PlasmaRico en Plaquetas

7/26/2019 PlasmaRico en Plaquetas

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Introduccin: el polimetilmetacrilato (PMMA) es el nico sistema de entrega local de antibiticos aprobado por laMateriales y mtodos: se dise& un estudio in %itro, estandariado, controlado, con el mtodo de difusin agar,Resultados: los antibiticos e%aluados fueron transportados ' liberados por el gel rico en pla$uetas. #e produjo inDiscusin: se demostr in %itro la capacidad $ue tiene el P1P como transportador ' liberador de antibitico. DadoPalabras clave: plasma rico en pla$uetas, agentes antibacterianos, in %itro.71e% +ol 8r 9ra /:5 ;(:)< 2=!>=?

Plasma rico en pla$uetas (P1P) como sistema de entrega

@olumen ; ! Ao. :, Mar)o 2

Plasma rico en plaquetas (PRP) como sistemade entrega local de antibiticos en infeccionesseas:

estudio in vitro

Dr. Julin Camargo! Dra. "atas#a $anegas! Dr. Juan David $%le&! Dr. Juan Carlos 'pe&! Dr. Juan anuelerrera

* Posgrado de Ortopedia y Traumatologa, Universidad El Bosque, Bogot, Colombia.

** nstituto de !en"ti#a $ole#ular Ba#teriana, Universidad El Bosque, Bogot, Colombia.

Corresponden#ia%&r. 'uan $anuel

(errera

Calle )+ o. -B/ O0. )1)+, Edi0i#io El Bosque, Bogot, Colombia.

Tel. 23-)4 35111/6

7uanm8errera9#able.net.#o

:e#8a de re#ep#i;n% < de 7ulio de 511it8out asso#iated systemi# to?i#ity.evert8eless, it is also a #on#ern t8at sometimes P$$= may a#t as a 0oreign body >it8in our body, on#e it8as #ompleted its antibioti# release,

and spe#ially, on#e t8e antibioti# release rate 8as dropped belo> t8erapeuti# levels. Per8aps, sometimes P$$= #ould even a#t as a 0riendly

sur0a#e 0or ba#terial bio0ilm.

et#ods: = standardi@ed #ontrolled invitro study >as designed 0ollo>ing t8e agar di00usion met8od, a##ording to parameters set byClini#al

and Aaboratory tandards nstitute 2CA4 in 511-, in order to determine i0 t8e platelet ri#8 plasma 2PP4 loaded >it8 antibioti# #ould >orD as a

#arrier and as an antibioti# lo#al delivery system, by in8ibiting a Dno>n S. aureus subtype gro>t8.

Results: =ll antibioti#s tested >ere transported and released by t8e PP. e 0ind out a dire#t relations8ip bet>een ba#terial in8ibition 8alos and

antibioti# #on#entration dilutions. =s 8ig8er t8e #on#entration as bigger t8e 8alo. O?a#ilin at )%5 dilution 8ad a ba#terial in8ibition 8alo even

greater t8an t8e sensidis#. T8e ba#terial in8ibition 8alos produ#ed by t8e Fan#omy#in >ere t8e smaller ones. Cipro0lo?a#in s8o>n t8e lo>est

ba#terial in8ibition #apa#ity #ompared to #ontrol.

Discussion: PP 8as t8e ability to per0orm as an antibioti# #arrier as >ell as a lo#al antibioti# delivery system invitro. &ue to t8e 8ete

rogeneous be8avior s8o>n in t8ese di00erent antibioti# trials, it is assumed t8at ea#8 antibioti# 8as its o>n di00usion #apa#ity >8i#8 must be

taDen in #onsideration any time t8e PP >ants to be used as a lo#al antibioti# delivery system.

,e- .ords: plateletri#8 plasma, antiba#terial agents, in vitro.

[Rev Col Or Tra 2012; 26(1): 39-49]

+ntroduccin

$Gltiples ba#terias son #ausantes de in0e##iones mus

#uloesquel"ti#as. El agente pat;geno depende de la

edaddel pa#iente, la va de ino#ula#i;n, las #ir#unstan#ias

en las #uales se produ7o la in0e##i;n y la respuesta

inmune indivi duali@ada de #ada pa#iente. Aosmi#roorganismos que predominan en las in0e##iones de

pr;tesis e implantes, adems de osteomielitis y artritis

s"pti#a, son el Stap!lo"o""us aureusy el Stap!lo"o""us

#oagulasa negativo 2), 54. $u#8as de las ba#terias

impli#adas en la osteomielitis #r;ni#a, parti#ularmente el S.ep#$er%#$#s y algunas #epas de S. aureus& produ#en

un

glu#o#li? que limita la a#tividad de los antibi;ti#osH este

glu#o#li? 8a#e que la ba#teria se ad8iera a #uerpos e?traIos

#omo el polimetilmeta#rilato 2P$$=4 y los implantes metli#os

generando una de las prin#ipales #ausas de resisten#ia

antibi;ti#a y re#urren#ia de la in0e##i;n en un pro#eso que8a

sido denominado J#ompeten#ia por la super0i#ieK.Aa re#omenda#i;n terap"uti#a a#tual para la mayora de las

in0e##iones osteoarti#ulares #onsiste en un desbridamien to

quirGrgi#o de todo el te7ido ne#r;ti#o, aso#iado a una terapia

agresiva #on antibi;ti#os intravenosos por un mnimo de +6

semanas. El obtener una ade#uada respuesta de la in 0e##i;n es

un gran desa0o debido a que las #on#entra#iones altas de

antibi;ti#os en suero llevan a un riesgo de to?i#idad sist"mi#a

generada por dosis altas y mGltiples, adems de la


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pobre ad8eren#ia al tratamiento por parte de los pa#ientesa

#ausa de los e0e#tos se#undarios del antibi;ti#o.

Para evitar los problemas rela#ionados #on

a##esibilidad, ad8eren#ia al tratamiento y to?i#idad

que produ#en los antibi;ti#os sist"mi#os, se 8a

planteado el uso de sistemas de entrega lo#al deantibi;ti#o. En el tpi#o mi#roambientede una in0e##i;n

osteoarti#ular, que se #ara#teri@a por una @ona de

te7ido avas#ular rodeada por un ambiente #on p(

#ido

e 8ipo?"mi#o, el sitio de la in0e##i;n se #onstituye en

un rea ina##esible, tanto para la respuesta inmune del

8uesped a la in0e##i;n, #omo para el mismo antibi;ti#o.

Aos sistemas de entrega lo#al de antibi;ti#os tienen la#apa#idad yLo 8abilidad para al#an@ar #on#entra#iones

e?tremadamente altas de antibi;ti#os a nivel tisular lo#ali@ado,

sobre todo#uando se #omparan #on el m"todo tradi#ional de

terapia#on antibi;ti#o sist"mi#o, sin presentar el riesgo in8erente

deto?i#idad sist"mi#a aso#iada. Aa seguridad de los sistemas deentrega lo#al de antibi;ti#os se 8a #omprobado en algunos

estudios, in#luso reali@ados en pa#ientes #on altera#i;n de la

0un#i;n renal 24.

Aos di0erentes sistemas de entrega lo#al de antibi;ti#otienen

#omo prin#ipio bsi#o la entrega lo#al del antibi;ti#o


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> 1e% +ol 8r

en #on#entra#iones altas y la minimi@a#i;n de sus e0e#tos

se#undarios y to?i#idad sist"mi#a. Aa idea de utili@ar #ementode

P$$= #omo una 0orma de antibioti#oterapia lo#al 0ueintrodu#ida

en la literatura por Bu#88ol@ y #ols. en )


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@olumen ; ! Ao. :, Mar)o >

0ibrina libera las plaquetas #ontenidas en ella, perdi"ndoseas la

#apa#idad osteoindu#tora deseada #on la geli0i#a#i;n del PP.

in embargo, di#8a lisis de 0ibrina podra produ#ir una libera#i;n

antibi;ti#a a demanda por parte del germende a#uerdo #on su

tasa de repli#a#i;n.

El prop;sito del presente estudio es determinar si el gelde

plasma ri#o en plaquetas 2PP4 #argado #on antibi;ti#os

sirve

#omo sistema de transporte y libera#i;n lo#al de losantibi;ti#os

in8ibiendo el #re#imiento in vitro de una #epa #ono#ida de

Stap!lo"o""us aureus.

ateriales - m%todosPara determinar si el gel de PP suplementado #on un

antibi;ti#o 2o?a#ilina, #ipro0lo?a#ina, gentami#ina o van#o

mi#ina4 sirve #omo sistema de transporte y libera#i;n lo#al de

antibi;ti#os, in8ibiendo el #re#imiento in vitro de una #epa

#ono#ida de Stap!lo"o""us aureus, se diseI; un estudio in vitro,

estandari@ado, #ontrolado, #on el m"todo de di0usi;n en agar,

siguiendo los parmetros estable#idos por el Clini#al and

Aaboratory tandards nstitute 2CA4 511- 2-4.

/standari&acin del m%todo de obtencin del plasmarico

en plaquetas

e tomaron 1 ml de sangre total de un donante voluntario

para #ada una de las pruebas, los #uales se re#ole#taron en

tubos de ensayo #on #itrato para prevenir su #oagula#i;nH

inmediatamente despu"s, la sangre total se #entri0ug; a dis

tintas revolu#iones y tiempos y a #ada una de las muestrasse le

8i@o re#uento de plaquetas por m"todo automati@ado =&F=61

2BayerQ4.

/standari&acin del volumen de PRP - de la activacin del

plasma rico en plaquetas

Para lograr obtener un gel de PP que se pudiera manipu

lar y sembrar en los medios de #ultivo se reali@; una prueba#on

6 muestras de 311 Rl de PPH a #ada una se le agreg; un

volumen distinto de CaCl5 al )1 M 2) Rl, 5 Rl, Rl, 3 Rl, - Rl, )3

Rl4 y se estable#i; el tiempo y las #ara#tersti#as del#ogulo que

se 0ormaba.

Diluciones de los antibiticosPara determinar el volumen de antibi;ti#o ne#esario para

lograr las di0erentes #on#entra#iones se tuvo en #uenta el vo

lumen de #ada muestra de PP ms el volumen del a#tivador

2351 Rl4 y )1 dilu#iones seriadas en base dos 2de la dilu#i;n de

5 RgLml 8asta la dilu#i;n de 1,16 RgLml4 preparadas apartir de

una solu#i;n sto"' de )1 111 RgLml.

(e&cla del PRP con el activador - el antibitico para la

obtencin del gel

En una pla#a de 5+ po@os se me@#laron +


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@olumen ; ! Ao. :, Mar)o >2

9abla . 1esultados obtenidos con %ancomicina.

a :. +oncentraciones de pla$uetas obtenidas con diferentes tiempos ' %elocidades de centrifugacin.

#idos. e molde; el #ogulo para darle una 0orma es0"ri#aque

generara 8alos de in8ibi#i;n de 0orma #ir#ular que se pudieran

medir, puesto que en algunas pruebas preliminares al sembrar

#ogulos de 0orma irregular los 8alos de in8ibi #i;n no eran

#ir#ulares y no se podan medir. En #ada #a7a se sembr; un

sensidis#o del antibi;ti#o estudiado #omo #ontrolpositivo y una

muestra de PP #on a#tivador sin antibi;ti#o

#omo #ontrolnegativo 20igura 54. Aos #ultivos se in#ubarona - SC durante 5+

8oras para reali@ar la medi#i;n de los8alos de in8ibi#i;n.

Resultados

/standari&acin de la obtencin de PRP

Aa mayor #on#entra#i;n de plaquetas se logr; #on una

#entri0uga#i;n a 111 rpm por 3 minutos obteniendo un

re#uento de plaquetas de -11 111 por mm

2tabla )4.

/standari&acin del volumen - de la activacin del PRP El

volumen de PP #on el que se pudo obtener un #ogulo de

tamaIo ade#uado 0ue de 311 Rl. Con )3 Rl dea#tivador se logr;

una #onsisten#ia ade#uada del #ogulo.

El tiempo para obtener el #ogulo 0ue de 531 minutos.

+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -

vancomicina

e obtuvo in8ibi#i;n del #re#imiento ba#teriano utili@an do

#on#entra#iones de van#omi#ina de / RgLml, )6 RgLml y 5

RgLml. El promedio de los 8alos de #ada #on#entra#i;n 0ue de/,) mm,


7/13

:B:;:>::/B;>/

+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91

+oncentracin de %ancomicina ( g4ml)

9abla 2. 1esultados obtenidos con o"acilina.

C

/

:C

:/

C

/+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91

+oncentracin de o"acilina ( g4ml)

#ura 3. #ota: CTR-: "o,trol ,eat#vo (R s#, a,t##t#"o); CTR?: "o,trol pos#t#vo(se,s#$#s"o)

1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 1 5 $e oa"#l#,a (OO78); se "o,s#$era se,s#le u,

alo %a!or $e 13 %%.

R1 ! R2 so, $#s"os $e plas%a r#"o e, plauetas s#, a,t##t#"o ("o,trol

,eat#vo).

#ura 4. @alos $e #,##"#, pro$u"#$os por va,"o%#"#,a. Se oserva else,s#$#s"o

$e va,"o%#"#,a ("o,trol pos#t#vo) (/)& el R s#, a,t##t#"o("o,trol ,eat#vo) () ! el

R "o, $#=ere,tes "o,"e,tra"#o,es $e a,t##t#"o (C1& C2& C3& C4 ! C9& para las

$#lu"#o,es 32& 16& A& 4 ! 2& respe"t#va%e,te).

+n#ibicin del crecimiento bacteriano obtenido con PRP -o7acilina

Con o?a#ilina se obtuvo in8ibi#i;n del #re#imiento ba#

teriano a partir de la dilu#i;n de 5 RgLml. El promedio del

dimetro del 8alo de in8ibi#i;n obtenido #on la dilu#i;n ms alta

25 RgLml4 0ue superior al 8alo de in8ibi#i;n del sensidis#o 251,

mm #ontra 51 mm4 2)15 M4. Aos 6 #ontroles de PP no

produ7eron in8ibi#i;n del #re#imiento ba#teriano 2tabla 4 20igura34.

#ura 9. #


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9abla >. 1esultados obtenidos con gentamicina.9abla C. 1esultados obtenidos con cipro6o"acina.


gentamicina

=l evaluar el PP #on gentami#ina se obtuvo in8ibi#i;n del

#re#imiento ba#teriano desde la dilu#i;n de 5 RgLmlHdilu#iones

menores no produ7eron in8ibi#i;n. Aa in8ibi#i;n produ#ida por la

#on#entra#i;n ms alta 0ue de )6,6 mmH seal#an@; el / M del

dimetro de in8ibi#i;n del sensidis#o

empleado 251 mm4. Aos#ontroles de PP no generaron in8ibi#i;n del #re#imiento

ba#teriano 2tabla +4 20igura 64.


ciproflo7acina

Con #ipro0lo?a#ina se produ7o in8ibi#i;n #on las #on

#entra#iones de + RgLml, / RgLml, )6 RgLml y 5 RgLmlH el

promedio de la medida del 8alo 0ormado por la dilu#i;n de 5

RgLml 0ue de )/,6 mm, #orrespondiente al 6< M del 8alo

generado por el sensidis#o, el #ual 0ue de 5- mm. inguno delos#ontroles negativos produ7o in8ibi#i;n 2tabla 34 20igura -4.

Dilucin Prueba

Inhibicin (mm)

Prueba 2 Prueba Promedi

32 19 15 16 16,6

16 18 14 12 14,68 16 10 9 11,6

4 15 9 9 11

2 11 7 7 8,3

1 0 0 0 0

0,5 0 0 0 0

0,25 0 0 0 0

0,12 0 0 0 0

0,06 0 0 0 0

D1 20 20 20 20

D2 20 20 20 20

P!P1 0 0 0 0

P!P2 0 0 0 0

Diluci n g/

Prue

b

Inhibicin (mm)

Prueba Promedio

32 14 20 22 18,6

*1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 10 5 $e e,ta%#"#,a (OO78); se "o,s#$era se,s#le u,

alo %a!or $e 12 %%.


,eat#vo).

* 1 ! 2 so, se,s#$#s"os $e 9 5 $e "#pro=loa"#,a (OO78); se "o,s#$erase,s#le u,

alo %a!or $e 21 %%.


,eat#vo).

Dimetr

odelhalo(mm)

Dimetrodelhalo(mm)


9/13

C

/

:C

:/

C

/

+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91

+oncentracin de gentamicina ( g4ml)

2/

C

/

:C

:/

C

/

+91 ! /,/; /,:C /,C /,C : >B:;2 +91

+oncentracin de cipro6o"acina ( g4ml)

#ura 6. #


10/13

esterili@a#i;n del tend;n se reali@a #on ;?ido de etileno o#on

radia#i;n gammaH las esterili@adas #on ;?ido de etileno

al#an@an mayor #on#entra#i;n lo#al de antibi;ti#o que las

esterili@adas #on radia#i;n gamma, pero en estas Gltimas, la

degrada#i;n de la espon7a es mayor. Aa gentami#ina es

liberada a mayores #on#entra#iones que las al#an@adas #on el

P$$=. El antibi;ti#o se di0unde desde la espon7a a partirde su

implanta#i;n pero prin#ipalmente desde la degrada#i;n

del#olgeno #ausada por las #olagenasas produ#idas por los

ma#r;0agos. Aa degrada#i;n se #ompleta en / semanas, pero

estudios in vitro demuestran que la libera#i;n del antibi;ti#o

puede #ompletarse en solo +/ 8oras 2))4, motivo por el #ual

todava no se puede re#omendar #omo un sistema de en

trega lo#al de antibi;ti#o para el tratamiento de in0e##iones

ortop"di#as.

El grupo de los polmeros sint"ti#os es un promisorio

sistema de transporte de antibi;ti#os en la pr#ti#a #lni#a. us

prin#ipales venta7as son que es biodegradable y que los

antibi;ti#os que libera tienen una 0arma#o#in"ti#a ade#uada.Tiene dos 0ormas de presenta#i;n% perlas #ompuestas de#ido

polil#ti#oLpoligli#;li#o y dil#ti#o polimeri@ado devarios pesos

mole#ulares. Aos #opolmeros de polil#ti#oy poligli#;li#o se

produ#en #on rela#iones entre los dos#ompuestos que van

de


11/13

a )111 ve#es la #on#entra#i;n in8ibitoria mnima para los

prin#ipales agentes pat;genos impli#ados en la osteomielitis

#r;ni#aH el pi#o de libera#i;n se presenta en el primer daen

los polmeros de ba7o y mediano peso mole#ular 251 D&y 31 D&,

respe#tivamente4. En los polmeros de )11 D& se observa

libera#i;n sostenida de #ipro0lo?a#ina que al#an@a los 31 das

2+, 3, 6, -, /,


12/13

#iones se 8an 8e#8o en el #ampo de los implantes dentales y

#iruga ma?ilo0a#ial, #uya primera re0eren#ia data de )alter '=, imon , Ein8orn T=, editores. Ort8opaedi# basi#

s#ien#e. Biology and biome#8ani#s o0 t8e mus#ulosDeletal system. 5. ed.

=meri#an =#ademy o0 Ort8opaedi# urgeonsH 5111. p. 5)-61.5. E8alen 'A, :it@gerald C(, $orrissy CT. = 8istologi#al study o0 a#ute

8ematogenous osteomyelitis 0ollo>ing p8yseal in7uries in rabbits. 'Bone

'oint urg )


13/13

3. Bu#88ol@ (, Elson =, Engelbre#8t E,

AodenDVmper (, Wttger', iegel =. $anagement o0

deep in0e#tion o0 total 8ip repla#ement.' Bone 'oint

urg )

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