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TP Informatica de la UNQ alumna Priscila Pubul
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REPLICATION OF MITOCHONDRIAL DNA OCCURS BY STRAND DISPLACEMENT WITH ALTERNATIVE LIGHT-STRAND ORIGINS, NOT VIA STRAND-COUPLED MECHANISM
Thimothy A. Brown, Ciro Cecconi, Ariana N. Tkachuk, Carlos Bustamante y David A. Clayton
Cornaglia Schaffer, Mayra
Estudios nuevos propusieron un modelo de replicación bidireccional
en tejidos
Puso en duda el modelo de replicación por desplazamiento
Objetivo: demostrar lo contrario
COMPARACIÓN ENTRE AMBOS MODELOS PROPUESTOS
PAPERS ANTERIORES
Re-examinan el modelo de replicación
mitocondrial en mamíferos, contradiciendo
toda evidencia previa.
¿QUÉ DETECTARON?
Usando electroforesis bidimensional de
agarosa, se encontraron con y-arcs entre las
dos secuencias de origen, concluyendo que
era inconsistente con el modelo asimétrico.
¿CÓMO JUSTIFICAN?
Atribuyen resultados anteriores a
errores experimentales, que llevan a la
degradación preferencial de la cadena
retrasada por un contaminante en las
muestras con actividad RNasa.
Estudios Anteriore
s
Electroforesis 2D
Estrategia
-Microscopía de Fuerza Atómica
(AFM)-Electroforesis 2D
Resultados
-Sólo se evidencia la replicación por desplazamiento
-Se reveló la presencia de orígenes alternativos de la cadena liviana (L)
AFM (ATOMIC FORCE MICROSCOPE)
Instrumento mecánico
óptico que permite el
mapeo topográfico de
una muestra, con
altísima resolución (del
orden de los nanometros)
PROTOCOLO DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA SU REVELADO POR AFM
Con el objetivo de mejorar la
visibilidad de los segmentos de DNA
de simple cadena al microscopio, se
propuso incubar las muestras con
SSBp.
El protocolo demostró ser funcional en
muestras de M13 (B).
Se aplicó entonces el mismo protocolo
a las muestras de mtDNA (C).
Se demostró además que el protocolo
no afecta a la correcta interpretación
de los resultados.
VISUALIZACIÓN DIRECTA DEL MTDNA POR AFM
INTERMEDIARIOS REPLICATIVOS DEL MTDNA
Azul: hebra parentalRojo: ssDNA + SSBCeleste: cadena H nacienteVerde: cadena L naciente
LONGITUDES PERCEPTIBLES DE LAS REGIONES DESPLAZADAS DE EXP-D Y GPC
POSIBLES ORÍGENES DE LA CADENA LIVIANA
Azul: hebra parentalRojo: ssDNA + SSBCeleste: cadena H nacienteVerde: cadena L naciente
ANÁLISIS POR ELECTROFORESIS 2D: Y-ARCS
¡¡Muchas gracias por su atención!!
¿Alguna pregunta?
