Manual Tecnicas Cc

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Elaboró: Monserrat Campos

01/07/2011

Manual de técnicas de

Laboratorio de Control de

Calidad



GRUPO BIOTERRA S.A.P.I DE C.V.

MANUAL DE TECNICAS DELABORATORIO JULIO 2011

2

INDICE

Páginas

1. Objetivo 3

2. ANALISIS FISICOQUÍMICOS

2.1. Determinación de acidez titulable 5

2.2. Determinación de pH 7

2.3. Calibración a un punto 11

2.4. Calibración a dos puntos 12

2.5. Determinación de sólidos solubles totales 13

2.6. Calibración del refractómetro 15

2.7. Determinación de Dureza del agua 16

2.8. Determinación de cloro en agua 18

2.9. Determinación de total de sólidos disueltos (TSD) 20

2.10. Determinación de volumen 22

2.11. Determinación de sanitizante Peroxen 23

3. ANALISIS MICROBIOLOGICOS

3.1. Preparación de muestras y material 263.2. Determinación de microorganismos mesofílicos 30

3.3. Determinación de microorganismo coliformes 31

3.4. Determinación de microorganismos hongos y levaduras 32

3.5. Determinación de microorganismos en agua 33

3.6. Determinación microorganismos en ambiente 35





3

OBJETIVO

Ser un recopilado de técnicas básicas que se necesitan realizar en losproductos que se elaboran en GRUPO BIOTERRA S.A.P.I de C.V. paragarantizar la seguridad e inocuidad, así como de los posibles riesgos que sepueden o no generar.

Además de tener como finalidad facilitar el trabajo de las personas quelaboren en el laboratorio





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FISICOQUÍMICOS





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TECNICA ACIDEZ TITULABLE

Ligeramente modificada y basada en la NORMA MEXICANA NMX-F-102-S-

1978. DETERMINACION DE LA ACIDEZ TITULABLE EN PRODUCTOS

ELABORADOS A PARTIR DE FRUTAS Y HORTALIZAS.

FUNDAMENTO

El método de consiste en determinar el volumen de Hidróxido de Sodio

(NaOH) necesario para neutralizar el ácido contenido en una alícuota de

muestra problema que se titula, determinando el punto final por medio del

cambio de color que se produce por la presencia del indicador ácido-baseempleado.

REACTIVOS

Hidróxido de Sodio (NaOH) 0.1 N Fenolftaleína al 1% (solución de etanol al 95%)

PROCEDIMIENTO

1. Pipetear 10 ml de jugo de fruta (5 ml en caso de jugo de limón) y

colocarlos en un matraz Erlenmeyer limpio y seco.





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2. Agregar 90 ml de agua destilada en caso de que hayan sido 10 ml de

muestra, o bien, en el caso del jugo de limón son 5 ml de alícuota y por

consecuente 50 ml de agua destilada.

3. Agregar 3 -5 gotas de la solución de fenolftaleína y homogenizar la

mezcla.

4. Titular con NaOH 0.1 N hasta que el vire a color rosa permanezca

durante 20 segundos.

5. Calcular la acidez como ácido cítrico. Con la siguiente formula:

% ácido cítrico = (ml NaOH gastados) (N del NaOH) (Factor) X100

Volumen de la muestra

Factor = 0.064

Antes Después





7

TECNICA DETERMINACION DE pH

Basada en la Norma mexicana NMX-F-317-1978.DETERMINACION DE pH

EN ALIMENTOS.

FUNDAMENTO

Los ácidos tienen hidrógenos ionizables, los cuales forman el ión hidronio

(H3O+) o hidrógeno (H+), del mismo modo, las bases tienen oxhidrilos

ionizables, lo que forma el ion oxhidrilo (OH-). El total de hidrógenos

ionizables, en un ácido es la acidez total, y al total de oxhidrilos ionizables en

una base se llama alcalinidad total. Pero como no todos los ácidos y bases

se ionizan con la misma cantidad de energía, debido a que unos son más

fuertes que otros, es por eso que unos ácidos y unas bases se ionizan con

más facilidad que otros. La cantidad de iones reales de hidrógeno en un ácido

o de oxhidrilo en una base, se llama acidez actual. La diferencia entre la

acidez total y la acidez actual forma la acidez potencial, ésta representa al

hidrógeno que no fue ionizado. El símbolo pH significa potencial de hidrógenoy expresa la acidez actual. Para explicar mejor este concepto se usa el

ejemplo del agua destilada.





8

El agua destilada casi no se ioniza, pero a 25°C por cada 10 millones

de litros se puede formar un ion H+ y un ion OH-. Es decir, la concentración de

iones en el agua es de 1/10 000 000 que es igual a 10 -7; esta concentración

de iones H+ es igual a la concentración de iones OH-. El valor del exponente

de la base diez es el valor del pH, por lo tanto, como el valor del exponente es

7, el pH del agua destilada es 7 o sea neutro. De ahí que, el máximo grado de

concentración de los iones H+ en una solución normal, es de un gramo por

litro, o sea pH de 0, en donde la solución es ácida. Por el contrario, el grado

mayor de alcalinidad posible en una solución normal de un álcali fuerte es de

1/100 billones de iones H+ o sea 1/1014 ó 10 -14; aquí el valor de pH es de 14,

que es el grado de mayor alcalinidad en una solución.

REACTIVOS

Solución reguladora de pH 4

Solución reguladora de pH 7

MATERIAL

Vaso de precipitados

Potenciómetro

Piseta con agua destilada





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PROCEDIMIENTO

1. Calibrar el instrumento (potenciómetro) de acuerdo a las necesidades,puede ser a uno o dos puntos con la ayuda de las soluciones buffer.Este procedimiento se describe en el anexo.

2. Colocar en un vaso de precipitados limpio y seco una cantidadsuficiente de muestra a valorar

3. Sumergir el electrodo en la muestra hasta que ésta cubra el bulbo,teniendo cuidado en que el electrodo quede en el centro del líquido, esdecir, evitar que se toquen las paredes del recipiente contenedor paraevitar daños en el electrodo o bien errores en la medición.

4. Espere a que la medición se estabilice en la pantalla del potenciómetro,registrar el valor de pH.

5. Sacar cuidadosamente el electrodo de la muestra y enjuagarlo con

agua destilada hasta quitarle cualquier residuo extraño.6. Secarlo ligeramente y con sutileza con material absorbente.

7. Colocar el electrodo en su solución de almacenamiento.

8. Apagar el instrumento.

NOTAS

El electrodo, las soluciones patrón y las muestras deben mantenerse auna misma y constante temperatura. Cambios bruscos de temperaturapueden dificultar la lectura de pequeñas variaciones de pH de lasmuestras.

Los electrodos deben ser humectados con una solución de cloruro depotasio, para evitar que se seque el diafragma. La membrana y eldiafragma de los electrones de pH pueden contaminarse, produciendoasí errores en la medición.





10

La membrana de vidrio en el electrodo, puede limpiarse con un papelhúmedo, en caso de contaminación con productos orgánicos, puedeutilizar el disolvente adecuado para limpiar la membrana por ejemplo,acetona; cuando se mide el pH en muestras con grasas o aceites, sepueden quitar lavando el electrodo con detergente y agua abundante.





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ANEXO

CALIBRACIÓN A UN PUNTO

1. Conecte el electrodo al instrumento y encienda éste con la tecla ON.

2. Introduzca el electrodo en la solución patrón de pH 7.00 y permita que

la lectura se estabilice (aproximadamente 30 segundos)

3. Ajuste la perilla de compensación de temperatura temp°C a la

temperatura de la solución patrón.

4. Ajuste la perilla de calibración calibrate hasta que el medidor indique

el valor pH 7.00 de la solución patrón.

5. Retire el electrodo de la solución patrón y enjuáguelo con agua

destilada, SIN secar el electrodo.


temperatura de la solución a medir.

7. Introduzca el electrodo en la solución a medir y lea el valor de pH del

medidor. Si el valor de la solución no está entre + 3 unidades pH de la

solución patrón (7.00 pH), se necesita hacer una calibración a dos

puntos.8. Después de cada medición, retire el electrodo y enjuáguelo con agua

destilada.





12

CALIBRACION A DOS PUNTOS

1. Conecte el electrodo al instrumento y encienda éste con la tecla ON.

2. Introduzca el electrodo en la solución patrón de pH 7.00 y permita que

la lectura se estabilice (aproximadamente 30 segundos)


temperatura de la solución patrón.

4. Ajuste la perilla de calibración calibrate hasta que el medidor indique

el valor pH 7.00 de la solución patrón.

5. Retire el electrodo de la solución patrón y enjuáguelo con agua

destilada, SIN secar el electrodo.

6. Sumerja el electrodo en la segunda solución patrón de pH 4.0 o pH

10.00. La temperatura de esta solución patrón debe ser idéntica a la de

la primera.

7. Ajuste el control de pendiente slope hasta el medidor indique el valor

de pH de la segunda solución patrón.

8. Retire el electrodo, enjuáguelo con agua destilada y proceda a efectuar

las mediciones. No olvide enjuagar el electrodo con agua destilada

después de cada medición.





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TECNICA DETERMIACIÓN DE GRADOS BRIX (° Bx)

Basada en la Norma mexicana NMX-F-103-1982. DETERMINACION DE

GRADOS BRIX.

FUNDAMENTO

Los grados Brix miden la cantidad de sólidos solubles presentes en un jugo

o pulpa expresados en porcentaje de sacarosa. Los sólidos solubles están

compuestos por los azúcares, ácidos, sales y demás compuestos solubles en

agua presentes en los jugos de las células de una fruta.

REACTIVOS

Agua destilada

PROCEDIMIENTO

1. Limpiar y secar cuidadosamente la tapa y el prisma antes de comenzar

la medición.

2. Poner de 2 a 3 gotas del jugo de fruta en el prisma. Para uso en

laboratorio, se recomienda utilizar una pipeta proporcionada con el

instrumento, con la cual se puede poner la muestra sobre el prisma.





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3. Una vez ubicada la muestra, ésta debe ser cubierta con la tapa de

acrílico, que además debe ser movida ligeramente para conseguir

repartir más homogéneamente el jugo de la fruta analizada. Se debe

evitar la formación de burbujas de aire, ya que estas podrían tener un

efecto negativo en el resultado de la medición.

4. Luego se debe sostener el refractómetro bajo la luz, con la que podráver la escala a través del ocular. El valor de la muestra se podrá leer

entre el límite claro/oscuro. Con el giro del ocular se podrá ajustar y

precisar la escala.

5. Una vez obtenido el resultado de º Brix, se debe limpiar y secar

cuidadosamente el prisma y la tapa, para evitar que queden restos que

pudieran afectar futuras mediciones. En el proceso de limpieza es

recomendable evitar utilizar elementos abrasivos, para aumentar lavida útil del prisma.

RECOMENDACIONES IMPORTANTES

Mantener limpios la tapa y el prisma, ya que la suciedad puede

afectar negativamente sobre la precisión del refractómetro.

Limpiar el instrumento solo con un paño húmedo y nunca bajo el

chorro del agua, ya que esta podría entrar al equipo.

E vitar golpes y caídas que puedan dañar el sistema óptico.

Guardar el instrumento en un lugar seco.





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CALIBRACION DE REFRACTOMETRO

1. Limpiar y secar con cuidado el prisma y la tapa antes de la calibración.

2. Poner 2 a 3 gotas de agua destilada en el prisma.

3. Si el límite claro/oscuro no se encuentra en 0º, se debe ajustar con

ayuda del tornillo de calibración bajo la cobertura de goma, para esto, junto al instrumento se proporciona un destornillador.

4. Todos los refractómetros Hanna Instruments vienen calibrados desdefábrica.





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TECNICA DETERMINACIÓN DE DUREZA DE AGUA

Basado en las normas:

NMX-AA-072-SCFI-2001. ANALISIS DE AGUA-DETERMINACION DEDUREZA TOTAL EN AGUAS NATURALES Y RESIDUALES YRESIDUALES TRATADAS- METODO DE PRUEBA. CANCELA A LA

NMX-AA-074-1981.NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, “SALUDAMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO- LIMITESPERMISISBLE DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBESOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACION.

FUNDAMENTO

El ácido dietilenamino tetraacético y su sal disódica forman un complejoquelado soluble cuando se adicionan a una solución de ciertos cationesmetálicos. Si se adiciona una pequeña cantidad del indicador negro deeriocromo T a una solución que contiene los iones calcio y magnesio en unpH de 10, la solución toma un color similar al del vino rojo. Si se adicionaEDTA como titulante los iones calcio y magnesio serán complejadospaulatinamente hasta que la solución adquiere un color azul, lo que indica elfinal de la titulación.

Para llevar a cabo esta determinación se utiliza un kit de dureza (Hach, 5BHardness Test Kit) siguiendo la metodología del fabricante.

REACTIVOS

Reactivo para dureza uniVer 3 (Cloruro de Amonio, AcidoEtilendiamino tetraacético, Carbonato de sodio, sulfito de sodio).

Solución tituladora Hardness 3.





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PROCEDIMIENTO

1. Llenar el tubo de ensayo hasta el borde con muestra.

2. Verter la muestra en la botella de mezclar.

3. Agregar una cucharada rasa (contenida en el kit) de reactivo paraDureza uniVer 3 (mezcla de cloruro de amonio, ácido etilendiaminotetraacético, carbonato de sodio, sulfito de sodio).

4. Agregar la solución tituladora Hardness 3 a la botella de mezclar, gotaa gota, a tiempo que revuelve circularmente.

5. Cuando el color de la muestra cambia de rosado a azul, anote elnúmero de gotas que se han agregado.

6. El número de gotas = Dureza Total de la Muestra en granos por galóncomo CaCO3. El cálculo para dureza total expresada como ppm deCaCO3.

Tomar en cuenta la siguiente relación para expresar los resultados enppm.

1 gpg corresponde a 17.1 mg/Ldonde gpg= grano por galón.

NOTASi aparece el color azul con una sola gota de titulador, entoncesla dureza total es <1grano por galón.





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TECNICA DETERMINACIÓN DE CLORO EN AGUA


ANALISIS DE AGUA- DETERMINACION DE CLORUROS TOTALESEN AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS-METODO DE PROEBA (CANCELA A LA NMX-AA-073-1981).

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, “SALUDAMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO- LIMITESPERMISISBLE DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBESOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACION.

FUNDAMENTO

Los análisis de cloro en agua son muy comunes ya que el agua de consumohumano se trata con productos clorados para destruir microorganismos.Además la calidad del agua mejora con el cloro debido a que éste reaccionacon NH3, FE, MN, S2- Y CN- y algunas sustancias orgánicas. Sin embargotambién puede tener efectos perjudiciales al formar compuestosorganoclorados cancerígenos.

El cloro se añade al agua, generalmente como hipoclorito, se hidroliza a cloromolecular, ácido hipocloroso o ión hipoclorito, dependiendo de lasproporciones de éstos de la temperatura y del pH.

El cloro puede determinarse mediante colorimetría utilizando una solución deo-toluidina al 0.1%, que forma un cloruro de color amarillo.





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REACTIVOS

Solución de o-toluidina al 0.1%

PROCEDIMIENTO

1. Se llena el tubo medidor con la muestra de agua,

2. Agregar 5 gotas de O-toluidina al 0.1%

3. Comparar con el patrón amarillo lateral del tubo medidor paradeterminar la cantidad de cloro presente.





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DETERMINACION DE SOLIDOS TOTALES DISUELTOS (TDS)

Basado en la norma

NMX-F- 527-1992. ALIMENTOS. DETERMINACION DE SOLIDOSTOTALES, SOLIDOS DISUELTOS Y SOLIDOS EN SUSPENSION ENAGUA.

FUNDAMENTO

El término sólidos hace alusión a la materia suspendida o disuelta en un

medio acuoso. La determinación de sólidos disueltos totales mideespecíficamente el total de residuos sólidos filtrables (sales y residuosorgánicos. Los sólidos disueltos pueden afectar de manera negativa al agua,produciendo desde un sabor desagradable hasta una reacción fisiológicaadversa en el consumidor. Este análisis también es importante comoindicador de la efectividad de procesos de tratamiento biológico y físico deagua.

Se ha encontrado que la conductividad es directamente proporcional a laconcentración de sólidos disueltos totales por lo tanto cuanto mayor sea dicha

concentración, mayor será la conductividad; siendo “ppm” la unidad demedición para los Sólidos Totales Disueltos.

REACTIVOS

Agua destilada





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PROCEDIMIENTO

Un método sencillo consiste en estimar los sólidos disueltos totales con unTDS metro portátil.

1. Retire la funda protectora del medidor portátil.

2. Encienda el medido portátil presionando la tecla ON.

3. Sumerja el medidor portátil en el agua a analizar hasta un nivel máximode inmersión de 2 pulgadas.

4. Espere que la lectura se estabilice (entre unos 10-30 segundos).

5. Saque de la muestra el medidor portátil.

6. Apague el medidor presionando la tecla OFF.

7. Enjuáguelo con agua y séquelo cuidadosamente con material

absorbente.8. Coloque su tapa protectora y guarde en su estuche.





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TECNICA DETERMINACION DE VOLUMEN

Basado en la norma oficial mexicana NOM-002-SCFI-1993. Productospreenvasados- contenido neto tolerancias y métodos de verificación (estanorma cancela la NOM-Z-96-1989)

PROCEDIMIENTO

Para determinar el volumen neto, se puede vaciar el contenido del envase:

1. Un recipiente de precisión y con divisiones mínimas de 1.0 ml paraproductos de hasta 1.0 litro.

2. Con divisiones mínimas de 5.0 ml para el resto de presentaciones.

3. Tomar la lectura del recipiente.





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TECNICA DE DETERMINACION DE PEROXEN

DEFINICION

Peroxen

Desinfectante de amplio espectro para control microbiológico en frutas yverduras, y superficies que entren en contacto con alimentos.

REACTIVOS

Matraz Erlen Meyer de 125 ml.Probeta graduada de 25 ml.Solución de Ácido Sulfúrico al 50%.Solución de Permanganato de Potasio 0.2N.

Solución Indicador de almidón.Solución de Tiosulfato de Sodio 0.1N.

PROCEDIMIENTO

1. Transferir una muestra de 20 ml de solución problema al Matraz ErlenMeyer.

2. Adicionar 20 gotas de solución de Ácido Sulfúrico al 50%.

3. Titular con solución de Permanganato de Potasio hasta coloración derosa ligero.

4. Adicionar 10 gotas de indicador de Almidón.

5. Titular con solución de Tiosulfato de Sodio 0.1N hasta el vire deamarillo a incoloro.

6. Anotar el número de gotas gastadas.

Nº de gotas = Número de gotas de solución de Tiosulfato de Sodio gastado enla titulación.





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NOTAS

Para la determinación del sanitizante, se emplea la técnica y losreactivos proporcionados por el proveedor.

Una vez analizadas las muestras se desechan a la tarja conabundante agua y se deja drenar por un minuto

% Peroxen = Nº Gotas x 0.032





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MICROBIOLOGÍA





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PREPARACION DE MUESTRAS Y MATERIAL

Basada en la norma:

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-110-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS.PREPARACIÓN Y DILUCIÓN DE MUESTRAS DE ALIMENTOS PARA SU ANÁLISIS

MICROBIOLÓGICO.

MATERIAL Y EQUIPO

Autoclave con manómetro.

Frascos de vidrio para dilución con tapa de rosca.

Tubos de cultivo de 18 X150 mm.

Matraces Erlenmeyer.

Espátula

Cucharas y cuchillos estériles

Medios de cultivo

Agar para métodos estándar para cuenta total Agar de bilis y rojo violeta para coliformes

Agar de dextrosa y papa para hongos y levaduras

Caldo Lactosado como medio de enriquecimiento.





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PREPARACION DE MATERIAL

1. Todo el material que entre en contacto con la muestra debe de estaresterilizado.

2. Las pipetas se protegen con un tapón de algodón, se envuelvenindividualmente.

3. Las puntas que se utilizan para la micropipeta se colocan en el rack yse envuelven para esterilizar.

4. Los cuchillos y cucharas se envuelven individualmente.

5. Los medios de cultivo se preparan de acuerdo con las instruccionesdel fabricante, utilizando agua destilada.

6. Los matraces que contienen el medio de cultivo se tapan con un tapón

de algodón forrado con una gasa y papel aluminio. Se les pone unacorona de papel para evitar que se contaminen al tocarlos.

7. Los medios deben de preparase el mismo día que se van a utilizar.

8. Las cajas petri se marcan con los siguientes datos

Nombre de la muestra.Dilución.Fecha de siembra.Tipo de medio.





28

PROCEDIMIENTO PARA UTILIZAR EL AUTOCLAVE

1. Colocar agua en la autoclave para que recubra la resistencia.

2. Conectar a la fuente de energía.

3. Encender girando el interruptor hacia la leyenda ON esto se verificaviendo que se encienda la luz que se encuentra a lado de la perilla.

4. Girar la perilla para hacia el número 5 o 6 dependiendo.

5. Colocar el tripie de acero para que sostenga el contenedor.

6. Colocar el material a esterilizar dentro del contenedor que va dentro dela autoclave.

7. Tapar el autoclave

8. Ajustar las perillas de cerrado de dos en dos de manera contraria para

sellar bien la tapa.9. Esperar a que suba la temperatura y la presión.

10. Vigilar que llegue a mínimo 121ºC o bien visualizar en el manómetroque la presión se encuentre a 15 psi, es decir, que se encuentre en elárea de color verde que significa que se encuentra en el área deesterilización.

11. Contar mínimo 15 minutos manteniendo esa temperatura y presión.

12. Visualizar que no pase de la zona verde para evitar riesgos depresiones altas.

13. Después de los 15 minutos, apagar el autoclave girando la perilla haciala leyenda OFF y verificando que la luz a lado e la perilla este apagada.

14. Despresurizar la autoclave abriendo la válvula reguladora de presión.

15. Abrir y sacar el material esterilizado con guantes de asbesto.





29

PROCEDIMIENTO

PREPARACIÓN DEL ÁREA DE TRABAJO

Las puertas y ventanas deben mantenerse cerradas para evitarcorrientes de aire que puedan contaminar el ambiente.

Previamente se prende la luz ultravioleta de la campana de flujolaminar por un periodo mínimo de 30 minutos antes de empezar aprepara las muestras. Así como el filtro de aire de la misma campana.

Se limpia la superficie de la campana con una solución de dióxido decloro al 10% o bien etanol.

Después de transcurrido el tiempo se puede comenzar a preparar lasmuestras así como las diluciones de las mismas.

PREPARACIÓN DE DILUCIONES

DILUCIONES

Transferir 10 g o ml de la muestra a un frasco de dilución que contiene90 ml de caldo lactosado estéril, se agita para homogeneizar. Estaconstituye la primera dilución, la cual es 1:10 o bien 10-1.

Para preparar la segunda dilución 1:100 o 10-2, con una micropipeta

con punta estéril se toma 1 ml de la dilución 1:10 y se transfiere a untubo de 18X150 mm que contiene 9 ml de caldo lactosado estéril.Agitar para homogeneizar.

En el caso de la muestra de superficies, el caldo lactosado utilizadopara tomar la muestra, se utiliza como la dilución 10-1.





30

TECNICA DE DETERMINACION DE CUENTA DE MICROORGANISMOSMESOFILICOS AEROBIOS

Basada en las normas:

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994, Bienes y servicios. Método para lacuenta de bacterias aerobias en placa.

NMX-F-253. ALIMENTO PARA HUMANO. MICROBIOLOGICOS. CUENTA DE BACTERIASMESOFILICAS AEROBIAS.

PROCEDIMIENTO

1. En la campana de flujo laminar previamente preparada se procede arealizar la inoculación de las diluciones, transfiriendo 1 ml de cadadilución a cajas petri, previamente identificadas.

2. Agregar de 15 a 20 ml de agar para métodos estándar a 40-45ºC3. Mezclar con movimientos de vaivén y rotatorios, cuidando que el medio

no moje la tapa de la caja.4. Dejar solidificar en una superficie horizontal. El tiempo que transcurra

entre la preparación de las diluciones y la adición del medio no debe deexceder de 20 min.

5. Incubar las cajas en posición invertida durante 48 horas a 35ºC.6. Contar todas las colonias desarrolladas en las placas (excepto mohos),

incluyendo las colonias puntiformes.7. Contar las colonias extendidas como una colonia individual.8. Cuando las placas no muestren crecimiento de colonias, se reporta la

cuenta como menor que el valor de la dilución más baja usada (<10para la dilución 10-1).9. Después de contar el número de colonias, multiplicar éste por el

inverso de la dilución y reportarlo como UFC/gr ó UFC/ml (Unidadesformadoras de colonias por gramo ó por mililitro de producto).





31

TECNICA DE DETERMINACION DE CUENTA DE MICROORGANISMOSCOLIFORMES


NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-113-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODOPARA LA CUENTA DE MICROORGANISMOS COLIFORMES TOTALES EN PLACA

NMX-F-254. ALIMENTO PARA HUMANOS. MICROBIOLOGICOS. CUENTA DEORGANISMOS COLIFORMES

PROCEDIMIENTO

1. Pasar 1 ml de cada dilución decimal a una caja de petri, utilizandopipetas diferentes; esta operación se puede realizar al mismo tiempo

que la cuenta de bacterias mesofílicas aerobias y la cuenta de hongosy levaduras.

2. Agregar de 15 a 20 ml de agar de bilis y rojo violeta y homogeneizarcon movimientos de vaivén y rotatorios, cuidando que el medio no mojela tapa de la caja.

3. Dejar solidificar en una superficie horizontal. El tiempo que transcurraentre la preparación de las diluciones y la adición del medio no debeexceder de 20 min.

4. Incubar las cajas en posición invertida a 35ºC durante 48 horas (lasbacterias coliformes pueden contarse a las 24 hr de la incubación).

5. Contar como coliformes las colonias de 0.5 a 2 mm de diámetro decolor rojo obscuro, que exhiban un halo de precipitación típico de colorrojo claro o rosa.

6. Calcular el número de coliformes por ml o por gr de producto,multiplicando el número de colonias por el inverso de la dilucióncorrespondiente.





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TECNICA DE DETERMINACION DE CUENTA DE MICROORGANISMOSHONGOS Y LEVADURAS

Basada en las normas:

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-111-SSA1-1994, BIENES Y SERVICIOS. MÉTODOPARA LA CUENTA DE MOHOS Y LEVADURAS EN ALIMENTOS.

NMX-F-255. METODO DE CONTEO DE HONGOS Y LEVADURAS EN ALIMENTOS.

PROCEDIMIENTO

1. Inocular 1 ml de cada dilución a cajas de petri; se puede efectuar almismo tiempo que se inoculan las cajas para cuenta de mesofilicosaerobios y coliformes.

2. Agregar de 15 a 20 ml de agar papa y dextrosa a 40ºC y,homogeneizar con movimientos de vaivén y rotatorios, cuidando que elmedio no moje la tapa de la caja.

3. Dejar solidificar en una superficie horizontal. El tiempo que transcurraente la preparación de las diluciones y la adición del medio no debeexceder de 20 min.

4. Incubar las cajas en posición invertida a 28ºC durante 72 h y contar lascolonias que aparezcan, debido a que hay colonias de hongos que sedesarrollan profusamente y enmascaran el resultado, si no haycrecimiento incubar 2 días más.

5. Contar el número de colonias de hongos y levaduras y multiplicarlo porla inversa de la dilución. Informar número de colonias de hongos ylevaduras por gr o ml de producto.





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TECNICA DE DETERMINACION ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA


NOM-127-SSA1-1994. SALUD AMBIENTAL. AGUA PARA USO YCONSUMO HUMANO. LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD YTRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SUPOTABILIZACION

NOM-180-SSA1-1998, SALUD AMBIENTAL. AGUA PARA USO YCONSUMO HUMANO. EQUIPOS DE TRATAMIENTO DE TIPODOMÉSTICO. REQUISITOS SANITARIOS

PROCEDIMIENTO

TOMA DE LA MUESTRA

1. Se desinfecta la salida del agua con ayuda de una torunda empapadade alcohol. Se purga la línea dejando correr el agua durante 1 minuto.

2. La bolsa de muestreo es abierta después del drenado.

3. Se recolecta la muestra y se cierra.

4. Se lleva la muestra al laboratorio y ahí se coloca para su respectivoanálisis.

5. Si requiere de hacer otros muestreos, la muestra de agua se almacenaen refrigeración hasta su análisis, el cual debe realizarse antes de quetranscurran 5 horas después de la recolección de la muestra, paraevitar resultados falsos o dudosos.





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DETERMINACIÓN DE BACTERIAS MESOFÍLICAS AEROBIAS

1. Transferir 1 ml de muestra a una caja de petri, previamenteidentificada.

2. Agregar de 15 a 20 ml de agar para métodos estándar a 40-45ºC.

3. Mezclar con movimientos de vaivén y rotatorios, cuidando que el mediono moje la tapa de la caja. Dejar solidificar en una superficie horizontal.

4. Incubar las cajas en posición invertida durante 24 hrs a 35ºC.

5. Contar todas las colonias desarrolladas, incluyendo las coloniaspuntiformes.

6. Contar las colonias extendidas como una colonia individual.

7. Reportar el resultado como UFC/gr ó UFC/ml (Unidades formadoras decolonias por gramo o por mililitro de producto).





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TECNICA DE DETERMINACION DE ANÁLISIS MICROBIÓLOGICO DEAMBIENTE.

PROCEDIMIENTO

1. Para el muestreo de ambiente se requiere una caja de cada medioesterilizado y solidificado.

2. Cada una de las cajas se abre en el área a muestrear y se dejandurante 10 minutos

3. Después de este tiempo, las cajas se incuban como en losprocedimientos anteriores.

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Manual Tecnicas Cc