PRACTICA N 12
FACULTAD DE CIENCIAS VETERINARIAS Y BILGICAS
E.A.P. BIOLOGA MARINA
PRACTICA N 12
AISLAMIENTO DE PSEUDOMONAS Y VIBRIO A PARTIR DE MUESTRAS DE
AGUAI. OBJETIVOAislar Pseudomonas aeruginosa y Vibrio sp, a partir
de muestras de agua y observar sus caractersticas fenotpicas en
medios selectivos.II. FUNDAMENTOLos agentes patgenos transmitidos
por el agua constituyen un problema mundial que demanda un urgente
control mediante la implementacin de medidas de proteccin ambiental
a fin de evitar el incremento de las enfermedades relacionadas con
la calidad del agua.
La experiencia de la vigilancia sistemtica de las playas como
parte del control de la contaminacin es relativamente limitada, si
bien a menudo ha sido recomendada para investigacin, la OMS ha
sealado que la arena hmeda y los sedimentos de la playa deben ser
una parte integral de los estudios epidemiolgicos y microbiolgicos
que relacionan la calidad del agua recreativa con el efecto sobre
la salud; sin embargo, la evidencia disponible indica que la arena
de playa no constituye un peligro de infeccin.
El grupo Pseudomonas est constituido por bacilos aerobios Gram
negativos y mviles, algunos de los cuales producen pigmentos
solubles en agua. Las especies del gnero Pseudomonas se identifican
sobre la base de varias caractersticas fisiolgicas. Una de las
propiedades ms notables de Pseudomonas es la gran variedad de
compuestos orgnicos que utilizan como fuentes de carbono y
energa.
Pseudomonas aeruginosa es un microorganismo comn en el medio
ambiente y puede encontrarse en las heces, el suelo, el agua y las
aguas residuales. Puede proliferar en ambientes acuticos, as como
en la superficie de materias orgnicas propicias en contacto con el
agua. Pseudomonas aeruginosa es una fuente conocida de infecciones
intrahospitalarias y puede producir complicaciones graves. Se han
aislado en gran variedad de ambientes hmedos, como fregaderos, baos
de agua, sistemas de distribucin de agua caliente, duchas y baeras
de hidromasaje.
Las foliculitis y las otitis relacionadas con el agua se asocian
con ambientes hmedos y clidos como las piscinas. Los vibriones son
generalmente microorganismos tolerantes a la sal que se encuentran
de forma natural en los ecosistemas marinos y de aguas salobres de
las regiones tropicales y templadas, aunque Vibrio cholerae y V.
mimicus tambin estn presentes en el agua dulce. Se han aislado
asimismo vibriones de sedimentos, plancton, moluscos, peces y
crustceos. Aunque en varios estudios se ha puesto de manifiesto que
no hay una correspondencia entre la presencia de vibriones y las
concentraciones de coliformes fecales, hay una correlacin positiva
entre su presencia y los residuos humanos contaminados en el agua.
Hay asimismo una correlacin positiva entre la temperatura del agua
y el nmero tanto de vibriones patgenos humanos aislados como de
infecciones notificadas. Es particularmente acusada la correlacin
estacional para V. vulnificus y V. parahaemolyticus.III. EQUIPOS,
MATERIALES, REACTIVOS E INSUMOSEQUIPOSMATERIALES Y
REACTIVOSINSUMOS
MicroscopioLminas porta y cubre objetosPlacas petri con Agar
TCBS.
Soporte para tincinAsa/aguja de kollePlacas petri con agar
Cetrimide
IncubadoraPlacas petri con agar M-PA-C
Equipo de filtracin Frascos con agua peptonada alcalina
Membrana de filtracin estril
Placas petri con agar leche
IV. PROCEDIMIENTO
PARA Pseudomonas aeruginosa
1. Filtrar 200 mL de muestra de agua a travs de filtro de
membrana estril.
2. Cada filtro colocar en la superficie del agar M-PA-C.
cuidando de no dejar espacio entre la superficie y la membrana.
3. Incubar las placas a 41,5 0,5 oC / 72 horas.
4. Para confirmar, las colonias seleccionadas tpicas o atpicas
sembrar por estriado en agar leche.
5. Incubar a 35 1,0 oC/24 horas. Las colonias de Pseudomonas
aeruginosa hidrolizan casena y producen un pigmento amarillo
verdoso difusible.PARA Vibrio sp.1. Agitar bien la muestra de agua
de mar e inocular 10 mL en 90 mL de agua peptonada alcalina.
2. Incubar el cultivo de enriquecimiento a 35 oC/ 6-8 horas.
3. Luego pasar una asada del cultivo y estriar en placas
conteniendo agar Tiosulfato Citrato Sales Biliares Sacarosa
(TCBS).
4. Incubar a 35 oC/ 24 horas. Las colonias de V.
parahaemolyticus son redondas con centro azul o verde, V.
alginolyticus son mas grandes y amarillas, V. cholerae tambin son
amarillas, lisas, ligeramente planas con centro opaco y periferia
translucidas.
5. Para confirmar es necesario otras pruebas bioqumicas.
V. CUESTIONARIO1. Cul es la importancia de estos patgenos en el
medio acutico?
2. Diga la importancia biotecnolgica de Pseudomonas.
3. Investigue sobre otros mtodos de aislamiento de estos
microorganismos.
4. Explique la transmisin del clera.
VI. BIBLIOGRAFIA STANIER, R; INGRAHAM, J; WHEELIS, M; PAINTER;
P. Microbiologa. Editorial Revert. Segunda Edicin. Espaa. 1992.
STANDARD METHODS FOR THE EXAMINATION OF WATER AND WASTEWATER. 21st
Ed. 2005.
