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PRCTICA N 12

HIDRLISIS DE LAS PROTENAS: PROPIEDADES DE PROTENAS Y AMINOCIDOS

I.- GENERALIDADES:

El grado de hidrlisis se puede determinar por el incremento de los grupos carboxlicos, amnicos o ambos.El incremento en grupos amino se puede medir por titulacin con lcali en presencia de formaldehido o etanol. En la titulacin por el formol se forman compuestos mono o dimetillicos. As se reduce grandemente la basicidad aparente de los grupos amino, de tal manera que los N-hidroximetilaminocidos pueden titularse con lcali y fenolftalena en la misma forma que los cidos grasos. Cada equivalente de lcali consumido corresponde a un equivalente de enlace peptdico escindido.

II.- OBJETIVOS:

Separar los aminocidos de una protena por accin cataltica de los enzimas proteolticos. Determinar los aminocidos mediante titulacin con formol.

III.-MATERIALES Y REACTIVOS:

REACTIVOS:

1. Solucin de casena: disolver 2g de casena en 75ml de una solucin de carbonato de sodio al 0,3%, aadir unas gotas de tolueno y fenolftalena. Si la solucin no es alcalina aadir lcali hasta que el indicador se haga rosado. Continuar disolviendo la casena y aadir HCl 0,1N hasta que el color desaparezca.2. Solucin de pancreatina al 2%3. Solucin alcohlica de fenolftalena4. Solucin de formol: neutralizar el formol con NaOH 0,1N5. NaOH 0,02N

IV.- PROCEDIMIENTO:

4.1.- Hidrlisis de la protena.-Tomar en un Erlenmeyer 40ml de sol. de casena en carbonato de sodio al 0,3%, aadir 10ml de sol. de pancreatina al 2% y agitar medio minuto. Tomar luego 10ml de la mezcla de la digestin y proceder a titularla segn la tcnica que se indica ms abajo. Poner el resto a incubar a 40C tomando muestras cada 30minutos hasta completar 90 minutos.

4.2.- Titulacin.-Tomar 10ml de la mezcla de digestin, colocarla durante un minuto en bao mara a 100C para inactivar la enzima, enfriar, aadir 10 ml de formol y tres gotas de fenoftalena, titular con NaOH 0,02N

4.3.- Propiedades de protenas y aminocidos:En la presente prctica se emplear el mtodo cualitativo usando los reactivos de Biuret y de Ninhidrina.

V. RESULTADOS, VI. INTERPRETACIN, VII. CONCLUSIN

VIII. CUESTIONARIO:

1.- Fundamente los mtodos para la determinacin de protenas y de aminocidos 2.- Mencione las caractersticas de por lo menos 2 enzimas proteolticas de importancia metablica

MATERIALES ENCARGADOS PARA LA PRCTICA N 12

Agua destilada, Formol 500 ml., Casena 5 gramos, material de vidrio. Pancreatina.

Dra. SOLEDAD LLAEZ BUSTAMANTE: Coordinadora de curso. 1