“Métodos diagnósticos para la Chlamydia trachomatis y

C.pneumoniae" 

Cultivo Celular

• Gold Estándar

Muestras utilizadas: C. trachomatis

Uretrales de hombres y mujeres asintomáticasNasofaríngeasRectales Vaginales de niñas prepúberes y en casos de abuso sexual

C. pneumoniae

Exudado nasofaríngeo u orofaríngeoLavado broncoalveolar (LBA) Líquido pleuralEsputo (no es la mejor)

Chlamydia trachomatis

Líneas Celulares Utilizadas:• McCoy (fibroblastos de ratón) (mas utilizada)• HeLa 299 (carcinoma humano)• BHK-21 (células de ovario de hámster) • Células BGMK (mas recientes)

También puede ser utilizado

Inoculación en el saco vitelino de huevos de

pollos embrionados de 6-8 días de edad

Procedimiento

• El cultivo se propaga en una monocapa sobre un cubreobjetos inoculado con las muestras• Si hay suficiente número de cuerpos elementales: infectarán las

células y crecerán en forma de inclusiones citoplásmicas• Las inclusiones después de 48-72 h de incubación y teñidas con

anticuerpos marcados con fluoresceína que se ligan al LPS de la clamidia• Otros reconocen específicamente la proteína de membrana externa,

la observación directa de las inclusiones que posee una morfología distintiva contribuye al 100% de especificidad

Chlamydia pneumoniae

Líneas celulares utilizadas:

• HL • Hep - 2

Procedimiento

• Tras la incubación se tiñe la monocapa de uno de los viales o pocillos con anticuerpos monoclonales conjugados con fluoresceína, específicos de género o de especie, para visualizar si hay inclusiones de C. pneumoniae

Importante: Hay que fijar la monocapa con acetona, no se debe utilizar metanol para este fin, ya que puede modificar la estructura de algunas proteínas y alterar su antigenicidad

• Aunque el cultivo celular es una de las pruebas consideradas como gold standard tiene algunas consideraciones:

Detecta células vivas: Ventaja con respecto a la detección de DNA .. Pero también es un incoveniente: Como son bacterias lábiles el medio de transporte de muestras debe ser muy rigurosoSe pueden realizar estudios de resistencia a AMBMas inconvenientes: difíciles de estandarizar, son exigentes, requieren varios días de incubación y personal muy capacitado