Monitoreo de Vibrio spp. de importancia epidemiológica

Desde la costa hasta el talud continental en ambos laterales de la ZCP

Jurquiza V., Odizzio M., La Torre S., Salomone A., Sanabria A., García A., Izzo S. y Costagliola M.

Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus y Vibrio vulnificus implicadas en brotes de enfermedad en humanos

Género Vibrio

Bacilos pleomórficos Gram-negativos

Habitantes naturales del ambiente acuático

> 90 especies identificadas12 patógenas para el hombre

8 asociadas a ETAs3 importancia epidemiológica

http://vibrio-cholerae.org/

V. cholerae y V. parahaemolyticus manifestación clínica gastroenteritis V. vulnificus infecciones no intestinales

septicemias, infección de heridas

Vibrio cholerae Vibrio parahaemolyticus Vibrio vulnificus

Todos los serotipos O:K pueden producir

enfermedad TDH /TRH factores

de virulencia

Biotipo 1 Patógeno oportunista

en personas inmunosuprimidas

Serotipos O1 y O139 gen ctx toxina CT

responsable de las epidemias de cólera

El contagio se produce por ingestión de alimentos de origen marino (pescado o mariscos) o aguas contaminadas.

V. vulnificus, además, es contaminante de heridas abiertas a partir del contacto con agua contaminada o como consecuencia de la manipulación de

pescados o mariscos contaminados.

http:hku-env-health.blogspot.com.ar

/

www.aafp.org/afp Volume 76, (4)

2007

Broberg, 2011http://research.pomona.edu/jane-liu/

liu-lab-research/

• Tº del aguafactor más importante que rige la distribución y abundancia de Vibrio spp.

• Salinidad • Disponibilidad de nutrientes • Concentración de plancton

• Asociación con organismos marinos

En el ambiente • Libre en suspensión

• Asociado a partículas formando biofilms • Asociado a plancton (copépodos),

• Formando parte de la flora comensal de peces, mariscos y crustáceos

Lutz C. et al. 2013. Front.Microbiol. 4: 375.

Debido a que, el medio ambiente puede actuar como reservorio y vehículo de transmisión.

OBJETIVOS

Monitorear la presencia de Vibrio spp. de importancia epidemiológica en muestras ambientales para garantizar la inocuidad de los productos pesqueros.

Aportar datos a los estudios de evaluación de riesgo microbiológico para Vibrio spp.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se analizaron muestras de agua y sedimento

METODOLOGÍA

Manual de Procedimientos para el Aislamiento,

Identificación y Caracterización de V.

parahaemolyticus de la OPS y el BAM (FDA)

Aguamétodo cualitativo

Presencia/Ausencia (P/A).

Confirmación por PCR

Detección de genes especie-específicos

y factores de virulencia

NORMA ISO/TS 21872+

Recuento experimental

Sedimento método cualitativo

Molinari et al.-59° -58° -57° -56° -55° -54° -53° -52° -51°

-40°

-39°

-38°

-37°

-36°

-35°

-34°

12

34

5

6

65

43

21

Arg

entin

a

Estaciones CTD

Nodos ASCAT

COS-TAL I

COS-TAL II

RESULTADOS

Fueron recuperados 123 aislamientos presuntivosde V. cholerae, V. parahaemolyticus y V. vulnificus.

No fue detectado en agua ni en sedimento.

No fue detectado en agua. Sedimento, fueron identificados bioquímicamente

4 aislamientos:3 en la estación 3u de la Costal II.

1 en la estación 2 Costal I.

PCR Vibrio cholerae agua. Gen VC-F2 y VCmR1 (300 pb)C+: V. cholerae ATCC 14033. PM: Marcador de peso molecular

Vibrio cholerae

Vibrio vulnificus

Gen VC 16S-23S300 pb

Agua 4 aislamientos positivos,estaciones 1u y 2 u de la Costal II.

Sedimento 43 aislamientos positivos,estaciones 1u, 2u y 3u de la Costal II.

Vibrio parahaemolyticus

Se confirmó la presencia del gen toxR, especie-específico de V. parahaemolyticus.

No fueron detectados aislamientos toxigénicos (ausencia de los genes tdh y trh).

PCR V. parahaemolyticus (gen toxR 368 pb) en sedimento.10: C + (ATCC 17802); PM: Marcador de peso molecular 100 pb.

PCR múltiple genes tdh (250 pb)y trh (500 pb) en sedimento. 13. C+ CAIM

1772 tdh+/trh+ [http://www.ciad.mx/caim/CAIM.html]).

5ºC

10ºC

15ºC

20ºC

25ºC

30

31

32

33

34

35

36

37

Cuantificación de Vibrio

parahaemolyticus

Est. UFC/g

Costal II 1u 370

2u 330

3u 200

5u -

Costal I 1 -

2 -

3 -

5 -

Diagramas de cajas (Box Plots) obtenidos para temperatura y salinidad en muestras de agua y sedimento, según la recuperación de V. parahaemolyticus: P (presencia) - A (ausencia).

Se observa> frecuencia de aislamiento de

Vibrio parahaemolyticus con Tº y Sal.

Asociación entre detección de V. parahaemolyticus en agua y sedimentoy su relación con temperatura y salinidad

Agua / Temperatura

Mediana 25%-75% Rango

de valoresP A

Presencia/Ausencia de Vibrio parahaemolyticus

13

14

15

16

17

18

19

20

21

22

Tem

pera

tura

Agua / Salinidad

Mediana 25%-75% Rango

de valores

P A

Presencia/Ausencia de Vibrioparahaemolyticus

29,5

30,0

30,5

31,0

31,5

32,0

32,5

33,0

33,5

34,0

34,5

Sal

inid

ad

Sedimento / Temperatura

Mediana 25%-75% Rango

de valoresP A

Presencia/Ausencia de Vibrio parahaemolyticus

6

8

10

12

14

16

18

20

22

Tem

pera

tura

Sedimento / Salinidad

Mediana 25%-75% Rango

de valores

P A

Presencia/Ausencia de Vibrioparahaemolyticus

31,4

32,0

32,6

33,2

33,8

34,4

Sal

inid

adTemperatura (ºC)

19,44-21,29

Salinidad 30,14-32,43

Si bien se demostró la presencia de V. parahaemolyticus, no fueron detectados marcadores de virulencia.

En función de los resultados obtenidos y de acuerdo a la normativa internacional de aceptación de V. parahaemolyticus en productos de la pesca (< 102 ufc/g), el riesgo de padecer enfermedad por el

consumo de productos pesqueros en la ZCP podría calificarse bajo.

Debido a que, es la primera vez que se realiza este análisis en la zona, resulta necesario efectuar repeticiones del mismo, con

variaciones espacio-temporales que refuercen estas conclusiones.

CONCLUSIONES

GRUPO DE TRABAJO MICROBIOLOGÍA

URUGUAY:Dirección Nacional de Recursos Acuáticos-DINARAMarta Odizzio, Sabrina La Torre y Analía Sanabria

ARGENTINA:Instituto Nacional de Investigación y Desarrollo Pesquero-INIDEPMarcela Costagliola, Verónica Jurquiza, Andrea Salomone, Analía

García y Silvina Izzo

Holanda, < 102 ufc/g punto de venta para productos pesqueros importados congelados, cocinados o crudos.

Reino Unido la Health Protection Agency (HPA), productos listos para el consumo, en el punto de venta, insatisfactorios > 102 ufc/g.

Estados Unidos, límite máximo un nivel de 102 ufc/g. Australia y Nueva Zelanda, en manufactura y venta m=102; M=103,

(n=5; c=2; m=102; M=103) Japón para ostras crudas < 102 ufc/g. España límite máximo de 102 ufc/g, (n=5, c=0, m=M=102 ufc/g).

Criterios microbiológicos para Vibrio parahaemolyticus

A partir de capturas procedentes de zonas de riesgo, debería establecerse un plan de vigilancia especial en relación con algunas de las serovariantes principales del O3:K6

surgidas en los últimos años en relación con brotes de enfermedad.

AESAN, 2010

¡Muchas gracias…!