Manual de Parasitologia

Gua de Laboratorio Prctico en Parasitologa Bioanlisis Clnico Internado Rotatorio UNAN-Len

2014

Lester Ivn Gutirrez Prez Tutora: Lic. Aleyda Tllez

28/09/2014

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Tabla de contenido

1) Microscopio ptico ..................................................................................................................2

2) Partes del Microscopio .............................................................................................................2

3) Funcionamiento del Microscopio ............................................................................................3

4) Calibracin y Medicin de longitudes .....................................................................................3

5) Preservacin y Fijacin de muestras fecales...........................................................................5

a) PVA (Polivinil Alcohol) ........................................................................................................5

b) Formalina al 10% .................................................................................................................5

c) Solucin MIF (Mertiolate-Iodo-Formaldehdo) .................................................................6

6) Examen General de Heces .......................................................................................................6

a) Examen macroscpico ..........................................................................................................6

b) Examen Qumico ..................................................................................................................8

c) Examen Microscpico. .........................................................................................................9

7) Mtodos de Concentracin ....................................................................................................10

a) Mtodos de Flotacin .........................................................................................................10

b) Mtodos de Sedimentacin ................................................................................................11

c) Mtodo de concentracin Kato-Katz ................................................................................12

8) Diagnstico de Protozoarios Intestinales. .............................................................................13

a) Giardia lamblia ....................................................................................................................14

b) Entamoeba histolytica-dispar ..............................................................................................15

c) Entamoeba coli ....................................................................................................................15

d) Blastocystis hominis ............................................................................................................16

e) Iodamoeba butschlii ............................................................................................................16

f) Balantidum coli ...................................................................................................................17

9) Diagnstico de Helmintos Intestinales ..................................................................................17

a) Enterobius vermicularis ......................................................................................................18

b) Ascaris lumbricoides ...........................................................................................................19

c) Trichuris trichuria ...............................................................................................................19

d) Uncinarias ...........................................................................................................................20

e) Taenia solium ......................................................................................................................21

f) Hyminolepis nana ................................................................................................................21

g) Hyminolepis diminuta .........................................................................................................22

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1) Microscopio ptico

El microscopio es un instrumento que nos permite observar objetos que son demasiado

pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el

microscopio ptico. Se trata de un instrumento que contiene dos o ms lentes que permiten

obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.

2) Partes del Microscopio

Ocular: Lente situado cerca del ojo del

observador. Capta y ampla la imagen

formada en los objetivos.

Objetivo: Lente situado en el revlver.

Ampla la imagen, es un elemento vital que

permite ver a travs de los oculares.

Condensado: Encargado de concentrar

rayos luminosos sobre la preparacin

Diafragma: Regula la cantidad de luz que

llega al condensador.

Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el

condensador.

Cabezal: Cmara que porta el ocular y los

objetivos.

Revlver: Sistema que porta los objetivos

de diferentes aumentos, es rotatorio y se

alinea con el ocular.

Tornillos macro y micromtrico: Son

tornillos de enfoque, mueven la platina o el

tubo hacia arriba y hacia abajo. El

macromtrico permite desplazamientos

amplios y el micromtrico desplazamiento

muy corto, para el enfoque ms preciso.

Platina: Es una plataforma horizontal con

un orificio central, sobre el que se coloca la

preparacin, permite el paso de los rayos

procedentes de la fuente de iluminacin.

Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo,

la platina y los tornillos de enfoque

asociados al tubo o a la platina.

Base o pie: Es la parte inferior del

microscopio que permite que ste se

mantenga de pie.

Imagen N 1. Partes del microscopio ptico

3

3) Funcionamiento del Microscopio

El enfoque de la imagen en el microscopio se realiza separando el objeto a estudiar de los

objetivos. Mediante los tornillos macro y micromtrico, se puede subir y bajar la platina

para buscar el foco. La operacin de enfoque requiere seguir unos determinados pasos para

realizarla con seguridad. El procedimiento correcto es el siguiente:

Mirando por fuera del microscopio se lleva el objetivo junto a la preparacin

Luego por el ocular se va separando lentamente hasta obtener la imagen.

Si se busca el enfoque acercando el objetivo a la preparacin se corre el riego de

producir fracturas (en la preparacin o, en lo que es mucho peor, en la lente frontal del

objetivo) si nos pasamos del plano de foco.

Sistema de Iluminacin: Ubicado en la base de

los microscopios. En los microscopios de

investigacin la fuente de iluminacin conlleva un

complejo sistema de filtros y lentes. Un sistema de

este tipo se reproduce en la Imagen N2 en la cual

la luz procedente de una bombilla (1) pasa a travs

de un sistema de filtros (2) que concentran la luz

en un haz de rayos paralelos. Un filtro anti-

calorfico (3) evita que el calor se propague a

travs del microscopio. La correcta coloracin se

consigue por unos filtros cromticos (4).

Finalmente mediante un espejo (5) se conduce a los

rayos en la direccin correcta. La intensidad del haz luminoso se regula mediante un

diafragma de tipo iris (6), llamada diafragma de campo luminoso.

Sistemas de Lentes: Son objetivos diseados para ampliar la imagen de los objetos

situados en la platina del microscopio. La imagen real (e invertida) que forman se ampla

con el sistema ptico del ocular. Normalmente se usa una combinacin de cuatro (x4, x10,

x25, x50) o cinco objetivos (x 2,5, x5, x10, x25, x50). Para que no se produzca el

desplazamiento de los objetos fuera del campo de observacin al girar la platina del

microscopio, es necesario que el eje de giro coincida con el eje ptico del objetivo. Para

conseguirlo cada objetivo est montado sobre unas piezas excntricas de manera que estos

pueden ser desplazados al girar unos anillos o unos tornillos de centrado situado en sus

monturas externas

4) Calibracin y Medicin de longitudes

Una vez familiarizado con la estructura y funcionamiento del microscopio compuesto, hay

que considerar aquellos accesorios que conducen a una excelente prctica microscpica y

que facilitan el trabajo, hacindolo ms rpido y efectivo o ampliando las capacidades del

instrumento. Dentro de las posibilidades se puede medir y cuantificar. Consiste en la

micrometra aproximada de los especmenes observados al microscopio.

Imagen N2. Sistema de Iluminacin

4

Para cuantificar longitudes, cantidades (nmero de clulas, ncleos, partculas), se emplean

oculares de medicin con retculos (retculo ocular micromtrico) en combinacin con

micrmetros especializados, patrones calibrados, cmaras de conteo y el vernier.

Pasos a seguir para calibrar el retculo ocular

a) Ver a travs del ocular y enfocar la imagen del micrmetro objeto usando la

combinacin de lente objetivo 10x.

b) Sobreponer el retculo ocular y el micrmetro objeto, haciendo coincidir uno de sus

extremos de cada uno.

c) La medicin deber ser consistente, desde el extremo en que coinciden ambas retculas

hasta otra subdivisin coincidente

d) La calibracin retculo ocular puede ser determinado dividiendo la longitud conocida del

micrmetro objeto (Lp) entre el nmero de divisiones coincidente del retculo ocular (#dO).

Este clculo da por resultado el valor real de la longitud de cada subdivisin del retculo

ocular (VR):

Ejemplo: Calibracin del Retculo Ocular a la amplificacin de cuatrocientos aumentos

(400X). Para una configuracin dada de lentes en un microscopio ptico (ocular de 10X y

objetivo de 40X), se determina la longitud por valor de divisin de un ocular micromtrico.

Dos (2) subdivisiones de la retcula ocular (#dO = 2 subdivisiones) coinciden con la

distancia conocida de 0,3 mm con respecto al micrmetro objeto (LP = 0,3 mm). La

longitud por unidad de divisin (VRSub) puede ser calculada de la siguiente manera

Esto significa que cada subdivisin nominal del Retculo Ocular vale 0,15 mm vista con un

lente objetivo de 40X. Nota: Para convertir el valor de milmetros (mm) a micrmetros

(m) se multiplica por 1000= seran 150 um

= VR(sub) (mm/Subdivisin) LP (mm)

#dO (divisiones)

= VR 0,15 mm LP = 3mm

#dO= 2 subdivisin

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Una vez determinado el factor de calibracin podemos medir longitudes en nuestra

muestra. Para ello:

a) Retirar el micrmetro y enfocar el objeto a medir.

b) Contar el nmero de intervalos del retculo que corresponden al tramo que se desea

medir.

c) Multiplicar el nmero de intervalos por el valor de calibracin.

L = # de subdivisiones x VRsub

El resultado es la longitud absoluta del tramo medido, en mm (micrmetros)

5) Preservacin y Fijacin de muestras fecales

La edad de la muestra, influye directamente en el descubrimiento principalmente de

protozoarios; si no es posible observar las muestras dentro del tiempo lmite, es necesario

preservarlas y refrigerarlas a 3-5C en envases bien cerrados para prevenir la desecacin.

Tres de los conservadores ms utilizados son: PVA, Formalina y MIF. De estos PVA, es el

nico fijador que se emplea para preparar frotis teidos permanentes y es fcil de preparar.

Los otros fijadores mencionados permiten el examen de la muestra slo en frotis hmedos.

a) PVA (Polivinil Alcohol)

Es altamente recomendado como un medio preservativo de trofozotos y quistes de

protozoarios, tambin se emplea para mandar muestras por correo al laboratorio. PVA, es

una combinacin de fijador modificado de Shaudinn y resina; deber ser usado en una

proporcin de tres pares de PVA y una parte de la materia fecal. Este fijador permanece

estable por largos perodos, meses o aos, cuando es guardado en frascos bien sellados a

temperatura ambiente.

Frmula

PVA. Elvanol 71-24 10 g

Alcohol etlico 95% 62.5 ml

Cloruro de Mercurio saturado acuoso 125 ml

cido Actico Glacial 10 ml

Glicerina 3 ml

b) Formalina al 10%

Con este Fijador los quiste de protozoarios, huevos, helmintos y larvas, son bien

preservados por largo perodo. Se recomienda calentar la formalina a 60C al usarse para

huevos de helmintos, para prevenir el posterior desarrollo de stos al estado infectivo. La

formalina deber ser usada en la proporcin 3:1 y mezclada completamente.

Frmula

Formaldehdo 100 ml

Solucin Salina al 0.85% 900 ml

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c) Solucin MIF (Mertiolate-Iodo-Formaldehdo)

Con este Conservador, todos los elementos parasitarios microscpicos se conservan bien,

en estado natural y se tien convenientemente para reconocerlos con seguridad, durante una

preparacin hmeda. El material, se conserva bien en un frasco bien cerrado, durante un

ao o ms.

Frmula Solucin Madre MF Agua destilada 250 ml

Tintura de Mertiolate #90 Lilly (1:1000) 200 ml

Formaldehdo 25 ml

Glicerol 5 ml

Solucin de Lugol Yodo al 5% en yoduro de Potasio al 10% en Agua Destilada

6) Examen General de Heces

El examen general de heces forma parte de la rutina de pruebas que se solicitan a una

persona para conocer su estado general de salud o en casos particulares cuando se sospecha

de alguna patologa a nivel del sistema gastrointestinal bajo; en un simple examen de la

materia fecal se pueden reunir datos claves para realizar el diagnstico y seguimiento de

estas patologas. Sin embargo es necesario conocer algunas generalidades para comprender

sus ventajas y sus limitaciones.

Heces fecales: Se elimina en un individuo adulto sano un cantidad aproximada de 300 a

500 g. de materia fecal, esto depende mucho del tipo de alimentacin y de los hbitos

intestinales de cada persona. As un individuo que consuma mayor cantidad de fibra tendr

una eliminacin mucho mayor de heces fecales, al igual que una persona que consuma

muchos carbohidratos y protenas complejas evacuar menos cantidad y con menor

frecuencia.

En cuanto a la recoleccin de la materia fecal, esta se recolectar en recipientes limpios y

secos, no necesariamente estriles (las heces fecales son muestras polimicrobianas),

adquiridos usualmente para tal fin. En la caja recolectora a mxima capacidad se pueden

recoger 20g de heces, sin embargo, normalmente se recolecta entre 5 a 10g que resulta

suficiente para las pruebas de rutina de laboratorio.

El EGH, permite diagnosticar de entrada alteraciones fisiopatolgicas infecciosas o no del

sistema gastrointestinal bajo. Este consta de tres partes:

a) Examen macroscpico

Se analizan caractersticas fsicas de las muestras, comprende los parmetros:

Aspecto: Homogneo o Heterogneo (Normalmente la materia fecal es heterognea

puesto que est conformada por diferentes desechos alimenticios, una muestra muy

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heterognea puede sealar trnsito intestinal rpido, mientras que las heces ms

homogneas denotan trnsito intestinal lento generalmente)

Consistencia: Diarreica o lquida, blanda, pastosa y dura o formada. Est en

relacin directa a la cantidad de agua presente en la materia fecal, siendo que la

cantidad de agua la que otorga la fluidez de las heces, donde la muestra diarreica

tiene mayor cantidad de agua, mientras que las muestras duras tienen mucha menor

cantidad. Este parmetro tambin se relaciona con el trnsito intestinal, mientras

ms rpido el trnsito intestinal, menor agua es absorbida por el intestino grueso y

por lo tanto la consistencia de las heces es ms fluida.

Color: Color usual de las heces es el marrn, viene dado por las sales biliares

provenientes del metabolismo de la hemoglobina, en especial del pigmento

Estercobilina. Tambin est en relacin directa con el tipo de alimentacin, as los

lactantes que consumen mayor cantidad de lcteos tendrn unas heces ms amarillas

mientras que los individuos que consuman mayor cantidad de protenas de

carnes presentarn heces ms oscuras. La falta de coloracin de las heces se

denomina ACOLIA, y se denota con heces color grisceo o arcilloso, relacionada

con obstruccin a nivel de los conductos biliares o hepticos. Las heces negruzcas

llamadas MELENA, ocurren por la presencia de sangre digerida en la materia fecal

o de sustancias ricas en hierro que reaccionan con los diferentes componentes de los

jugos pancreticos. Otros colores pueden aparecer en el caso de ingestin de

alimentos coloreados (remolacha, morcillas, etc.) o de medicamentos. Tambin

pacientes hospitalizados que presenten diarreas si se observa un cambio llamativo

de color de las heces se debe estudiar para descartar infecciones por bacterias, como

por ejemplo en heces verdes o azuladas la presencia de bacterias del

gnero Pseudomonas

Olor: Viene dado por la formacin del indol producto de la degradacin del

aminocido triptfano, en la protelisis de los alimentos. Este parmetro se toma

poco en cuenta, sin embargo la aparicin de un olor marcadamente necrtico puede

indicar procesos malignos a nivel intestinal. Tambin en el caso de infecciones

intestinales las bacterias aumentan la protelisis y por ende el olor fecal se acenta.

Otros hallazgos: la presencia de moco visible, producido como mecanismo de

defensa del organismo frente a irritaciones de la mucosa, este se observa como una

capa gelatinosa, que se encuentra sobre o entre la muestra fecal, que al ser tocada

con el aplicador de madera durante el montaje presenta el fenmeno de filancia. Se

puede diferenciar dependiendo de la textura la procedencia del moco, el moco

observado fluido, brillante, que recubre la materia fecal dando un aspecto

espumoso, proviene del intestino delgado. El moco ms denso, opaco, formando

grumos entre la materia fecal, casi siempre rico en leucocitos, proviene del intestino

grueso. Este tipo de hallazgos permiten dar una presuncin del foco de la alteracin

del organismo.

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Presencia de sangre, la observacin de sangre, indica ruptura en la mucosa del

intestino grueso, puesto que si fuera del intestino delgado, la sangre cambiara de

color por accin de las enzimas pancreticas sobre el grupo hem dando una

coloracin negruzca (Melena).

Presencia de Restos alimenticios: corresponden a fragmentos generalmente de

fibras de celulosa indigeribles u otras sustancias. Se informan ausentes o

presentes, desatacndose el hecho si son abundantes, lo que indica trnsito

intestinal rpido siendo denominado Lientera, signo de algunas infecciones

intestinales

b) Examen Qumico

Generalmente forma parte del estudio especial de heces, puesto que algunos de sus

parmetros necesitan una dieta previa para evitar interferencias

pH: normalmente es ligeramente cido (6,5 6,9 aprox.) viene dado por la

degradacin de las protenas, interpretndose su disminucin como un aumento en

la degradacin de estas tpico de las infecciones bacterianas, o su alcalinizacin

como producto de la inhibicin de la flora bacteriana secundaria a tratamientos

antibiticos, lo que predispone al desarrollo de levaduras (se usan tiras reactivas

para determinar pH)

Azcares reductores, esta prueba revela la presencia de azcares del tipo glucosa

que son capaces de reducirse en presencia de xido cprico. Normalmente las heces

son azcares reductoras negativas. Esta prueba es especialmente til en infantes

menores de 2 aos con cuadros diarreicos, permitiendo establecer el diagnstico

de sndrome de intolerancia a la lactosa con la positividad de la prueba. Presenta

poca o nula utilidad en la mayora de los casos de adultos. Sin embargo, se han

estudiado casos de intolerancia a la lactosa en pacientes ancianos, lo que ameritara

la aplicacin de esta prueba. Se usan tiras indicadoras, o mtodos basados en el

mtodo tradicional de Benedict.

Sangre oculta: Se basa en revelar la presencia de tetrapirroles del tipo de los grupo

hem en la materia fecal, se denomina sangre oculta puesto que la sangre si proviene

del sistema digestivo alto (Boca, esfago, estmago e intestino delgado) pasa por

una serie de cambios qumicos y de pH inducidos por las diferentes sustancias que

fisiolgicamente actan a esos niveles, cambiando su coloracin a negro, si esta no

es muy abundante el color negro se diluye en la materia fecal marrn y no se

verifica macroscpicamente. Los mtodos que se utilizan se basan en la

identificacin del grupo Hem, Bencidina y Piramidn, entrando en desuso por el

riesgo cancergeno de estas sustancias, hoy se utilizan mtodos simplificados con

menor contacto del analista. El paciente debe guardar al menos 48 horas sin

consumir carnes, alimentos o medicamentos ricos en hierro, cobalto, o sustancias

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coloreadas. La prueba se informa negativo o positiva por cruces dependiendo del

tipo de prueba.

c) Examen Microscpico.

El montaje del examen directo se debe realizar siempre con solucin salina al 0,85% y

lugol u otro colorante supravital de la siguiente manera:

La solucin salina permitir la observacin de las formas parasitarias vivas en movimiento,

mientras que el lugol permitir precisar estructuras internas (ncleos, organelas, etc.)

Estructuras Observadas:

El examen general de heces como todo montaje hmedo se observa a 10x y 40x. Nunca con

objetivo de inmersin

Hemates: Su presencia es normal hasta 3 clulas por campo (400X)

Leucocitos: Normal hasta 4 clulas por campo (400X)

Flora bacteriana: Se informa Normal o disminuida, no tiene relevancia clnica el

informar flora aumentada, puesto no existe parmetro de comparacin. Si se

observa una flora bacteriana sobreabundante se deber casi siempre a que la muestra

tiene mucho tiempo de haber sido recolectada por lo que los resultados

obtenidos podran no ser los ms confiables

Levaduras: su presencia no tiene relevancia clnica mientras hasta 8 cel. xc (400X),

se pueden informar de la siguiente forma:

0 8 por campo > se informa: Levaduras escasas

9 18 por campo > se informa: Levaduras moderadas

19 o ms por campo > se informa: Levaduras abundantes

Si se observan artrosporas o blastosporas (levaduras gemantes), pseudohifas o

pseudomicelios, se informarn por campo, es relevante siempre que se observan, pues esto

refiere colonizacin e infeccin mictica.

Formas parasitarias

Se informaran primero el estadio y luego el nombre cientfico correctamente escrito, no es

necesario la cuantificacin por campo microscpico. Excepto en Blastocystis spp que de

acuerdo a los criterios de patogenicidad se informar por rango cuantitativo en: ms o

menos de 5 clulas por campo (400X).

Cualquier otro hallazgo que el analista considere necesario se informar en el espacio de

observaciones al final de la hoja de anlisis. El examen general de heces tiene una gran

utilidad en el diagnstico de enfermedades intestinales, sin embargo, tiene una sensibilidad

limitada de alrededor de 57%, por lo que un resultado no se puede informar como negativo,

si no se diagnostican formas parasitarias. Se reporta No se observ Parsitos (NSOP)

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7) Mtodos de Concentracin

Cuando un examen directo de heces resulta negativo, se puede recurrir a mtodos de

concentracin, que aumentan la probabilidad de un diagnstico positivo. La

concentracin de una muestra puede ser por Mtodos de Flotacin o Sedimentacin.

a) Mtodos de Flotacin

i) Mtodo con Sulfato de Zinc 1.18

Principio: Se basa en la utilizacin de un lquido de ms alta densidad que los elementos

buscados. Por tal, los elementos menos densos flotarn en la superficie.

Ventajas: Los elementos de Diagnsticos se recobran libres de detritus, lo cual facilita y

acelera el tiempo de examinar la lmina; las larvas de Strongyloides stercolaris es

ocasiones tambin se recobran del sobrenadante.

Desventajas: Se debe ajustar correctamente la densidad (1.18 o 1.20), ya que una densidad

de la solucin puede encoje y deforma estructuras de inters. Adems, no recobra huevos

pesados como los tremtodos o cstodos.

Materiales: Solucin se SO4Zn (D=1.18), Gradillas, Tubos, Centrfuga, Portaobjetos,

Cubreobjetos, Solucin de Lugol, Embudos, Agua destilada, Aplicadores, Asa de 5 mm y

mechero

Preparacin del SO4Zn (D=1.18)

Pesar 330 gr de SO4Zn

Colocar en Erlen Meyer y agregar 700 mL de agua destilada

Calentar para facilitar la disolucin

Cuando se ha diluido completamente agregar 250 ml de agua destilada y mezclar

Medir densidad. Si la densidad es baja, se debe agregar SO4Zn; si la densidad es

alta, se agrega agua destilada

Procedimiento

Rotular muestras y tubos de ensayos

Lavar las muestras con agua y preparar suspensin con la misma

Filtrar la suspensin con gasa en 4 dobleces a un tubo de ensayo

Agregar ms agua y mezclar muy bien

Centrifugar a 2,500 rpm durante 1 min, Descartar sobrenadante

Agregar SO4Zn (D=1.18) al sedimento y agitar fuertemente

Centrifugar a 2,500 rpm durante 1 min

Recoger muestra del sobrenadante y realizar preparaciones hmedas

Observar al microscopio

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ii) Mtodo de Willis

Principio: Consiste en preparar la materia fecal con solucin saturada de Cloruro de Sodio.

Los huevos y quistes de peso especfico menor a la solucin de cloruro de sodio tienden a

flotar.

Ventajas: Se usa para la bsqueda e identificacin de formas parasitarias como quistes,

huevos y helmintos. Se evala una gran porcin de la muestra tiene sensibilidad alta y es

fcil, rpida y econmica. Este mtodo es de alta sensibilidad en el diagnstico de huevos

livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana, y quistes.

Desventajas: No indicado en la bsqueda de huevos pesados, trofozotos y Larvas

Materiales: Vaso de precipitados, Embudo, Gasa, Porta objetos, Cubre objetos, Abate

lenguas, Sol. Saturada de NaCl y Sol. De yodo lugol

Procedimiento:

1.- Tomar aprox. 1 gr de heces fecales con un abate lenguas

2.- En vaso de precipitados poner 10ml de solucin saturada de cloruro de sodio, echarle el

gramo de heces fecales y disolver.

3.- En el embudo con la gasa ya puesta en forma de cono, se filtra la mezcla a forma que

caiga en el tubo de ensaye llenando completamente el tubo.

4.- Coloque un porta objetos con cuidado sobre le tubo, de manera que el lquido haga

contacto con el cubre objeto

5.- Dejar reposar de 5 a 10 minutos

6.- Los quiste o huevos flotaran y quedara adheridos a la cara del porta objetos que est en

contacto con la mezcla

7.- Retirar cuidadosamente el porta objetos para evitar perdida de material, colocar una gota

de yodo lugol y ponerle el cubre objetos.

8.- Examinar la muestra al microscopio con objetivo 40x, buscando quistes o huevecillos de

parsitos.

b) Mtodos de Sedimentacin

i) Mtodo de Ritchie

Principio: Se basa en la concentracin de los quistes y huevos por sedimentacin mediante

la centrifugacin, se necesitaran de algunas sustancias como: ter, formaldehido, y sol

salina; que respectivamente nos ayudaran a limpiar y concentrar los parsitos en las heces.

Ventajas: No deforma a los parsitos, y permite el transporte y almacenamiento de la

materia fecal procesada antes de ser examinada, resulta ms conveniente en casos de

tratamiento o bsqueda mayor de las estructuras parasitarias.

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Desventajas: Alto costo en los materiales y sustancia, no se recomienda como prueba de

campo, no identifica trofozotos ni larvas.

Materiales: Centrifuga, Tubos de ensaye cnicos, Sol. Salina isotnica, gasa cortada en

cuadros, Sol de formaldehido al 10%, embudos de polietileno, ter, vasos de precipitados

de 50 ml, aplicadores de madera, solucin yodo-lugol, pipetas Pasteur con bulbo,

portaobjetos, cubreobjetos, microscopio.

Procedimiento:

Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal en

el vaso de precipitados, se aaden 10 ml de solucin salina y se homogeniza.

Se filtra la suspensin a travs de la gasa colocada en el embudo recogiendo el

filtrado en el tubo cnico.

Se centrifuga la suspensin durante 2 min. a 2000 rpm

Se decanta el sobrenadante y se re-suspende el sedimento con la solucin salina,

centrifugando, decantando y re-suspendiendo 2 veces ms

Al ltimo sedimento se agregan 5 ml. de sol de formaldehido al 10%, se mezcla y se

deja reposar durante 10 min.

Se aaden despus 0.5 ml. de ter, se tapan los tubos y se agitan energticamente

durante 30 seg.

Se centrifuga durante 2 min. a 2000 r.p.m.

Despus de centrifugar se observan 4:

ter (superficial)

Tapn de restos fecales

Formaldehido

Sedimento (fondo del tubo), contiene los elementos parasitarios.

Se decanta el sobrenadante.

Se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del

sedimento y se coloca en el portaobjetos.

Se aade una gota de lugol y se le coloca el cubreobjetos.

Se observa la preparacin en el microscopio con los objetivos 10x y 40x.

c) Mtodo de concentracin Kato-Katz

Este mtodo ha sido ampliamente difundido por la OMS y la OPS y es actualmente

recomendado como el mtodo cualitativo y cuantitativo para las geohelminteasis humanas.

Principio: Utiliza altas concentraciones especficas de heces (42 o 50 gr) las cuales

mediantes el proceso de aclaramiento con glicerina conlleva una mejor visualizacin y

contabilidad de las carga parasitarias

Ventajas: Mayor sensibilidad por alta concentracin de heces, permite contabilizar las

formas parasitarias por gramos de heces, es un mtodo sencillo, preciso y de bajo costo.

Ideal en pruebas de campo.

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Desventajas: No indicado en muestras diarreicas, ni en la visualizacin de larvas, debido a

la clarificacin de la glicina.

Materiales: Lminas portaobjetos, papel absorbente, aplicador, papel de celofn

impregnado con glicerina y verde de malaquita, molde plstico con perforacin central,

malla metlica o nylon.

Procedimiento.

Transferir muestra fecal al papel absorbente.

Colocar la malla o nylon de 2x3 cm sobre la muestra y comprimirla para tamizar la

muestra.

Colocar el molde plstico sobre el portaobjetos y rellenar la perforacin con la

muestra tamizada; levantar el molde dejando el cilindro sobre la lmina.

Colocar la laminilla glicerinada con verde de malaquita sobre la muestra y con

ayuda de un tapn de jebe presionarla para extender la muestra.

Dejar para diafanizacin a temperatura ambiente por 30-45 minutos

Intensidad de la infeccin (hpg)

El resultado obtenido del recuento del kato-katz se multiplica por 24 y se obtiene el nmero

de huevos por gramos de heces (hpg). El comit de la OMS clasifica la intensidad de la

infeccin por helmintos segn los siguientes rangos:

Agente Leve Moderada Severa

A lumbricoides 1-4,999 5,000-49,999 >50,000

T. trichiura 1-999 1,000-9,999 >10,000

A duodenale

N americanus

1-1,999 2,000-3,999 >4,000

8) Diagnstico de Protozoarios Intestinales.

Los protozoarios son microorganismos unicelulares pertenecientes al Reino Protista,

subreino Protozoa. Se caracterizan por ser eucariotas, pueden reproducirse asexuada o

sexuadamente, tienen movilidad variable dependiendo de sus rganos de locomocin, la

mayora tienen nutricin de tipo hetertrofa (incapaces de transformar C inorgnico en C

orgnico). Pueden vivir libremente o actuar como parsitos. Pueden parasitar a distintos

animales y a la especie humana.

Su diagnstico puede llevarse a cabo por la observacin de los trofozotos o quistes, los

cuales pueden ser observados mediantes los mtodos hmedos o mediante tinciones como

azul de metileno, hematoxilina, etc.

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Los principales protozoarios pueden clasificarse segn su grado de patogenicidad de la

siguiente manera:

1. Patgenos primarios clsicos

1.1. Giardia lamblia

1.2. Entamoeba histolytica-dispar

1.3. Cryptosporidium parvum

1.4. Balantidium coli

2. Oportunistas emergentes

2.1. Cryptosporidium parvum

2.2. Isospora belli

2.3. Cyclospora cayetanensis

2.4. Microsporidios

3. De patogenicidad discutida comensales

3.1. Entamoeba coli

3.2. Endolimax nana

3.3. Iodamoeba butschlii

3.4. Blastocystis hominis

3.5. Chilomastix mesnilii

3.6. Pentatrichomonas hominis

a) Giardia lamblia

Trofozoto Quiste

Tamao: Aproximadamente 15 micras de

longitud y 8 micras de ancho

Ncleos: 2, con nuclolos centrales

Forma: Piriforme y una simetra bilateral.

Flagelos: 4 pares que emergen del axostilo.

Cuerpos parabasales: Presentes

Otras estructuras: El axostilo. Una

estructura con forma de disco bilobulado

denominados discos succionadores

Tamao: promedio de 10 micras.

Ncleo: 2-4

Forma: forma avalada con doble membrana

Flagelos: No presenta

Cuerpos parabasales: Presentes

Otras estructura: Axostilo en la parte

cntrica

15

b) Entamoeba histolytica-dispar

Trofozoto Quiste

Tamao: 20-40 micras de dimetro

Ncleos: 1

Forma: Irregular

Pseudpodos: 1, hialino, transparente

Citoplasma: Granuloso, con vacuolas

digestivas y eritrocitos u otros elementos

Movimiento: Unidireccional

Tamao: 10-18 micras

Ncleo: 1-4

Forma: Redondeado de cubierta gruesa

Pseudpodos: No presenta

Cuerpos cromatoidales: forma cilndricas

con extremos redondeados

Movimiento: Inmvil

c) Entamoeba coli

Trofozoto Quiste


Ncleo: 1, Cariosoma grande y excntrico

Forma: irregular.

Pseudpodos: romos y aparecen

simultneamente en varias partes

Citoplasma: endoplasma con grnulos

gruesos, vacuolas y bacterias. Sin GR

Movimiento: Lento, limitado, sin direccin

Tamao: 15-30 micras

Ncleo: ms de 4 (maduro)

Forma: Redondeado o ligero avoide


Cuerpos cromatoidales: delgados en

forma de astillas.

Movimiento: Inmvil

16

d) Blastocystis hominis

Morfologa de Blastocystis hominis

Vacuolar Granular Qustica Ameboide

Forma tpica en los

medios de cultivo, su

tamao vara entre 2-

200 micras posee una

vacuola central

redondeada y ncleos

en la periferia

Casi similar a la

vacuolar, sin embargo

se observan diversos

grnulos de diferentes

formas en la vacuola

central y citoplasma

Presenta gruesa pared

de varias capas y,

ms pequeas que las

otras formas, carece

de vacuola central,

pero se observan

ncleos y mltiples

vacuolas

Es inmvil y

fuertemente

adhesiva.

Relacionada a

procesos

patolgicos

e) Iodamoeba butschlii

Trofozoto Quiste


Ncleo: Cariosoma central rodeado de

grnulos y con fibrillas hacia la membrana

Forma: irregular.

Pseudpodos: romos o formas de dedo y

aparecen lentamente

Citoplasma: endoplasma con vacuolas y

bacterias, gran vacuola de glucgeno

Movimiento: muy lento

Tamao: 5-14 micras

Ncleo: 1, con cariosoma excntrico y

grnulos forma de media luna

Forma: irregular


Vacuola iodfila: Presente en el interior se

tie con Iodo y facilita su identificacin

Movimiento: Inmvil

17

f) Balantidum coli

Trofozoto Quiste

Tamao: 50-200 um de longitud, 40-50 um

ancho

Ncleo: Macroncleo (arrionado) Microncleo

(redondeado)

Forma: Ovalada y rodeada de cilios; se

observan dos orificio Citostoma (superior)

Citopigio (posterior)

Vacuolas: dos vacuolas contrctiles

Movimiento: Rpido debido a los cilios

Tamao: 40-60 micras

Ncleo: Resalta el macroncleo

Forma: Redondeado con doble

membraba

Cilios: No presenta

Movimiento: Inmvil

9) Diagnstico de Helmintos Intestinales

El trmino helminto (gusano), se usa sobre todo en parasitologa, para referirse a especies

animales de cuerpo largo o blando que infestan el organismo de otras especies. Los

helmintos son unos organismos pluricelulares complejos (no necesariamente

microscpicos, como la Taenia) que tienen forma alargada y simetra bilateral. Su tamao

es mucho mayor que el de los parsitos protozoarios y habitualmente son macroscpicos,

con un tamao que oscila de menos de 1 mm a l m o ms. La superficie externa de algunos

helmintos se recubre de una cutcula protectora acelular y que puede ser lisa o bien

presentar crestas, espinas o tubrculos. Los helmintos poseen con frecuencia unas

elaboradas estructuras de fijacin (p. ej., ganchos, ventosas, dientes o placas). Por regla

general, estas estructuras se localizan en la regin anterior y pueden resultar de utilidad

para clasificar e identificar a los distintos organismos. Los helmintos poseen unos sistemas

excretor y nervioso primitivos. Asimismo, algunos helmintos poseen un tubo digestivo,

aunque ninguno de ellos presenta un sistema circulatorio. Los helmintos se dividen en dos

tipos: Nematoda y Platyhelminthes.

18

Clasificacin de los Helmintos

a) Enterobius vermicularis

Es un pequeo parsito del hombre conocido

popularmente como oxiuros. Causa la enfermedad

intestinal conocida como oxiuriasis o enterobiasis.

El ciclo vital de Enterobius vermicularis est

restringido casi exclusivamente al humano. Este

parsito vive en promedio un par de das. El macho

mide 2-3 mm, la hembra es ms grande, llegando a

alcanzar los 15 mm

El diagnstico en el laboratorio de la presencia de oxiuros se efecta por la recuperacin de

los huevecillos (no embrionados, embrionados o larvados) de la piel anal y perianal

mediante el uso de la tcnica de la cinta adhesiva (Tcnica de Graham) a travs de la cual

se pueden observar al microscopio, los huevecillos que miden 50 um de longitud y 25 de

ancho, se observan con su forma caractersticas de D, blancos y transparentes, poseen

doble membrana, se puede observar la larva en su interior.

Al contrario de otros nemtodos intestinales, los huevecillos de los oxiuros no se

encuentran en las heces. En ocasiones sobre todo en mujeres pueden aparecer en los

sedimentos urinarios destacndose como un acierto casual.

Helmintos (gusanos)

Nemtodos (cilndricos)

E. vermiculares A. lumbricoides

T. trichuria Uncinarias

S. stercoralis

Platelmitos (aplanados)

Cstodos (Segmentados)

Taenia solium Taenia saginata

H. diminuta H. nana

Tremtodos (no segmentados)

Fasciola hepatica Schistosoma spp

P. westermani

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b) Ascaris lumbricoides

Es un parsito largo, cilndrico y de cutcula rosada. La boca posee 3 labios, uno dorsal y

dos latero-ventrales. El macho mide 15-30 cm de largo por 2-4 mm de dimetro y la

hembra mide 20-40 cm de largo y 3-6 mm de ancho. El extremo posterior de la hembra es

recto y el del macho es curvo.

El huevo frtil (Figura 1, 2 y 3) es redondo u ovalado y mide entre 45-75 um de longitud

por 35-50 de dimetro. Tiene tres membranas: una proteica gruesa mamelonada, una

membrana hialina intermedia y una membrana lipoproteica interna que envuelve la clula

germinativa. El huevo infrtil (figura 4 y 5) tiene formas atpicas, mide 90 um de longitud y

50 de dimetro y a menudo la capa mamelonada es escasa o no existe decorticado (figura

6).

c) Trichuris trichuria

Son gusanos de color blanco con una parte anterior delgada que ocupa dos tercio de

longitud corporal (Figura 7). Su forma es semejante a un ltigo. Miden entre 2-5 cm de

largo. El extremo posterior de la hembra es recto mientras el del macho es curvo.

Los huevos tienen forma de barril (figura 8), miden ms o menos 25 um de ancho y 50 um

de largo; presentan membrana doble y tapones albuminoides en los extremos por donde

sale el embrin.

Figura 8. Huevo de T. trichuria Figura 7. Morfologa de T. trichuria

Figura 3 Figura 2 Figura 1


20

d) Uncinarias

Pertenecen a la familia Ancylostomatidae que se caracteriza por la presencia de rganos

cortantes. Las dos especies que parasitan el intestino delgado del hombre son: Ancylostoma

duodenale y Necator americanus, cuyos huevos excretados en la materia fecal son

morfolgicamente indistinguibles. Estos parsitos son bastante similares difiriendo

nicamente las estructuras de la boca y el tamao.

Necator americanus (figura 12) es un parsito nemtodo. Vive en el intestino delgado de

huspedes, como los humanos, cerdos, perros y gatos, produciendo la enfermedad llamada

necatoriasis. Este parsito posee dos placas cortantes dorsales y dos ventrales alrededor del

margen anterior de la cpsula bucal. Los machos tienen usualmente 7 a 9 mm de longitud.

La vida media promedio de estos parsitos oscila entre 3 y 5 aos. Pueden producir entre

5.000 a 10.000 huevos por da

Ancylostoma duodenale (Figura 13) al igual que el Necator americanus es un nematodo

causante de una de las parasitosis ms prevalentes en el mundo, en particular en pases en

desarrollo. Es un gusano redondo, no mayor a 2 cm de largo. Como el resto de los

nemtodos son organismos con sexos separados. La boca est provista de una cpsula con

cuatro ganchos o dientes cortantes con las que se adhiere a las vellosidades de la mucosa

del intestino

Los huevos (figura 9, 10 y 11) son de forma ovalada y levemente redondeados de los

extremos, miden 60-75 um por 36-40 um y tiene una cscara lisa y delgada, es incoloro.

Cuando los huevos son excretados generalmente se encuentran en las primeras fases de

divisin, por lo que se observa en estado de 4 a 8 clulas.


Figura 13 Figura 12

21

e) Taenia solium

Es un platelminto de la clase Cestoda, que vive en el intestino delgado de los seres

humanos, donde mide normalmente de 3 a 4 m. Es, junto con T. saginata, una de las

especies conocidas como lombriz solitaria

El adulto de la Taenia humana es un gusano plano en forma

de cinta dividido en segmentos o progltidos (Figura 14), de

color amarillo blanquecino; habita en el intestino delgado,

donde vive anclado a la pared mediante un esclex (cabeza)

piriforme con cuatro ventosas y un rstelo con una doble

corona de ganchos. Al rgano de fijacin le contina el

cuello, porcin germinal que da origen a un conjunto de

segmentos o progltides que forman el estrbilo o cadena estrobilar.

Cada progltide es una unidad de reproduccin auto-

fecundante e independiente, que produce huevos que

contienen embriones infectantes (figura 15); Los Huevos son

redondos u ovalados, miden entre 31-43 um de dimetro. En

su interior contiene el embrin hexacanto u oncosfera y con

una envoltura externa gruesa de aspecto radiado llamada

embrifero.

f) Hyminolepis nana

Es un cestodo que mide de 2-4 cm de largo y 1 cm de ancho; el estrbilo est compuesto

por aproximadamente 200 anillos; los poros genitales se localizan en el mismo lado del

estrbilo. El esclex tiene cuatro ventosas, rostelo retrctil con una corona de 30 ganchos

aproximadamente. En las progltides maduras se observan tres testculos dispuestos

transversalmente en lnea, entre ellos se localizan los ovarios y la glndula vitelina; en las

progltides maduras slo se visualiza el tero lleno de huevos.

Los huevos son redondos u ovalados miden 40-50 um de dimetro (figura 16). Posee una

membrana transparente externa y una interna que rodea un embrin hexacanto. La

membrana interna tiene a cada lado dos mamelones polares de donde salen unos filamentos

que se cruzan.

Figura 14. Progltide de T. solium

Figura 15. Huevo de Taenia spp

Figura 16. Huevo de Hyminolepis nana

22

g) Hyminolepis diminuta

Es un cestodo que mide de 10-60 cm de longitud, posee esclex pequeo de 0.25 mm, de

forma redondeada con cuatro ventosas y una invaginacin apical en la cual se encuentra el

rostelo sin gancho y rudimentario. Las progltides grvidas miden de 2-4 mm de largo y

0.75 mm de ancho. El tero es irregular, en forma de arco; gonoporo simple y lateral.

Los huevos son grandes, esfricos, de cscara gruesa, mide 70 um de longitud y 85 um de

dimetro (figura 17). La oncosfera est rodeada por una membrana que est

consideradamente separada de la membrana externa. No presenta filamentos polares.

Figura 17. Huevo de Hyminolepis nana

Documents

Manual de Parasitologia