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Medios de cultivo de bacterias

Preparación y colonias de bacterias

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Tipos de mediosLos medios de cultivo se dividen acorde a sus características en generales, selectivos o diferenciales.Generales: permiten el crecimiento de cualquier tipo de bacteria.Selectivos: sólo permiten crecer un cierto tipo, p.ej. sólo un género.Diferenciales: permiten distinguir entre dos o mas bacterias por características coloniales.

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Medios generales• Agar Soya Tripticasa

(TSA)*• Agar marino 2216 o Zobell• Agar Nutritivo**

* añadir 2.0 % NaCl** añadir 2.5 % NaCl

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Medios selectivos

• Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS): Vibrio

• Agar Cetrimida: Pseudomonas

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Medios diferenciales

• Agar Eosina Azul de Metileno: coliformes y E. coli

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Preparación de medios

• Siempre preparar los medios con agua destilada (salvo el Marino).

• Es necesario ajustar simpre el pH.• Todos los utensilios deben estar

perfectamente limpios.• Todos los medios deben esterilizarse de

alguna forma.

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• Los medios se preparan en matraces cónicos con tapa

• Se pesa la cantidad de medio requerida, se disuelve o suspende en el agua.

• Se ajusta el pH.• Se esteriliza a 121°C por 20 min• Se espera a que enfrie (42°C o hasta que se

pueda sostener el recipiente sin quemarse la mano)

• Servir 20 ml Aprox. en cada caja de Petri

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Esterilización

• Tipos de esterilización– Húmeda, autoclave

– Seca, horno

– Gaseosa: óxido etileno, formaldehído o H2O2.

– Filtración:membranas de 0.45 y 0.22 µm.

Es el proceso mediante el cual se destruyen o remueven todos los microrganismos

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Esterilización húmeda• No colocar recipientes completamente cerrados en

la autoclave. • El vapor debe entrar en contacto con todo lo que

se quiere esterilizar• No esterilizar solventes o químicos corrosivos• Si se esterilizan líquidos, bajar la presión

lentamente y dejar enfriar los recipientes dentro de la autoclave

• Se esterilizan mejor los líquidos si se dividen en pequeños recipientes que en uno grande (> 1 lt)

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Esterilización húmeda (Cont.)

• Temperatura: 121 -123°C (250-254°F)• Presión: 15 psi• Tiempo: 10-15 min instrumentos*

20 -30 min líquidos*

* el tiempo depende de que tan llena este la cámara de la autoclave, muy llena mas tiempo.

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Agar TCBS

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agar Marino y TSA

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Colonias en agar TCBS

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Purificación de vibrios

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Colonias en agar Marino

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Vibrios en TSA

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