PRCTICA 1Fagocitosis

Casi desde principios de la historia de la bacteriologa mdica, la fagocitosis ocupa un lugar muy importante en la resistencia a las enfermedades infecciosas.Existen clulas capaces de ingerir y digerir muchos tipos de organismos que logran penetrar en el cuerpo, sin necesitar la ayuda inmunitaria especifica del sistema linfoide. Los macrfagos y los fagocitos mononucleares participan fundamentalmente en el fenmeno de Fagocitosis.Ciertas sustancias que facilitan la velocidad con que son fagocitados las bacterias y otros agentes infectantes son las OPSONINAS.

I. FAGOCITOSIS IN VITRO

1. Materiales: Cultivo de Candida albicans 5cc de sangre fresca con anticoagulante Wintrobe 1cc Una jeringa de 5cc. Bao Mara Pipeta Pasteur Colorante de Wright. Agua tamponada Colorante rojo de congo al 1% Lminas portaobjetos y cubreobjetos, microscopio. Aceite de cedro.

2. Procedimiento: Obtener 5ml de sangre fresca, agregar sol. Wintrobe 1cc y agitar Agregar al tubo con sangre 2cc de caldo de Candida albicans Incubar a 37C por 30 , luego centrifugar Con una pipeta Pasteur retirar de la interfase plasma, sangre, la capa leucocitaria. Depositar una gota en una lmina con una gota de rojo congo. Cubrir con laminilla cubreobjetos. Observar microscopio Depositar otra gota en una lmina portaobjeto y extender como para hemograma y colorear con Wright Observar al microscopio

II. FAGOCITOSIS IN VIVO

1. Materiales: Cepa de Candida albicans. Jeringa hipodrmica de 1cc. 1 Pericote.

2. Procedimiento: Inocular 0.5cc de Candida albicans va intraperitoneal al pericote. A las 24 h. autopsiar al pericote y hacer improntas de hgado, corazn, lquido peritoneal: colorear con Wright. Observar al Microscopio.

PRCTICA 2Reacciones: Antgeno-Anticuerpo

I. EXPERIMENTO N 1:Reaccin de precipitacin

La reaccin de precipitacin ocurre cuando un anticuerpo IgG divalente reacciona con una antgeno polivalente soluble. La precipitacin es el resultado de la formacin de grandes complejos Insolubles de molculas interconectadas de antgeno y anticuerpo.

La precipitacin se forma en la zona ptica de equivalencia entre el antgeno y el anticuerpo. La inmunoprecipitacin es el mtodo mas simple y directo para la demostracin de la reaccin antgeno-anticuerpo en el laboratorio.

Precipitacin en tubo Capilar: (Determinacin de PCR)La protenas C reactiva no se encuentra normalmente en la sangre, sino que aparece en los estadios iniciales o las enfermedades caracterizadas por cambios inflamatorios. Es serolgicamente diferente de las protenas normales y puede ser detectada prontamente su presencia con un antisuero especifico para la protenas C.

1. Materiales: Tubos capilares 1x80 mm. Suero Suero problema Bases de plastilina

2. Procedimiento: Un tubo capilar es sumergido dentro del suero anti PCR, dejar que el lquido se eleve de 25 a 30 mm dentro del tubo capilar. Es esencial que el tubo capilar sea sumergido en el antisuero primero para evitar contaminacin del mismo con el suero del paciente. Coloque el dedo sobre el extremo superior del capilar y squelo del antisuero Sin remover el dedo del extremo superior del tubo capilar, sumerja el capilar dentro del suero del paciente deje que un volumen igual del suero del paciente penetre al capilar. Es importante que el antisuero y el suero del paciente estn en contacto. Deben ser evitadas las burbujas del aire. Invierta el tubo capilar varias veces para lograr la mezcla de los sueros, coloque el dedo en un extremo dejando un espacio de aire alrededor de 1 cm en el extremo opuesto. Inserte los tubos en la base de la plastilina, estando seguros que el final de la columna de suero est alrededor de 1 cm por encima del bloque. Coloque en la incubadora a 37 durante dos horas. Tambin se permite dejar el tubo a la temperatura ambiente si no hay incubadora disponible. Si la protena C reactiva est presente en el suero del paciente, un precipitado ser percibido al cabo de 3 minutos y un informe cualitativo puede ser hecho en este tiempo. Contine la incubacin por espacio de 2 horas en total, y entonces coloque dentro de la refrigeradora heladera a 0 - 6C durante la noche y a la maana siguiente puede hacer la lectura final.

LECTURA:

Debern ser realizadas examinando los capilares frente a una luz, sin necesidad de usar un fondo de contraste especifico. El colorante presente en el antisuero acenta cualquier precipitado antgeno-anticuerpo, permitiendo una lectura fcil.

Las lecturas pueden ser clasificadas de la siguiente manera:

NO PRECIPITADONEGATIVO

1mm de precipitadoUna cruz

2mm de precipitadoDos cruces

3mm de precipitadoTres cruces

4mm de precipitadoCuatro cruces

5mm de precipitadoCinco cruces

6mm de precipitadoSeis cruces o ms

REFERENCIA:

Inmunodifusin Simple (Ouchterlony)

Esta prueba actualmente no vigente se basa en una reaccin de Ag-Ac. y como resultado forma precipitados en la zona de equivalencia.

Si sobre la superficie quieta de un lquido aplicamos una gota de cualquier colorante, observamos que esta se difundir de manera uniforme en todas las direcciones del seno del lquido, si en vez de utilizar este medio empleamos un gel, esta difusin se har en forma ms lenta y uniforme.

Este principio junto con la propiedad que tienen los anticuerpos de formar precipitados con sus respectivos antgeno. Se aplican en el estudio de las protenas del plasma enfrentndolas con antisueros especficos para ellas. Lo que condiciona en el lugar de contacto de los bordes de la difusin es la formacin de bandas de precipitacin, si la concentracin y velocidad de difusin de ambas sustancias son iguales.

Los resultados se interpretan como: Identidad total, Identidad Parcial o No Identidad.

a) Identidad Total: Lnea de confluencia obtenida con do antgenos que no pueden distinguirse por el antisuero utilizado.b) Identidad Parcial: Formacin de espoln por tratarse de antgenos parcialmente relacionados con una determinante comn x pero determinantes individuales y y z que reaccionan con una mezcla de anticuerpos dirigida contra x e y. El antgeno con determinantes x y z slo puede precipitar anticuerpos dirigidos contra x. Los anticuerpos remanentes (Ac y ) cruzan la lnea de precipitina para reaccionar con el antgeno de la cubeta adyacente que contiene determinante y, dando origen a un espoln sobre la lnea de precipitina.c) Cruce de lneas formadas por antgenos no relacionados.

II. EXPERIMENTO N 2: Reaccin de Aglutinacin Bacteriana

La aglutinacin es un fenmeno inmunolgico producto de una reaccin ANTIGENO-ANTICUERPO en el que uno de los reactantes, el antgeno, es de naturaleza particulada de tamao grande, que no le permite formar suspensiones coloidales o soluciones en medios acuosos (antgeno insoluble). Estas partculas pueden ser bacterias, eritrocitos partculas de ltex, bentonita, etc. y se encuentran recubiertas en formas natural o artificial por antgenos o anticuerpos. Al ser suspendidas en un medio salino y mezclarse con antisueros o antgenos especficos, formaran los respectivos complejos Ag-Ac, observables a simple vista o con lentes de poco aumento.

Aglutinacin bacteriana:Existen muchos mtodos comnmente empleados para demostrar la aglutinacin bacteriana. Uno de los ms simples es la aglutinacin microscpica en lmina de una suspensin de bacterias de salmonella tiphy con suero positivo (con anticuerpos ant-salmonella). A esta prueba se le denomina Prueba de Widal.

1. Materiales: Una lmina para aglutinacin con espacios marcados. Sueros problemas de pacientes. Un set de antgenos para aglutinacin en lmina: Tifico O, Tifico H, paratifico A, paratifico B. 4 pipetas estriles Palillos mondadientes

2. Procedimiento:A. CUALITATIVAS Con la pipeta coloque una gota de suero problema en cada uno de los espacios marcados (50 mL). Agregar una gota de cada uno de los antgenos a cada uno de las gotas de los sueros problema de un mismo paciente, proceda del mismo modo con los otros sueros. Mezclar uniformemente con un mondadiente distinto para cada gota. Haga rotar suavemente la lmina durante 3 - 5 minutos. La aglutinacin se observa por la aparicin de grumos de tamao variable, que tienden a agruparse en la periferie de la gota. Anotar el resultado.

ANTGENOSOHAB

SUERO (50 mL)

Resultado: Cualitativo: 1+, 2+, 3+, ....

B. SEMICUANTITATIVO Preparar diluciones colocando cantidades decrecientes de suero: 0.04 (40 ml), 0.02 (20 ml), 0.01 (10 ml) y 0.005 (5 ml). Agregar el antgeno que result positivo en el cualitativo. Ejemplo: O somtico: positivo 3+

SUERO40 mL

20 mL

10 mL

5 mL

DILUCIONES1/401/801/1601/320

RESULTADOS

Resultado: Es la mayor dilucin donde an existe aglutinacin. Ejemplo: O 1/160

PRCTICA 3

Hemoaglutinacin determinada: Grupo Sanguneo

La superficie de los eritrocitos contiene un gran nmero de determinantes antignicos que son productos directos o indirectos de los genes. Estos determinantes antignicos se clasifican en grupos sanguneos. Dentro de cada grupo sanguneo los antgenos parecen que se heredan como producto de un solo gen o de un grupo de genes ntimamente ligados.

Grupo ABO.- En 1900. Landstelner pblico su observacin de un patrn consistente en la aglutinacin de las clulas sanguneas del humano por otro suero humanos. Las clulas de personas A eran aglutinadas por el suero de los individuos del suero B y viceversa. Las clulas de algunas personas (grupo O) no eran aglutinadas por ningn suero. Estas personas tenan anticuerpos contra A y B. Poco despus el cuarto AB fue hallado. El suero de la sangre AB no tiene anticuerpos contra A ni contra B.

Isohemaglutinacin:

GRUPO SANGUINEOISOANTIGENOISOANTICUERPO

ONingunoAnti A y B

AAAnti B

PBAnti A

ABA y BNinguno

La determinacin de grupos en el sistema ABO es rpida y simple: los tipos son rpidamente determinados con adicin de un suero tipo conocido, por medio del mtodo de aglutinacin en lmina. El suero tipo se prepara en conejo y son cuidadosamente adsorbidos hasta que sean altamente especficos y no den reaccin cruzada con antgeno de otra sangre de diferente grupo. Adems en los eritrocitos aproximadamente el 85% a 90% de la poblacin existe un antgeno Rhesus (Rh) (D) que no tiene normalmente aglutininas pero que es importante su conocimiento en inmunoterapia e inmunopatologa.

1. Materiales: Suero Anti. A. Anti B y Anti D (Rh) Algodn, alcohol yodado, lancetas y portaobjetos

2. Procedimiento: Utilizando la lanceta punzar un dedo limpiando previamente el pulpejo con alcohol presionando el dedo haga caer tres gotas de sangre sobre una lmina portaobjetos. A una de ellas aadirles una gota de suero anti-A, a la otra una gota de suero anti B y a la tercera agregarle una gota de suero anti-D. Mezcle cada muestra con un palillo mondadiente diferente. Continuar mezclando con movimientos giratorios a la lmina durante unos minutos: la aglutinacin se observa generalmente de 2 a 3 minutos, se aprecia fcilmente por la presencia de grumos consistentes en grandes conglomerados de eritrocitos. Su ausencia indica reaccin negativa.

1. Interpretacin:Sistema ABO

SUERO ANTI-ASUERO ANTI-BGRUPO SANGUINEO

PositivoPositivoAB

PositivoNegativoA

NegativoPositivoB

NegativoNegativoO

Sistema Rh

SUERO Rh (Anti-D)GRUPO Rh

+Positivo

-Negativo

- (falso)Variante Du

Donacin de Sangre

PRCTICA4

Poder bactericida del suero

El suero normal fresco contiene sustancias capaces de destruir a los microorganismos. Se sabe que en parte esta actividad es debida a la presencia de anticuerpos normales, pero est tambin la presencia de factores humorales. Por ejemplo el suero fresco no calentado contiene una sustancia conocida como COMPLEMENTO, el cual bajo ciertas condiciones juega un rol importante en la destruccin de los microorganismos. Esta sustancia puede ser destruida si el suero es primeramente calentado a 56 por 30.

El propsito de esta prctica consiste en demostrar los efectos combinados de las sustancias antes mencionadas sobre algunas bacterias patgenas comunes.

1. Materiales : 4 Tubos 16x150; 6 tubos 13x100 4 Pipetas de 1 ml (1/10); una pipeta de 10ml (1/10) 1 Jeringa de 10ml con agua 20x1 Cultivo en caldo de Escherichia coli Solucin salina estril 100ml (CINa 0.85%) Agar nutritivo licuado; repartido en 9 tubos con 10ml c/u 9 Placas de Petri Bao Mara a 35 Bao Mara a 56

2. Procedimiento:

Valindose de la jeringa extraer 10ml de sangre venosa. Obtener el suero por centrifugacin. La mitad del suero obtenido llevarlo al Bao Mara a 56 por 30. Conservar la otra mitad. Preparar 3 diluciones de caldo de cultivo con el microorganismo en sol. salina estril (1:104, 1:105, 1:106) tal como sigue.A.1.0ml de 1:10,000 en 9ml de sol, salina.................1:100.000 B. 1.0ml de 1:10,000 en 9ml de sol, salina.................1:1000.000CUIDADO: Est seguro de usar algodn protector en la pipeta cuando maneja grmenes patgenos. Repartir soluciones obtenidas (A y B) 0.5ml de c/u en 3 juegos de 3 tubos A los tres primeros tubos aadirles 0.5ml de suero normal, a los siguientes tubos aadirles 0.5ml de suero calentado a 56 y a los tres ltimos aadirles 0.5ml de sol. salina (control). Mezclar el contenido de los tubos e incubar a bao mara por una hora a 37 Despus de incubados vertir el contenido de cada tubo en Petris estriles marcndolos con lpiz de cera Aadir 10ml de Agar fundido a 45 en cada Petri y agitar suavemente con el propsito de distribuir en forma pareja los microorganismos en el medio Despus que el agar se halla solidificado, incubar todas las placas en forma invertida por 24 hs.

LECTURA E INTERPRETACIN

Despus de la incubacin marcar cuidadosamente aquellas placas que tengan no menos de 30 ni mas de 300 colonias. Las que no se encuentren dentro de estos lmites deben ser descartadas: Hacer comparaciones. Registrar los resultados y explicarlos.

Nmero de Colonias

Escherichia coliSuero normalSuero calentadoSolucin Salina

1:104

1:105

1:106

CUESTIONARIO

1.-Cules son los factores del complemento responsable de la citlisis?2.-Qu tipo de anticuerpos han actuado en el experimento?3.-Porqu el agar fundido en el momento de aadirlo a la placa Petri debe estar a una temperatura de 45?4.-Qu sucedera si el paso N6 del experimento incubamos por 24 hrs?5.-Si en un animal de experimentacin inoculamos por va endovenosa 0.5ml. de cada una de las diluciones preparadas de Escherichia coli. Cmo podra comportarse en cada caso?6.-Despus de una Proctosigmoidoscopia, una extraccin dentaria o una debridacin de abscesos, se produce pasaje de bacterias al torrente circulatorio. Porqu no se produce septicemia?

PRCTICA5

Prueba de Fijacin de Complemento

Este procedimiento emplea dos sistema Antgeno-Anticuerpo. La prueba consiste en colocar primero el Antgeno especfico y el Anticuerpo en cuestin, conjuntamente con el complemento y luego, en un segundo paso, aplicar el sistema indicador consistente en Eritrocitos de carnero y suero de conejo antieritrocito de carnero (hemolisina). Si el complemento est presente en el momento de aadir el sistema indicador, quiere decir que el primer sistema no lo utilizo en su reaccin y por tanto los eritrocitos de carnero son hemolisados. Si el primer sistema emple complemento, es decir lo fij, al aadir el segundo sistema, la hemlisis no se producir por la ausencia de complemento libre en la mezcla.

1. Materiales: Suero problema, positivo y negativo: Inactivados a 56C por 30 min. Antgeno: Adenovirus en solucin. Buffer de Mayer Complemento (suero de cobayo) Sistema Hemoltico: mezcla de partes iguales de eritrocitos de carnero al 2% y Hemolisina Tubos de Kahn (8) Pipetas de 1 ml (8)

2. Procedimiento: Diluir 0.2 ml de cada uno de los sueros con 0.8 ml de Buffer de Mayer. Se obtiene as una dilucin de 1/5. Rotular un tubo e Kahn para el suero problema y cuatro (4) tubos ms para control positivo, control negativo control de antgeno y control de sistema hemoltico. Aadir a cada tubo los siguientes reactivos en el orden sealado

SPC+C-CAgCSH

Suero Problema (1/5)0.2 ml-.--.--.--.-

Suero Positivo (1/5)-.-0.2 ml-.--.--.-

Suero Negativo (1/5)-.--.-0.2 ml-.--.-

Antgeno0.1 ml0.1 ml0.1 ml0.1 ml-.-

Complemento0.1 ml0.1 ml0.1 ml-.--.-

Buffer de Mayer0.1 ml0.1 ml0.1 ml0.4 ml0.5 ml

Incubar todos los tubos a 37 en Bao Mara por 15 minutos Aadir a cada tubo 0.3 ml del sistema hemoltico Incubar todos los tubos en Bao Mara a 37C por 15

LECTURA

Observa la presencia o ausencia de hemlisis en cada uno de los tubos los controles deben dar la siguiente lectura:

Control positivoNo hemlisis

Control negativoHemlisis

Control del antgeno:No hemlisis

Control del Sistema Hemoltico:No hemlisis

Anotar el resultado del suero problema: .......................................

Prueba de Inmunoensayo: Test Elisa para VIH

El Test ELISA para HIV se basa en un inmunoensayo absorbente enzimtico ligado para la deteccin de anticuerpos al virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y 2 en suero humano o plasma. La prueba se realiza en tres tiempos:

1.-Incubacin de la muestra problema2.-Incubacin del conjugado3.-Incubacin del sustrato

En los micropozos se encuentran una combinacin de cuatro antgenos recombinantes de los virus HIV 1 y 2 relacionados a la envoltura y al core del virus HIV.

1. Materiales: Suero problema del paciente Placas con micropozos ELISA Conjugando: Antgeno-Ig G humano marcado con una enzima Sustrato: TMB (Tetrametilbenzidina) H2SO4 4N Micropipetas de 50 ul.. 100ul Buffer isotnico, bao mara y/o estufa a 37C Lector ELISA Lavadora de placas de ELISA

2. Procedimiento:* Como paso previo debe tratarse todos los reactivos a temperatura ambiente.

a)Aadir 150 ul. de muestra problema y controles a los pocilos correspondientesb)Cubrir los micropozos con un adhesivoc)Incubar a 37C durante 1 hr.d)Aspirar y lavar todos los pocillos cinco veces con tampn de lavadoe)Aadir 200 ul. de conjugado a todos los pocillosf)Incubar a 37C durante 1 hr.g)Aspirar y lavar todos los pocillos cinco veces con tampn de lavadoh)Aadir 200 ul. de solucin sustrato a todos los pocillosi)Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 30 min.j)Aadir 50 ul. de cido sulfrico 4N a todos los pocillos para detener la reaccink)Realizar la lectura de los micropozos en un lector ELISA

NOTA: Esta prctica se realizara en forma demostrativa.

PRCTICA6

Test Antiestreptolisina O (ASO)

NEUTRALIZACION: DE LA ESTREPTOLISINA OUna de las funciones inmunitarias ms importantes mediadas por anticuerpos especficos es la neutralizacin de toxina. Estos anticuerpos especficos llamados Antitoxinas tienen el papel principal la inmunidad adquirida a enfermedades graves como difteria, ttanos. etc.

Casi todas las cepas de estreptococo grupo A producen dos factores hemolticos: estreptolisinas O y S (exotoxinas). Cuando ocurre una infeccin por estreptococos de este grupo, la estreptolisina O, no asi la S, estimula el desarrollo de un anticuerpo especfico: la antiestreptolisina O, dicho anticuerpo bloquea la hemlisis por estreptolisisna O. Este fenmeno proporciona las bases para la determinacin cuantitativa del anticuerpo.

La determinacin de los ttulos sricos de antietreptolisina O tiene gran importancia por su valor diagnstico en paciente que tienen o han tenido recientemente una infeccin por estreptococo hemoltico del grupo A, sobre todo por las secuelas que estas infecciones incluyen: fiebre, reumtica, glomerulonefritis, eritema nodoso.

Por la frecuencia de infecciones estreptoccicas se encuentran ttulos bajos de Antiestreptolisina O en casi todos los individuos. Se considera ttulos normales de Antiestreptolisina O de 40 a 160 Unidades Todd.

La Estreptolisina O en su forma reducida, agregada a Glbulos rojos, producen hemlisis, si el suero de un paciente posee Antiestreptolisina O al aadirse la Estreptolisina se produce una reaccin Antgeno- Anticuerpo y el anticuerpo neutraliza al antgeno total o parcialmente segn el nivel de anticuerpo presente si una cantidad constante de Estreptolisina (Antig..) se agrega a cantidades cada vez menores de suero y si el anticuerpo (ASO) presente es suficiente para neutralizar el antgeno no habr hemlisis cuando se agregue glbulos rojos, cuando el Ag.excede al Ac. de exceso de Estreptolisina causar hemlisis. El Titulo de ASO es reciproca de la mayor dilucin de suero que impide la hemlisis de los glbulos rojos.

FUNDAMENTO DEL TEST ANTIESTREPTOLISINA OEn el suero del paciente enfermo se encuentran los anticuerpos circulantes de tipo antiestreptollina en el cual al unirse a un antgeno de una fase slida (ltex) va a producir una reaccin complejo Ag-Ab que se va a traducir por la presencia de una aglutinacin del ltex.

En caso de un paciente negativo a este anticuerpo no ocurrir la reaccin de aglutinacin.

1. Materiales: Suero problema del paciente Antgeno fase slida absorbida en ltex Suero control positivo Suero control negativo Diluyente Palillos Placas de reaccin

2. Procedimiento: Colocar 5 ul. de suero problema en un circulo de la placa. Colocar 50 ul. de suero control positivo y negativo en cada uno de los crculos restantes. Agregar a cada uno de ellos 1 gota (50 ul.) del antgeno ltex, mezclar suavemente. Agitar en forma rotativa por 3 min. Leer en busca de una reaccin de aglutinacin.

Nota: Se debe descartar la prueba en caso de observar aglutinacin inapropiada con los controles positivo y negativo.

CUESTIONARIO :

1. Qu funcin tienen los glbulos rojos en esta prueba?2. Qu otras pruebas de laboratorio se conocen para el diagnstico de fiebre reumtica?3. Explique por qu se inhibe la hemlisis en la determinacin de la ASO4. Explique por qu se utilizan glbulos rojos O Rh + en la determ. de ASO.

Significancia Clnica

La antiestreptolisina -O- (ASO.) es una exotoxina producida por el estreptococo B-hemoltico (grupo A) la cual tiene la capacidad de hemolizar los glbulos rojos de varias especies. La estreptolisina - O tiene capacidad antignica resultando en la produccin por parte del organismo de anticuerpos antiestreptolisina O.La determinacin de los niveles de ASO es un mtodo universalmente aceptado para el diagnstico de diversas enfermedades por infeccin de estreptococo tales como la fiebre reumtica y glomerulonefritisLa concentracin de ASO en individuos normales varia ampliamente. Despus de la fase aguda de una infeccin por estreptococo, el titulo comienza a aumentar en alrededor de dos semanas llegando a sus niveles mximos en cuatro a seis semanas, mantenindose alto por un periodo de tiempo relativamente prolongado. En pacientes con fiebre reumtica. se encuentra un ttulo elevado en ms de 90% de los casos, ttulos mantenidos por sobre las 500 unidades se consideran como evidencia de fiebre reumtica.La determinacin de la concentracin de a ASO en forma aislada es de relativa utilidad. por lo cual se recomienda la repeticin de la prueba a Intervalos de 10 a 15 das. Si se observa un aumento progresivo de los ttulos obtenidos, es posible concluir que se est frente a una infeccin reciente. Por otra parte, la disminucin subsecuente de los ttulos es un ndice claro de recuperacin

PRCTICA7

Prueba de Mantoux (Hipersensibilidad tarda)Reaccin al polvo de casa (Hipersensiblidad inmediata)

I. EXPERIMENTO N 1: Hipersensibilidad TardiaEs una intradermorreacin en la que se usa un filtrado de cultivo de bacilos tuberculosos conocido como Derivado Proteico Purificado (PPD). Si existen linfocitos sensibilizados a este antgeno, dan lugar a la aparicin de ppula y eritema en la zona inyectada, en un lapso de 24 horas a 48 horas.

1. Materiales: 1 Jeringa de tuberculina con aguja N 25 PPD 50 U.I x mm Algodn y Alcohol Regla milimetrada

2. Procedimiento:

Limpiar una zona de la piel antebrazo y aplicar con la jeringa 0.1 ml de PPD (5UI) por va intradrmica.

3. Lectura:

Despus de 24 a 48 horas de la aplicacin se efecta la lectura de la respuesta inflamatoria producida la cual estar en relacin con la mayor o menor sensibilidad del organismo a este tipo de antgeno.

4. Tipo de Respuesta:

Eritema, edema y necrosis centralPositivo ++++

Eritema acentuado y edema de ms de 20 mmPositivo +++

Eritema y edema de 10 a 20 mmPositivo ++

Eritema y edema de 5 a 10 mmPositivo +

Leve eritema e indicios de edema de 5mm o menosDudoso

Solo se aprecia el lugar de inoculacin de el aguaNegativo

DIAGNSTICO DE TUBERCULOSIS POR LAPRUEBA DE MANTOUX

Por qu debe hacerse la prueba de Mantoux?La prueba de la Mantoux puede mostrar si la persona ha sido infectada con las bacterias causantes de la tuberculosis.

Quin necesita hacerse la prueba? Personas que hayan tenido contacto diario muy cercano con alguien que tenga la tuberculosis activa. Personas que tengan sntomas de tuberculosis tales como cansancio constante, prdida de apetito, fiebre, sudores nocturnos, prdida de peso, tos persistente. Personas que tienen un sistema inmunolgico dbil o problemas de salud.

Qu cuidados se debe tener despus de la prueba? NO cubrir el lugar del pinchazo con una curita. NO rascarse el brazo, si pica, ponerse una compresa fra. Puede lavarse el brazo y secarlo dndose palmaditas, pero NO debe frotrselo.

Qu significa un resultado negativo?Esto puede significar que la persona no ha sido infectada con las bacterias que causan la tuberculosis. Puede significar que a la persona le hicieron la prueba muy pronto despus de haber inhalado las bacterias. El cuerpo reacciona a la prueba de la tuberculina unas cuantas semanas despus de haberse infectado con las bacterias. En este caso, la prueba debe repetirse despus de tres meses.

Qu significa un resultado positivo?Esto significa que las bacterias que causan la tuberculosis estn en su cuerpo. A pesar de que la persona est infectada con las bacterias de la tuberculosis, esto no significa que tenga la enfermedad

PPD

DefinicinPPD (Derivado Purificado de Protena) es un examen selectivo estndar para la tuberculina, un antgeno que causa tuberculosis. La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa crnica de los pulmones.Razn para el procedimientoUna PPD se da habitualmente a todas las personas admitidas como un enfermo hospitalizado. No requiere una PPD si se ha tenido una reaccin positiva en el pasado o si tiene prueba que se ha tenido una PPD en los ltimos tres meses.

Procedimiento Una aguja diminuta se usa para inyectar una cantidad pequea de solucin lquida bajo la piel en su brazo. En 2 3 das una enfermera ver si hay alguna reaccin a la prueba.Una reaccin es positiva si un abultamiento cerca del tamao de un borrador de lpiz o ms grande aparece en su brazo. A menudo rojez tambin se desarrolla en el sitio en el que la inyeccin se dio. Estas reacciones significan que usted sido expuesto(a) a la tuberculosis en algn momento en el pasado. No significa que tiene TB. Otras pruebas incluyendo una radiografa del trax (rayos X del pecho) se hacen para ver si usted en realidad tiene TB. Si se tiene una reaccin positiva al PPD, a menudo es tratada(o) con el medicamento INH (Isoniazida) por 6 a 9 meses. El propsito de estas pastillas (tomadas una vez al da) es destruir los grmenes de TB en su cuerpo y prevenir que usted desarrolle TB en realidad.

II. EXPERIMENTO N 2: Sensibilidad al Polvo de CasaEs una reaccin de hipersensibilidad de tipo inmediata. Es positiva en los pacientes que presentan mastocitos sensibilizados en IgE especifica contra este antgeno.

Una vez el sistema inmunitario de un atpico ha comenzado a producir IgE contra alrgenos la nueva IgE producida se va a ir anclando en la superficie de clulas que tengan receptores para IgE en su superficie. Los mastocitos estn presentes en el tejido conectivo de muchos tejidos. Dado que estas clulas tienen receptores para IgE pueden recoger en su superficie la IgE producida por los linfocitos B. Cuando los alrgenos acceden a un tejido como la mucosa respiratoria, los que sean especficos de las IgEs presentes en la superficie de los mastocitos, se unirn y conducirn a la activacin del mastocito. La activacin del mastocito conduce a la liberacin de diferentes mediadores (Histamina, leucotrienos, TNF-a que van a tener diferentes efectos sobre vasos sanguneos, bronquios e intestinos. Todo esto conduce a una reaccin de hipersensibilidad inmediata que puede producir broncoconstriccin, liberacin de mucus y que pone en marcha el mecanismo de una posterior reaccin retardada a las pocas horas.

1. Materiales: 1 Jeringa de tuberculina con aguja N 25 Antgeno: Polvo de casa en solucin Algodn y alcohol Regla milimetrada

2. Procedimiento: Limpiar una zona de la piel antebrazo e inyectar por va intradrmica 0.1. ml de la solucin de polvo de casa.

3. Lectura: Observa la aparicin de mcula y ppula a los 15.30 y 60 minutos despus.

Reacciones de Hipersensibilidad

TIPO I

TIPO III

PRCTICA8

Shock Anafilctico

La prctica consiste en una anafilaxia generalizada y suele obtenerse en el laboratorio inyectando una pequea dosis de antgeno a un animal (dosis sensibilizante), y algunos das ms tarde, otra dosis intravenosa de antgeno (dosis desencadenante).

En el hombre este fenmeno es ms complejo desde el punto de vista fisiopatolgico y recibe el nombre SHOCK ALERGICO.

1. Materiales: 1 Cobayo Jeringa de Tuberculina Suero de caballo 1:100 albmina de huevo 1:10 en sol. salina (Antgeno)

2. Procedimiento:

Inocular un cobayo por va intraperitoneal con 1 ml de la solucin del antgeno a eleccin. Despus de 10 a 20 das inyectar por va intracardica 1 ml de dicha solucin de antgeno.

RESULTADOS:

Las manifestaciones de la anafilaxia varan segn la especie, pues vara tambin el rgano de choque afecta en el cobayo, a los pocos minutos de la inyeccin del antgeno (dosis desencandenante) en animal empieza ara estornudar, toser, quizs presenta convulsiones, e incluso colapso y muerte.

CUESTIONARIO:

1.-Qu debe hacerse antes de inyectar por va intravenosa por primera vez cualquier medicamento?2.-Investiga en algn hospital por una Historia Clnica donde un paciente haya presentado Shock anafilctica. presentar un resumen del caso3.- Qu valor tiene la aplicacin de antihistaminicos despus de producido el shock anafilctico?

SHOCK ANAFILCTICO

Definicin: Sndrome clnico grave, sbito y adverso de etiologa variada con relacin a los agentes desencadenantes, con mecanismos inmunolgicos implicados en su fisiopatologa, que se manifiesta por sntomas y signos aislados o combinados, fatales en muchas ocasiones si no se diagnostican y tratan urgentemente. Fisiopatologa:La anafilaxia proviene tras la exposicin a una protena externa que activa la generacin de un anticuerpo especifico de la clase de Inmunoglobulina IgE. Estas molculas de IgE se unen rpidamente a los mastocitos y basfilos, estimulando la degranulacin de estas clulas para la liberacin masiva de mediadores preformados como la histamina, triptasa, quininas, factor de activacin de plaquetas y metabolismo del cido araquidnico especialmente leucotrienos.Para que se produzca la anafilaxis es necesario que el individuo haya estado expuesto al antgeno antes y que haya sintetizado una gran cantidad de anticuerpos IgE especficos.En una siguiente exposicin puede producirse una reaccin de hipersensibilidad inmediata.Los medicamentos del tipo de las penicilinas, derivados y antibiticos relacionados con esta familia, as como los sueros heterlogos figuran como las causales ms frecuentes de las severas reacciones de anafilaxia.Diagnstico:Se basa en el antecedente de la exposicin a algn alergeno externo y los signos y sntomas clnicos caracterizados por congestin de los tejidos y edema.Los signos y sntomas son derivados de:1. Shock circulatorio:HipotensinAlteraciones de la frecuencia cardaca (Bradicardia o taquicardia en dependencia del estadio de la afeccin)Palidez marcadaSncope2. Obstruccin de las vas areas superiores:Edema de la Epiglotis y laringeEstridor respiratorioTiraje supraesternal3. Broncoespasmo:DisneaPolipneaTiraje supraesternal e infraesternal, intercostal y subcostal Respiracin de KusmaullHipersecrecin pulmonar(edema)Sibilancias 4. Sntomas cutneos:SudoracinPalidez EritemaUrticariaPrurito5. Sntomas gastrointestinales:Dolor AbdominalDiarreasNuseas Vmitos6. Sntomas neurolgicos:CefaleaMareosConfusin mentalConvulsiones Alteraciones de la conciencia de diversa severidad (Somnolencia, Estupor, Letargo, Coma)

Diagnstico diferencial:Reaccin anafilactoide: Histaminoliberadores inespecficos, degranulacin de basfilos y mastocitos, no existe reaccin antgeno anticuerpo. Se activa el complemento (C3A, C5A) por inhibicin de la sntesis de ProstaglandinasComa hipoglicmico (Ayunas, ejercicios violentos, etc)IMAReaccin Vasovagal

Conducta a seguir:Una vez efectuado el diagnstico de anafilaxis se proceder al tratamiento inmediato, cuyo objetivo fundamental ser garantizar la vida del paciente, para lo cual se tomaran las siguientes medidas de urgencia:Posicin de shock: Colocar al paciente en posicin supina con las extremidades inferiores elevadasMantener vas areas permeables (pudiendo ser necesarias la entubacin pulmonar para la respiracin asistida o mecnica y/o la traqueotoma segn lo merite el caso).Canalizacin una vena profunda para la administracin de los medicamentos necesarios. Mantener estables los parmetros vitales tales como frecuencia cardaca, temperatura, tensin arterial, frecuencia respiratoria, PVC, Monitoreo constante, etc.Realizar una evaluacin del estado de los gases e iones en el organismo por medio de una gasometra e ionograma, corrigiendo las alteraciones que pudieran presentarse.Realizar un balance de los lquidos corporales.Proceder a la extraccin de muestra de sangre adems para conocer el estado de los elementos formes de la sangre, grupo sanguneo y factor Rh.

El tratamiento especfico se realizar simultneamente y consiste en:Adrenalina acuosa (amp. 1ml)-1:1000, administrar:EdadNios de 2 a 6 aosNios de 6 a 12 aosUsar 0.5 ml diluido en 10cc de Solucin Salina Isotnica, EV lento(2 o 3 min)

Adultos

Dosis(cc)0.15 ml0.2 ml0.3-0.5ml/10-15, hasta un total de 2 cc

Si existiera colapso venoso, pudiera utilizarse la va intramuscular subcutneaPudiera utilizarse Epinefrina acuosa a 5 mg en 500 ml de Solucin Salina EV a goteo segn la tensin arterial, en los casos de severidad.El Shock Anafilctico debe tratarse en el lugar donde ocurra, de disponerse de los medicamentos indispensables. Slo despus de la recuperacin de los signos vitales debe procederse a su remisin, siempre acompaado de un personal mdico y enfermera.Si es producido por la picadura de insectos se aplicar un torniquete por encima de la picadura; en la zona de esta se administrar la Epinefrina de 0.1 a 0.3 en forma circular cuatro punturas, de ser posible se debe extraer el aguijn sin exprimir. Tratamiento complementario:Antihistamnicos:a)Difenhidramina(EV o IM): (amp. 20 mg en 2 ml)

Nios: 5 mg/Kg./24 horas Adultos: 25-50 mg c/6 horas.b)Cimetidina: (amp. 300 mg en 2 ml)4mg/Kg/dosis, sin exceder los 2 gEn casos prolongados de anafilaxia pueden utilizarse como terapia los corticoesteroides por va parenteral a razn de:a)Prednisona(EV): (Bbo. 60 mg en 3cc 5cc) Nios: - Menores de 1 ao = 10mg/Kg/dosis c/6 u 8 horas- De 1 a 14 aos = 20mg/Kg/dosis c/ 6 u 8 horas Adultos: 60 mg c/8 horas.b)Hidrocortisona(EV): (Bbo. 100-500 mg en 3cc 5cc)Nios: 15 mg/Kg/dosis c/6 u 8 horasAdultos: 100 mg c/8 horasSi persiste el broncoespasmo administrar:a)Broncodilatadores:Aminofilina(EV): Nios: 5-7 mg/ Kg/24 horas Adultos: 250 mg (1amp.) lento de 10-20 minutos, puede repetirse la dosis cada seis horas.Si la hipotensin persiste puede aadirse a la venoclisis un suplemento de Dopamina o Norepinefrina.

Tambin se pueden utilizar expansores de volumen Albmina o Dextrn para el tratamiento de la hipotensin persistente.Prevencin de la Anafilaxis:1. Efectuar una Historia Clnica Farmacolgica antes de administrar cualquier medicamento.2. Administrar los medicamentos por va oral siempre que sea posible, reservar la va parenteral para los casos en que sea indispensable.3. Observar al paciente durante 30 minutos despus de la administracin de un frmaco por va parenteral.4. Si se descubren antecedentes de hipersensibilidad, se deben efectuar pruebas cutneas, si no se dispone de un medicamento alternativo.5. El paciente debe conocer y llevar en todo momento una tarjeta de alerta mdica.