PLANES DE MEJORA ANIMAL: CURSO ASPECTOS … · permite la obtención de poblaciones celulares puras bajo la visualización directa de un microscopio óptico. 2ºNIVEL DE EXPRESION-Microdisecciónláser.-PCR

CURSO

2008-2009

PLANES DE MEJORA ANIMAL: ASPECTOS INMUNOGENÉTICOS

MASTER. Zootecnia y Gestión Sostenible: Ganadería Ecológica e Integrada

Dr. Diego Llanes

Dra. Ángela Moreno

Dr. José Pérez de la Lastra

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Inmunogenética.

• VARIABILIDAD DE LAS MOLÉCULAS RELACIONADAS CON EL SISTEMA INMUNE.

• PARTE DE LA GENÉTICA EN LA QUE SE USAN ANTICUERPOS PARA DETECTAR

VARIABILIDAD.

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Aplicaciones en la mejora animal.

• CONTROLCONTROL DE PARENTESCODE PARENTESCO.(histórica)

•• NUEVOS BIOMARCADORES.NUEVOS BIOMARCADORES.

•• OTRAS APLICACIONESOTRAS APLICACIONES

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APLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMAL.APLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMAL.

1.1. DIAGNDIAGNÓÓSTICO ENFERMEDADES. STICO ENFERMEDADES.

2.2. DIAGNOSTICO DE PREDIAGNOSTICO DE PREÑÑEZ.EZ.

3.3. TERAPIAS.TERAPIAS.

4.4. DESARROLLO DE POLITICAS DE PREVENCIDESARROLLO DE POLITICAS DE PREVENCIÓÓN A INFECCIONES.N A INFECCIONES.

5.5. ¿¿DIFERENCIACIDIFERENCIACIÓÓN DE EMBRIONES?, N DE EMBRIONES?, ¿¿Y ESPERMATOZOIDES? Y ESPERMATOZOIDES?

6.6. BIOSENSORES.BIOSENSORES.

7.7. INMUNOMODULADORESINMUNOMODULADORES

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Nuevos biomarcadores.

• CLUSTERS DE DIFERENCIACION ó CD.

• 339 EN HUMANOS

• VARIABILIDAD

• NIVEL ADN

• NIVEL PROTEÍNA

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CARACTERISTCARACTERISTÍÍCAS DE LOS CAS DE LOS ANTICUERPOS.ANTICUERPOS.

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Anticuerpos

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Clases de anticuerpos.

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Clases y cantidad relativa de anticuerpos.

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Variabilidad entre individuos.

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Teoría clonal.

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ACTIVACIACTIVACIÓÓN DE LAS CELULAS B.N DE LAS CELULAS B.

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Variabilidad de los idiotipos.

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Modelos para la obtenciModelos para la obtencióón de anticuerposn de anticuerpos

•• PoliclonalesPoliclonales..

•• Monoclonales.Monoclonales.

PrecioPrecio, , visivisióónn de de conjuntoconjunto y y tiempotiempo

Inmortalidad y especificidad Inmortalidad y especificidad úúnicanica

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Producción de anticuerpos policlonales

1. Preparación de inmunógenos.

2. Inmunización

3. Procedimiento de detección.

4. Recogida, almacenamiento y absorción.

5. Obtención de la fracción de inmunoglobulinas.

6. Purificación de los anticuerpos.

7. Controles de calidad.

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Los anticuerpos monoclonalesLos anticuerpos monoclonales

DEL LABORATORIO A LA INDUSTRIA. DEL CONOCIMIENTO PDEL LABORATORIO A LA INDUSTRIA. DEL CONOCIMIENTO PÚÚBLICO A LAS PATENTESBLICO A LAS PATENTES

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Producción de anticuerpos monoclonales

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INMUNIZACIONES.

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Separar cada anticuerpo

Inmortalizar


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LUGAR DE TRABAJO

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PONIENDO HAT A LAS CELULAS

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Producción de anticuerpos monoclonalesEFECTO DEL HAT

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BOTELLAS DONDE CRECEN LOS HIBRIDOMAS

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HIBRIDOMA EN CRECIMIENTO

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CONSERVACIÓN DE LOS CLONES EN NITRÓGENO

LÍQUIDO

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Producción de anticuerpos monoclonalesOBTENCIÓN DE ASCITES.

OTRAS TOTRAS TÉÉCNICAS SE HACEN NECESARIAS TRAS LA PROHIBICICNICAS SE HACEN NECESARIAS TRAS LA PROHIBICIÓÓN DE LA N DE LA PRODUCCIPRODUCCIÓÓN DE ASCITES EN MUCHOS PAISES.N DE ASCITES EN MUCHOS PAISES.

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Anticuerpos comerciales

Uso del producto.

• Citometría

• Inmunoprecipitación

• Western blotting

• ELISA

• Otros ensayos

• Inmunohistoquímica

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Anticuerpos comerciales

Condiciones a cumplir

• Forma del producto

• Método de purificación.

• Concentración

• Otros componentes

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Los anticuerpos en el mercado

Información en Internet

Empresas

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Anticuerpos por encargo

• Policlonales.

• Monoclonales

600 - 1.500 € de 10 a 13 SEMANAS

3.900 A 9.000 € de 16 a 24 SEMANAS

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Aplicaciones de los anticuerposAplicaciones de los anticuerpos

1. Identificación y estudio de moléculas.

2. Cuantificación de moléculas.

3. Purificación de moléculas y células.

4. Aplicaciones terapéuticas reales y potenciales.

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APLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMAL.APLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMAL.

1.1. DIAGNDIAGNÓÓSTICO ENFERMEDADES.STICO ENFERMEDADES.

2.2. DIAGNOSTICO DE PREDIAGNOSTICO DE PREÑÑEZ.EZ.

3.3. TERAPIAS.TERAPIAS.

4.4. DESARROLLO DE POLITICAS DE PREVENCIDESARROLLO DE POLITICAS DE PREVENCIÓÓN A INFECCIONES.N A INFECCIONES.

5.5. ¿¿DIFERENCIACIDIFERENCIACIÓÓN DE EMBRIONES?, N DE EMBRIONES?, ¿¿Y ESPERMATOZOIDES? Y ESPERMATOZOIDES?

6.6. BIOSENSORES.BIOSENSORES.

7.7. INMUNOMODULADORESINMUNOMODULADORES

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CONSULTAR DIVERSOS DOCUMENTOS.CONSULTAR DIVERSOS DOCUMENTOS.

APLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMALAPLICACIONES A LA MEJORA Y SANIDAD ANIMAL

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DESARROLLO DE NUEVAS TDESARROLLO DE NUEVAS TÉÉCNICAS.CNICAS.

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CITOMETRÍA DE FLUJO

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CITOMETRIA DE FLUJOAPLICACIONES CLÍNICAS

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CITOMETRIA DE FLUJO

Hemoglobinuria paroxismal nocturna

Diagnostico

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AAñño 96: o 96: MicrodisecciMicrodiseccióónn llááserser

-- El sistema diseEl sistema diseññado por ado por MicrotestMicrotestpermite la obtencipermite la obtencióón de poblaciones n de poblaciones celulares puras bajo la visualizacicelulares puras bajo la visualizacióón n

directa de un microscopio directa de un microscopio óóptico.ptico.

22ºº NIVEL DE EXPRESIONNIVEL DE EXPRESION

-- MicrodisecciMicrodiseccióónn llááser.ser.

-- PCR cuantitativa.PCR cuantitativa.

11erer NIVEL DE EXPRESIONNIVEL DE EXPRESION

-- InmunohistoquInmunohistoquíímicamica..

-- Anticuerpos monoclonales.Anticuerpos monoclonales.

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NUEVAS APLICACIONESNUEVAS APLICACIONES

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NUEVAS APLICACIONES. MICROARRAYS DE ANTICUERPOS.

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Tipos de anticuerpos monoclonales

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Tipos de anticuerpos monoclonales

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ANTICUERPOS HUMANOS EN ANIMALES

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Each of the four bovine IgM heavy chain alleles is knocked out by homologous recombination followed by somaticcell nuclear transfer to extend the life span of the selected cell lines. An artificial chromosome carrying the human immunoglobulin heavy and -light chain loci ( HAC) is transferred to the multitargeted bovine cell lines by microcell-

mediated chromosome transfer, and three additional nuclear transfer steps are performed to obtain a healthytransgenic calf with the HAC/IGHM-/-/IGHML1-/- genotype. Vaccination of this animal with an antigen of interest

produces 20% fully human antibodies and 80% chimeric antibodies (bearing human heavy chains and bovine lightchains).

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ANTICUERPOS HUMANOS EN ANIMALES

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Anticuerpos monoclonales recombinantes

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Anticuerpos monoclonales humanizados

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Entrada de anticuerpos en el mercado

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Anti-cancer antibodies

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Anticuerpos aAnticuerpos antinti--ccááncer, accincer, accióón n

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Anticuerpos aAnticuerpos antinti--ccááncer, accincer, accióón n

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LOS PROBLEMAS DE LOS ANTICUERPOS EN LA CLÍNICA.

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TGN1412 FUNCITGN1412 FUNCIÓÓNN

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EXPLICACIÓN DE LO SUCEDIDO

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ANTICUERPOS CONTRA RECEPTORES CELULAS MADRE

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In the study by Wrammert et al.2, human subjects were given a booster immunization against influenza virus, and bloodwas collected on day 7 post-immunization. Blood cells were specifically sorted by flow cytometry for an early population

of antibody-secreting cells (ASCs). Single cells were distributed into multiwell plates and cDNA generated by reverse transcription followed by PCR amplification of the VHH and VKK genes of each cell. Subsequent subcloning and expression

of mAbs allowed screening for neutralizing mAbs against a panel of influenza subtypes.

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MUCHAS GRACIAS POR LA ATENCIÓN

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