Medios de cultivo y siembra

Las cepas de bacterias se sembraron en los medios sólidos a 280C y 370C, según el caso durante 24 - 48 h. Los medios empleados se detallan a continuación:

a) TY (Triptone Yeast-estract)

Triptona 5g, Extracto de levadura 1,5g, CaCl2 0,64 g, NaCl 0,2g, H2O 1 litro, Agar 15 g

b) LB (Luria Betani)

H2O destilada 1 L, Triptona 10 g, Levadura 5g, NaCl 10 g, Agar 14 g

c) TSA (Triptone Soy Agar)

Pectona de caseína 14 g, Pectona de soja 5g

NaCl 5g, Agar 15g, H2O destilada 1 L

d) TSB ()Pectona de caseína 15 g, Pectona de soja 3g, Dextrosa 2,5g, NaCl 5g, Fosfato ácido de potasio 2,5g, H2O destilada 1 L

e) Medio CAS (Alexander y Zureber, 1991) – sideróforos

Solucion 1. Indicadores de Fe- CAS; FeCl3. 6H2O 1mM(en HCl 10mM) 10 ml, Solución acuosa de CAS (cromo azurol S) 1.21mg/ml 50 ml, Solución acuosa de HDTMA (hexadeciltrimetilamonio) 1.82 mg/ml 40 ml.

Solución 2. Tampón; PIPES (Piperazine-N, N^-bis) 2-ethanesulfonicacid) 30,25 g, KH2PO 4 0,30 g, NaCl 0,5, NH4Cl 0,1 g, Agar 14, Agua destilada c.s.p 800 ml,

Solución 3. Micro y macroelementos; Glucosa 2 g, Manitol 2 g, MgSO4. 7H2O 493 mg, CaCl2 11 mg, MnSO4.H2O 0,17 mg H3BO3 1,4 mg, CuSO4. 5H2O 0,04 mg, ZnSO4.

7H2O 1,2 mg, NaMoO4. 2H2O 1 mg, Agua destilada c.s.p 17,5 ml

Solución 4. Casaminoácidos; Casaminoacidos 3 g Agua destilada

30 ml

f) Reactivo de Salkowsky (Gordon y Weber, 1951) – prueba de auxinas ver cantidades y solución b d practicaH2SO4, 150 ml, FeCl3.6H2O 0,5M, 7,5 ml, Agua destilada, 250 ml

PVK (medio Pikoskaya,1948)

Glucosa 10 g, (NH4)2SO4 0,5g, MgSO4. 7H2O, 0,1 g, Extracto de levadura 0,5 g ,KCl 0,2 g, NaCl 0,2 g, FeSO4. 7H2O 0,002 g, MnSO4. H2O 0,002 g, Ca3(PO4)2 5, g pH 7-/+ 0,2 Agua destilada 1 L

NFB ()

Ácido málico 1 L, 5 g/l, K2HPO4 (solución al 10%) 5 ml, MgSO4.7H2O (solución al 10%) 2 ml, NaCl (solución al 10%) 1 ml, CaCl2. 2H2O (solución al 1%) 2 ml, Azul de bromotimol (solución al 0,5% en KOH 0,2 N) 6 ml, Solución de micronutrientes 2 mlFe-EDTA (solución al 1,64%) 4 ml, Solución de vitaminas 1 ml Extracto de levaduras 0,1 ml Agar 15 ml Agua destilada 1ml

Para obtener bacterias crecidas se utilizó TSA y TY, mientras que para determinar la resistencia de las bacterias a los metales pesados se utilizó LB, el medio CAS para analizar la presencia de sideróforos, el reactivo de Salkowiski para la prueba de auxinas, PVK para la solubilización de fosfato y para la tinción de esporas agar glucorado. Se vertió aproximadamente 25 ml en cada placa Petri de 10 cm de diámetro. Cuando se solidificó se procedió a la siembra.