas absolutas de absorbancia (no se utiliza curva de calibrado sino el coeficiente de extincioacuten del NADH) deben controlarse las escalas de las longitudes de onda y de las absorbancias del aparato

32 Cubetas de vidrio o cubetas desechables de 1 cm de camino oacuteptico

33 Micropipetas que permitan tomar voluacutemenes comprendidos entre 002 ml y 2 ml


La determinacioacuten del citrato se suele efectuar directamente sobre el vino sin decoloracioacuten previa y sin dilucioacuten siempre que el contenido en aacutecido ciacutetrico sea inferior a 400 mgl Si no proceder a la dilucioacuten del vino de forma que la concentracioacuten de citrato se situacutee entre 20 y 400 mgl (cantidad de citrato en la muestra comprendida entre 5 μg y 80 μg)


En caso de vino tinto rico en compuestos fenoacutelicos se recomienda tratarlo previamente con PVPP

Poner en suspensioacuten en el agua alrededor de 02 g de PVPP y dejar reposar 15 minutos Pasar por filtro de pliegues

Antildeadir a 10 ml de vino colocado dentro de un Erlenmeyer de 50 ml la PVPP huacutemeda tomada del filtro con espaacutetula Agitar durante 2 o 3 minutos y filtrar

5 PROCEDIMIENTO

Se ajusta la longitud de onda del espectrofotoacutemetro a 340 nm y se realizan las medidas de absorbancia en cubetas de 1 cm habiendo ajustado el cero de absorbancia con respecto al aire (sin cubetas en el camino oacuteptico) Introducir en cubetas de 1 cm

Solucioacuten testigo Solucioacuten de la muestra

Solucioacuten 21 100 ml 100 ml


Muestra mdash 020 ml

Agua bidestilada 200 ml 180 ml


Mezclar transcurridos unos 5 minutos leer las absorbancias de las soluciones testigo y de la muestra (A 1 )

Antildeadir


Mezclar esperar a que finalice la reaccioacuten (unos 5 minutos) y leer las absorbancias de las soluciones testigo y de la muestra (A 2 )

Determinar las diferencias de absorbancias (A 1 ndash A 2 ) de las soluciones testigo y de la muestra

Restar la diferencia de absorbancias de la solucioacuten testigo (ΔA T ) de la diferencia de absorbancias de la solucioacuten de la muestra (ΔA M )

ΔA = ΔA M ndash ΔA T

Observacioacuten El tiempo necesario para la accioacuten de las enzimas puede variar de un lote a otro Aquiacute solo se ha dado a tiacutetulo indicativo Se recomienda determinarlo con cada lote


El contenido en aacutecido ciacutetrico se expresa en miligramos por litro (mgl) sin decimales


La concentracioacuten en miligramos por litro viene dada por la foacutermula general

C = ((V times PM)(ε times d times v)) times ΔA

V = volumen total de la solucioacuten en ml (aquiacute 314 ml)

v = volumen de la muestra en ml (aquiacute 2 ml)

PM = masa molecular de la sustancia que va a determinarse (aquiacute aacutecido ciacutetrico anhidro = 1921)

d = camino oacuteptico de la cubeta en cm (aquiacute 1 cm)

ε = coeficiente de extincioacuten del NADH a 340 nm

ε = 63 mmol ndash 1 times l times cm ndash 1

Se obtiene

C = 479 times ΔA

Si se ha efectuado una dilucioacuten durante la preparacioacuten de la muestra multiplicar el resultado por el factor de dilucioacuten

Observacioacuten a 334 nm C = 488 times ΔA (ε = 62 mmol ndash 1 times l times cm ndash 1 ) y

a 365 nm C = 887 times ΔA (ε = 34 mmol ndash 1 times l times cm ndash 1 )



Contenido en aacutecido ciacutetrico inferior a 400 mgl r = 14 mgl

Contenido en aacutecido ciacutetrico superior a 400 mgl r = 28 mgl


Contenido en aacutecido ciacutetrico inferior a 400 mgl R = 39 mgl

Contenido en aacutecido ciacutetrico superior a 400 mgl R = 65 mgl


14 AacuteCIDO SOacuteRBICO (OIV-AS-313-14-ACISOR) mdash MEacuteTODO DE TIPO IV


11 Meacutetodo de determinacioacuten por espectrofotometriacutea de absorcioacuten en el ultravioleta

El aacutecido soacuterbico (aacutecido transtrans-hexa-24-dienoico) separado por destilacioacuten con arrastre de vapor de agua se determina en el destilado mediante espectrofotometriacutea de absorcioacuten en el ultravioleta Las sustancias que interfieren con la medida de la absorcioacuten en el ultravioleta se eliminan por evaporacioacuten a sequedad de la muestra del destilado ligeramente alcalinizado por una solucioacuten de hidroacutexido de calcio Los contenidos inferiores a 20 mgl deben confirmarse por cromatografiacutea en capa fina (sensibilidad 1 mgl)

12 Meacutetodo de determinacioacuten por cromatografiacutea de gases

El aacutecido soacuterbico extraiacutedo en eacuteter etiacutelico se determina por cromatografiacutea en fase gaseosa en presencia de un patroacuten interno

13 Meacutetodo de deteccioacuten de trazas por cromatografiacutea de capa fina

El aacutecido soacuterbico extraiacutedo en eacuteter etiacutelico se separa por cromatografiacutea en capa fina y se evaluacutea su concentracioacuten en forma semicuantitativa

2 MEacuteTODO DE DETERMINACIOacuteN POR ESPECTROFOTOMETRIacuteA DE ABSORCIOacuteN EN EL ULTRAVIOLETA

21 Reactivos

211 Aacutecido tartaacuterico (C 4 H 6 O 6 ) cristalizado

212 Solucioacuten de hidroacutexido de calcio (Ca(OH) 2 ) aproximadamente 002 M

213 Solucioacuten de referencia de aacutecido soacuterbico de 20 mg por litro

Disolver 20 mg de aacutecido soacuterbico (C 6 H 8 O 2 ) en 2 ml aproximadamente de solucioacuten 01 M de hidroacutexido de sodio Verter en un matraz aforado de 1 000 ml y enrasar con agua Tambieacuten es posible disolver 268 mg de sorbato de potasio (C 6 H 7 KO 2 ) en agua y completar con agua hasta 1 000 ml

22 Material

221 Aparato de destilacioacuten con arrastre de vapor de agua (veacutease laquoAcidez volaacutetilraquo)

222 Bantildeo de agua a 100 degC

223 Espectrofotoacutemetro que permita efectuar medidas a la longitud de onda de 256 nm con cubetas de cuarzo de 1 cm de camino oacuteptico

23 Procedimiento

231 Destilacioacuten

Introducir en el borboteador del aparato de arrastre de vapor de agua 10 ml de vino antildeadir entre1 y 2 g de aacutecido tartaacuterico (punto 211) Recoger 250 ml de destilado

232 Curva patroacuten

Preparar mediante diluciones con agua a partir de la solucioacuten de referencia (punto 213) cuatro soluciones de referencia diluidas que contengan respectivamente 05 1 25 y 5 mg de aacutecido soacuterbico por litro medir con el espectrofotoacutemetro sus respectivas absorbancias a 256 nm respecto al agua destilada Trazar la curva de absorbancias en funcioacuten de la concentracioacuten de las soluciones La variacioacuten es lineal


Introducir en una caacutepsula de 55 mm de diaacutemetro 5 ml de destilado antildeadir 1 ml de solucioacuten de hidroacutexido de calcio (punto 212) Evaporar hasta sequedad en un bantildeo de agua hirviendo

Recoger el residuo con algunos mililitros de agua destilada arrastrar cuantitativamente a un matraz aforado de 20 ml y enrasar con el agua de lavado Medir la absorbancia a 256 nm con el espectrofotoacutemetro en comparacioacuten con una solucioacuten testigo obtenida diluyendo hasta 20 ml con agua 1 ml de solucioacuten de hidroacutexido de calcio (punto 212)

Llevar el valor de la absorbancia medida a la recta patroacuten y deducir la concentracioacuten en aacutecido soacuterbico C de la solucioacuten

Observacioacuten En la praacutectica corriente esta evaporacioacuten a sequedad puede no ser necesaria Medir directamente la absorbancia en el destilado diluido a 14 frente a agua destilada




La concentracioacuten en aacutecido soacuterbico del vino expresada en miligramos por litro es igual a

100 times C

C = concentracioacuten en aacutecido soacuterbico de la solucioacuten analizada mediante espectrofotometriacutea expresada en miligramos por litro

3 MEacuteTODO DE DETERMINACIOacuteN POR CROMATOGRAFIacuteA DE GASES

31 Reactivos

311 Eacuteter etiacutelico ((C 2 H 5 ) 2 O) destilado en el momento de su utilizacioacuten

312 Solucioacuten del patroacuten interno solucioacuten de aacutecido undecanoico (C 11 H 22 O 2 ) en etanol al 95 vol de 1 g por litro

313 Solucioacuten acuosa de aacutecido sulfuacuterico (H 2 SO 4 ) (ρ 20 = 184 gml) diluido 13 (vv)

32 Material

321 Cromatoacutegrafo de gases equipado con un detector de ionizacioacuten de llama y una columna de acero inoxidable (4 m times 18 de pulgada) previamente tratada con dimetil-dicloro-silano y rellena con fase estacionaria comshypuesta por una mezcla de succinato de dietilenglicol (5 ) y aacutecido fosfoacuterico (1 ) (DEGS-H 3 PO 4 ) o por una mezcla de adipato de dietilenglicol (7 ) y aacutecido fosfoacuterico (1 ) (DEGA-H 3 PO 4 ) sobre un soporte soacutelido de Gaschrom Q 80 mdash 100 mallas

Para el tratamiento con dimetil-dicloro-silano (DMDCS) pasar por la columna una solucioacuten con 2 o 3 g de DMDCS en tolueno lavar inmediatamente la columna con metanol y a continuacioacuten pasar una corriente de nitroacutegeno despueacutes hexano y de nuevo una corriente de nitroacutegeno Rellenarla a continuacioacuten

Condiciones operativas

Temperatura del horno 175 degC

Temperatura del inyector y del detector 230 degC

Gas portador nitroacutegeno (flujo 20 mlmin)

322 Microjeringa de 10 microlitros de capacidad graduada en 01 microlitros

Observacioacuten Puede conseguirse igualmente una buena separacioacuten con otros tipos de columnas como la coshylumna capilar (por ejemplo FFAP)

El modo operatorio descrito arriba se da a tiacutetulo de ejemplo

33 Procedimiento

331 Preparacioacuten de la muestra problema

Introducir 20 ml de vino en un tubo de vidrio con una capacidad de unos 40 ml y provisto de un tapoacuten esmerilado antildeadir 2 ml de solucioacuten del patroacuten interno (punto 312) y 1 ml de solucioacuten diluida de aacutecido sulfuacuterico (punto 313)

Tras agitar el tubo invirtieacutendolo varias veces antildeadir al contenido 10 ml de eacuteter etiacutelico (punto 311) Extraer el aacutecido soacuterbico en la fase orgaacutenica agitando el tubo durante 5 minutos Dejar decantar

332 Preparacioacuten de la solucioacuten de referencia

Seleccionar un vino cuyo extracto eteacutereo produzca un cromatograma que no presente ninguacuten pico en la zona de elucioacuten del aacutecido soacuterbico antildeadir a este vino aacutecido soacuterbico hasta la concentracioacuten de 100 mg por litro Tratar seguacuten el procedimiento descrito en el punto 331 20 ml de la muestra asiacute preparada

333 Cromatografiacutea

Inyectar sucesivamente en el cromatoacutegrafo con una microjeringa 2 μl de la fase eteacuterea obtenida en el punto 332 y 2 μl de la fase eteacuterea obtenida en el punto 331

Registrar los cromatogramas respectivos comprobar la identidad de los tiempos de retencioacuten respectivos del aacutecido soacuterbico y del patroacuten interno Medir la altura (o el aacuterea) de cada uno de los picos registrados




La concentracioacuten de aacutecido soacuterbico del vino analizado expresada en miligramos por litro es igual a

100 times (hH) times (li)

H = altura del pico del aacutecido soacuterbico en la solucioacuten de referencia

h = altura del pico del aacutecido soacuterbico en la muestra problema

l = altura del pico del patroacuten interno en la solucioacuten de referencia

i = altura del pico del patroacuten interno en la muestra problema

Nota La concentracioacuten de aacutecido soacuterbico puede determinarse del mismo modo a partir de las medidas de la superficie de los picos respectivos


15 PH (OIV-AS-313-15-PH) mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 PRINCIPIO

Medida de la diferencia de potencial entre dos electrodos sumergidos en el liacutequido que se estudia Uno de los dos electrodos tiene un potencial que es una funcioacuten definida del pH del liacutequido mientras que el otro tiene un potencial fijo y conocido y constituye el electrodo de referencia

2 MATERIAL

21 pH-metro graduado en unidades de pH que permita efectuar medidas con una precisioacuten miacutenima de 005 unidades

22 Electrodos

221 Electrodo de vidrio que deberaacute conservarse en agua destilada

222 Electrodo de referencia de calomelanos y cloruro potaacutesico saturado que se conservaraacute en una solucioacuten saturada de cloruro potaacutesico

223 O electrodo combinado que deberaacute conservarse en agua destilada

3 REACTIVOS

31 Soluciones amortiguadoras

311 Solucioacuten saturada de tartrato aacutecido de potasio Solucioacuten con un contenido miacutenimo de 57 gl de tartrato aacutecido de potasio (C 4 H 5 KO 6 ) a 20 degC Esta solucioacuten puede conservarse hasta 2 meses en presencia de 01 g de timol por cada 200 ml

pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC

8 gt gt gt gt lt gt gt gt gt

312 Solucioacuten 005 M de ftalato aacutecido de potasio Solucioacuten con 10211 gl de ftalato aacutecido de potasio (C 8 H 5 KO 4 ) a 20 degC (plazo maacuteximo de conservacioacuten 2 meses)

pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC

8 gtgt gt gt gt gt gt gt gt lt gtgt gt gt gt gt gt gt gt

313 Solucioacuten con

Fosfato monopotaacutesico (K H 2 PO 4 ) 3402 g

Fosfato dipotaacutesico (K 2 HPO 4 ) 4354 g

Agua csp 1 l

(Duracioacuten maacutexima de la solucioacuten 2 meses)

pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC


Observacioacuten Tambieacuten pueden utilizarse soluciones amortiguadoras de referencia comerciales


4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino

Utilizar directamente el mosto o el vino


Diluir este mosto con agua a fin de obtener una concentracioacuten de 25 plusmn 05 (mm) en azuacutecares totales (25 deg Brix)

Si P es el contenido porcentual (mm) en azuacutecares totales del mosto concentrado rectificado pesar una masa igual a 2 500P

y completar hasta 100 g con agua El agua utilizada debe tener una conductividad inferior a 2 microsiemens por centiacutemetro

42 Puesta a cero del aparato

Se efectuaraacute antes de cada medida siguiendo las instrucciones dadas para el aparato utilizado


El calibrado se efectuacutea a 20 degC siguiendo las indicaciones dadas para el aparato utilizado con las soluciones amortiguadoras de pH 688 y 357 a 20 degC

Utilizar la solucioacuten amortiguadora de pH 400 a 20 degC para controlar el calibrado de la escala

44 Medida

Introducir el electrodo en la muestra analizada cuya temperatura deberaacute estar comprendida entre 20 y 25 degC y tan proacutexima a 20 degC como sea posible Leer directamente el valor del pH

Efectuar al menos dos determinaciones de cada muestra

Tomar como resultado la media aritmeacutetica de las determinaciones


El pH del mosto del vino o de la solucioacuten al 25 (mm) (25 deg Brix) del mosto concentrado rectificado se expresaraacute con dos decimales


16 DETERMINACIOacuteN SIMULTAacuteNEA DE AacuteCIDO L-ASCOacuteRBICO Y DE AacuteCIDO D-ISOASCOacuteRBICO POR HPLC Y DETECCIOacuteN UV (OIV-AS-313-22-ACASCO) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

1 INTRODUCCIOacuteN

El aacutecido ascoacuterbico es un antioxidante presente de forma natural en toda una serie de productos alimentarios La cantidad normal de aacutecido ascoacuterbico de la uva va disminuyendo a lo largo de la elaboracioacuten de los mostos y de la vinificacioacuten Puede antildeadirse a los mostos y a los vinos dentro de ciertos liacutemites

El meacutetodo descrito se ha validado en el marco de ensayos interlaboratorios mediante anaacutelisis de muestras de vino con cantidades antildeadidas de aacutecido L-ascoacuterbico y de aacutecido D-isoascoacuterbico de 30 mgl a 150 mgl y de 10 mgl a 100 mgl respectivamente


Este meacutetodo es adecuado para la determinacioacuten simultaacutenea de aacutecido L-ascoacuterbico y de aacutecido D-isoascoacuterbico (aacutecido eritoacuterbico) en el vino mediante cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten (CLAR o HPLC (siglas de su nombre en ingleacutes)) y deteccioacuten UV en una banda de 3 a 150 mgl

En caso de contenido superior a 150 mgl hay que efectuar una dilucioacuten de la muestra

3 PRINCIPIO

Las muestras se inyectan directamente en el sistema de HPLC previa filtracioacuten por membrana Los analitos se separan en una columna de fase inversa y se someten a deteccioacuten UV a 266 nm La cuantificacioacuten del aacutecido L- ascoacuterbico y del aacutecido D-isoascoacuterbico se efectuacutea con relacioacuten a un patroacuten externo

Observacioacuten Las columnas y las condiciones de funcionamiento se dan a tiacutetulo de ejemplo Con otros tipos de columnas puede conseguirse igualmente una buena separacioacuten

4 REACTIVOS Y PRODUCTOS

41 Reactivos

411 n-octilamina pureza ge 990

412 Acetato de sodio trihidratado pureza ge 990

413 Aacutecido aceacutetico puro al 100

414 Aacutecido fosfoacuterico aproximadamente al 25

415 Aacutecido oxaacutelico pureza ge 990

416 Ascorbato-oxidasa

417 Aacutecido L-ascoacuterbico ultra ge 995

418 Aacutecido D-isoascoacuterbico pureza ge 990

419 Agua bidestilada

4110 Metanol p a 998

42 Preparacioacuten de la fase moacutevil

421 Soluciones para la fase moacutevil

Preparar las soluciones siguientes para la fase moacutevil

4211 1293 g de n-octilamina en 100 mlde metanol

4212 6805 g de acetato de sodio trihidratado en 500 ml de agua bidestilada

4213 1201 g de aacutecido aceacutetico puro en 200 ml de agua bidestilada

4214 Solucioacuten amortiguadora de pH 54 430 ml de solucioacuten de acetato de sodio (4212) y 70 ml de solucioacuten de aacutecido aceacutetico (4213)



Antildeadir 5 ml de solucioacuten de n-octilamina (4211) a unos 400 ml de agua bidestilada en un vaso Ajustar el pH de esta solucioacuten a 54 - 56 antildeadiendo gota a gota aacutecido fosfoacuterico al 25 (414) Antildeadir 50 ml de la solucioacuten amortiguadora (4214) introducir el conjunto en un matraz aforado de 1 000 ml y enrasar con agua bidestilada Antes de utilizarse la fase moacutevil debe filtrarse por membrana (celulosa regenerada de 02 μm) y si es posible desgasificarse con helio (durante unos 10 minutos) seguacuten las necesidades del sistema de HPLC utilizado

43 Preparacioacuten de la solucioacuten patroacuten

Observacioacuten

Todas las soluciones patroacuten (solucioacuten madre 431 y soluciones de trabajo 432) deben prepararse cada diacutea y de preferencia guardarse en refrigerador hasta el momento de su inyeccioacuten

431 Preparacioacuten de la solucioacuten madre (1 mgml)

Preparar una solucioacuten acuosa de aacutecido oxaacutelico al 2 y eliminar el oxiacutegeno disuelto borboteando nitroacutegeno

Pesar con exactitud 100 mg de aacutecido L-ascoacuterbico y 100 mg de aacutecido D-isoascoacuterbico en un matraz aforado de 100 ml y enrasar con solucioacuten acuosa de aacutecido oxaacutelico al 2

432 Preparacioacuten de las soluciones de trabajo

Para obtener las soluciones de trabajo diluir la solucioacuten madre (431) hasta las concentraciones deseadas con la solucioacuten de aacutecido oxaacutelico al 2 Se recomienda obtener concentraciones entre 10 mgl y 120 mgl Por ejemplo llevar 100 μl 200 μl 400 μl 800 μl y 1 200μl a 10 ml lo que corresponde a 10 20 40 80 y 120 mgl

5 MATERIAL

Instrumental habitual de laboratorio y en particular el siguiente

51 Bomba de HPLC

52 Inyector con bucle de 20 μl

53 Detector de UV

6 MUESTREO

Las muestras de vino se pasan por un filtro de membrana de 02 μm de diaacutemetro de poro antes de inyectarlas


7 PROCEDIMIENTO

71 Condiciones para la utilizacioacuten del sistema de HPLC

Inyectar en el aparato de cromatografiacutea 20 μl de la muestra filtrada por membrana

Precolumna por ejemplo Nucleosil 120 C18 (4 cm x 4 mm x 7 μm)

Columna por ejemplo Nucleosil 120 C18 (25 cm x 4 mm x 7 μm)

Volumen de inyeccioacuten 20 μl

Fase moacutevil veacutease el punto 422 gradiente isocraacutetico

Caudal 1 mlmin

Deteccioacuten de UV 266 nm

Ciclo de lavado al menos 30 ml de agua bidestilada seguidos de 30 ml de metanol y de 30 ml de acetonitrilo


72 Identificacioacutenconfirmacioacuten

La identificacioacuten de los picos se efectuacutea comparando los tiempos de retencioacuten de los patrones y de las muestras Con el sistema cromatograacutefico que se describe como ejemplo los tiempos de retencioacuten son de 77 min para el aacutecido L-ascoacuterbico y de 83 min para el aacutecido D-isoascoacuterbico (ver la figura 1 cromatograma A)

Para confirmar un resultado positivo estas muestras deben tratarse con una espaacutetula de ascorbato-oxidasa y medirse de nuevo (ver la figura 1 cromatograma B)

Debido a la degradacioacuten del aacutecido L-ascoacuterbico y del aacutecido D-isoascoacuterbico provocada por la ascorbato-oxidasa no deberiacutea encontrarse ninguna sentildeal al tiempo de retencioacuten del aacutecido L-ascoacuterbico ni del aacutecido D-isoascoacuterbico En caso de deteccioacuten de picos paraacutesitos es necesario tener en cuenta su superficie para calcular la concenshytracioacuten de los analitos

Figura 1

Ejemplo de cromatograma de un vino blanco A antes del tratamiento con ascorbato-oxidasa B despueacutes del tratamiento

Observacioacuten Se recomienda analizar las muestras tratadas con ascorbato-oxidasa al final de una secuencia seguido del ciclo de lavado para eliminar de la columna los restos de ascorbato-oxidasa en caso contrario el aacutecido L-ascoacuterbico y el aacutecido D-isoascoacuterbico podriacutean ser transformados por los restos de ascorbato-oxidasa en la determinacioacuten por HPLC y el resultado podriacutea verse afectado

8 CAacuteLCULOS

Preparar una curva de calibracioacuten a partir de las soluciones de trabajo (432) Seguacuten el meacutetodo del patroacuten externo la cuantificacioacuten del aacutecido L-ascoacuterbico y del aacutecido D-isoascoacuterbico se realiza midiendo las superficies de los picos y comparaacutendolas con la concentracioacuten correspondiente en la curva de calibracioacuten

Expresioacuten de los resultados

Los resultados se expresan con un decimal en mgl de aacutecido L-ascoacuterbico y de aacutecido D-isoascoacuterbico (por ejemplo 513 mgl)

En caso de contenido superior a 150 mgl hay que tener en cuenta la dilucioacuten

9 FIDELIDAD

El meacutetodo se ha comprobado dentro de una prueba interlaboratorios organizada en 1994 por la antigua Oficina Federal de Sanidad (Bundesgesundheitsamt) de Alemania con participacioacuten de 27 laboratorios El proshygrama de la prueba interlaboratorios seguiacutea el artiacuteculo 35 de la Ley alemana relativa a los productos alimenshyticios aceptado por la OIV hasta la introduccioacuten del nuevo protocolo (OENO 62000)


El estudio comprendiacutea cuatro muestras diferentes de vino (dos vinos blancos y dos vinos tintos) con cinco repeticiones de cada muestra Como no era posible preparar muestras con una estabilidad suficiente de los analitos (velocidades de degradacioacuten diferentes) se decidioacute enviar a los participantes cantidades definidas de sustancias patroacuten puras y las muestras de vino Se dio a los laboratorios la consigna de transferir cuantitatishyvamente los patrones a las muestras de vino y de analizar estas inmediatamente Se analizaron muestras con 30 ndash 150 mgl de aacutecido L-ascoacuterbico y 10 - y 100 mgl de aacutecido D-isoascoacuterbico En el anexo publicado por la OIV se recogen los resultados pormenorizados del estudio La evaluacioacuten se realizoacute seguacuten la norma DINISO 5725 (versioacuten 1988)

Las desviaciones tiacutepicas de la repetibilidad (s r ) y de la reproducibilidad (s R ) eran adecuadas para las concepshyciones de aacutecido L-ascoacuterbico y de aacutecido D-isoascoacuterbico El paraacutemetro de precisioacuten real puede calcularse mediante las ecuaciones siguientes

Aacutecido L-ascoacuterbico

s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139

x concentracioacuten de aacutecido L-ascoacuterbico (mgl)

Aacutecido D-isoascoacuterbico

s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129

x concentracioacuten de aacutecido D-isoascoacuterbico (mgl)

Ejemplo

50 mgl de aacutecido D-isoascoacuterbico s r = 10 mgl

s R = 52 mgl

10 OTRAS CARACTERIacuteSTICAS DEL ANAacuteLISIS

101 Liacutemite de deteccioacuten

Se estima que el liacutemite de deteccioacuten de este meacutetodo es de 3 mgl para el aacutecido L-ascoacuterbico y para el aacutecido D- isoascoacuterbico

102 Exactitud

La recuperacioacuten media calculada a partir de la prueba interlaboratorios realizada con cuatro muestras (ver el anexo publicado en el Compendio de la OIV) fue de

mdash 1006 para el aacutecido L-ascoacuterbico

mdash 1033 para eacutel aacutecido D-isoascoacuterbico


17 DIOacuteXIDO DE CARBONO (OIV-AS-314-01-DIOCAR) mdash MEacuteTODO DE TIPO II


11 Caso de vinos tranquilos (sobrepresioacuten de CO 2 le 05 x 10 5 Pa) ( 1 )

El volumen de vino tomado de la muestra y llevado a una temperatura proacutexima a los 0 degC se vierte en un exceso suficiente de solucioacuten valorada de hidroacutexido de sodio para lograr un pH de 10 a 11 Se valora con una solucioacuten aacutecida en presencia de anhidrasa carboacutenica El contenido en dioacutexido de carbono se deduce del volumen empleado para pasar de pH 86 (forma de carbonato aacutecido) a 40 (aacutecido carboacutenico) Una valoracioacuten testigo efectuada en las mismas condiciones con el vino desprovisto de CO 2 permite tener en cuenta el volumen de solucioacuten de hidroacutexido de sodio consumido por los aacutecidos del vino

12 Caso de vinos de aguja y vinos espumosos

Se lleva la muestra de vino problema a cerca de su punto de congelacioacuten Despueacutes de tomar un cierto volumen que serviraacute de testigo una vez desprovisto de CO 2 se alcaliniza el resto de la botella para fijar todo el CO 2 en forma de Na 2 CO 3 Se valora con una solucioacuten aacutecida en presencia de anhidrasa carboacutenica El contenido en dioacutexido de carbono se deduce del volumen de solucioacuten aacutecida empleado para pasar de pH 86 (forma de carbonato aacutecido) a pH 40 (aacutecido carboacutenico) Una valoracioacuten testigo efectuada en las mismas condiciones con el vino desprovisto de CO 2 permite tener en cuenta el volumen de solucioacuten de hidroacutexido de sodio consumido por los aacutecidos del vino

2 DESCRIPCIOacuteN DEL MEacuteTODO

21 Vinos tranquilos (sobrepresioacuten de dioacutexido de carbono le 05 x 10 5 Pa)

211 Material

2111 Agitador magneacutetico

2112 pH-metro

212 Reactivos

2121 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) 01 M

2122 Solucioacuten de aacutecido sulfuacuterico (H 2 SO 4 ) 005 M

2123 Solucioacuten de 1 gl de anhidrasa carboacutenica

213 Procedimiento

Enfriar la muestra de vino hasta los 0 degC aproximadamente asiacute como la pipeta de 10 ml que sirva para la toma de muestra

En un vaso de precipitados de 100 ml poner 25 ml de solucioacuten de hidroacutexido de sodio (punto 2121) antildeadir 2 gotas de solucioacuten acuosa de anhidrasa carboacutenica (punto 2123) Introducir 10 ml de vino con ayuda de la pipeta enfriada a 0 degC

Poner el vaso de precipitados en el agitador magneacutetico colocar el electrodo y la varilla magneacutetica y llevar a cabo una agitacioacuten moderada

Cuando el liacutequido esteacute a la temperatura ambiente verter lentamente la solucioacuten de aacutecido sulfuacuterico (punto 2122) hasta llegar a pH 86

Seguir despueacutes vertiendo aacutecido sulfuacuterico (punto 2122) hasta pH 40 Sea n ml el volumen utilizado entre pH 86 y 40

Por otro lado eliminar el CO 2 de unos 50 ml de la muestra de vino agitando bajo vaciacuteo durante tres minutos y calentando el matraz en un bantildeo de agua a 25 degC aproximadamente

Aplicar el procedimiento anterior a 10 ml de vino desprovisto de CO 2 sea nprime ml el volumen utilizado


1 ml de solucioacuten valorada de aacutecido sulfuacuterico 005 M corresponde a 44 mg de CO 2

La cantidad de CO 2 en gramos por litro de vino se expresa mediante la foacutermula

044 (n ndash nprime)

indicando 2 decimales

Observacioacuten En el caso de vinos con bajo contenido de CO 2 (CO 2 lt 1 gl) no es necesaria la adicioacuten de anhidrasa carboacutenica para catalizar la hidratacioacuten del CO 2


( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar

22 Vinos de aguja y vinos espumosos

221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos

2221 Solucioacuten de hidroacutexido de sodio (NaOH) al 50 (mm)



223 Procedimiento

Trazar una marca al nivel del llenado sobre la botella de vino problema y enfriarla hasta el inicio de la congelacioacuten

Dejar que la botella se caliente ligeramente agitando hasta que desaparezcan los cristales de hielo

Destapar raacutepidamente y apartar en una probeta graduada de 45 a 50 ml de vino que serviraacuten para la determinacioacuten testigo El volumen exacto de esta muestra v ml se determinaraacute mediante lectura sobre la probeta cuando el vino esteacute a la temperatura ambiente

Antildeadir inmediatamente despueacutes de haber tomado la muestra anterior 20 ml de solucioacuten de hidroacutexido de sodio (punto 2221) a la botella si tiene una capacidad de 750 ml

Esperar a que el vino esteacute de nuevo a temperatura ambiente

En un vaso de precipitados de 100 ml poner 30 ml de agua destilada hervida y 2 gotas de solucioacuten de anhidrasa carboacutenica (punto 2223) Antildeadir 10 ml de vino alcalinizado

Poner el vaso en el agitador magneacutetico colocar el electrodo y la varilla magneacutetica y llevar a cabo una agitacioacuten moderada

Verter lentamente la solucioacuten de aacutecido sulfuacuterico (punto 2222) hasta pH 86


Por otro lado eliminar el CO 2 de los v ml de vino apartados para la determinacioacuten testigo agitando bajo vaciacuteo durante tres minutos y calentando el matraz en un bantildeo de agua a 25 degC aproximadamente Tomar 10 ml de vino desprovisto de CO 2 en 30 ml de agua destilada hervida antildeadir 2 o 3 gotas de solucioacuten de hidroacutexido de sodio (punto 2221) para llevar el pH a 10-11 Aplicar despueacutes el procedimiento anterior Sea nprime ml el volumen de aacutecido sulfuacuterico 005 M empleado


1 ml de solucioacuten de aacutecido sulfuacuterico 005 M corresponde a 44 mg de CO 2

Vaciar la botella del vino alcalinizado y determinar con una aproximacioacuten de 1 ml el volumen inicial de vino llenaacutendola con agua hasta la marca sea V ml

La cantidad de CO 2 en gramos por litro de vino se expresa mediante la foacutermula siguiente

044 (n ndash nprime) x ((V ndash v + 20)(V ndash v))


23 Caacutelculo de la sobrepresioacuten teoacuterica

La sobrepresioacuten a 20 degC Paph 20 expresada en pascales viene dada por la foacutermula

Paph 20 = ((Q)(1951 times 10 -5 (086 ndash 001 A)(1 ndash 000144 S))) - Patm

siendo

Q contenido en gramos de CO 2 por litro de vino

A grado alcohoacutelico del vino a 20 degC

S contenido en azuacutecares del vino en gramos por litro

Patm presioacuten atmosfeacuterica expresada en pascales


18 DETERMINACIOacuteN DEL DIOacuteXIDO DE CARBONO EN EL VINO POR MEacuteTODO MANOMEacuteTRICO (OIV-AS314-04-CO2MAN) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

(pm)

[La descripcioacuten de este meacutetodo de anaacutelisis estaacute siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Esta descripcioacuten se publicaraacute en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV]


19 MEDICIOacuteN DE LA SOBREPRESIOacuteN DE LOS VINOS ESPUMOSOS Y DE AGUJA (OIV - AS-314-02- SURPRES) mdash MEacuteTODO DE TIPO I

1 PRINCIPIO

Tras la estabilizacioacuten teacutermica y agitacioacuten de la botella se mide la sobrepresioacuten por medio de un afroacutemetro (calibre de presioacuten) La sobrepresioacuten se expresa en pascales (Pa) (meacutetodo de tipo I) Este meacutetodo tambieacuten es aplicable a los vinos espumosos gasificados y a los vinos de aguja gasificados

2 MATERIAL

El aparato que se utiliza para medir la sobrepresioacuten en las botellas de vinos espumosos y de aguja se llama afroacutemetro Tiene distintas presentaciones que dependen del cierre de la botella (caacutepsula metaacutelica corona tapoacuten de corcho o de plaacutestico)

21 Botellas con caacutepsula o corona

Consta de tres partes (figura 1)

mdash La parte superior (o tornillo porta agujas) compuesta por un manoacutemetro una rueda de ajuste manual un tornillo sinfiacuten que se desliza en la parte media y una aguja que atraviesa la caacutepsula La aguja tiene una perforacioacuten lateral que comunica la presioacuten al manoacutemetro Una junta que queda sobre la caacutepsula de la botella garantiza la hermeticidad del conjunto

mdash La parte media (o tuerca) que sirve para centrar la parte superior Se atornilla a la parte inferior de forma que el aparato quede fuertemente sujeto a la botella

mdash La parte inferior (o estribo) provista de un espoloacuten que se desliza bajo el anillo de la botella y sujeta todo el aparato Existen anillos adaptados a cada tipo de botella

22 Botellas con tapoacuten

Consta de dos partes (figura 2)

mdash La parte superior es ideacutentica a la del aparato precedente aunque la aguja es maacutes larga Esta uacuteltima estaacute formada por un tubo largo y hueco en cuyo extremo se halla una punta que permite perforar el tapoacuten La punta es amovible y cae dentro de la botella una vez que se ha perforado el tapoacuten

mdash La parte inferior formada por la tuerca y una base que se coloca sobre el tapoacuten La base tiene cuatro tornillos de ajuste con los que se sujeta el aparato al tapoacuten

Figura 2 Afroacutemetro para tapones Figura 1 Afroacutemetro para caacutepsulas


Observaciones sobre los manoacutemetros que llevan estos dos tipos de aparato

mdash Pueden ser mecaacutenicos con tubo de Bourdon o numeacutericos con sensor piezoeleacutectrico En el primer caso el tubo de Bourdon debe ser obligatoriamente de acero inoxidable

mdash Deben estar graduados en pascales (siacutembolo Pa) Para los vinos espumosos lo maacutes praacutectico es utilizar como unidad 10 5 pascales (10 5 Pa) o el kilopascal (kPa)

mdash Pueden ser de distintas clases La clase de un manoacutemetro es la precisioacuten de la lectura respecto de la escala completa expresada en porcentaje (ejemplo laquomanoacutemetro 1 000 kPa clase 1raquo significa presioacuten maacutexima de utilizacioacuten de 1 000 kPa y lectura con precisioacuten de plusmn 10 kPa) Para mediciones precisas se recomienda la clase 1

3 PROCEDIMIENTO

La medicioacuten debe efectuarse con botellas cuya temperatura lleve estabilizada 24 horas como miacutenimo Para efectuar la lectura se perfora la corona o el tapoacuten de corcho o plaacutestico y se agita vigorosamente la botella hasta alcanzar una presioacuten constante


Deslizar el espoloacuten del estribo bajo el anillo de la botella Apretar la tuerca hasta que el conjunto quede ajustado a la botella Enroscar la parte superior en la tuerca Para evitar peacuterdidas de gas debe perforarse la caacutepsula lo maacutes raacutepidamente posible hasta que la junta quede en contacto con la caacutepsula A continuacioacuten se agita con fuerza la botella hasta alcanzar una presioacuten constante para efectuar la lectura


Colocar una punta en el extremo de la aguja Disponer el aparato sobre el tapoacuten Ajustar los cuatro tornillos al tapoacuten Enroscar la parte superior (la aguja perfora entonces el tapoacuten) La punta debe caer dentro de la botella para que la presioacuten se transmita al manoacutemetro Efectuar la lectura despueacutes de agitar la botella hasta alcanzar una presioacuten constante Recuperar la punta despueacutes de la lectura


La sobrepresioacuten a 20 degC (Paph 20 ) se expresa en pascales (Pa) o kilopascales (kPa) Deberaacute concordar con la precisioacuten del manoacutemetro (por ejemplo 63 times 10 5 Pa o 630 kPa y no 633 times 10 5 Pa o 633 kPa si se utiliza un manoacutemetro de 1 000 kPa de escala completa y de clase 1)

Cuando la temperatura de medicioacuten no sea de 20 degC conviene corregir el resultado multiplicando la presioacuten medida por el coeficiente que corresponda (veacutease la tabla 1)

Tabla 1

Relacioacuten entre la sobrepresioacuten Paph 20 de un vino de aguja o espumoso a 20 degC y la sobrepresioacuten Paph t a una temperatura t

degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088


5 CONTROL DE LOS RESULTADOS

Meacutetodo de determinacioacuten directa de paraacutemetros fiacutesicos (meacutetodo criterio de tipo I)

Verificacioacuten de los afroacutemetros

Los afroacutemetros deben verificarse perioacutedicamente (al menos una vez al antildeo)

La verificacioacuten se realiza con un banco de calibracioacuten Eacuteste permite comparar el manoacutemetro con un manoacutemeshytro de referencia de clase superior conectado a los patrones nacionales y montado en paralelo En el control se comparan los valores indicados por los dos aparatos para presiones crecientes y despueacutes para presiones decrecientes Si hay alguna diferencia entre ambos se efectuacutean las correcciones necesarias mediante un tornillo de regulacioacuten

Todos los laboratorios y organismos autorizados estaacuten equipados con bancos de calibracioacuten de este tipo Tambieacuten los constructores de manoacutemetros disponen de ellos


20 DETERMINACIOacuteN DE LA LISOZIMA EN EL VINO POR HPLC (OIV-AS-315-14) mdash MEacuteTODO DE TIPO IV

1 INTRODUCCIOacuteN

Es preferible utilizar para la lisozima un meacutetodo analiacutetico que no esteacute basado en la actividad enzimaacutetica


Este meacutetodo permite la cuantificacioacuten de la lisozima (mg de proteiacutenal) presente en los vinos blancos y tintos independientemente de la actividad enzimaacutetica (que podriacutea verse afectada por una desnaturalizacioacuten parcial o por fenoacutemenos de complejacioacuten o de coprecipitacioacuten) de la matriz

3 DEFINICIOacuteN

La cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten (CLAR o en ingleacutes HPLC) ofrece un enfoque analiacutetico basado en interacciones de tipo esteacuterico polar o de adsorcioacuten entre la fase estacionaria y el analito y en consecuencia sin relacioacuten con la actividad enzimaacutetica real de la proteiacutena

4 PRINCIPIO

El anaacutelisis se efectuacutea mediante cromatografiacutea liacutequida de alta resolucioacuten (HPLC) a la que se asocia un detector espectrofotomeacutetrico y un detector espectrofluorimeacutetrico El contenido de lisozima en la muestra de vino se calcula en funcioacuten de la superficie del pico cromatograacutefico utilizando el meacutetodo del patroacuten externo

5 REACTIVOS

51 Disolventes y soluciones

Acetonitrilo (CH 3 CN) para anaacutelisis HPLC

Aacutecido trifluoroaceacutetico (TFA) puro

Agua desionizada para anaacutelisis HPLC

Solucioacuten patroacuten aacutecido tartaacuterico 1 gl alcohol etiacutelico al 10 vv con el pH ajustado a 32 con tartrato de potasio neutro

52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298

53 Soluciones de referencia

De 1 a 250 mgL de lisozima patroacuten disuelta en la solucioacuten modelo mediante agitacioacuten continua durante un miacutenimo de 12 horas

6 MATERIAL

61 Aparato de HPLC con sistema de bombeo capaz de efectuar un gradiente de elucioacuten

62 Recinto para columna termostaacutetica (horno)

63 Detector espectrofotomeacutetrico asociado a un detector espectrofluorimeacutetrico

64 Bucle de inyeccioacuten de 20 μL

65 Columna polimeacuterica de fase inversa con grupos funcionales fenilo (diaacutemetro de los poros = 1 000 Aring liacutemite de exclusioacuten = 1 000 000 Da) Tosoh Bioscience TSK-gel Phenyl 5PW RP 75 cm times 46 mm ID por ejemplo

66 Precolumna del mismo material que la columna Tosoh Bioscience TSK-gel Phenyl 5PW RP Guardgel 15 cm times 32mm ID por ejemplo


Las muestras de vino se acidifican con HCl (10 M) diluido al 110 y se pasan cinco minutos tras la adicioacuten por un filtro de poliamida cuyos poros tienen un diaacutemetro de 022 μm El anaacutelisis cromatograacutefico se efectuacutea inmediatamente despueacutes de la filtracioacuten

8 CONDICIONES DE FUNCIONAMIENTO

81 Flujo de eluyente 1 mlmin

82 Temperatura de la columna 30 degC


83 Deteccioacuten espectrofotomeacutetrica 280 nm

84 Deteccioacuten espectrofluorimeacutetrica λ ex = 276 nm λ em = 345 nm Ganancia (Gain) = 10

85 Programa del gradiente de elucioacuten

Tiempo (min) Sol A Sol B Gradiente

0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0

86 Tiempo de retencioacuten media de la lisozima 2550 minutos

9 CAacuteLCULO

Las soluciones de referencia que contienen las concentraciones siguientes de lisozima se analizan por triplicado 1 5 10 50 100 200 y 250 mgl En cada cromatograma se llevan a un diagrama las aacutereas bajo el pico correspondiente a la lisozima en funcioacuten de sus concentraciones respectivas con el fin de obtener las rectas de regresioacuten lineal expresadas por la foacutermula y = ax+b El coeficiente de determinacioacuten r 2 deberaacute ser gt 0999

10 CARACTERIacuteSTICAS DEL MEacuteTODO

Con el fin de evaluar la aptitud del meacutetodo para el objetivo formulado se ha efectuado un estudio de validacioacuten teniendo en cuenta la linealidad los liacutemites de deteccioacuten y de cuantificacioacuten y la precisioacuten del meacutetodo Este uacuteltimo paraacutemetro se ha determinado definiendo el nivel de precisioacuten y de exactitud del meacutetodo

Banda de linealidad

(mgl)

Pendiente de la recta

Coeficiente de determinacioacuten

(r 2 ) LD (mgl) LC (mgl)

Repetibilidad (n = 5) DTR Reproducibilidad (n = 5) DTR

Patr 1 VT 2 VB 3 Patr 1

UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230

Cuadro 1 Datos relativos a las caracteriacutesticas del meacutetodo Patr 1 solucioacuten patroacuten VT 2 vino tinto VB 3 vino blanco


101 Linealidad del meacutetodo

Seguacuten los resultados obtenidos gracias al anaacutelisis de regresioacuten lineal se ha visto que el meacutetodo es lineal en las bandas indicadas en el cuadro 1

102 Liacutemite de deteccioacuten y de cuantificacioacuten

El liacutemite de deteccioacuten (LD) y el liacutemite de cuantificacioacuten (LC) se han calculado como la sentildeal equivalente al triple y al deacutecuplo respectivamente del ruido de fondo cromatograacutefico en condiciones de trabajo con una matriz real (cuadro 1)

103 Precisioacuten del meacutetodo

Los paraacutemetros que se han tomado en consideracioacuten son la repetibilidad y la reproducibilidad El cuadro 1 indica los valores de estos paraacutemetros (expresados como porcentaje de desviacioacuten tiacutepica de las medidas repetidas con diferentes concentraciones) que se han obtenido con la solucioacuten patroacuten con vino blanco y con vino tinto

104 Exactitud del meacutetodo

Se ha calculado el porcentaje de recuperacioacuten con las soluciones patroacuten que contienen 5 et 50 mgL de lisozima a las que se ha antildeadido una cantidad determinada de esta sustancia como se indica en el cuadro siguiente

[C] inicial noshyminal (mgl) Adicioacuten (mgl) [C] teoacuterica

(mgl) [C] obtenida

(mgl) Desviacioacuten tiacuteshy

pica Recuperacioacuten

UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977

Figura 1 Cromatograma de vino tinto con lisozima pura (se ha antildeadido al vino una solucioacuten patroacuten con 1 000 mgl de lisozima para obtener una concentracioacuten final de 125 mgl de lisozima) A detector de UV a 280 nm B detector de UV a 225 nm C detector de FLD (λ ex 276 nm λ em = 345 nm)


21 SULFATOS (OIV-AS-321-05-SULFAT) mdash MEacuteTODO DE TIPO II


11 Meacutetodo de referencia

Precipitacioacuten del sulfato de bario y pesada El fosfato de bario precipitado en las mismas condiciones es eliminado por lavado del precipitado con aacutecido clorhiacutedrico

En caso de mostos o vinos ricos en dioacutexido de azufre estaacute indicado un desulfitado previo por ebullicioacuten al abrigo del aire

12 Meacutetodo raacutepido de ensayo

Clasificacioacuten de los vinos en varias categoriacuteas por el meacutetodo llamado de los liacutemites basado en la precipitacioacuten del sulfato de bario mediante una solucioacuten valorada de ioacuten bario


21 Reactivos

211 Aacutecido clorhiacutedrico solucioacuten 2 M

212 Cloruro baacuterico en solucioacuten de 200 gl de BaCl 2 times2 H 2 O

22 Procedimiento

221 Caso general

En un tubo de centriacutefuga de 50 ml introducir 40 ml de la muestra problema antildeadir 2 ml de aacutecido clorhiacutedrico 2 M y 2 ml de solucioacuten de cloruro baacuterico de 200 gl agitar con la varilla de vidrio lavar la varilla con un poco de agua destilada y dejar en reposo durante 5 minutos Centrifugar durante 5 minutos y decantar con precaucioacuten el liacutequido sobrenadante

Lavar a continuacioacuten el precipitado de sulfato baacuterico de la forma siguiente antildeadir 10 ml de aacutecido clorhiacutedrico 2 M poner el precipitado en suspensioacuten y centrifugar durante 5 minutos Separar con precaucioacuten el liacutequido sobrenadante Repetir 2 veces el lavado del precipitado en las mismas condiciones con 15 ml de agua destilada cada vez

Trasvasar cuantitativamente el precipitado lavando con agua destilada a una caacutepsula de platino tarada y colocarla en un bantildeo Mariacutea a 100 degC hasta evaporacioacuten a sequedad El precipitado desecado se calcina varias veces brevemente sobre una llama hasta la obtencioacuten de un residuo blanco Dejar enfriar en un desecador y pesar

Sea m la masa en miligramos de sulfato de bario obtenida

222 Caso particular mostos sulfitados y vino con un contenido elevado de dioacutexido de azufre

Proceder previamente a la eliminacioacuten del dioacutexido de azufre

En un matraz Erlenmeyer de 500 ml provisto de un embudo de decantacioacuten y de un tubo de salida de vapor introducir 25 ml de agua y 1 ml de aacutecido clorhiacutedrico puro (ρ 20 = 115 ndash 118 gml) Hervir para expulsar el aire e introducir por el embudo de decantacioacuten 100 ml de vino manteniendo la ebullicioacuten Continuar la ebullicioacuten hasta que el volumen del liacutequido contenido en el matraz se reduzca a unos 75 ml y trasvasarlo cuantitativamente despueacutes de enfriar a un matraz aforado de 100 ml Enrasar con agua Proceder a la valoracioacuten de los sulfatos con una porcioacuten de 40 ml como se indica en el punto 221


231 Caacutelculos

El contenido en sulfatos expresado en miligramos por litro de sulfato de potasio K 2 SO 4 es

1867 times m

El contenido en sulfatos de mostos o vinos se expresa en miligramos por litro de sulfato de potasio sin decimales

232 Repetibilidad

Hasta 1 000 mgl r = 27 mgl

Alrededor de 1 500 mgl r = 41 mgl

233 Reproducibilidad

Hasta 1 000 mgl R = 51 mgl

Alrededor de 1 500 mgl R = 81 mgl


22 HIERRO (OIV-AS-322-05-FER) mdash MEacuteTODO DE TIPO IV


MEacuteTODO DE REFERENCIA

El hierro se determina directamente por espectrofotometriacutea de absorcioacuten atoacutemica previa dilucioacuten del vino y eliminacioacuten del alcohol

MEacuteTODO USUAL

Despueacutes de la mineralizacioacuten del vino con peroacutexido de hidroacutegeno el hierro que se encuentra en forma de hierro III se reduce al estado de hierro II y se determina por la coloracioacuten roja que se produce con la ortofenantrolina


21 Reactivos

211 Solucioacuten patroacuten concentrada de hierro III de 1 gl

Utilizar una solucioacuten patroacuten comercial de 1 gl Esta solucioacuten puede prepararse disolviendo 86341 g de sulfato de hierro III y de amonio (FeNH 4 (SO 4 ) 2 times12 H 2 O) en agua destilada ligeramente acidificada con aacutecido clorhiacuteshydrico M y llevando el volumen a 1 litro

212 Solucioacuten patroacuten diluida de hierro de 100 miligramos por litro

22 Material

221 Rotavapor con bantildeo Mariacutea termostaacutetico

222 Espectrofotoacutemetro de absorcioacuten atoacutemica provisto de mechero alimentado con aire y acetileno

223 Laacutempara de caacutetodo hueco de hierro

23 Procedimiento


Eliminar el alcohol del vino mediante reduccioacuten a la mitad del volumen de la muestra en un rotavapor (50- 60 degC) Llevarlo de nuevo a su volumen inicial con agua destilada

Si fuera necesario efectuar una dilucioacuten previa a la determinacioacuten

232 Calibrado

En una serie de cinco matraces aforados de 100 ml echar 1 2 3 4 y 5 ml de la solucioacuten de hierro de 100 miligramos por litro (punto 212) y completar hasta 100 ml con agua destilada Las soluciones preparadas tendraacuten un contenido de hierro de 1 2 3 4 y 5 mg por litro

Estas soluciones se conservaraacuten en frascos de polietileno


Seleccionar la longitud de onda a 2483 nm Regular el cero de la escala de absorbancias con agua destilada Aspirar directamente la muestra diluida en el quemador del espectrofotoacutemetro y seguidamente hacer lo mismo con las soluciones patroacuten preparadas como se indica en el punto 232 Tomar las absorbancias Efectuar las determinaciones por duplicado



Trazar la curva de variacioacuten de la absorbancia en funcioacuten de la concentracioacuten de hierro de las soluciones patroacuten Llevar a esta curva el valor medio de la absorbancia obtenida con la muestra de vino diluido y determinar la concentracioacuten en hierro C

La concentracioacuten en hierro expresada en miligramos por litro de vino con 1 decimal seraacute

C times F

F = factor de dilucioacuten


23 COBRE (OIV-AS-322-06) mdash MEacuteTODO DE TIPO IV


Empleo de la espectrofotometriacutea de absorcioacuten atoacutemica

2 MATERIAL

21 Caacutepsula de platino

22 Espectrofotoacutemetro de absorcioacuten atoacutemica

23 Laacutempara de caacutetodo hueco de cobre

24 Gas de alimentacioacuten aireacetileno o protoacutexido de nitroacutegeno acetileno

3 REACTIVOS

31 Cobre metaacutelico

32 Aacutecido niacutetrico concentrado al 65 (HNO 3 ρ 20 = 138 gml)

33 Aacutecido niacutetrico diluido al 12 (vv)

34 Solucioacuten de cobre de 1 gl

Utilizar una solucioacuten patroacuten de cobre comercial de 1 gl Esta solucioacuten puede prepararse pesando 1 000 g de cobre metaacutelico y transfiriendo este cuantitativamente a un matraz aforado de 1 000 ml Antildeadir aacutecido niacutetrico diluido al 12 (punto 33) en cantidad estrictamente suficiente para disolver el metal antildeadir 10 ml de aacutecido niacutetrico concentrado (punto 32) y enrasar con agua bidestilada

35 Solucioacuten de cobre de 100 mgl

Tomar 10 ml de la solucioacuten 34 introducirlos en un matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua bidestilada

4 PROCEDIMIENTO

41 Preparacioacuten de la muestra y determinacioacuten del cobre

Tomar 20 ml de la muestra introducirlos en un matraz aforado de 100 ml y enrasar con agua bidestilada Modificar la dilucioacuten en caso necesario

Leer con el espectrofotoacutemetro de absorcioacuten atoacutemica la absorbancia de la muestra diluida a la longitud de onda de 3248 nm tras haber regulado el cero de la escala de absorbancias con agua destilada En caso necesario preparar una dilucioacuten adecuada con agua bidestilada

42 Determinacioacuten de la curva patroacuten

Tomar 05 1 y 2 ml de la solucioacuten del punto 35 (100 mg de cobre por litro) introducirlos en sendos matraces aforados de 100 ml y enrasar con agua bidestilada las soluciones obtenidas contendraacuten respectivashymente 05 1 y 2 mgl de cobre Con los valores de absorbancias de estas soluciones medidas como se especifica en el punto 41 trazar la curva patroacuten


Trasladar a la curva patroacuten la absorbancia leiacuteda con la muestra de vino diluido y determinar la concentracioacuten C en mgl

Si F es el factor de dilucioacuten el contenido en cobre del vino seraacute en miligramos por litro F x C

El resultado se daraacute con 2 decimales

Comentarios

(a) Las soluciones para determinar la curva patroacuten y las diluciones de la muestra deben elegirse en cualquier caso en funcioacuten de la sensibilidad del aparato utilizado y de la concentracioacuten del cobre presente en la muestra


(b) Cuando en la muestra hay concentraciones muy bajas de cobre el procedimiento es el siguiente poner 100 ml de muestra en una caacutepsula de platino concentrar por evaporacioacuten en un bantildeo Mariacutea a 100 degC hasta que adquiera una consistencia de jarabe antildeadir gota a gota 25 ml de aacutecido niacutetrico concentrado (punto 32) intentando cubrir todo el fondo de la caacutepsula Incinerar con precaucioacuten el residuo en una placa calentadora eleacutectrica o sobre una pequentildea llama introducir a continuacioacuten la caacutepsula en un horno de mufla regulado a 500 degC plusmn 25 degC y mantenerla alliacute una hora aproximadamente Cuando se haya enfriado humedecer las cenizas con 1 ml de aacutecido niacutetrico concentrado (punto 32) trituraacutendolas con una pequentildea varilla de vidrio evaporar e incinerar de nuevo como en el caso anterior Poner otra vez la caacutepsula en el horno durante 15 minutos repetir tres veces como miacutenimo este tratamiento con aacutecido niacutetrico concenshytrado Solubilizar las cenizas antildeadiendo en la caacutepsula 1 ml de aacutecido niacutetrico concentrado (punto 32) y 2 ml de agua bidestilada pasar a un matraz aforado de 10 ml Lavar la caacutepsula tres veces con 2 ml de agua bidestilada cada vez y enrasar con agua bidestilada Proceder a la determinacioacuten como se indica en el punto 41 utilizando los 10 ml de solucioacuten tener en cuenta el factor de concentracioacuten a la hora de expresar los resultados


24 DIOacuteXIDO DE AZUFRE (OIV-AS-323-04-DIOSU) mdash MEacuteTODO DE TIPO II

1 DEFINICIONES

Se denomina dioacutexido de azufre al dioacutexido de azufre presente en el mosto o en el vino en las formas siguientes H 2 SO 3 y HSO 3 ndash cuyo equilibrio es funcioacuten del pH y de la temperatura

H 2 SO 3 larrrarr H + + HSO 3 ndash

H 2 SO 3 representa el dioacutexido de azufre molecular

Se denomina dioacutexido de azufre total al conjunto de las distintas formas de dioacutexido de azufre presentes en el vino en estado libre o combinado con sus componentes

2 DIOacuteXIDO DE AZUFRE LIBRE Y TOTAL

21 Principio de los meacutetodos


2111 V i n o s y m o s t o s

Arrastre del dioacutexido de azufre con una corriente de aire o de nitroacutegeno fijacioacuten y oxidacioacuten por borboteo en una solucioacuten diluida y neutra de peroacutexido de hidroacutegeno Valoracioacuten del aacutecido sulfuacuterico formado con una solucioacuten valorada de hidroacutexido soacutedico El dioacutexido de azufre libre se extrae del vino por arrastre en friacuteo (a 10 degC)

El dioacutexido de azufre total se extrae del vino por arrastre en caliente (a 100 degC aproximadamente)

2112 M o s t o s c o n c e n t r a d o s r e c t i f i c a d o s

Se extrae el dioacutexido de azufre total por arrastre en caliente (aproximadamente 100 degC) del mosto concentrado rectificado previamente diluido

212 Meacutetodo raacutepido de ensayo (vinos y mostos)

Determinacioacuten del dioacutexido de azufre libre por valoracioacuten yodomeacutetrica directa

Determinacioacuten del dioacutexido de azufre combinado por valoracioacuten yodomeacutetrica tras hidroacutelisis alcalina La suma del dioacutexido de azufre libre y combinado permite obtener el dioacutexido de azufre total


221 Material

2211 El material utilizado debe ajustarse al esquema que figura a continuacioacuten principalmente en lo que se refiere al refrigerante

Figura 1

Las dimensiones estaacuten indicadas en miliacutemetros Los diaacutemetros internos de los 4 tubos conceacutentricos que constituyen el refrigerante son 45 34 27 y 10 mm


El tubo de conduccioacuten de los gases al borboteador B termina en una pequentildea esfera de 1 cm de diaacutemetro que lleva en su mayor ciacuterculo horizontal 20 agujeros de 02 mm de diaacutemetro Tambieacuten puede terminar en una placa de vidrio fritado que permita la formacioacuten de gran nuacutemero de pequentildeas burbujas realizando asiacute un buen contacto entre las fases gaseosa y liacutequida

El flujo de gas que debe recorrer el aparato ha de ser de 40 lh aproximadamente El frasco situado a la derecha del aparato se destina a limitar de 20 a 30 cm de agua la depresioacuten producida por la trompa de agua Para poder regular dicha depresioacuten de forma que el caudal sea el correcto conviene colocar un medidor de flujo de tubo semicapilar entre el borboteador y el frasco

2212 Microbureta

222 Reactivos

2221 Aacutecido fosfoacuterico al 85 (H 3 PO 4 ) (ρ 20 = 171 gml)

2222 Solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno de 91 g de H 2 O 2 l (3 voluacutemenes)

2223 Reactivo indicador

Rojo de metilo 100 mg

Azul de metileno 50 mg

Alcohol de 50 vol 100 ml


223 Determinacioacuten del dioacutexido de azufre libre

2231 P r o c e d i m i e n t o

El vino debe mantenerse a 20 degC en un frasco lleno y cerrado durante 2 diacuteas antes de la determinacioacuten

mdash En el borboteador B colocar de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (punto 2222) y 2 gotas de reactivo indicador neutralizar a continuacioacuten la solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido de sodio (punto 2224) Acoplar el borboteador al aparato

mdash En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de muestra y 15 ml de aacutecido fosfoacuterico (punto 2221) Acoplar el matraz al aparato

mdash A continuacioacuten hacer borbotear el aire (o el nitroacutegeno) durante 15 minutos El dioacutexido de azufre libre arrastrado se oxida a aacutecido sulfuacuterico Retirar el borboteador del aparato y valorar el aacutecido formado con la solucioacuten de hidroacutexido soacutedico 001 M (punto 2224) Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados

2232 E x p r e s i oacute n d e l o s r e s u l t a d o s

Dioacutexido de azufre libre en mgl sin decimales

22321 Caacutelculo

Dioacutexido de azufre libre en miligramos por litro 64 n

224 Determinacioacuten del dioacutexido de azufre total


22411 En el caso del mosto concentrado rectificado utilizar la solucioacuten obtenida diluyendo la muestra problema al 40 (mv) tal y como se indica en el capiacutetulo laquoAcidez totalraquo en el punto 512 En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de esta solucioacuten y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (punto 2221) Acoplar el matraz al aparato

22412 Vinos y mostos

Muestras en las que se suponga que el contenido en SO 2 total sea le 50 mgl En el matraz A de 250 ml del aparato de arrastre introducir 50 ml de muestra y 15 ml de aacutecido fosfoacuterico (punto 2221) Acoplar el matraz al aparato

Muestras en las que se suponga que el contenido en SO 2 total sea ge 50 mgl En el matraz A de 100 ml del aparato de arrastre introducir 20 ml de muestra y 5 ml de aacutecido fosfoacuterico (punto 2221) Acoplar el matraz al aparato


Introducir en el borboteador B de 2 a 3 ml de solucioacuten de peroacutexido de hidroacutegeno (punto 2222) neutralizarla como se ha hecho anteriormente llevar a ebullicioacuten el vino contenido en el matraz A con una pequentildea llama de 4 a 5 cm de altura que debe lamer directamente el fondo del matraz No colocar bajo el matraz ninguna tela metaacutelica sino depositarlo sobre un disco perforado con un agujero de 30 mm de diaacutemetro Se evita asiacute la pirogenacioacuten de las materias extractivas del vino sobre las paredes del matraz

Mantener la ebullicioacuten durante el paso de la corriente de aire (o de nitroacutegeno) En 15 minutos el dioacutexido de azufre total habraacute sido arrastrado y oxidado Valorar con la solucioacuten 001 M de hidroacutexido de sodio (punto 2224) el aacutecido sulfuacuterico formado

Sea n el nuacutemero de mililitros utilizados


El dioacutexido de azufre total se expresa en miligramos por litro (mgl) o en miligramos por kilogramo (mgkg) de azuacutecares totales sin decimales

22421 Caacutelculo

mdash Vinos y mostos

Dioacutexido de azufre total en miligramos por litro

mdash Muestras con bajo contenido en dioacutexido de azufre (muestra de 50 ml)

64 times n

mdash Otras muestras (muestra de 20 ml)

16 times n

mdash Mostos concentrados rectificados

Dioacutexido de azufre en miligramos por kilo de azuacutecares totales (con 50 ml de muestra preparada) (punto 22411)

(1600 times n)(P)

P = contenido en (mm) de azuacutecares totales


Contenido lt 50 mgl (muestra de 50 ml) r = 1 mgl

Contenido gt 50 mgl (muestra de 20 ml) r = 6 mgl


Contenido lt 50 mgl (muestra de 50 ml) R = 9 mgl

Contenido gt 50 mgl (muestra de 20 ml) R = 15 mgl



5 Iacutendice de Folin AS-2-10-INDFOL IV

6 Contenido en azuacutecar (= glucosa + fructosa) AS-311-02-GLUFRU II

7 Contenido en sacarosa (medido por HPLC) AS-311-03-SUCRES II

8 Resonancia magneacutetica nuclear ndash Deuterio del etanol del vino

AS-311-O5-ENRRMN (en revisioacuten) I

9 Grado alcohoacutelico volumeacutetrico en (GAV) AS-312-01-TALVOL I

10 Relacioacuten isotoacutepica 13 C 12 C del etanol del vino AS-312-06-ETHANO II

11 Acidez total AS-313-01-ACITOT I

12 Acidez volaacutetil AS-313-02-ACIVOL I

13 Aacutecido ciacutetrico AS-313-09-ACIENZ II

14 Aacutecido soacuterbico AS-313-14-ACISOR IV

15 pH de los mostos AS-313-15-PH I

16 Aacutecido ascoacuterbico AS- 313-22 ACASCO II

17 CO 2 en gl AS-314-01-DIOCAR II

18 CO 2 en gl (manometriacutea) AS-314-04-CO2MAN II

19 Sobrepresioacuten de CO 2 AS-314-02-SURPRES I

20 Lisozima AS-315-14-LYSOZY IV

21 Sulfato de potasio AS-321-05-SULFAT II

22 Hierro AS-322-05-FER IV

23 Cobre AS-322-06-CUIVRE IV

24 Sulfitos (SO 2 ) o dioacutexido de azufre total

AS-323-04-DIOSU II

La descripcioacuten de algunos meacutetodos de anaacutelisis estaacute siendo objeto de actualizacioacuten por parte de las instancias de la OIV Estas descripciones se publicaraacuten en una proacutexima Comunicacioacuten de la Comisioacuten en cuanto la OIV haya publicado un texto actualizado en la edicioacuten 2010 del Compendio de meacutetodos internacionales de anaacutelisis de la OIV


ANEXO

IacuteNDICE



























1 DEFINICIONES



20 degC





Nota









41 Material



Figura 1









o










Caacutelculos





Volumen a 20 degC








Determinar





Caacutelculos




m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

































TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









ANEXO

IacuteNDICE



























1 DEFINICIONES



20 degC





Nota









41 Material



Figura 1









o










Caacutelculos





Volumen a 20 degC








Determinar





Caacutelculos




m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

































TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










1 DEFINICIONES



20 degC





Nota









41 Material



Figura 1









o










Caacutelculos





Volumen a 20 degC








Determinar





Caacutelculos




m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

































TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)













o










Caacutelculos





Volumen a 20 degC








Determinar





Caacutelculos




m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

































TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









Caacutelculos




m= 00012 (P 1 ndash P)

Volumen a 20 degC

































TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









TABLA I

Factores F



TABLA II




TABLA III




TABLA IV






TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










TIPO I



2 MATERIAL












4 PROCEDIMIENTO




5 CAacuteLCULO













TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









TABLA I



TABLA II




TABLA III






1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










1 DEFINICIOacuteN










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










(pm)




1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO



3 REACTIVOS





4 MATERIAL




5 PROCEDIMIENTO

51 Vinos tintos









52 Vinos blancos






532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









532 Medida





62 Repetibilidad





1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)










1 DEFINICIOacuteN


2 PRINCIPIO








F6PlarrrarrG6P


3 MATERIAL





4 REACTIVOS












Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)











Observacioacuten


5 PROCEDIMIENTO








Hasta 400 gl Hasta 800 gl 1 + 99 100


























Observacioacuten



531 Caacutelculo










v = 020 ml

PM = 180

d = 1

Se obtiene




Observacioacuten









r = 0056 x i


R = 012 + 0076 x i




(pm)





(pm)




(pm)

















4 PRINCIPIO





5 REACTIVOS















ndash 2672 permil








6 EQUIPO Y MATERIAL














Nota














8 PROCEDIMIENTO









mdash Nota















9 CAacuteLCULO





















A amp G 80 10 10

B amp C 90 10 0

D amp F 0 100 0

E amp I 90 0 10

H amp K 100 0 0

J amp L 0 0 100




19 18 17 19 19 19



S r 2 00064 00077 00031 00127 00069 00041



S R 2 00389 00309 00382 00459 00316 00584






















2 R

Diciembre 1994 6 0210 0044 059 6 0151 0023 042

Junio 1995 8 0133 0018 037 8 0147 0021 041

Diciembre 1995 7 0075 0006 021 8 0115 0013 032

Marzo 1996 9 0249 0062 070 11 0278 0077 078

Junio 1996 8 0127 0016 036 8 0189 0036 053

Septiembre 1996 10 0147 0022 041 11 0224 0050 063

Diciembre 1996 10 0330 0109 092 9 0057 0003 016

Marzo 1997 10 0069 0005 019 8 0059 0003 016

Junio 1997 11 0280 0079 078 11 0175 0031 049

Septiembre 1997 12 0237 0056 066 11 0203 0041 057

Diciembre 1997 11 0127 0016 036 12 0156 0024 044

Marzo 1998 12 0285 0081 080 13 0245 0060 069

Junio 1998 12 0182 0033 051 12 0263 0069 074

Septiembre 1998 11 0264 0070 074 12 0327 0107 091

Media ponderada 0215 0046 060 0209 0044 059








1 DEFINICIOacuteN





3 REACTIVOS




Agua csp 1 000 ml










Agua csp 1 000 ml

4 MATERIAL





5 PROCEDIMIENTO


511 Vinos

















611 Vino


A = 10 bull n








A = (500 bull n)P

















1 DEFINICIOacuteN







Observacioacuten


3 REACTIVOS










4 MATERIAL



2) Un borboteador


4) Un refrigerante









43 Matraz Kitasato

5 PROCEDIMIENTO





53 Valoracioacuten



















71 Principio




72 Reactivos





73 Procedimiento




















2 REACTIVOS













3 MATERIAL











5 PROCEDIMIENTO









Antildeadir


















Se obtiene

C = 479 times ΔA





















21 Reactivos





22 Material




23 Procedimiento














100 times C



31 Reactivos




32 Material










33 Procedimiento





















1 PRINCIPIO


2 MATERIAL


22 Electrodos




3 REACTIVOS



pH

357 a 20 degC

356 a 25 degC

355 a 30 degC



pH

3999 a 15 degC

4003 a 20 degC

4008 a 25 degC

4015 a 30 degC





Agua csp 1 l


pH

690 a 15 degC

688 a 20 degC

686 a 25 degC

685 a 30 degC




4 PROCEDIMIENTO


411 Mosto y vino











44 Medida








1 INTRODUCCIOacuteN






3 PRINCIPIO




41 Reactivos






















Observacioacuten







5 MATERIAL


51 Bomba de HPLC


53 Detector de UV

6 MUESTREO



7 PROCEDIMIENTO







Caudal 1 mlmin








Figura 1



8 CAacuteLCULOS





9 FIDELIDAD






s r = 0011 x + 031

s R = 0064 x + 139



s r = 0014 x + 031

s R = 0079 x + 129


Ejemplo


s R = 52 mgl




102 Exactitud













211 Material


2112 pH-metro

212 Reactivos




213 Procedimiento















( 1 ) 10 5 pascal (Pa) = 1 bar


221 Material


2212 pH-metro

222 Reactivos




223 Procedimiento




















siendo







(pm)




1 PRINCIPIO


2 MATERIAL

















3 PROCEDIMIENTO









Tabla 1


degC

0 185

1 180

2 174

3 168

4 164

5 159

6 154

7 150

8 145

9 140

10 136

11 132

12 128

degC

13 124

14 120

15 116

16 113

17 109

18 106

19 103

20 100

21 097

22 095

23 093

24 091

25 088










1 INTRODUCCIOacuteN




3 DEFINICIOacuteN


4 PRINCIPIO


5 REACTIVOS






52 Eluyentes

A CH 3 CN 1 TFA 02 H 2 O= 988

B CH 3 CN 70 TFA 02 H 2 O= 298



6 MATERIAL

















0 100 0

isocraacutetico

3 100 0

lineal

10 65 35

isocraacutetico

15 65 35

lineal

27 405 595

lineal

29 0 100

isocraacutetico

34 0 100

lineal

36 100 0

isocraacutetico

40 100 0


9 CAacuteLCULO




Banda de linealidad

(mgl)






UV 5-250 3 786 09993 186 620 467 554 062 193

FLshyD

1-250 52 037 09990 018 059 261 237 068 230












(mgl) [C] obtenida



UV 280 nm 50 131 631 623 386 99

FD 50 131 631 645 536 102

UV 280 nm 5 144 194 179 149 921

FD 5 144 194 190 161 977











21 Reactivos



22 Procedimiento

221 Caso general









231 Caacutelculos


1867 times m


232 Repetibilidad











MEacuteTODO USUAL



21 Reactivos




22 Material




23 Procedimiento




232 Calibrado









C times F






2 MATERIAL





3 REACTIVOS








4 PROCEDIMIENTO










Comentarios






1 DEFINICIONES

















221 Material


Figura 1





2212 Microbureta

222 Reactivos
















22321 Caacutelculo














22421 Caacutelculo




64 times n


16 times n



(1600 times n)(P)









Documents

Lista y descripción de los métodos de análisis