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Microscopia

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Microscopia  

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Resolución: capacidad de distinguir 2 objetos adyacentes como unidades distintas y separadas Magnificación: capacidad de aumentar el tamaño de una imagen en relación al tamaño real del objeto

Contraste: diferencia en color entre el espécimen y el campo de visión

Conceptos importantes:

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I. Microscopia de luz

resolución: 0.2 µm

Microscopio compuesto de luz

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Algunos  tipos  de  Microscopio

•  Microscopio de Campo Claro •  Microscopio de Campo Obscuro •  Microscopio de Contraste de Fase •  Microscopio de Fluorescencia •  Microscopio Electrónico de Transmisión (TEM) •  Microscopio Electrónico de Rastreo (SEM)

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Microscopio  de  Luz •  Secciones ultrafinas de la muestra •  Magnificación máxima- 1,000X •  Resolución- menor distancia discernible entre dos

puntos 0.2 µm •  Fuente de iluminación–lámpara •  Tinción diferencial •  Micrografías a colores

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Microscopio de Campo Claro (compuesto de Luz)

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Microscopio de contraste de fase (microscopio de luz modificado)

microscopio compuesto de luz microscopio de contraste de fase

Se amplifica el efecto de desplazamiento de fase de aquellos rayos de luz que se refractan al pasar sobre partes densas del espécimen. De esta forma sepermite mayor contrate entre el objeto de interés y su alrededor en el campo óptico.

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Microscopia de contraste de fase

células de levadura

luz contraste de fase

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Contraste de Fase:

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Microscopio de campo obscuro (microscopio de luz modificado)

Método por el cuál la muestra es observada sobre un fondo obscuro, al dirigir la luz por los lados de la muestra

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Microscopio de Campo Obscuro

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Microscopio de campo obscuro

células de levadura luz campo oscuro

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Microscopio de fluorescencia Resolución similar a la del microscopio de luz, es otra técnica para lograr contraste usando tintes fluorescentes

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Microscopio de fluorescencia (se utiliza un pigmento que genera luz al absorber luz de un largo de onda específico)

ventaja: permite visualizar células en un medio complejo, suelo, agua, muestras ambientales

Ejemplo: autofluorescencia, clorofila de cianobacterias

absorve luz verde (λ 546nm) emite luz roja (λ 700nm)

cianobacterias

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Fluorescencia:

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Microscopía Electrónica •  Fuente de iluminación- haz de

electrones (por filamento de tungsteno) •  Magnificación máxima 200,000X •  Colores artificiales con computador

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Microscopía en tres dimensiones de alta resolución Microscopia electrónica de rastreo (MER)

Se utiliza para obtener imágenes de alta resolución de partes externas de la célula o superficies de objetos

v Para observar la muestra se cubre con una capa fina de metal, y se rastrea con un rayo de electrones en presencia de un vació. v  El patrón de movimiento de los electrones sobre la muestra produce la imagen

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M.E. de Rastreo o Scanning (SEM):

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Microscopio electrónico de transmisión (MET)

v  Este tipo de microscopia se usa para visualizar estructuras internas de una célula. v  Para trabajar la muestra se requiere el corte de las muestras en secciones delgadas

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M.E. de Transmisión (TEM):

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microscopio de luz

microscopio electrónico de rastreo

Microscopio de luz Versus Microcopio Electrónico

region nucleoide

microscopio electrónico de transmisión (resolución máxima 0.2nm)

luz → electrónico rastreo → electrónico transmisión

poder de resolución aumenta