LABORATORIO DE FORMAS FARMACUTICAS SLIDAS

Universidad Autnoma Del Estado De Mexico

Facultad De Qumica

Inmunologa General

Practica No. 1:

Toma De Muestra Sangunea Y Observacin De Las Clulas Del Sistema InmuneNivel:

Laboratorio clnico

Elabor:

Equipo 3Revis:

Aprob:

1. Objetivo: Observar y caracterizar las clulas del sistema inmune presentes en la sangre perifrica a travs de una tincin de Wright, obteniendo la muestra por puncin venosa.2. Introduccin CONTROL DE EQUIPO AL INICIO DEL PROCESO

EQUIPOCDIGO UAEMREALIZVERIFICFECHA

Microscopio14/02/15

SURTIDO DE REACTIVOS

INGREDIENTEREALIZVERIFICFECHA

Colorante de Wright14/02/15

Solucin amortiguadora de fosfato pH 7.414/02/15

REPORTE DE DESPEJE DE REA/VERIFICACIN DE CONDICIONES DE REA Y EQUIPO

ACTIVIDADCUMPLENO COMPLEREALIZVERIFICFECHA

El rea est libre de producto, materiales y documentos Judith RodrguezPablo Ramrez

14/02/15

Los equipos y reas estn limpios Judith RodrguezPablo Ramrez

14/02/15

Los equipos estn ajustados Judith RodrguezPablo Ramrez

14/02/15

3. Etapas del proceso

A. MATERIALES Y REACTIVOS B. TOMA DE MUESTRA

C. TINCION DE WRIGHTD. OBSERVACIONES

E. RESULTADOS F. CONCLUSIONES

G. DESECHO DE RESIDUOS H. CUESTIONARIO

A. MATERIALES Y REACTIVOS

Jeringas de plstico estriles de 3 o 5 mL, Sistema Vacutainer

Torundas embebidas en etanol al 70%

1 caja de portaobjetos por grupo

Gradilla

Aplicadores de madera

Tubos de 13 x 100 con anticoagulante EDTA

Ligadura

Microscopio

Colorante de Wright

Solucin amortiguadora de fosfatos pH 7.4

Aceite de inmersin

B. TOMA DE MUESTRA

ACTIVIDAD REALIZO VERIFICO

1.-Localizar y palpar la vena en el brazoNayeli YaesJudith Rodrguez

2.-Verificar que la aguja este atornillada en la jeringa y que el embolo fluya sin ningn obstculo.Nayeli YaesJudith Rodrguez

3.-Colocar una ligadura (torniquete) aprox. 15 cm por encima de la vena.Nayeli YaesJudith Rodrguez

4.-Desinfectar el rea donde se localiz la vena con una torunda impregnada en etanol al 70% y con movimientos circulares de antro hacia afuera se realiza la desinfeccin.Nayeli YaesJudith Rodrguez

5.-Colocar el bisel de la aguja con la perforacin hacia arriba antes de introducirlo, una vez que se tiene el bisel dentro de la vena, jalar el embolo lentamente hasta la cantidad que se va a obtener (3 mL).Nayeli YaesJudith Rodrguez

6.-Colocar la torunda encima del bisel antes de quitar la jeringa y al mismo tiempo se quita la ligadura.Nayeli YaesJudith Rodrguez

7.- Vaciar la muestra lentamente por las paredes del tubo con anticoagulante EDTA y mezclar por inversin 5 a 7 vecesNayeli YaesJudith Rodrguez

8.-Si se utiliza el sistema vacutainer se debe colocar la aguja doble en el soporte de plstico y realizar el mismo procedimiento.

C. TINCION DE WRIGHT

ACTIVIDAD REALIZO VERIFICO

1.- Una vez que tengan su muestra debern colocar una gota (10 L) en uno de los extremos del portaobjetos.Nayeli YaesJudith Rodrguez

2.- Inmediatamente con otro portaobjetos colocado a 45 del primero recorrer para hacer un extendidoNayeli YaesPablo Ramrez

3.- Secar la laminilla por 5 minutosNayeli YaesJudith Rodrguez

4.- Teir con el reactivo de Wright dejar por 3 min Judith RodrguezNayeli Yaes

5.-Agregar el amortiguador de Wright dejar por 10 min Judith RodrguezPablo Ramrez

6.-Lavar con agua destilada la laminilla Nayeli YaesJudith Rodrguez

7.- Vaciar la muestra lentamente por las paredes del tubo con anticoagulante EDTA y mezclar por inversin 5 a 7 vecesJudith RodrguezNayeli Yaes

8.- Observar al microscopio a un aumento de 100x con aceite de inmersin.Pablo RamrezNayeli Yaes

9.- Comparar los datos obtenidos contra los valores de referencia y registrarlos para su anlisis.Pablo Ramrez Nayeli Yaes

10.- Identificar las clulas del sistema y llevar a cabo un conteo de 100.Pablo Ramrez

Nayeli Yaes

Judith RodrguezPablo Ramrez

Nayeli Yaes

Judith Rodrguez

D. OBSERVACIONES

Se observo y se palpo la vena de la cual se tomo sangre, lo cual facilito mucho la puncion venosa, obteniendo 10mL.

Se necesita realizar un homogeneizado adecuado de la muestra para que salga con la carga adecuada de clulas sanguneas.

Para realizar el extendido se necesita una gota de aproximadamente 5L, el angulo correcto y una extencion continua sin pausas para que quede correctamente. Para la tincin de Wright despus de agregado el reactivo se dejo secar por 3min, el portaobjetos se tio de morado.

Despus se agrego el buffer y se dejo secar por 10min. Enseguida se enjuago con agua destilada y se deco secar.

E. RESULTADOS

F. CONCLUSIONES

G. DISPOSICION DE RESIDUOS-El contenido de los tubos Vacutainer se debe juntar y depositar en el recipiente de desechos biolgico-infecciosos para su posterior tratamiento

-Las muestras de las laminillas de deben inactivar con hipoclorito de sodio y lavar posteriormente con jabn y agua; se pueden reutilizar.

-Los residuos de la tincin se deben depositar en el frasco de residuos B

H. CUESTIONARIO 1. Qu es un anticoagulante?

Un anticoagulante es una sustancia de distinta naturaleza qumica que afecta al proceso de coagulacin o bien de la agregacin de las plaquetas. Poseen un efecto biolgico, lo cual permite que se puedan dividir en dos tipos:

1.Anticoagulantes de accin indirecta: Este tipo de anticoagulantes son aquellos que por medio de su intervencin con otras protenas alteran el funcionamiento de las cascadas de

coagulacin, esta accin tambin sucede cuando actan en otras vas metablicas.

Entre los anticoagulantes de accin indirecta se encuentran:

Inhibidores medianos de antitrombina III

Inhibidores de sntesis de factores de coagulacin

Derivados del dicumarol

Heparina no fraccionada

Heparina de bajo peso molecular

Danaparoide sdico

.Anticoagulantes de accin directa: Estos anticoagulantes son aquellos que son capaces de inhibir la cascada de la coagulacin.

Entre los anticoagulantes de accin directa, se encuentran:

Inhibidores directos de trombina

Hirudina

Argatroban

Cules son las clulas granulocticas?

Leucocitos:

Neutrfilo

Eosinfilos Basfilos

Cules son los valores normales de las clulas sanguneas?

Valores normalesHombresMujeres

Eritrocitos4,5-5,6 mill./l4,2-5,4 mill./l

Reticulocitos3-18/1.000 eritrocitos3-18/1.000 eritrocitos

Leucocitos4.000-11.000/l4.000-11.000/l

Trombocitos150.000-4000.000/l150.000-400.000/l

Hemoglobina14-18g/dl12-16g/dl

Hematocrito42-52%37-47%

1. Qu calores obtuviste en tu muestra?

Eusinofilos: Granulos de color rojo-naranja y unos azules.

Neutrofilo: Granulos azules.

Linfocitos: Presenta un color azul claro(agranulosos)

Basofilo: Granulos color azul oscuras.

Monocitos: Color azul con una forma caractersticas HISTRICO DE CAMBIOS EN EL PRECEDIMIENTO DE OPERACINRevisinFechaDescripcin del cambio

00A14 Febrero 2015Primera versin