Pasos de la Técnica Histológica

Básica

Toma de Material

Los métodos más utilizados son:

• Biopsias

• Necropsias

• Improntas

• Frotis de células superficiales

• Frotis de células sanguíneas

• Animales de experimentación

• Aplastados celulares

Fijación

• La fijación debe realizarse lo más rápido posible

luego de tomada la muestra, para evitar los

procesos de autolisis. Además se debe escoger el

método más adecuado al objetivo del estudio a

realizar.

• Se pueden clasificar en los siguientes métodos:

Por inmersión: pequeños trozos del tejido son

sumergidos en el liquido fijador.

Por perfusión: el líquido fijador se aplica por inyección

vascular.

Por vapores: consiste en utilizar líquidos fijadores que

emitan vapores, se debe realizar bajo campana

extractora de gases.

Deshidratación

Luego de que la muestra ha sido fijada se debe

eliminar el fijador y deshidratar.

Para esto se utiliza una serie gradual de soluciones

acuosas con una concentración de menor a mayor

del agente deshidratante, como por ejemplo alcohol

etílico.

La deshidratación gradual se hace para evitar la

deformación de la morfología del tejido, debido a la

rápida salida del agua.

Aclaramiento

Posterior a la deshidratación el tejido se debe

sumergir en un líquido que sea miscible tanto en el

medio de inclusión como en el medio de

deshidratación.

El líquido comúnmente utilizado es el xilol.

Esta etapa se llama aclaramiento debido a que el

tejido se vuelve transparente.

Inclusión

Para poder obtener cortes delgados que puedan ser

observados al microscopio óptico, los tejido deben

ser incluidos en una sustancia de consistencia firme,

la cual puede ser hidrófila o hidrófoba.

Un medio hidrófobo que se puede utilizar es la

parafina o el paraplast. Este último es una parafina

altamente purificada a la cual se le han agregado

cantidades variables de polímeros especiales, lo

cual le dará distinta dureza y plasticidad al taco de

inclusión.

Corte

El taco obtenido en la inclusión se debe cortar en

secciones lo suficientemente delgadas que permitan

el paso de la luz, para esto se utiliza un aparato

llamado micrótomo.

Para esto el bloque se debe tallar, para eliminar el

exceso de parafina, formando una pirámide

truncada.

Corte

Los cortes que se van obteniendo se deben ir

estirando, esto se puede realizar en un baño

termoregulado (40-45 ºC). El estiramiento se

basa en la dilatación de la parafina producto del

calor.

Luego estos cortes se van recogiendo con un

portaobjetos.

Tinción

Primero la parafina debe ser eliminada

sumergiendo los portaobjetos con los cortes en un

solvente orgánico que puede ser xilol.

Luego los cortes deben ser hidratados pasando por

una serie de graduaciones decreciente de alcohol

etílico, hasta llegar a una solución que sea 100%

agua.

Una vez rehidratado el tejido puede ser teñido. Los

colorantes más utilizados son hematoxilina y eosina.

Montaje

Luego de teñir el tejido este debe ser deshidratado

nuevamente, para esto hay que pasarlo por una

serie de alcoholes en grado ascendente.

Posteriormente hay que pasar el tejido por xilol, de

modo de hacerlo miscible con el medio de montaje.

Finalmente se le agrega el medio de montaje y se le

coloca el cubreobjetos, teniendo cuidado en no dejar

burbujas.

Observación al Microscopio

Observación al Microscopio