o

MINISTERIO DE SALUD

Ministro Dr. Alvaro Vidal Rivadeneyra

Viceministro Econ. Carlos Rodríguez Cervantes

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

Jefe Dr Luis Fernando Llanos Zavalaga

Subjefe Dra. Alda Cecilia PalacIos Rarnlrez

Centro Nacional de Salud Pública Dra. Susana Zurita Macalupú

Directora General

Centro Nacional de Alimentación y Nutrición Dr Napoleón Chávez Villanueva

Director General

Centro Nacional de Control de Calidad Dra. Rosa Guevara Ormeno

Directora General

Centro Nacional de Productos Biológicos Q F Ricardo Valera Sánchez

Director General

Centro Nacional de Salud Ocupacional y Protección del Ambiente de Salud

Dr Ennque P Swayne Diaz Director General

Centro Nacional de Salud Intercultural Dr. Carlos del Aguila Campos

Director General

COMITÉ EDIT~, INSTITUTO NACIONAL DE~ •• ,

Presidente Dra. Aída Palacios Ramírez

Secretario Técnico Dr Cgsar Cabezas Sánchez

Miembros Q.F Zulema Arévalo Chong

Dr Jorge Barnaby Rodríguez D~. Zuño Burstein Alva

Llc Ivan Gómez-Sanchéz Prieto Dr Alfredo GUlllén Oneeg/io Dr César Náquira Velarde

Lic. Margarita Rodríguez Gutarra Dr Víctor Suárez Moreno

Ora ¡::rine Samalvides Cuba

Editor 01 Leonid Lecca García

Asistente editorial LIS Janiel C¡:¡rdenas Rojas

Secretaria Sr a. Rocío Solís Agurto

Diseño y Diagramación: María Elena Córdova Burgos

Dirección: Instituto Nacional de Salud Capac Yupanqui 1400 Lima 11, Perú. T:):f. (0511)471-992ClAnexo 162

BRUCElOSIS: DIAGNÓSTICO SEROlÓGICO y VACUNAS

Elaborado:

M. V. SI/vla Herrera B M, V. Mar/ene Cardenas C

INSTITUTO NACIONAL DE SALUD Centro Nacional de Prr¡ductos Biológicos

200 "

3

Catalogación hecha por el Centro de Inforrnación y Documentación Científica del INS

Herrera B., Silvia, Cardenas e., Marlene Diagnóstico y prevención de la brucelosis / Elaborado por Silvia Herrera B. y Marlene

Cárdenas C. Lima Ministerio de Salud. Instituto Nacional de Salud, 2003. 57 p. 21 cm.

1 BRUCELOSIS i cJlagnósti( o 2 BRlJCELOSIS / prevención y control 1. Herrera B .. Silvia 11. Cárdenas C .. Marlene 111. Instituto Nacional de Saluc: (Peru) IV. Perú. Ministerio de Salud

ISBN 9972-857-36-0 Hecho Depósito Legal N° 150 132003- ::535

©Ministerio de Salud, Av. Salaverry cuadra 8 Jesú~ Mana, L r1a Peru Telf. (51-1) 431-0410

©Instituto Nacional de Salud. 20C 3 Cápac Yupanqui 1400. ,;üsús Ma~la. Lima ,Jeru Telf.: (51-1) 471-9920 Fax ()1-1) 47' 0179 e-mail.postmaster@in:o.gob.pe Página Web: http://www Ins.gotJ2Ell

Publicación aprobada ln R.J N 410-20': 3·-J-OPD/INS

Portada. Personal del c.é:r,tro manipuland(, ¡íofllizadora. Se autoriza su reproduc':lón total parcial siempre y cuando se cite la fuente

COBIIO:idu

Presentación ------------------------------------ -. 7

Capítulo 1: Genera 1I dades . --------­ ..------ 9

Capítulo 11: Diagnóstico de la enfermedad ---------------- 17

Capítulo 111: Pruebas diagnósticas 23

Capítulo IV: Antígenos para el diagnóstico de la brucelosls 27

Capítulo V: Vacunas para la prevención de la brucelosis animal 45

Capítulo VI: Especificaciones de los productos 49

Capítulo VII: Bioseguridad 5

Bibl iografía ------- 57

5

La presente publicación tiene por finalidad aportar en la solución de la problemática que representa la brucelosis como enfermedad zoonótica de repercusión en la salud pública y pecuaria

En ese contexto, el Instituto Nacional de Salud, a través del Centro Nacional de Productos Biológicos, viene invirtiendo esfuerzos a fin de impulsar el desarrollo de técnicas para el diagnóstico y prevención de la brucelosls, buscando hacer frente a esta enfermedad.

Las investigaciones científicas que se van desarrollando constituyen la herramienta fundamental en la generación de nuevos conocimientos y enfoques para los programas sanitarios y por ende, todo esfuerzo que conlleve a la real izaclón de mejoras por el bien de la salud pública y pecuaria, servirá para afrontar las necesidades y problemas nacionales.

Es Importante considerar que la Orientación de las medidas de control y prevención deben ser aunadas en trabajos coordinados entre el sector salud y agropecuario a fin de opTimizar las tareas dirigidas al control de la enfermedad.

Esperamos que la presente sea de utilidad para el personal involucrado en los programas de y control de la brucelosis, a fi n de afianzar los (r IterlOS le diagnóstico y prevención de esta enfermedad

6

S3(]V(]I1VM3N39

010111119

Brucelosls DiagnostiCO Serologlcl y vacun" l, INS

ESPECIES DEL GÉNERO Brucella

lO

¡ ~,

Brucelosis: Ulagnóstlco ::ierólófllCO Vacunas

(,Conceptos generales I . i

Definición

La brucelosis tam bien llamada «fiebre malta» es una enfermedad zoonótica Infecciosa importante. Afecta a la mayoría de animales de sangre caliente, el hombre es sólo un huésped accidental. Es de difusión mundial y, a pesar de haber sido erradicada en países industrializados, continúa siendo un grave problema de salud pública, así como para la producción animal y la economía de algunas regiones.

Agente etiológico

La enfermedad es causada por diferentes especies del Bruce/la, el cual tiene las características: • Cocobacilos Gram negativos, de 0,5 a O 7 fJm de ancho por 0,6 a 1,0 fJm de

longitud. • No forman esporas, ni • No toman coloración bipolar. • No son áCido resistentes, pero res,stir la d'.:colorac-ón por áCidos débiles

o álcalis • Son aerobios e In móvi les requl,'ren CO (5% 10%) para

crecimiento. • Tienen metabol ismo (oxidat' JO)

• Son organismos Intracelulares. • A la observación están sole· , en ~)ar'cJas, fon¡ando cadenas cortas

o pequeños • En cultivo en medios sólidos, las colonl sor vllb1es dcspués del al

cuarto día de creCimiento Su tama' o varia entre y 1,0 mm. Son transparentes, con bordes enteros y SU;,,~rfICIF" Ha

Características bioquímicas del género Brucella

• Catarasa • Hldrolizan la úrea • OXldasa positiva • Reducen nitratos nltrr'os (con excepe H' B avis)

Brucelosis: Diagnóstico Serológlco y Vacuna~

• Producen hidrógeno sulf nado. • I ndol negativo. • No hldrolizan la gelatina ni Ilsan a sangre. • Reacción negativa al roJc de metl o. • Temperatura óptlllla de ceclmierllo de 3T'C • pH óptimo de creClmlent) entre '-.0 a 7,0.

Especies y características del género Brucella

• Bruce/la melitensis. Crece en presencia de fucsina básica y tionina, produce trazas de H;oS en medio peptonado, posee un antígeno M predominante, patógeno para caorlnos y oVinos. 'Jtras especies animales y humanos. Presenta 3 blovares.

• Bruce/la abortus. Para SL cultivo desarrollo requiere de CO) (5.0%-10.0%).y

Crece en presencia de fl<cslna baslca, pero es Inhibido por fa tlonlna. Posee por lo general un antígeno A predominante. Presenta 7 blovares Infecta preferentemente a vacunJs. produce abortos Infecciosos en vacas y también infecta a otros animales v al hOrTlt!re

• Bruce/la suis. Crece en prE~sencla de tlonlna. Posee un antígeno A predominante. Infecta preferentemente a los por'=lnos. patógena para otras especies animales y para el hombre (excepto. el blovar 4 que afecta a renos). Presenta 4 biovares.

• Bruce/la ovis. Requiere adición de CO,. no produce H2 S. Son oXldasa negativa No reduce nitratos a nitr'tos, su desarrollo es inhibido por metil violeta pero crece en presencia de fucslna básica y tionlna. No presenta antígenos A y M de las Brucellas lisas. Presenta Jn antígeno de superficie rugosa (R), que presenta reaCCiones cruzadas con otras Brucel/as rugosas. Infecta principalmente a los oVinos y produce epldldimitis en carneros. No es patógena para otras especies anlmelles ni para humanos.

• Bruce/la canis. Su creclrTliento e~ Inhibido por COI y por fucsina, pero no por tlonina. No produce H S. No poseen antígenos A y M. Forman sedimento mucoso

2

en medios líquidos Presenta antígeno de superficie (R). Infecta prinCipalmente a calles de ambos sexos v se ha aislado en humanos.

• Bruce/la neotomae. Es o\ldasa negativa, produce H~S. No crece en fucslna báSica, pero sí en tionina. Ha sido aislada en ratas L salvajes del desierto de Utah (USA) y no es patógena para otras especies animales ni para el hombre.

12

Brucelosis: Diagnóstico Serológlco y Vacunas

• Las IgM se formari precozrlente er los 5 y 7 días y alcanzan su pico entre los 13 y 21 días.

• Las IgG se forman simul'áneamer1te entre los 14 y 21 días y alcanzan su máxima concentración entre los 23 y 42 días.

• Tanto en el hombre comr} en los animales la II1fecclón natural estimula la simultánea o I diferida de las IgM e IgG, pero mientras

IgM declinan y tienden a las se estabilizan y persisten por tiempo.

• En casos crónicos de brJcelosl; humana y animal la clase prlncl de inmunoglobina presente y muchas veces la única, es la

• En el hombre y animales la desaparición de la significa, la eliminación de la Infecció'l

Fenómeno de zona

Ocurre cuando un suero no aflutlna las dilucIOnes más bajas, mientras en las dilucIOnes más altas ocurre ur1a IIltensa.

Este fenómeno se explica por 12: presenc ia de IIlcompletos «unlvalentes>· que, aunque se unen al antígeno, no la segunda fase de la reacción, es decir, la agregación. Estos anticuerpo;) ~"'"+""n,,,""'''''' a la clase

El fenómeno de zona na sido jemostr;¡do en sueros de título alto y en IndiViduos con InfecCiones de dura 'Ión

16

L1

(]V(]3WH3~N3

V, 3(] 0311S0N9VI(].1

Brucelosís: Diagnóstico Serológico y Vacuna~ \ INS~1

Diagnóstico de la enfermedad

El diagnóstico se basa en los slguler!tes aspectos'

• Diagnóstico clínico.

• Diagnóstico bacteriológic o

• 1'-::'C1nAchr'("\ serológico.

Diagnóstico bacteriológico

Para el diagnóstico bacterIC lógico debe considerar la toma de muestra del enfermo.

Toma de muestra en el hombre El aislamiento de Brucella en el horrbre se logra a partir de sangre circulante, cuando el paciente se encuentra en estado de bactenemia. Tamblen se el cultivo de médula ósea, nódulos linfáticos que hayan Inflamación. líqUido sinovial o biopsias de hígado. cuando existe sospecha de casos crónicos o cuando no se ha logrado aislar de la sangre.

Los cultivos sólo deben reélllzarse en laboratorios diseñados con un nivel de bioseguridad tipo 11. por la característica Infecciosa del m r(("\,("\(rr-::.nismo al pertenecer al gru po de riesgcl 3

La muestra debe ser de 5 mL a 10 mL de sangre o de 0,5 mL a 1 mL de aspirado de médula ósea y se puede usar medio bifásIco Ruiz Castañeda. El procedimiento consiste en incubar la muestra a 37' C y bañar la fase sólida con la líqUida dos veces por día hasta observar desarrollo de los microorganismos en iera de las dos fases. Es conveniente conser'Jar las muestras hasta los 35 días en estufa antes de desecharlos como regativo'

Toma de muestras en animales Para el aislamiento de Bru. a f'·'lrtlf de un animal VIVO, las muestras mas favorables son las secreclOr~s vaglr ,'lles y la leche tomada en el momento del parto o poco ,:::uando númE'"'o de bacterias excretadas es máXimo (lO] )

de los

Brucelosls: Diagnóstico Ser:JloglCo y Vacuflas

Diagnóstico serológico

SI bien el alslamlentr repreSt-nta la ,'ueba Jnfec~lón por Brucella, eXisten métodos de sera G proporcionan Información acertada y permiten una acción oportuna para tratamiento y central la enfermedad

de brotes epldérllCOS

perm I/dr una evaluación de la respuesta Inmune del frente a la enferm':dad en forma rápida y sencilla Las de su uso se resumen en los aspe::tos:

• Son las más usadas en el o de !a brucelosls humana yanlmal • Detectan la presenCia de IgM, IgG¡, e • Frente a una Jnfecclon los anticuerpo,: IgM los primeros en aparecer,

ant ¡~uerpos• nan más Intensamente que los más umln mayor número de SitiOS de

reacc Ión.

• Los IgM son tenlOlábIIEZ., mientras que los IgG son termoestables la actividad nante con agentes , mientras que las no la pierden y

pueden ser detectadas meolante uso de este reactivo • El título de un suero la más alta dilución que causa un determinado

de

• Ilnas pierden

la brllcelosls se utilizan las siguientes

• Prueba en • Prueba en placa • Prueba en tubo. • Prueba rosa de no,nnC::>'A

• Prueba ani 110 en leche. Además de estas, eXisten pruebas complementarlas, como la 2­

que, ntamente con la prueba en tubo, preporcionan un certero de l'lfecCIÓr por Brurella y realizar el seguimiento del

Las permiten resolver diferentes problemas, tales como: • correctamente mayor número de casos, especialmente cróniCOS,

que muchas veces permanecen ocu Itas e de Incierto. • Evitar o disminuir las reaccones i",,·-r.r'''''''r>''C • Evidenciar la presencia de anticuerpos Incompletos • Efectuar la lancla eficaz y de mayor cobertura.

20

I ....

INsL!~ '. Brucelosls DiagnóstiCO Serológico y Vacunas

.\0 r"\

.'" \ ..

Diagnóstico clínico en el hombre

ObJ'etivo " ;¡{. ':-",

Diagnosticar en forma rápida y segura. El dlagnóstlcc se basa e~~.dro CHnICO de la enfermedad y en la respuesta Inmune lel pac1c:nte

Manifestaciones clínicas • Fiebre. perdida de peso. escalofríos. sudoraclóll. cefalea. anorexia. fatiga.

astenia. mialgias y artralglas. entre lOS s,ntomas más comunes. • Los síntomas se presentan generalmente de 1 a 3 semanas posteriores a la

InfeCCión. en algunos casos aparece más tarde. • Complicaciones: osteoartlculares (30% -40% de los casos). artntis, sacrotleítls.

burSltlS. espondilltlS. hepáticas (mayormente pn Infecciones por BruceIJa mel/tens/sJ

• Complicaciones neurológlcas en <2% oe lOS CdSOS. siendo las meningitis aguda o crónica los síndromes más corrunes

Respuesta inmunológica La Infección por Bruce/la conduce a una respuesta r umoral con la producción de anticuerpos o ínmunoglobulinas. Presencia y evolución de las Inmunoglobullnas: • l' a

- semana posinfecclón: Presencia de IgM 2 jJ 3 ra• semana posinfecclón: Presencia de

Caracterización inmunológica del paciente • Pacientes agudos: Presencia de IgG (deteCCión mediante prueba rosa de

bengala) Los anticuerpos IgM aglutinan intensamente y llegan a títulos de 1/400, mediante la prueba en placa o en tubo.

• Pacientes crónicos: Persistencia de IgG (deteCCión por 2-mercaptoetanol. fijaCión de complemento o rosa de bengala)

Transmisión del germen al hombre • No se transmite de un Individuo a otro. • Transm Isores más comunes: cabras. ovejas. vacas y cerdos. • Fuentes de infección: productos de aborto placenta. fetos, sangre, orina, semen.

descargas vaginales, leche, subproductos de la leche. legumbres yagua contaminada.

• Susceptibilidad: el hombre y todos los alllmales domésticos son susceptibles.

Brucelosis: Diagnóstico Serológlco ¡ Vacuna:,

Diagnóstico en animales

Objetivo Identificar al anima Infectédo prop de la enfermedad. El diagnóstico se basa en la respuest j I nmun aborto InfeccIoso.

Manifestaciones clínicas El género Brucel/a tl'2l1e lecclór ;::lor la placenta mamaria, sexuales, articulaclo'les y be Isas sin' Jiales.

El síntoma Ipal el ab·)r1o c lal ocurre en el ultimo terCIO de la gestación Durante el parto aparentemente norrr¿11 o aborto de un animal infectado, se liberan gran cantidad de mlr:roorgarr,smos (')J que contamlllan los pastos, el agua y el med 10 ambiente.

Respuesta inmunológica Presencia y evoluclc~' de irí~nLJnqlobui!nas

• 1'0 semana )oslnfee~lón • semana :)jslnfec 'I;':n Pr.o,encla

Caracterización InflH'lOÓglC 1 la f·¡fermedad en los animales • Agudos: Presel1c el (deteu Ión mediante prueba rosa de Los

anticuerpos IgM::lglutlna 1 Intens:;¡mente y I a títulos de 1/400, mediante la prueba en pla· o en ubo

• Crónicos: Persls'f·ncla por 21e o . 5a de :r

Transmisión del germen en animales • Se transmite de Jn Indlv duo a :'0 (animal - animal, animal hombre) • Material abortar]' Infectcdo por ;rucelfa contiene 10' células

e Ing",sta alimentos contaminados representan d' f'ansr 31Ó ll

• Los animales se ,fectan ai'Jral'l'· nft' por vía conJuntlval, digestiva, resp'ratora, y por COI

• Las mucosas ser fác ~ellte " prl entrada Las Jacas Iwectada::. , eliminan

el calostro y la leche I~asta 'a tercera semana, pero cuando hay mastltis InterstiCial la liberación eJe Brucel/a es permanente. Por heces y orina también se elimina BruC!:'//a, pern en mell)r número.

• Las

en

22

Brucelosis: Diagnóstico Serológlco y Vacunas

Pruebas para el diagnóstico de la brucelosis

Prueba en placa

• Prueba In vitra, rápida y ~,encilla. • Detecta IgM e IgG) al que la prueba lenta en tubo. • Proporciona el título de la reacción de aglutinación. • Permite su aplicación en gran escala en las campañas de control yerradlcaclón.

Prueba rosa de bengala (Card test ode la tarjeta)

• Prueba in vitra, rápida y ~,encllla. • Representa la prueba o tamlzaJe. • Es una prueba de alta sensibilidad y especificidad debido a su pH áCido. • Procedimiento cualitativo rápido de macroscópica que se efectúa

con una sola dilución y que detecta nClpalmente anticuerpos IgG .. 1• El colorante rosa no ejerce n acción en la actiVidad y

se puede reemplazar por ()tros col)rantes de acridina. Su funCión es facilitara observación de la reacció1

Prueba en tubo

• Prueba In vitra rea Iizada ·jn tu bo~

• Es llamada también prueba lenta en tubos al necesitar 48 horas para la lectura de las reacciones de Jt¡nación

• Método para corroborar los resultados de otras pruebas serológicas • Detección de anticuerpo IgM e

Prueba 2 - mercaptoetanol

• Prueba selectiva que detecta solamente la presencia de IgG 2 .

• Se basa en que los IgM se degradan debido a la acción de ciertos compuestos que contienen el radical tlol, tales como el 2-mercaptoetanol. Las moléculas de IgG en cambiO, no sufren un efecto que altere su actividad para las reacciones

• En el hombre esta prueba se debE- Incorporar en el d de rutina.

SIS0133nH8 V1 3D 0311S0N9VID

" 13 VHVd SON3911NV

"

Brucelosis: Diagnóstico Seroldglco y Va:unas

ProcedimIento a Diluir al 1% mL del + 99 mL de solución

salina al 0,85% b Diluir el fenol 0,5 en so uClón Ina 0,85% 0,5 mL de fenol

+ 99,5 mL de solución salln 1 ai 0,8';% c Colocar en la Ila una hileras de inca tubos de 13 x 100 mm, d Con una Bang colocar 0,08 ml 0,04 0,02 mL 0,01 mL y 0,005

mL de suero en el fondo de ,ada tut '. e Agregar 2 mL de soldclón sa Ina fen" ada a cada tubo. f Agitar la illa para muestras. g Incubar a 3rC por L~8 horas

Lectura

La lectura se realiza sobre un fa ldo neg' ) con una luz que atraviesa los tubos. Las determinaciones se oasan ':n la claridad o turbidez de la mezcla y la firmeza de los grumos al ::uavemeite los tubos

Aglutinación Completa: El uico de la con una sedimentación de grum )S al for se en el

Aglutinación Incompleta: La meZCla SUE"O se presenta parcialmente clara, que al suaVf'rnente pi tubo é111arece una leve suspensión de grumos

Aglutinación Negativa: La mezc suero aparece turbia, a una suave agitación no aparecen grumos

Interpretación de los resultados

En sueros humanos conSlderd como título una dilución 1/200. Un título de 1/1 00 es considerado s Sic com: presuntivo.

En sueros de animales vacunaCiOS c,Jnsldera como una dilución de 1/200. Un título de 1/1 00 es considerado como sospechoso. En animales no vacunados un título en la diluciól 11l0C es considerado

aparece claro suavemente

32

BruceloSlS: Diagnóstico Serologlco y Vacullas

Procedimiento de la prueba anillo en leche Materiales a. Tubos de 12 x 75 de v drlo cia' ) y

Gradillas de alam para sostener tubos. Pipeta de 2 m L y 10 mL o automático

d. Gotero calibrado para 0,03 mL. por 20ta o mlcroplpeta de 30 fJL e. Puntas para microplpetas (r f. Estufa a 37"C.

Toma de muestras INDIVIDUAL: Tomar O mL de leche vaca problema. REBAÑOS: Tomar 50 mL de cada de 10 vacas, Identificándolas

leche por una noche

Procedimiento TéCnica de la mUEstras Jnl¡ v/duales: a. Llevar a temperaturrl amble lte las uestras y el b la n'1.lestra df~ Jroblema. C Colocar 1 mL de la 'lluestra lechr en un tubo. d una gota (C iJ3 del ant s;eno a tubo. mezclar No debe

antígeno efl parE·jec, del' e Incubar a 37"C por [ior,

utiliza Jn dliuc para el 'ICC' cuantitatiVO en la leche del an.rnal

sospechoso para saber .",1 título Infectar 'e.

a lOS :'lgU lenteS

lechE del pr Posteriormente trasvasar 1 rT L del

tubo al tercero,

EnunaflladelOtL problema en el primer tubo v 1 m L de leche negativa tubos, para 'ealizar dilUCiones aobles. Transvasar 1 mL al segundo y homogeneizar

y continuar así hasta el último tubo de! se 1<2SCarta 1 mL

c. Agregar una gota (O 03 ml) ant ¡;:eno a cada tubo y mezclar d. Incubar 37" e por 1 hora I ieer

36

c

!t~r:~,~ ~ ..~ Brucelosís: Diagnóstico Serológíco y Vacunas

Técnica de la prueba para un rebaño: Las muestras refrigeradas de cada pool de 10 vacas se levan a temperatura ambiente al Igual que el antígeno.

a Homogeneizar la muestra de cada pool de leche. b Colocar 2 m L del pool en un tubo.

Agregar una gota (0,03 ml) del antígeno a cada tubo y mezclar. No debe quedar antígeno en las paredes del tubo.

d. Incubar a 3rC por una hora

lectura Anillo de crema color blanco y columna de leche color púrpura.

+ Anillo de crema y columna de leche del mismo color púrpura o casi igual. ++ Anillo crema de color púrpura más pronunciado que la columna de leche. +++ Anillo crema púrpura oscura, la columna de leche tiene aún un poco de

color. ++++ Anillo crema de color púrpura oscuro. la col Jmna de leche blanca.

Dificultades en la Interpretación de la pruet;a

• Escasez o exceso de crema. • Leche pasteurizada. • Leche de vacas con mastitis pueden dar falsos • No toda vaca infectada elimina anticuerpos por la leche por lo que se recomienda

la prueba serológica anual al rebaño

Interpretación Para muestras Individuales la formaCión del anillo fuertemente teFlido por el antígeno es Indicativo de Infección. Si a esta muestra se le realiza la prueba con diluciones. un título en la dilución 1: 16 o superior se correlaciona generalmente con infección por Brucella. Se sugiere que cuando exista un título de infeCCión en la prueba de anillo, el hato pase por una prueba

Brucelosis: Diagnóstico S¡'rológICo y Vacullas

• Prueba rosa de bengala, prueba que detecta antlcuerp )s ti po . desr élrtándo"e reacc )nes cruzadas

Conservación Durante el almacenarnlento y transpcr~e el kit debe mantenerse entre 2"C y c.

Procedimiento de la prueba La prueba y rosa de deben realizarse en forma simultánea, teniendO en cuenta el procedirnlento cada lYueba descritas anteriormente

Interpretación del kit

TíTULO + PLACA

INTERPRETACiÓN

En la Intervetaclón (,f' re ,ultado:- la reaCCión en p'ueba de es Indicativo Infec Ion por Brucel/a. La prueba en determina E:I

de InfeCCión di; I paclerte Cow. derar qué títulos en las dilUCiones 1/25 v l/50 se deben a Iones uzadas

Precauciones yrecomendaciones antes de usar

Presentación en placa frasc )s de 'n L para 60 pruebas rosa de : 1 frasce 5 m L para 160

• • •

• •

40

Brucelosis: Diagnóstico Serologlco y Vélcunas

• Prueba 2-mercaptoetanol, prueba selectiva que detecta la presencia de anticuerpos IgG 2 , Se basa la degradación de los anticuerpos IgM debido a la acción de compuestos que contienen el radical tiol, como el 2-mercaptoetanol Es útil para detectar infectados crónicos en los que la prueba de aglutinación estándar puede presentar títulos dado que el suero contendrá exclusivamente anticuerpos IgG,

Conservación Durante el almacenam lento y transporte el kit debe mantenerse entre 2°C y g"C,

Precauciones yrecomendaciones • Agitar el antígeno antes de lJSar. • Reconstituir los sueros con 2, mL 1e agua destilada estéril. • No exponer al sol. • No congelar.

Presentación del kit • en tubo, frasco de 1 mL para 25 pruebas (prueba en tubo y 2 - ME) • Reactivo 2 -ME: frasco de 1 m para 25 pruebas (prueba en tubo y 2 - ME). • Suero control I iofi Ilzado: frasco de 2,5 m L, • Suero control liofilizado: frasco de 2,5 mL

Procedimientos de la prueba complementaria Materia/es a. Tubos de 13 x 100 mm de vidrio cláro y completamente limpios, b, Gradi lIa de alambre para sostener los tubos. c. Micropípeta o pipetas Bang. graduadas para verter 0,08 mL, 0.04 mL. 0,02

mL, O,OlmL y 0,005 mL d. Pipetas de 10 mL o autcmátlco e. Estufa a 3T'C. f. Material de vidrio (probetas, balones) para la dilución del antígeno,

Procedimiento a. Diluir el antígeno al 2%, mL del antígeno + 98 mL de solución

salina al 0,85%. b. Diluir el 2-mercaptoetanol 0.1 plo: 0,78 mL

2-mercaptoetanol + 99,22 mL de solución salina al c. Diluir el fenal al 1 % en solUCión salina al 0,85%. Ejemplo: 1 mL de fenal + 99

mL de solución salina al 0,85%,

4\~~~\·r~ INS )" Brucelosís: Diagnóstico Serológico y Vacunas

d. Colocar por cada muestra dos hileras de cinco tubos de 13 x 100 (marcadas como T y M). Una hilera se destina para la prueba en tubo y la otra para prueba 2-mercaptoetanol.

e Con una pipeta Bang colocar 0,08 mL, :::;,04 mL, 0,02 mL 0,01 mL y 0,005 m L de suero en el fondo de cada tubo.

f. 1 m L de sol uClón sa I lila fenolada a la h I 'era T. g. Agregar 1 mL de solución de 2-mercaptoetanol la hilera M. h Esperar 30 minutos. l. Agregar m L de la sol uClón del a todos los tubos (hilera T y M). J Agitar la para f'\("'ft::>n en", r las tT1 uestra~.

k Incubar a 3rC por 48 horas.

lectura del kit La lectura se realiza sobre un fondo negro :Jn una uz que atravieza los tubos. Las determinaciones se basan en la clarload o tu'bldez la mezcla y en la presencia de grumos al suavemente tubos

Aglutinación completa: líqUido de la mez(~la suero - antígeno aparece claro, con una sedimentación de grumos al fondo del tubo q le al agitarlo suavemente se supenden en el líqUido.

Aglutinación negativa: el líqUido de la me:r:la aparece turbia y a una suave no aparecen grumos.

Interpretación del kit

TUBO 2 - ME INTERPRETACiÓN

(Títulos) (Títulos)

1/25 1/50 1/100 1/100

(.) leCDrnlenda repetir 1" P' lleba v

En 'a interpretación de lOS resultados la reacclon pcsltiva en la es indicativo de infecc Ión por Brucella La prueba en tubo

determina el de infeCCión del Con:,lderar, en la en tubo, qué títulos en las diluciones 1/25 y l/50 deben a reacciones cruzadas.

BrucelOSls DiagnostiCO S"rologICo \ Vacunas

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA EN TUBO 2-MERCAPTOETANOL

Aq SS tenOladd

r L MF

98 9922 "l SS 9~ mL SS

PlpCld

Bal1,:2

Coloe-ir l;olcear

0.02 ml 0,04 rTlL 1 mL SS

- 0.02 mL 0.01 mL

0005 mL T

T :VI M

Colocar

1 mL 1 mL

Suero

2-ME 2-merc3ptoetano l Solución salm3

Nota: Se debe preparar primero las ~!llLJCIOneS (!gufilS a. by·" y alistar la baten ade tubos (d t» para la reallzaclon de la prueba Los sueros serán depositados de acuerdo a la fl~ura (d el seguido de I mL de solución salrna fenolada rSSf) para la lila df tubos 10 de 1 ml de 2-ME para la lila de lUllOS M. finalmente agrega 1mi del antígeno 312%. (figura al. a toda la baterla de tubos de las filas Ty M. realiza la lectura caho de 48 horas en íl 37°C

44

SP

1VWINV SIS0133nHB V1 30 NOl3N3A3Hd

'"

V1 VHVd SVNnaVA

6v

SOl!JnOOHd SOl 30 S3NOI3V31~1!J3dS3

Brucelosls: Diagnóstico Serologlco y Vacunas \ INS

Rangos de normalización de antígenos recomendados por la Organización Mundial de Salud

Antígeno pH Volumen celular

PLACA 64 '.0 10- 12%

TUBO 6.4 '.0 4.5%

ROSA DE BENGALA 3.65 l~ 8,0%

ANILLO EN LECHE 4.0 .13 4.0%

Rangos de normalización de vacunas recomendados por la Organización Mundial de Salud

Vacunas

Brucella abortus cepa 19 - r--­

Células/mL

10-12:( 10'

Dosis I gérmenes

60.000 millones

-

Brucella mehtens¡s ' f'pa rev I

-

1..' x

-­

JO 1.000 millones

cabras Jóvenes

Brucella me/¡tenSIS I fPa Re\ 1 f-­

I } 10 100 mol

cabras adultas (dosl reducll ._'---.

~o

IS

OVOIHnS3S0lB

Brucelosis: Diagnóstico Serológico y Vacunas

Bioseguridad en el campo

• EVitar el consumo de queso fresco en áreas endem Icas Usar vestimenta protectora: veterinarios y técnicos.

• Precaución en la de cadáveres de animales Ubres y útero el mayor riesgo. No deben ser abiertos ni derramar su contenido. Eliminar el material contaminado com(' abortos y deSinfectar las contaminadas

Diseño del laboratorio

Diseño adecuado del laboratorio Aislamiento Control de acceso.

• física: áreas para reactivos 11flamab ies • Evitar la reclrculación de aire medlantE.- extractcres.

Presión de aire

Equipos y técnicas de seguridad eficientes Cabinas de Tipo 11 para el E'~nero 8rucella (.c-;vltar turbulencias de aire) . Filtros eficiencia 99% para partí 'ulas J.13 rn crones de diámetro.

protectoras mandiles de mangaarga cl.ello y Jños estrechos. • Mascarillas descartables: reducen 2 IOf,élrltmclS ,.: rlúmE:r de

de aire Inhalado: Tipo N95. • evitan contamlnaClon a ml, osas • Guantes: evitan la de mlcr orgar' ISll0S pO!'lerldas o abrasiones

de la piel • Asas: no deben exceder lOS 5 en gltuc ora mir "Izar la VibraCión

Buenas técnicas microbiológicas

• RemiSión muestras. recipiente Ir )mpit)lf ester zable. descartable y -::ublerto Operaciones de ruti na

• Uso de deSinfectantes

Brucelosis: Diagnóstico Serológico y Vacunas

Grupo de riesgo en relación con el tiempo de laboratorio

Grupo de riesgo

Escaso Indlv¡·jual y comunitario

11

¡ndivld uai y comunitario limita

1II

Lugar

Ensf' anzas básicas

:3ervlclos oáslcos de hospital d~~ nivel Vimarlo Laboratorio

e y salud

Individual elevado ..aboratc'flo y comunitario limitado

IV Elevado individual i

comunitario

Microorganismos

Baeillus subt¡/!s Esehenehl8 eoll

54

Brucelosis: Diagnóstico Serológico y Vacunas

Desinfección de ambientes ySUllerficies

Luz ultravioleta: control semestral Se recomienda 10 ~JW/cm en laboratorio y 20 en áreas contaminadas

• H de sodio: En (5 (lOO porr) relaCión 1 18 para material de autopsias. A campo abierto desinfectar con hlpoCionto al 20% con cal apagada. El material abortado puede contener hasta 10l? células de Formol: deSinfectante: 50g/L (5%). Paré desinfección ambientes usar:

mL+15 g. Permanganato de potasIo 'Yl 3

Alcohol: 70% • Yodo: 0,075 gr/L (75 • Fenol: Al 5%, baJo nivel de Inactlvacló¡ por sus-ancias

Descontaminación de material Autoclave 121°C a 15 lbs. de :n

Remisión yconservación de muestras

Definiciones: Sustancias Infecciosas: . s bactwlas, virus, etc. [I¡1uestras para Materiales de L' Igen 'lU nano o 211mal como excretas.

secreciones. s 1'lgre et( F'rOductos Vacunas. I , ares. reactivos de

Parél la rem ISlón sustan:::las infecciosa' y ra::, tener en e

• Impermeac;les, con • Uso de recipientes secundé' os. • de muestras. Local de •

Brucelosis: Diagnóstico Serológico y Vacunas

Cadena de frío

Representa el modo ddecuadr) de corservar un producto SI n que pierda sus características y :Jropledódes ant

Recomendaciones: • Mantener durante alma\.::enamiento y transporte entre 2°C y 8°C. • Reconstituir la vacuna liofilizada en forma correcta. Extraer el diluyente e

Introducir al liófilo. Agitar suavemente hasta lograr su reconstitución. • Se recomienda usar la vac una el fT' Ismo día que se

Toma y remisión de muestras

• La prevalencia de la enferlledad realiza por • En campañas de vacunacón se tCllnará una muestra al azar en animales sin

antecedentes de vacunaci)n • En hatos muestr·::;ar por I menos 10 animales y en hatos mayores un

10% de animales Sin vaCUlar • Las muestras deben esta' debidarYJente Identificadas y antes de comenzar

cualquier prueba veriflcé:1r que material se encuentre en condiciones apropiadas para

Brucelosls y Vacunas

2. Alton GG, Jones LM. Las

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