María Jesús Molina Cimadevila

OPTIMIZACIÓN DEL MANEJO DE COLONIAS DE

RATONES MODIFICADOS GENÉTICAMENTE

OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES

OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES

OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES

6 EUROS/JAULA/MES

IN 39%

UMH 44%

PROYECTOS 17%

OPTIMIZACIÓN DE LA GESTIÓN DE COLONIAS DE RATONES

MEDIDAS PARA OPTIMIZAR EL USO DE RATONES

•Formación

•Seminario. Materiales en la intranet •Curso de gestión de colonias

•Programa de criopreservación

•Asesoramiento •Penalizaciones económicas

IMPORTANCIA DEL FONDO GENÉTICO

FONDO GENÉTICO

Neuron. 1997 Oct;19(4):755-9. Mutant mice and neuroscience: recommendations concerning genetic background. Banbury Conference on genetic background in mice. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9354323

CONSANGUÍNEOS INBRED

•Homocigotos en el 98 % de sus genes • Prácticamente genéticamente idénticos • Se mantienen con cruces hermano-hermana •Adecuados como fondo genético de ratones modificados genéticamente

INBRED

NO- CONSANGUÍNEOS OUTBRED

• Genéticamente diversos • Para mantener su diversidad genética es necesario mantener al menos 20 parejas criando al azar • No son adecuados como fondo de ratones modificados genéticamente

OUTBRED

OUTBRED

OUTBRED

OUTBRED

=

FONDO GENÉTICO

http://jaxmice.jax.org/support/husbandry/breeding-considerations.html

FONDO GENÉTICO

http://phenome.jax.org/

FONDO GENÉTICO

http://phenome.jax.org/

FONDO GENÉTICO

http://phenome.jax.org/

FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA

LÍNEAS COISOGÉNICAS

N10 99.8%

X

X

X

N2 Porcentaje de genoma de la cepa donante 50%

N3 75%

N5 94%

Porcentaje de genoma de cepa donante= 1- (1/2)n-1

Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995

FONDO GENÉTICO COMO CAMBIAR EL FONDO GENÉTICO DE UNA LÍNEA

LÍNEAS COISOGÉNICAS

X

X

X

N2: 3 MESES

N3: 6 MESES

N5: 15 MESES

N10: 30MESES

SPEED CONGENICS

15 meses

Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995

FONDO GENÉTICO

A partir de N10

Si el alelo no es letal Si el alelo es letal

X

CREAR LÍNEA HOMOCIGOTA CONTINUO BACKCROSSING

CRUCE HERMANO X HERMANA A A

A A A

1/4 1/2 1/4

A A

A A

A A

A A

A A

A X

A

1/2 1/2

X

X

Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995

NOMENCLATURA LÍNEAS COISOGÉNICAS

Nn Ff

n-1 generaciones de backcrossing f generaciones de cruce hermano-hermana

N15 F8

14 generaciones de backcrossing 8 generaciones de cruce hermano-hermana

Mouse Genetics, Concepts and Applications Lee M. Silver Oxford University Press 1995

DATOS REPRODUCTIVOS BÁSICOS

REPRODUCCIÓN

•Pubertad 6-8 semanas •Gestación 19-21 días •Destete 21-28 días •Tamaño de camada 2-12 crías (muy dependiente de cepa) •Reemplazo de reproductores 7-8 meses de edad. •Estro postparto

REPRODUCCIÓN

3semanas 3semanas

Nace la primera camada Celo postparto

GESTACIÓN GESTACIÓN LACTANCIA

Nace la segunda camada Celo postparto

Destete de la primera camada

REPRODUCCIÓN

Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas

Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas

REPRODUCCIÓN

Mes y medio Destete de ratones de 3 semanas

Destete de ratones de 3 semanas

3 semanas

Destete de ratones de 3 semanas

3 semanas

REPRODUCCIÓN

CRUCE

Mes y medio

3 semanas

3 semanas

3 semanas

3 semanas

3 semanas

SUSTITUCIÓN DE REPRODUCTORES

•Reemplazar a los reproductores antes de que decline su eficiencia reproductiva, y siempre si: No producen camadas dentro de los 60 dias del cruce o desde su última camada Producen camadas pero no destetan en 2-3 camadas. •Tener reproductores de distintas edades en la colonia •Cruzar reproductores pronto. •Usar machos expertos con hembras jóvenes.

SISTEMAS DE CRÍA DE RATONES

CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS

COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO

COLONIA EXPERIMENTAL

4 meses !NO MÁS!

MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK

HOMOCIGOSIS

COSTE ECONÓMICO: 12-18 euros/mes

MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK

HOMOCIGOSIS

COSTE ECONÓMICO: 18 euros/mes

MANTENIMIENTO DE TRANSGÉNICOS COLONIA DE STOCK

HETEROCIGOSIS

COSTE ECONÓMICO: 12 euros/mes

CRÍA DE RATONES TRANSGÉNICOS

COLONIA DE STOCK/MANTENIMIENTO

COLONIA EXPERIMENTAL

COLONIA EXPERIMENTAL

¿CUANTOS CRUCES NECESITO?

•¿ Cuántos animales necesito? •¿Con qué frecuencia? •¿De qué género? •¿De qué genotipo?

Nº de cruces

COLONIA EXPERIMENTAL

¿CUANTOS CRUCES NECESITO?

COLONIA EXPERIMENTAL

¿CUANTOS CRUCES NECESITO?

Para C57BL/6J

COLONIA EXPERIMENTAL

¿CUANTOS CRUCES NECESITO?

http://helixweb.nih.gov/CAMP/ Hoffert, Condinional Allele Mouse Planner (CAMP): software to facilitate the planning and design of breeding strategies involving mice with conditional alleles. Transgenic Res. 2011 Aug 26. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21870117

FECUNDACIÓN IN VITRO

+

Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.)

Obtención de esperma

4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión

Fecundación in vitro

100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)

Transferencia de embriones

30-50 ratones

CRIOPRESERVACIÓN

PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN

+

Hormonación y obtención de ovocitos (20:00 h.) Obtención de esperma

4-6 hembras/ sesión 1 macho transgénico/ sesión

Fecundación in vitro

100-200 embriones de 2 células (en función de la línea)

Congelación lenta

PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN

•ANEXO DE CRIOPRESERVACIÓN

•APORTAR 2-4 MACHOS (HETEROCIGOSIS), A SER POSIBLE QUE HAYAN SIDO PADRES.

•COSTE ECONÓMICO: 300 euros /línea

PROGRAMA DE CRIOPRESERVACIÓN

Dr. Lluis Montoliu

Dr. Lluis Montoliu

ESTANDARIZACIÓN DE PROTOCOLOS DEL COMITÉ

ÉTICO

PROTOCOLOS ESTANDARIZADOS BLOQUE ANESTESIA PNT A.1 ANESTESIA INHALATORIA PNT A.2 ANESTESIA CON KETAMINA MEDETOMIDINA … BLOQUE QUIRÚRGICOS PNT Q. 1 CUIDADOS PERIOPERATORIOS PNT Q.2 ELECTROPORACIÓN IN UTERO PNT Q.3 CRANEOTOMÍA ... INCORPORA UNA EVALUACIÓN DE LA SEVERIDAD DEL PROCEDIMIENTO SEGÚN LA NUEVA DIRECTIVA EUROPEA.