MÓDULO FORMATIVO 3...Las soluciones reguladoras ácidas se preparan a partir de mezclas de ácidos débiles, siendo un ácido que se disocia o ioniza en pequeño grado; es decir que

MÓDULO FORMATIVO 3

PROCESADO CITOLÓGICO

Y TISULAR

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UNIDAD FORMATIVA 1: OPERACIONES FÍSICO-QUÍMICAS

BÁSICAS EN CITOLOGÍA1.1. Disoluciones y tampones (o

amortiguadores o buffers)1.2. Estudio microscópico. Microscopía: microscopio óptico y electrónico. Bases,

funcionamiento, mantenimiento y artefactos técnicos

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1. OPERACIONES FÍSICO-QUÍMICAS BÁSICAS EN CITOLOGÍA

1.1. DISOLUCIONES Y TAMPONES (O AMORTIGUADORES O BUFFERS)

de precauciones: Respetar las condiciones que rigieron su calibración, tipo de aforo,

temperatura de referencia, etc. itar errores de parala e en la lectura. unca debe colocarse el material olum trico a temperaturas ma ores

de 50 ºC. as asi as deben estar perfectamente limpias. ntes de usar el material olum trico, el mismo debe calibrarse. itar el contacto del material olum trico con sustancias que lo

ataquen.

Dentro de los materiales volumétricos se encuentran:

Matraz aforado: También conocidos como frascos volumétricos, consisten en un recipiente de idrio con la parte inferior con forma esférica o de pera y con la base plana. Tiene una marca o aforo para indicar su capacidad. Cuando se enrasa asta la marca contiene un olumen exactamente conocido a una temperatura preestablecida. Se utiliza, para contener disoluciones de concentración conocida con los cuales se a a traba ar posteriormente. l cuello se ace relati amente estrec o

de modo que un peque o cambio en el olumen del l quido pro oque una considerable diferencia en la altura del menisco; de esta forma el

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Operaciones físico-químicas básicas en citología

error que se pueda cometer al lle ar el menisco asta el enrase sea el menor posible. os matraces aforados suelen lle ar tapones esmerilados pulimentados, con un m nimo de irregularidad en la super cie para

poder agitar las disoluciones sin peligro de que se derrame líquido, siendo la distancia desde el enrase asta el tapón relati amente grande para que aya su ciente espacio para agitar. Se emplea para preparar disoluciones

de concentración conocida con exactitud, es decir, cuando el soluto se ha pesado en una balanza analítica o de precisión. Probetas graduadas: Son recipientes cilíndricos, graduados, de idrio

grueso, de boca ancha, abierta y con pico, y las hay de distintos ol menes. Como la super cie libre del líquido es mucho mayor que la de los matraces aforados, de igual olumen la exactitud es mucho menor. or eso solo son tiles para medidas aproximadas. Pipetas aforadas: La parte superior de una pipeta tiene grabado un

anillo que a un olumen del líquido que debe descargarse. na pipeta que se usa de este modo para medir un olumen de nido de líquido, se conoce como pipeta para transferencia. Las más usadas son: 5, l0, 20, 50 y l00 ml. Cabe mencionar que existen también pipetas de doble aforo (uno superior y otro inferior), siendo éstas más exactas que las anteriores. Pipetas graduadas: Son tubos estrechos subdi ididos en graduaciones

que se emplean para medir cantidades ariables de líquido. l ori cio de una pipeta debe ser de un tama o que no pro oque una salida del líquido demasiado rápida, porque de otro modo llegarían a ser demasiados los errores debidos a pequeñas diferencias en el tiempo de escurrido. Se usan habitualmente pipetas de: 2, 5, l0, 25 ml y muchas otras. Cabe mencionar que de acuerdo al olumen que escurran y otras características (como por ejemplo la graduación al centésimo o al décimo) tendrán en la parte superior unas bandas de colores que las distinguen. Por ejemplo, las de 5 ml tienen una banda de color azul. Buretas: Son tubos largos, graduados, de calibre uniforme, pro istos

de un extremo inferior con un dispositi o que permite un control fácil del líquido obtenido. Se usan para descargar cantidades ariables de líquido y por esta razón se subdi iden en muchas di isiones pequeñas. Las buretas se usan frecuentemente en las titulaciones (a eriguación de concentración de un elemento o compuesto).

La bureta de 50 ml graduada en décimas de ml es la que se emplea más a menudo. Las buretas con robinete de idrio deben ser usadas preferentemente y son necesarias para algunos líquidos concretos (soluciones de yodo). El llenado de las buretas se debe realizar con un embudo especial para las mismas.

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UNIDAD FORMATIVA 1: Técnicas de apoyo psicológico y social en situaciones de crisisMÓDULO 3: PROCESADO CITOLÓGICO Y TISULAR

Los materiales no volumétricos se utilizan para mediciones que no requieren una alta precisión de medida. Entre ellos encontramos:

Vasos de precipitados: Este recipiente de idrio de laboratorio se utiliza para contener sustancias, disol erlas, atacarlas, calentarlas y en general cualquier acción que no necesite una medida de precisión del olumen. Suelen tener forma cilíndrica con base plana y una pequeña boca en la parte de arriba para poder transferir el líquido contenido con mayor facilidad. Existen arios tamaños de asos de precipitados, desde muy pequeños que suelen tener un olumen aproximado de mL hasta arios litros. Los más utilizados son los de 250 ml y 500 ml. Los materiales con etiquetación PYREX son aptos para el calentamiento y pueden ser utilizados con mecheros bünchen. Los que no tienen esa etiquetación no se pueden exponer a una fuente de calor continua ya que puede romperse. Erlen Meyer: Son recipientes cónicos de base ancha y cuello angosto.

Tienen muchas aplicaciones. Facilitan una mejor agitación del líquido e itando pérdidas por salpicaduras en la preparación de soluciones y dan la posibilidad de agitar la mezcla a n de acelerar el proceso de disolución, etc. Cristalizadores: Recipientes de forma cilíndrica con base plana, con

poca altura y un gran diámetro, por lo que su super cie abierta es grande. Se usan cuando se desea e aporar rápidamente el líquido de una solución facilitando la cristalización del soluto que se encontraba formando dicha solución. Tubos de ensayo: Son tubos de idrio de diferentes anchos y largos.

También se ha desarrollado toda una serie de tubos plásticos (desechables) de diferentes tamaños. Las gradillas son los elementos que se utilizan para colocar los tubos generalmente en posición ertical. Las hay de los más di ersos tamaños y materiales (madera, metal, etc.).

Material de medición en un laboratorio

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1.1.1. DisolucionesLa mayor parte de los procesos químicos que se realizan en un laboratorio,

no se hacen con sustancias puras, sino con disoluciones, generalmente acuosas. Además, es en la fase líquida y en la gaseosa, en las que las reacciones transcurren a más elocidad.

Las disoluciones se preparan en recipientes especí cos para ello citados anteriormente.

El método de disoluciones se describe continuación en dos casos distintos en función de la base de partida:

a) Preparación de una disolución a partir de un soluto sólido

El primer paso será pesar la cantidad necesaria de soluto, asegurándose de que el el de la balanza marque cero. En caso contrario, se ajustará. Las sustancias a pesar no se deben poner directamente sobre los platillos, sino sobre papel de

ltro o un idrio de reloj, que deben encontrarse escrupulosamente limpios y secos. Para sacar el sólido del recipiente que lo contiene utilizaremos una espátula perfectamente limpia y seca.

na ez pesado se pone en un aso de precipitados con la menor cantidad posible de agua destilada (enjuagar con agua destilada el idrio de reloj echando este agua en el aso). Se disuel e agitando con una arilla de idrio y se ierte en el matraz aforado. Enjuagamos con agua destilada el aso y echamos este agua al matraz aforado. Se añadirá agua con el frasco la ador hasta que el ni el haya subido casi hasta el cuello del matraz, pero no dentro del mismo. A continuación se agita de modo que el líquido se mezcle bien. Se sigue añadiendo agua hasta que falte como un centímetro, para la marca de enrase. Por ltimo, con un gotero y gota a gota, el matraz se llena de agua destilada hasta el enrase. El enrase se considera bien realizado cuando el menisco que forma el líquido queda tangente, por encima, a la marca de enrase.

Ejemplo de meniscos. A. Cóncavo. B. Convexo.

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b) Preparación de una disolución a partir de una disolución de ácido concentrado comercial

Con un frasco la ador llenamos de agua destilada la mitad del matraz aforado. tilizando una pipeta graduada con un émbolo o una bureta se toma la cantidad

necesaria del ácido concentrado comercial, que se ierte en el matraz aforado. Acto seguido se agita para que el líquido se mezcle bien y se uel e a añadir agua hasta que el ni el suba casi al cuello del matraz, pero no dentro del mismo. La mezcla se sigue agitando para mezclar bien mientras se le a añadiendo agua hasta antes de llegar al enrase (1 cm aproximadamente). Para alcanzar el enrase del matraz, se añade gota a gota con un gotero. El enrase se considera bien realizado cuando el menisco que forma el líquido queda tangente, por encima, a la marca de enrase.

1.1.2. Tampón químico, amortiguador o buffer.Estas soluciones son aquellas que ante la adición de un ácido o base son capaces

de reaccionar oponiendo la parte de componente básica o ácida para mantener jo el p . Cuando se agrega un ácido fuerte, la base conjugada reacciona con

los , aumentando la cantidad del ácido conjugado, pero como este es un ácido débil, se disocia poco y el p del medio no cambia en forma importante. Si se añade una base fuerte, esta es neutralizada por el ácido débil que se transforma en su base conjugada más débil que la original, amortiguando el cambio de p .

Puede haber soluciones reguladoras básicas que tienen alores de p por encima de , y soluciones reguladoras ácidas con alores de p menores de . Las soluciones reguladoras básicas se preparan a partir de mezclas de bases débiles que se disocian o ionizan en pequeño grado, es decir que produce una mínima cantidad de iones hidroxilo ( ) en agua y sus sales o ácidos conjugados. Las soluciones reguladoras ácidas se preparan a partir de mezclas de ácidos débiles, siendo un ácido que se disocia o ioniza en pequeño grado; es decir que produce una cantidad muy pequeña de iones hidrógeno ( ) y sus sales o bases conjugadas.

Cuando un buffer es añadido al agua, se produce un cambio de p con el n de que este se uel a constante. De esta manera, ácidos o bases (álcalis bases) adicionales no podrán tener efecto alguno sobre el agua, ya que esta siempre se estabilizará de inmediato gracias al efecto del tampón.

Los buffer consisten en sales hidrolíticamente acti as que se disuel en en agua. Los iones de estas sales se combinan con ácidos y bases. Estas sales hidrolíticamente acti as son los productos que resultan de la reacción entre los ácidos débiles y los álcalis fuertes como el carbonato de calcio (a partir del ácido carbónico e hidróxido de calcio) o entre ácidos fuertes y álcalis

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débiles como el cloruro de amonio (a partir del ácido clorhídrico e hidróxido de amonio). n ácido buffer reacciona cuando un ácido débil o base débil se combina con su correspondiente sal hidrolítica en una solución de agua. No siempre un sistema buffer es apropiado, porque los iones de algunas sales hidrolíticas pueden, por ejemplo, dañar a los organismos que entran en contacto con él.

Cada sistema buffer tiene su propio rango efecti o de p , el cual dependerá del ácido o base empleados.

Tampones típicos son el par amoniaco catión amonio, ácido acético anión acetato, anión carbonato anión bicarbonato, ácido cítrico anión citrato o alguno de los pares en la disociación del ácido fosfórico.

El p de una solución tampón se calcula utilizando la Ecuación de Henderson-Hasselbalch.

pH = pKa+log ([sal]/[ácido])

En ella los componentes se describen como:

p a log a sal concentración de la sal. ácido concentración de iones hidrógeno.

Cuando se trata del p de una solución amortiguadora o tampón químico de una sal con su base (no con un ácido como hemos isto) correspondiente se calcula el p de la misma forma solo que con una ariante: p p b log ( sal base])

El p luego se calcula restando el p a 1 :pH=14-pOH La elección del tampón es de acuerdo al alor de p a, que debe ser lo más próximo al alor de p que se quiere construir.

La capacidad reguladora es la máxima cantidad de ácido o base que una solución buffer puede neutralizar y a a depender del p de la solución y de la concentración. La capacidad reguladora máxima está en el rango de: p

p a 1

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1.2. ESTUDIO MICROSCÓPICO. MICROSCOPÍA: MICROSCOPIO ÓPTICO Y ELECTRÓNICO. BASES, FUNCIONAMIENTO, MANTEN-IMIENTO Y ARTEFACTOS TÉCNICOS1.2.1. Microscopio óptico

n microscopio es un dispositi o encargado de hacer isibles objetos muy pequeños. El microscopio compuesto consta de dos lentes o sistema de lentes, llamados objeti o y ocular.

El objetivo es un sistema de focal pequeña que forma una imagen real e in ertida del objeto (situado cerca de su foco) próxima al foco del ocular. Éste se encarga de formar una imagen irtual de la anterior ampliada y situada en un punto en el que el ojo tenga fácil acomodación (a 25 cm o más). Dada la reducida dimensión del objeto, se hace imperioso el recolectar la mayor cantidad de luz del mismo, utilizando sistemas de concentración de la energía luminosa sobre el objeto y diseñando sistemas que apro echen al máximo la luz procedente del objeto.

El microscopio está formado por componentes mecánicos y ópticos.

Componentes mecánicos:

1. Estati o o soporte: Formado por un pie pesado que sostiene un brazo inclinado del que salen la platina y el tubo.

2. Tubo o cañón: Tubo largo de metal hueco cuyo interior es negro. Proporciona sostén a la lente ocular y lentes del objeti o.

3. Platina: Plataforma pro ista de pinzas, donde se coloca el objeto o preparación. Puede ser tanto ja como mó il. Prácticamente todos los microscopio profesionales poseen un carro mó il graduado que con el mo imiento hacen posible la localización de áreas de interés.

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4. Revólver: Sistema que contiene los lentes objeti os y que puede girar, permitiendo el intercambio de dichas lentes.

5. Mando de enfoque: anejan el enfoque bien por mo imiento ertical de la platina o del tubo en función del modelo de microscopio. Suelen ir colocados a ambos lados del estati o. Para una precisión en el enfoque, existen el enfoque micro y macrométrico, que trabajan sobre el mismo eje (co axiales), mejorando el enfoque.

Tornillo macrométrico: Mando mecánico o perilla de gran tamaño, que al girarla permite acercar o alejar el objeto que se está obser ando. Tornillo micrométrico: Permite a nar la imagen, enfocándola y

haciéndola más clara. La manipulación de ambos mangos (macro y micro), permite enfocar la imagen de forma que

Componentes ópticos:

1. Objetivos: Constan de sistemas de lentes. Se puede hablar de objeti os secos, que se de nen como aquellos que entre el objeti o y la preparación solo hay aire y de los de inmersión, que son aquellos que utilizan un líquido entre la lente y preparación con el n de aumentar la luminosidad. Esta y otras características como el aumento del objeti o, apertura numérica, longitud del tubo y espesor del cubreobjetos, iene indicadas mediante unas marcas en el objeti o.

2. Oculares: Están formados por dos lentes separadas por un diafragma. Algunos microscopios para hacer la obser ación más fácil, cuentan con dos oculares en lugar de uno, permitiendo dicha obser ación con dos ojos a la ez. También existen cabezales m ltiples para que puedan haber arios obser adores a la ez.

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3. Fuente de luz: na correcta iluminación es la base de una buena obser ación. Debajo de la platina existe un espejo que recoge tanto la luz natural como la arti cial y re ecta la luz incorporada bajo el microscopio.

4. Condensador: Está situado debajo de la platina y su función es concentrar la luz en la muestra utilizando un conjunto de lentes. Dependiendo de los requerimientos de la obser ación, encontramos distintos tipos de condensadores: abbe, acromático, de campo oscuro…

5. Diafragma: Situado bajo la platina y el condensador, se encarga de regular la luz al condensador. En ciertos modelos el mecanismo se acciona por palanca y mediante rueda con distintos diámetros.

Respecto a los accesorios que complementan y mejoran la microscopia gracias a los a ances tecnológicos e informáticos, encontramos las cámaras fotográ cas, monitores, ídeos y ídeo impresoras, que han de ser tomados en cuenta como componentes adicionales al microscopio.

La microscopía puede clasi carse de distintas maneras. A continuación se expone un esquema del tipo de microscopios que atiende a los criterios de clasi cación clásicos:

Microscopía óptica: Está formado por numerosas lentes (en el caso de los compuestos) que pueden aumentar la isualización de un objeto. Algunos microscopios ópticos pueden agrandar la imagen por encima de las 2.000 eces. Con este tipo de instrumento se pueden er tejidos i os y obser ar los cambios que ocurren en un período de tiempo.

Microscopio simple: Pro isto de una lente o sistema de lentes con ergentes de forma que ofrecen una imagen irtual, alineada y mayor que el objeto, el cual está situado entre la lente y el foco. Se utiliza para disecciones de pequeños animales o disociación de piezas histológicas, debido a su limitada ampliación de imagen. Se denominan lupas y las hay de dos tipos: Lupas mono y binoculares. Microscopio compuesto: En este tipo la combinación de dos lentes o

sistema de lentes con ergentes de ampli cación de imagen colocados en los extremos del tubo: el denominado objeti o (colocado cerca del objeto a obser ar), y el ocular (más cercano al ojo del obser ador).

» Estereomicroscopio » De luz ultra ioleta » De contraste de fases » De campo oscuro » De polarización

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» Microscopía por luz re ejada » De uorescencia: Como se había tratado en su momento,

la uorescencia se de ne como la capacidad de algunas sustancias, denominadas uorescentes, de emitir, bajo la acción de onda corta, otras radiaciones de acción larga, llamadas de

uorescencia. Los componentes de este tipo de microscopios son una fuente de luz que emite en una banda de longitudes de onda desde la ultra ioleta al infrarrojo; un ltro que delimita la banda de excitación, que normalmente es la ultra ioleta; una muestra uorescente, después de la cual, encontramos un segundo ltro ( ltro de barrera), que corta los restos de la luz de excitación y deja pasar sólo la uorescencia. Este tipo de microscopia puede ser primaria (la propia muestra es la que posee uorescencia), secundaria (la muestra está marcada con sustancias uorescentes) y la inmuno uorescencia (la jación colorante se realiza con un anticuerpo marcado. Es el uso principal de la microscopia de uorescencia, siendo su principal

nalidad la detección de anticuerpos para estudiar reacciones inmunológicas.

Descripción del manejo del microscopio óptico:

1. Ajustar primero el asiento al microscopio.2. Seleccionar el objeti o.3. Colocar la preparación: Bajar la platina rotando el tornillo macrométrico

y colocar la preparación sobre ella, sujetándola con las pinzas de la platina, también centraremos la preparación mediante los tornillos que hay debajo de la platina cuidando de que este colocado en el sitio adecuado.

4. Ajuste de la iluminación: Enchufar, encender y regular la intensidad luminosa de la lámpara. Cuando se usa el objeti o de inmersión el diafragma estará un poco abierto y el condensador alto. abrá que poner una gota de aceite de inmersión y esto se usa para preparaciones teñidas y sin cubre. Si el objeti o es seco el diafragma se pondrá más cerrado y en condensador bajo y suele utilizarse para preparaciones en fresco o en anatomía patológica.

5. Ajuste de la distancia interpupilar: Se mue en los oculares hasta que se obser e un solo campo isual al mirar por ambos oculares.

6. Enfoque de la preparación: Cuando se utilice el de 100x se coloca una gota de aceite sobre la preparación después se sube cuidadosamente la platina con el macro hasta tocar el aceite con el objeti o. Es muy importante mirar esto por fuera del aparato, para no romper el objeti o por choque.

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Cuando los objeti os son secos, se hace con el macro y la preparación lo más cerca posible del objeti o, sin tocarlo, mirando también por fuera del aparato. Finalmente en ambos casos se mue e lentamente con el micro y mo iendo los tornillos de obser aran diferentes campos. Para cambiar de objeti o no hay nada más que mo er el re ól er hasta oír un clic y

nalmente ajustamos con el tornillo micrométrico.

1.2.2. Microscopio electrónicoEl microscopio electrónico utiliza haz de electrones en lugar de fotones (como

el óptico) y esto permite una ampli cación hasta 1000 eces mayor que el óptico. Todos los microscopios electrónicos cuentan con arios elementos básicos:

Disponen de un cañón de electrones que emite los electrones que chocan contra el objeto, creando una imagen aumentada. Se utilizan lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan

el haz de electrones, ya que las lentes con encionales utilizadas en los microscopios ópticos no funcionan con los electrones. El sistema de acío es una parte rele ante del microscopio electrónico.

Los electrones pueden ser des iados por las moléculas del aire, de forma que tiene que hacerse un acío casi total en el interior de un microscopio de estas características. Por ltimo, todos los microscopios electrónicos cuentan con un sistema

que registra o muestra la imagen que producen los electrones.

ay dos tipos básicos de microscopios electrónicos: el microscopio electrónico de transmisión (Transmission Electron Microscope, TEM) y el microscopio electrónico de barrido (Scanning Electron Microscope, SEM).

De barrido (SEM): Crea una imagen ampliada de la super cie de un objeto. No es necesario cortar el objeto en capas para obser arlo con un SEM, sino que puede colocarse en el microscopio con muy pocos preparati os. El SEM explora la super cie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra cada ez. Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una tele isión. Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o pro ocar la aparición de electrones secundarios. Los electrones perdidos y los secundarios son recogidos y contados por un dispositi o electrónico situado a los lados del espécimen. Cada punto leído de la muestra corresponde a un píxel en un monitor de tele isión. Cuanto mayor sea el n mero de electrones contados por el dispositi o, mayor será el brillo del píxel en la pantalla. A medida que el

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haz de electrones barre la muestra, se presenta toda la imagen de la misma en el monitor. Los microscopios electrónicos de barrido pueden ampliar los objetos 200.000 eces o más. Este tipo de microscopio es muy til porque, al contrario que los TEM o los microscopios ópticos, produce imágenes tridimensionales realistas de la super cie del objeto. De transmisión (TEM): El microscopio electrónico de transmisión

emite un haz de electrones dirigido hacia el objeto cuya imagen se desea aumentar. na parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo atra iesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para utilizar un microscopio electrónico de transmisión debe cortarse la muestra en capas nas (ultra nos), no mayores de un par de miles de Angstrom. Se coloca una placa fotográ ca o una pantalla uorescente detrás del objeto para registrar la imagen aumentada. Los microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar la imagen de un objeto hasta un millón de eces. Microscopio confocal de barrido láser: La mayor parte de las muestras

obser adas con microscopía óptica son trasl cidas o, en el caso de ser opacas, su super cie de re exión no se encuentra perfectamente pulida. En ambos casos la luz interacciona con la muestra a arias profundidades por lo que la imagen que llega al obser ador presenta áreas borrosas debidas a la luz procedente de zonas fuera del plano de enfoque, lo que produce una degradación en el contraste y resolución de la imagen. El principio de la microscopía confocal se basa en eliminar la luz re ejada o

uorescente procedente de los planos fuera de foco. Para ello se ilumina una pequeña zona de la muestra y se toma el haz luminoso que pro iene del plano focal, eliminándose los haces procedentes de los planos inferiores y superiores. La utilización de un láser como fuente de luz permite focalizar la iluminación en una región muy pequeña de la muestra y con una gran intensidad.

A.)Ima en obtenida con óptica de uorescencia. B.) Imagen obtenida con microscopio confocal

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Otros tipos de microscopios:

Microscopio de efecto túnel: Este microscopio utiliza una especie de aguja cuya punta es tan na que ocupa un solo átomo. Esta punta se sit a sobre el material y se acerca hasta una distancia determinada. Luego se produce una débil corriente eléctrica. Al recorrer la super cie de la muestra, la aguja reproduce la información atómica del material de estudio en la pantalla de una computadora. Los materiales que pueden obser arse con este tipo de microscopio tienen sus limitaciones; deben, por ejemplo, conducir la electricidad y ser elementos que no se oxiden: como el oro, el platino o el gra to, entre otros. Microscopio de fuerza atómica: Es similar al del efecto t nel. sa

una aguja muy na situada al nal de un soporte exible para entrar en contacto con la muestra y detectar los efectos de las fuerzas atómicas. El resultado que se obtiene es parecido al del efecto t nel pero sir e para materiales no conductores de la electricidad.

Imagen de un microscopio electrónico

Mantenimiento del microscopio

El microscopio óptico es un instrumento que debe cuidarse con esmero, se debe coger del brazo para trasladarlo de un lado a otro. Se situará en una mesa recta, ausente de ibraciones, no se usarán cantidades exageradas de aceite de inmersión para que no queden restos sobre la lente. Los objeti os secos se limpiarán con agua destilada y papel para lente. Si el objeti o es de inmersión se limpia con pequeños toques de xilol y con papel para lentes con cuidado para que no se desprendan.

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Se debe hacer una re isión profesional al año, debe mantenerse tapado y una ez que nalizado el trabajo, se debe apartar la fuente de iluminación, quitar el porta, desenchufar y guardarlo limpio y con su funda.

n microscopio es un dispositi o encargado de hacer isibles objetos muy pequeños. El microscopio compuesto consta de dos lentes o sistema de lentes, llamados objetivo y ocular.

El microscopio electrónico utiliza haz de electrones en lugar de fotones y esto permite una ampli cación hasta 1000 eces mayor que el óptico.

Artefactos técnicos en la observación al microscopio

La técnica citológica o histológica es compleja y con muchos pasos. n pequeño fallo en un paso, una pequeña partícula, in isible a simple ista pero que se incluye durante el montaje u otro paso del proceso,

puede pro ocar efectos no deseados como la aparición de cuerpos extraños en la preparación durante la obser ación al microscopio. A estos fenómenos se les denomina artefactos y al conocer su existencia e identi cación se hace posible la distinción de los mismos con erdaderos hallazgos anómalos en la muestra de estudio. Los artefactos más habituales presentes en muestras obser adas por microscopía son (entre otros):

Inclusiones: Pequeños elementos, inapreciables a simple ista que se incorporan a la preparación durante el procesamiento y luego son isibles al microscopio, pueden ser bras, pequeños pelos, pol o o incluso cristales de colorante. Pliegues: Durante el procesamiento de los cortes, el tejido puede

plegarse sobre sí mismo, lo cual es perfectamente isible al microscopio.

Pliegue en tejido

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Bandeado: Este artefacto se suele producir por un incorrecto ángulo de incidencia de la cuchilla y se reconoce por la presencia de bandas en el tejido cuando se obser a al microscopio. Mellas: Son producidas cuando la cuchilla tiene un pequeño defecto o

desperfecto en el lo de la hoja. Se reconoce porque este defecto pro oca una rasgadura lineal en el tejido siguiendo la dirección del corte.

Irregularidades por cuchilla defectuosa

Burbujas: Se suelen producir en el medio de montaje, habitualmente en cortes gruesos y medios de montaje de alta densidad.

El círculo blanco encierra dos burbujas atrapadas entre la preparación y el cubreobjetos durante el montaje.

Coloración: Pueden haber problemas de sobrecoloración por exposición demasiado larga al colorante y de precipitaciones de los pigmentos por no ltrar los colorantes o por preparados teñidos hace mucho tiempo ( encidos).

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Exceso de precipitados en el reborde derecho en una tinción realizada con hematoxilina-eosina

Retracciones: Producidas por la exposición de la muestra a alcoholes o por sobrecalentamiento en inclusiones en para na.

Los asteriscos muestran una retracción en el tejido y células

Autólisis o degeneración post-mortem: Se obser ará una muestra de mala calidad debido a una mala jación y u obtención de muestra inadecuada.

Se presenta cuando el tejido no se ja inmediatamente o la cantidad no es su ciente para el tamaño de la muestra. Los fenómenos de autolisis ocasionados por anoxia ocasionan liberación de enzimas hidrolíticas por parte de los lisosomas y los elementos celulares y tisulares se degradan. Esto ocasiona la pérdida de la morfología y las células pierden los detalles que se deberían obser ar al microscopio.

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Muestra donde se observa un daño tisular importante con cambios celulares por una mala praxis en la jación y tinción del preparado.

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