Manual de prácticas sobre microscopía

Institución educativa cadena las playas

Área de ciencias naturales

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

PARTES DE UN MICROSCOPIO ÓPTICO

Sistema óptico

OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del objetivo.

OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.

CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

DIAFRAGMA: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.

FOCO: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

Sistema mecánico

SOPORTE: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el brazo.

PLATINA: Lugar donde se deposita la preparación.

CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular.

REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar, cambiar los objetivos.

TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y micrométrico que consigue el enfoque correcto.

MANEJO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.

2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.

3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.

4. Para realizar el enfoque:

a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.

b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.

5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las

precauciones anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con el objetivo de inmersión.

6. Empleo del objetivo de inmersión:

a. Bajar totalmente la platina.

b. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.

c. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de x40.

d. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.

e. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.

f. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.

g. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.

h. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso 3.

i. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.

j. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.

2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma

prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.

4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.

5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su sujeción.

6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina, revólver y condensador).

7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular. 8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.

9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

PRACTICAS DE MICROSCOPÍA

1. Observación de Células Vegetales:

EPIDERMIS DE LA CEBOLLA

Objetivos:a) Observar células vegetales de la epidermis de cebolla al microscopio óptico.b) Reconocer las partes de la célula vegetal.c) Apreciar el tamaño de las células.

Materiales:

- Microscopio óptico.- Cebolla. - Frasco lavador con agua.- Bisturí. - Pinzas de disección.

- Porta y cubreobjetos. - Papel de filtro

Procedimiento:

1. Cortamos un trozo de cebolla de 1cm2 y con las pinzas retiramos la delicada piel de la cara interna del casco.

2. Colocamos la epidermis sobre el portaobjetos en el que habremos puesto previamente una gota de agua, extendemos bien la piel para que no tenga burbujas de aire. Podemos utilizar azul de metilileno como colorante

3. Secamos con cuidado el exceso de agua y colocamos el cubreobjetos.4. Colocamos el porta en la platina, con el objetivo más pequeño, enfocamos y

observamos. Luego cambiamos de objetivos

ACTIVIDADES

A) Realiza un dibujo de lo que estás viendo:

B) Señala en el dibujo las partes de la célula que estas observando y responde a las siguientes cuestiones:

a) ¿Cómo se llama el orgánulo visible? ____________________________________________b) ¿Se puede ver algún otro orgánulo? ____________________________________________c) ¿Todas las células tienen la misma forma? _______________________________________d) Están aisladas o están unidas. ________________________________________________e) ¿Cómo se llama la unión de células que presentan la misma forma y función? ________________________________________________________________________

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS VEGETALES: CÉLULAS DE LA

PULPA DE TOMATE MATERIAL

- Microscopio - Portaobjetos - Cubreobjetos - Escalpelo - Pinzas - Tomate

PROCEDIMIENTO

1. Utilizando un escalpelo, corta en dos mitades el tomate.

2. Obtén, ayudándote de unas pinzas, un trozo de pulpa de tomate de la zona indicada en la figura de unos 2mm de grosor.

3. Deposítalo en el centro de un portaobjetos sin poner agua.

4. Coloca encima un cubreobjetos y comprime suavemente con los dedos hasta obtener un completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate.

5. Lleva la preparación a la platina del microscopio y realiza una observación con pequeños aumentos. Selecciona el mejor grupo de células y pasa a mayores aumentos.

3. Observación microscópica de hongos

Es una observación cotidiana el hecho que si se deja un trozo de pan en un lugar húmedo, con el paso del tiempo es probable que crezca sobre él una pelusa blanca que luego se oscurece, correspondiente al hongo Rhyzopus stolonifer (o “moho negro del pan”). Esa pelusa es el micelio del hongo, y su oscurecimiento se debe a la formación de esporangios, estructuras que dan lugar a millones de esporas (una forma de reproducción de estos organismos)Los principales métodos aplicados para la observación microscópica de los cultivos son: la observación en fresco con una solución adecuada, y las preparaciones en cinta adhesiva.

Materiales:

- Pan o manzana en el cual haya crecido moho- Lupa- aguja de disección- portaobjetos y cubreobjetos- azul de metileno- Cinta adhesiva transparente- Microscopio

Preparación en fresco de mohos

Con la ayuda de la lupa tomar, con una aguja de disección, una porción muy pequeña de muestraExtender el material recogido en el portaobjetos.Colocar una gota de agua y una de azul de metileno.Aplicar el cubreobjetos.Observar al microscopio óptico las estructuras del hongo y sus esporas, y dibujarlas.

Preparación en cinta adhesiva

Colocar sobre un portaobjetos una gota de solución de azul de metileno.

Cortar un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2cm.

Tocar con el lado adhesivo de la cinta la superficie de la fruta o el pan enmohecidos o el borde de una colonia de hongo de un cultivo. En la zona central de una colonia puede haber una excesiva concentración de esporas.

Pegar la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.

Eliminar el colorante sobrante con un papel de filtro.

Guía para el análisis de resultados de las experiencias:

a) Enumerar la variedad de estructuras que presentan las células humanas.b) Prestar atención a la nitidez con que se ven las células vegetales debido a la

presencia de la pared celular.c) Analizar las diferencias fundamentales entre las células vegetales, animales y hongos,

y también entre las células procariotas y eucariotas.d) Comparar los dibujos realizados por los alumnos con imágenes de los libros (modelos

científicos y microfotografías) y reconocer las estructuras observadas.e) Analizar el detalle con que pueden observarse las estructuras celulares y proponer

técnicas para observar más detalles de las diferentes estructuras celulares.

3. Observación de Células Animales.

Objetivos:a) Observar células del epitelio de la mucosa bucal al microscopio óptico.b) Reconocer las partes de la célula animal.

Materiales:

- Microscopio óptico. - Colorante: Azul de metileno.- Palillo de dientes. - Frasco lavador con agua.- Mechero de alcohol. - Pinzas de madera.- Porta y cubreobjetos. - Papel de filtro/ Papel milimetrado

Procedimiento:

1. Pon una gota de agua en el centro de un portaobjetos2. Toma una muestra del interior de la boca, frotando con suavidad la mucosa de la

cara interna de tu mejilla con el extremo de un palillo de dientes.3. Mezcla el material obtenido con la gota de agua del porta y extiéndela.

4. Deposita unas gotas de azul de metileno sobre la preparación y deja que actúe el colorante durante 1 minuto. Lava con cuidado la preparación (echar el agua gota a gota).

5. Coloca el cubreobjetos y observa la preparación al microscopio.

ACTIVIDADES

Realiza un dibujo de lo que estás viendo: Señala en el dibujo las partes de la célula que estas observando y responde a las

siguientes cuestiones:a) ¿Todas las células tienen la misma forma? _______________________________________

b) Están aisladas o están unidas. ________________________________________________

c) Las células observadas, ¿forman un tejido? ¿Cuál? _________________________________

d) Si forman un tejido. ¿Por qué aparecen las células sueltas?______________________________________________________________________________________________________________________________________________

e) Compara las células observadas con las vegetales de la epidermis de cebolla._____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Observación de células sanguíneas

MATERIALES

Microscopio Portaobjetos Lanceta estéril

TÉCNICA

1. Con la lanceta estéril realizar una punción en un pulgar. 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un

portaobjetos. 3. Colocar un portaobjetos como indica el dibujo y deslizarlo

sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina película de sangre.

Frasco lavador

Alcohol absoluto

4. Colocar el frotis de sangre sobre la cubeta de tinción y añadir unas gotas de alcohol absoluto y dejar que el alcohol se evapore para fijar la preparación.

5. Cubrir con unas gotas de hematoxilina y dejar actuar durante 15 minutos. Evitar la desecación del colorante agregando más líquido.

6. Lavar la preparación y añadir unas gotas de eosina dejándola actuar 1 minuto.

7. Volver a lavar hasta que no queden restos de colorante.

8. Dejar secar aireando el porta o bien al calor muy lento de la llama del mechero.

9. Observar al microscopio.